Inmunologa clnica: Anticuerpos antinucleares (ANAs)

INTRODUCCION
Un anticuerpo es una molcula de inmunoglobulina con una secuencia especfica de
aminocidos que le da a cada anticuerpo la capacidad de adherirse solo al antgeno que
induce su sntesis e interactuar con l. Esta propiedad especifica del antgeno y anticuerpo
es la base del complejo inmunitario esencial para la respuesta inmune; dentro de los
parmetros normales.
No obstante, existen casos en los cuales se presenta una anormalidad: la aparicin de
anticuerpos antinucleares, conocidos tambin como ANAs. Estos anticuerpos estn
dirigidos contra los componentes de los ncleos celulares (ADN, ARN e histonas) y son
caractersticos de las enfermedades autoinmunes.
Algunos de estos anticuerpos participan directamente en el origen de las reacciones que
producen el dao tisular, reaccionan contra componentes presentes en todas las clulas.
Los anticuerpos contra antgenos de distribucin general usualmente se asocian con
enfermedades de carcter sistmico tales como Lupus Eritematoso Sistmico (LES),
esclerosis

sistmica,

artritis

reumatoide,

sndrome

de

Sjgren,

polimiositis/dermatomiositis).

Existen muchos mtodos de laboratorio para la deteccin de anticuerpos antinucleares,

tales como ELISA, IFI, Western blot, inmunodifusin doble (DID), inmunoelectroforesis
(CIE), entre otros; cada mtodo posee su propia especificidad y sensibilidad.

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OBJETIVOS
Definir que es anticuerpo antinuclear.
Conocer las patologas asociadas a la presencia de anticuerpos antinucleares.
Describir brevemente los mtodos diagnsticos ms utilizados para la determinacin
de anticuerpos antinucleares.

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Definicin de Anticuerpos antinucleares (ANAs).
Los anticuerpos antinucleares (ANAs) son una clase especfica de autoanticuerpos que
tienen la capacidad de unirse y destruir ciertas estructuras dentro de los ncleos de las
clulas; es decir pierden la tolerancia inmunolgica. Por esta razn se consideran
componente esencial en las enfermedades autoinmunes, sobre todo en las enfermedades
de tejido conectivo (CTD), aunque algunas fuentes afirman que en una poblacin normal
se pueden encontrar cantidades muy bajas de ANAs, especficamente naturales e
infecciosos. Los naturales son principalmente isotipos de IgM producidos por linfocitos B,
mientras que los infecciosos son isotipos de IgA, IgM e IgG, son producidos en respuesta a
estmulos antignicos externos y tras la resolucin de la respuesta inmunitaria
disminuyen.
Los ANAs tienen reactividad contra antgenos en los ncleos de las clulas de muchos
tejidos y rganos y por ello se asocian ms frecuentemente con enfermedades de carcter
sistmico. Los cidos nucleicos en el interior del ncleo celular se encuentran asociados
con protenas, a esta asociacin se le llama cromatina, que es una estructura molecular
extremadamente compleja. En la cromatina las protenas ms abundantes son las
histonas. La cromatina representa uno de los principales blancos de la respuesta
autoinmune en diversas enfermedades sistmicas. Hay una variedad de anticuerpos que
reaccionan contra diferentes componentes de esta estructura, los ms conocidos son
antiADN, antihistonas, anticentrmero, antiRNP y anti Sm.
Los nuclolos, por otro lado, representan las estructuras ms grandes y ms complejas de
ribonucleoprotenas dentro del ncleo celular, en ellos se encuentran cientos de
polipptidos y pequeas protenas acopladas a ARN, especialmente los de la denominada
serie U y el antgeno Ro, que tambin son blanco de autoanticuerpos.
Algunos antgenos que reaccionan con los anticuerpos anti nucleares pueden extraerse de
las clulas usando solucin salina, a stos se les llama antgenos extractables del ncleo o
ENA y a los anticuerpos correspondientes, anti ENA. Los principales anti ENA son: antiRNP,
antiSm, antiSS-A/Ro, entre otros.
Patologas asociadas a la presencia de anticuerpos antinucleares
La presencia de anticuerpos antinucleares (ANA) en la sangre puede indicar:
Artritis reumatoide
Escleroderma
Lupus Eritematoso Sistmico (LES)
Sndrome de Sjogren

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Enfermedades tiroideas
Enfermedad mixta del colgeno
Enfermedad de Raynaud
Hepatitis crnica
Miastenia gravis
Polimiositis

Mtodos diagnsticos de ANAs.

