Electroporacin

Diagrama de los principales componentes de un electroporador con la cubeta dentro.

La electroporacin o electropermeabilizacin consiste en provocar un aumento significativo

de la conductividad elctrica y lapermeabilidad de la membrana plasmtica celular mediante
un campo elctrico aplicado externamente. Es habitual en biologa molecular como forma de
introduccin de diferentes sustancias en clulas, como por ejemplo sondas moleculares,
un frmaco que puede cambiar las funciones celulares o un fragmento de DNA codificante,
como puede ser un plsmido.
Cuando el voltaje que atraviesa una membrana plasmtica excede su rigidez dielctrica se
forman poros. Si la fuerza del campo elctrico aplicado o la duracin de la exposicin al mismo
se eligen apropiadamente, los poros formados por el pulso elctrico se sellan tras un corto
perodo, durante el cual los compuestos extracelulares tienen la oportunidad de entrar a la
clula. Sin embargo, una exposicin excesiva de clulas vivas a campos elctricos puede
causar apoptosis o necrosis, procesos que provocan la muerte celular.
En biologa molecular, el proceso de electroporacin se usa frecuentemente para
la transformacin de bacterias, levaduras yprotoplastos vegetales. Adems de membranas
lipdicas, las bacterias tambin tienen una pared celular compuesta de peptidoglicano y sus
derivados. Sin embargo, las paredes son porosas por naturaleza y slo actan como corazas
que protegen a la clula de impactos ambientales severos. Si se mezclan bacterias
y plsmidos, stos pueden transferirse al interior de las clulas durante la electroporacin. En
este proceso suelen emplearse varios cientos de voltios, que atraviesan una distancia de
varios milmetros. A continuacin, las clulas deben manipularse cuidadosamente hasta que
tengan la oportunidad de dividirse, produciendo nuevas clulas que contendrn copias del
plsmido. Este proceso es aproximadamente diez veces ms eficaz que la transformacin por
mtodos qumicos.
Este procedimiento es tambin muy eficiente para la introduccin de genes externos en
clulas en cultivo, especialmente en las de mamfero. Por ejemplo, se usa en el proceso de
produccin de ratones knockout, as como en el tratamiento de tumores, terapia gnica y
terapias basadas en clulas. El proceso de introduccin de cidos nucleicosexgenos
en clulas eucariotas se conoce como transfeccin.

El proceso

Cubetas para electroporacin. stas son de plstico con electrodos de aluminio y tapa de plstico azul.
Pueden contener hasta 400 L.

La electroporacin se lleva a cabo en un electroporador, un aparato que crea un campo

electromagntico a travs de la suspensin celular (tpicamente bacterias, aunque se puede
aplicar a otros tipos de clulas, como se ha comentado anteriormente). La suspensin
se pipetea en una cubeta de plstico o vidrio con electrodos de aluminio en los costados.
Por ejemplo, para la electroporacin de bacterias suelen utilizarse unos 50 L de suspensin
celular. Antes de la electroporacin las clulas se mezclan con los plsmidos con los que se
quieren transformar. La mezcla se pipetea en la cubeta, se selecciona el voltaje en el
electroporador (unos 240 voltios, por ejemplo) y la cubeta se inserta en el electroporador.
Inmediatamente despus de la electroporacin se aade 1 ml de medio de cultivo a las
bacterias (en la propia cubeta o en un tubo de microcentrfuga) y se incuban a
la temperatura ptima de las bacterias durante una hora o ms para despus extenderlas en
una placa con agar.
El xito de la electroporacin depende en gran medida de la pureza de la disolucin de
plsmido, especialmente de su contenido ensales. Las disoluciones impuras pueden causar
una pequea explosin (un arco elctrico), en cuyo caso las clulas moriran. Si esto ocurre a
menudo, podra ser necesaria una sedimentacin de las clulas antes de una nueva
electroporacin.

Aplicaciones mdicas
Se ha descubierto que un voltaje ms alto de electroporacin puede destruir clulas diana en
una zona bastante reducida, sin afectar a clulas vecinas. Esto podra representar un
tratamiento prometedor para el cncer, las cardiopatas y otras enfermedades que requieren
eliminacin de tejido.1

Aplicaciones cosmticas
La tcnica de la electroporacin se utiliza habitualmente como sistema de liberacin
transdrmica en tratamientos de mesoterapia virtual, tambin conocida como mesoterapia
transdrmica o sin agujas.