El estudio de los anticuerpos antinucleares (ANA) se inici con la identificacin en
pacientes con lupus eritematoso generalizado (LEG) de las clulas LE, descrito por
Hargraves en 1948. La deteccin de las clulas LE fue durante mucho tiempo una prueba
utilizada para confirmar el diagnstico de LEG. Sin embargo, aos despus se demostr su
baja especificidad, ya que pueden estar presentes en pacientes con artritis reumatoide
(25%), sndrome de Sjogren (1520%), cirrosis pancretica (33%), hepatitis crnica activa
(5070%) y en otras enfermedades (12% miastenia gravis y prpura trombocitopenia
idioptica).
En 1959, Holman mostr que el fenmeno de las clulas LE se deba a la presencia de
anticuerpos que reconocen antgenos nucleares. Lo anterior llev al desarrollo de tcnicas
como la inmunodifusin (doble radial), hemoaglutinacin, fijacin de complemento, etc. y
de tcnicas de microscopa, empleando anticuerpos conjugados con molculas
fluorescentes (IFI) que aumentaron la especificidad y sensibilidad para la deteccin.
Actualmente, la tcnica ms utilizada para la deteccin de los ANA es la IFI, la cual fue
desarrollada en 1950 por Conns y, posteriormente, modificada por Tan en 1966, que
empleaba como sustratos cortes de hgado o rincn de ratn, ahora se emplean como
sustratos las lneas celulares HEp-2 dada su facilidad de crecimiento.
La deteccin de ANA mediante IFI en lneas celulares se considera la prueba inicial de
laboratorio que apoya al diagnstico de las enfermedades autoinmunes debido a su alta
sensibilidad. Sin embargo, dada su relativa baja especificidad, es necesario emplear
tcnicas ms sensibles y especficas como: ELISA, electroinmunotransferencia (EIT) o
Western blot, etc. con el fin de aumentar la sensibilidad y especificidad de los ANA para el
diagnstico de las enfermedades autoinmunes.
Actualmente se utilizan dos tcnicas para la deteccin de los anticuerpos antinucleares
(ANA) que son la prueba de ANA fluorescente y el ensayo inmunoabsorbente ligado a
enzimas (ELISA).

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La prueba de ANA fluorescente es un ensayo de inmunofluorescencia indirecta en la que
se utilizan clulas de carcinoma de clulas escamosas de esfago, llamadas clulas HEp-2,
como sustrato. La prueba detecta la presencia de ANA en la sangre del paciente que se
adhieren a reactivo de ensayo clulas (sustrato), que forman patrones de fluorescencia
distintas que estn asociados con ciertas enfermedades autoinmunes.
Para evaluar una prueba de ANA son importantes el ttulo y el patrn. El ttulo de una
prueba positiva de ANA es importante para el diagnstico de los trastornos del tejido
conectivo (TTC). Un ttulo bajo tiene menos importancia que un ttulo alto. Los individuos
sanos tienen ttulos negativos o bajos. Los pacientes con TTC generalmente tienen ttulos
elevados (especialmente, los casos de TTC sistmicos). Pueden observarse ttulos
intermedios o altos en familiares no afectados de individuos con TTC, en personas
mayores, en mujeres gestantes, en pacientes con infecciones crnicas y pacientes con
neoplasias.
Hoy en da se conoce, a travs de diversos estudios, que se pueden encontrar pruebas de
ANA positivas de individuos sanos y se encontr que cerca de un tercio de las personas
sanas tienen un resultado positivo a una prueba de ANA, encontrndose ttulos de ANA
1:80, 1:160; por ello se considera que un ttulo 1:160 o menor no tiene mucho significado
clnico. No obstante, un ttulo > 1:160 es significativo para el diagnstico de pacientes con
TTC.

CREST (calcinosis, fenmeno de Raynaud, dismotilidad esofgica, esclorodatilia y telangietasis),

DM (dermatomiositis), LE (Lupus eritematoso), TMTC (Trastorno mixto del tejido conectivo), ESP
(esclerosis sistemtica progresiva).
Tomado de: Adams, B. & Mutasim, D. The diagnostic value of anti-nuclear antibody testing.

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Adems del valor del ttulo de la prueba de ANA es importante evaluar los distintos tipos
de ANA. Hay cinco tipos bsicos de ANA: moteados, homogneos, perifricos (anillo),
centromricos y nucleolares.
El modelo moteado se correlaciona con anticuerpos frente a varias
fibronucleoprotenas y se observa en TMTC, LES y ESP.
Los modelos homogneo y perifrico, que se correlacionan con anticuerpos frente al
ADN nativo (ADNn) [o ADN de doble hlice (ADNdh)], se asocian con LES. Estos dos
modelos pueden coexistir.
El modelo centromrico es caracterstico del sndrome CREST (calcinosis, fenmeno
de Raynaud, dismotilidad esofgica, esclerodactilia y telangietasias).
Finalmente, los anticuerpos dirigidos contra el ARN nucleolar producen un modelo
nucleolar y se asocian con LES y ESP.

Patrones de ANA fluorescente: a) moteados, b) homogneos, c) perifricos y d) nucleolares.

Tomado de: Adams, B. & Mutasim, D. The diagnostic value of anti-nuclear antibody testing.

Tras determinar el ttulo y patrn de ANA, estos debern ser cuidadosamente evaluados
para pasar al segundo nivel de caracterizacin mediante pruebas ms sensibles y
especficas como ELISA y Western blot para confirmar el antgeno reconocido por los ANA
presentes en la muestra del paciente.
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Recientemente se han desarrollado varias pruebas de ELISA para detectar los ANA. La
prueba de ELISA es menos dificultosa en cuanto a trabajo, ms corta, menos subjetiva y
ms barata. Las diferentes pruebas de ELISA tienen diferente sensibilidad y especificidad.
Para la prueba de ELISA las placas de poliestireno son recubiertas con macerados
(principalmente ncleos) de las lneas celulares HEp-2, los patrones obtenidos en clulas
HEp-2 permiten sospechar la especificidad de los ANA.
En los ELISA de tercera y cuarta generacin, las placas estn sensibilizadas con antgenos
purificados o recombinantes. Estos ltimos presentan un reducido nmero de eptope, lo
anterior implica que se debe ser muy cauto al interpretar los resultados del tamizado
inicial y en la confirmacin mediante otras tcnicas ms sensibles y especficas. Un
ejemplo de lo anterior es cuando el suero de un paciente da un patrn centromrico
mediante IFI en clulas HEp-2 y el ELISA que detecta actividad anti-CENP-B resulta
negativo. Lo anterior se explica porque en las clulas HEp-2 estn presentes todos los
antgenos que componen los centrmeros (CENP-A, B, C, D, E y F) y en el ELISA el nico
antgeno que est presente es la protena CENP-B.
Algunas fuentes indican que la prueba IFI es ms sensible pero menos especifica (94% y
75% respectivamente), mientras que la prueba ELISa es ms especfica pero menos
sensible (90% y 70% respectivamente) por ello la prueba IFI debe corroborarse aplicando
la prueba de ELISA1.
Por su parte, el Western blot, es una tcnica que tiene mltiples usos; entre ellos est la
deteccin de actividad contra componentes celulares. Es altamente sensible y especfica, y
su uso (debido a su costo, tiempo de preparacin del ensayo, tiempo de desarrollo del
ensayo y numero de muestras que se pueden correr al mismo tiempo) est enfocado
principalmente a investigacin. La deteccin de ANA mediante EIT permite identificar una
gran cantidad de autoantgenos. Sin embargo, su interpretacin no es sencilla ya que
existen autoanticuerpos que reconocen solo la forma nativa de las protenas del
centrmero en clulas HEp-2 y no las formas desnaturalizadas o modificadas obtenidas
con frecuencia en WB.
Importancia de la deteccin temprana de ANAs en pacientes con enfermedades
autoinmunes.
Es muy comn que el diagnostico de una enfermedad autoinmune lleve mucho tiempo.
Un paciente con LES puede llegar a consultar 3 o ms mdicos durante 4 o ms aos antes
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Tomado de: Jimnez, M. et al (2010) Determinacin de anticuerpos nucleares por IFI y ELISA.

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que se establezca el diagnstico correcto. En el Sndrome de Sjgren el tiempo promedio
desde el inicio de los sntomas hasta el diagnstico puede ser mayor a 6 aos. Hay muchos
factores que contribuyen a este tiempo prolongado y uno de ellos es la aparicin de
sntomas vagos o no especficos de una enfermedad, por lo tanto no fcilmente
interpretables. Muchos sntomas como fatiga, fiebre, artralgia se sobreponen con
sntomas de otras enfermedades, algunos mdicos pueden mirar a los sntomas
individualmente y fallar en reconocer que est presente una enfermedad sistmica
Hoy en da hay evidencia que la aparicin de autoanticuerpos puede preceder al inicio de
la enfermedad, a menudo en varios aos. La deteccin temprana de estos
autoanticuerpos puede ofrecer la oportunidad de un diagnstico y tratamiento temprano,
mejorando el tiempo y calidad de vida del paciente. Un estudio reciente en el New
England Journal2 reporta que en promedio, al menos 1 anticuerpo antinuclear estaba
presente 3 aos antes del diagnstico clnico de LES (hasta 9,4 aos antes; media 3,3
aos); y al momento del diagnstico a menudo estaban presentes 3 autoanticuerpos. Con
tratamiento adecuado, la acumulacin de nuevos autoanticuerpos generalmente se puede
prevenir, y la morbimortalidad asociada a LES es mejor controlada. Los anticuerpos ms
tempranamente detectados eran anti-SS-A/Ro, anti SS-B/La y antifosfolpidos (media 3,4
aos).

Tomado de Etcheves, P. (s.f.) Deteccin temprana de anticuerpos anti nucleares (ANA): Clulas HEp-2000

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CONCLUSIN
Los ANA son inmunoglobulinas que reconocen componentes propios del organismo,
especficamente de las clulas (tanto del ncleo como del citoplasma). Existen 3 tipos:
ANAs naturales, ANAs infecciosos y ANas autoinmunes; estos ltimos asociados a LES,
artritis reumatoidea, entre otras patologas.

El diagnostico de ANAs se realiza primeramente con tcnica IFI, se confirma con pruebas
ms especficas como ELISA y Western blot; y siempre se deben asociar los resultados con
la historia clnica del paciente.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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http://www.elmedicointeractivo.com/ap1/emiold/publicaciones/dermacosmetica3/15
9-164.pdf
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Inmunologa, Departamento de Inmunologa y Reumatologa, Instituto Nacional de
Ciencias Mdicas y Nutricin Salvador Zubirn, Mxico. Recuperado de:
http://www.reumatologiaclinica.org
3. Etcheves, P. (s.f.) Deteccin temprana de anticuerpos anti nucleares (ANA): Clulas
HEp-2000.
Revista
Bioanalisis.
Recuperado
de:
www.revistabioanalisis.com/arxius/notas/notaj.pdf
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124.
Recuperado
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www.cap.org/apps/docs/committees/immunology/arpa_124_10_71.pdf?origin=public
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Recuperado
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www.jano.es/ficheros/sumarios/1/0/1578/85/1v0n1578a13079664pdf001.pdf
8. Mezzano, V. (s.f.) Uso del laboratorio reumatolgico. Recuperado
www.escuela.med.puc.cl/publ/apuntesreumatologia/pdf/usolaboratorio.pdf

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