Bioresource Technology 83 (2002) 199-202

Efecto de la radiacin ultravioleta en termotolerancia, tolerancia y

etanol
Osmotolerance de Saccharomyces cerevisiae VS 1 VS 3 cepas
M. Sridhar, N. Kiran Sree Kanya podr mezclar, L. Venkateswar Rao

Departamento de Microbiologa, Universidad de Osmania, Hyderabad, India 500 007

Recibido 19 de septiembre de 2001; recibi en forma revisada 15 de noviembre de 2001; aceptado 23 de noviembre de 2001

Resumen
Despus de haber tenido un cribado y programa de enriquecimiento para el aislamiento de levaduras termotolerantes, VS

VS

VS

3 , 4 y VS
Las cepas aisladas de las muestras de suelo recolectadas en las regiones calurosas del Kothagudem Planta de Energa Trmica, AP, India,
tuvo un mejor
Osmotolerance termotolerancia, etanol y tolerancia que los dems aislamientos. Entre estos aislamientos VS 1 VS 3 y son los que mejor
perFormadores. Se realizaron esfuerzos para mejorar an ms sus osmotolerance, termotolerancia y etanol tolerancia tratndolos con
Radiacin UV. Mutantes de VS 1 VS 3 y produjo mayor biomasa y etanol de las tensiones en los padres y la glucosa alta temperatura
Las concentraciones. La cantidad de biomasa producida por VS 1 VS 3 y mutantes fue de 0.25 y 0:20 g l A1 ms que el padre de las
cepas
42 C con 2% de glucosa. En altas concentraciones de glucosa VS 1 VS 3 mutantes y biomasa producida que fue 0,70 y 0:30 g l A1 a 30
C y 0.10 y 0:20 g l A1 a 40 C ms que el padre las cepas. La cantidad de etanol producido por los mutantes (VS 1 VS 3 y )
Fue 8,20 y 1:20 g l A1 ms de los padres en las cepas 42 C con 150 g l A1 glucosa. Ms etanol fue producida por mutantes (VS 1
Y VS 3 ) que los padres de familia en altas concentraciones de glucosa de 5.0 y 6:0 g l A1 a 30 C y 13,0 y 3:0 g l A1 a 42 C,
respectivamente.
Estos resultados indicaron que los rayos UV mutagnesis puede ser utilizado para mejorar termotolerancia, tolerancia y etanol
osmotolerance en
VS 1 VS 3 y cepas de levadura. 2002 Elsevier Science Ltd. Todos los derechos reservados.
Keywords: termotolerancia; Osmotolerance Saccharomyces cerevisiae; Etanol tolerancia; radiacin UV

8951X246; fax: +91-40 -709-9020.

1. Introduccin
Las levaduras Termotolerantes ayuda a reducir los costes de refrigeracin,
Los costes de destilacin y fermentacin rpida y las tasas
Tambin ayuda a disminuir las posibilidades de contaminacin
Fermentacin (Banat et al., 1996; Gera et al., 1997; Dalel
Singh et al., 1998; Kiran Sree Kanya podr mezclar et al., 1999).
El mundo de industria de etanol fermentacin es muy
Grande, por lo tanto, cualquier pequea mejora de la eciencia energtica
De la produccin de etanol por termotolerantes mejorado
Las levaduras pueden ser econmicamente signicativos. Cepas de levadura
Normalmente se utiliza en los procesos industriales han limitado osmoTolerancia y termotolerancia. Debido a esto, el alcohol
Las fermentaciones se llev a cabo en relativamente baja
Temperatura y baja concentracin de azcar (salmn y
Mauricio, 1994). Osmotolerant tolerante y etanol
Las levaduras son ventajosas en industria de etanol, porque
Crecimiento y alta fermentacin de azcar inicial de concentracin
Tereses no slo disminuye las posibilidades de contaminacin

Direccin de E-mail:
vrlinga@yahoo.com (L. Venkateswar
Rao).

Pero tambin ayuda a obtener altas concentraciones de etanol,

Que disminuyen los costes de destilacin (Bertolini et al.,
1991; Kiran Sree Kanya podr mezclar et al., 2000a,b).
Mutagnesis inducida con fsica y qumica
Mutgenos parece ser una simple y racional
Mejora de las cepas de levaduras. Seleccin despus del tratamiento
Con mutgenos se ha utilizado en gran medida
En cuanto a la mejora de las levaduras. Y Kobrina Demchemko
(1979) examinaron mutagnesis como un medio para generar
Termotolerancia en levaduras. Induccin de mutaciones por los rayos UV
Y MNNG seguida de seleccin se utiliz con xito
Para la mejora de cepas de levadura para hornear en Polonia y
URSS (Johnston y Oberman, 1979). Uma y Polasa
(1990) han informado de que la atraccin de la radiacin UV en la mejora de la

0960-8524/ 02/$ - ver asunto 2002 Elsevier Science Ltd. Todos los derechos reservados.
PII: S 0 9 6 0 8 5 2 4 ( 0 1 ) 0 0 2 2 1 - 8

Autor correspondiente. Tel.: +91-40 -709-0661, +91-40 -709-

Biomasa y rendimiento utilizando etanol

mesoflicas SaccharoMyces cerevisiae a 30 C. Kiran Sree
Kanya podr mezclar et al. (2000A,b)
Reporta el aislamiento de termotolerantes
osmotolerant
OCCULATING Saccahromyces cerevisiae
(VS 1 VS 2 VS 3
Y VS 4 ) cepas. Debido a las posibles
ventajas de
Termotolerantes, etanol tolerante y
osmotolerant
Las levaduras, la presente investigacin
est destinado a seguir
Mejorar VS 1 VS 3 cepas y con un
tratamiento de UV
La radiacin.

200

M. Sridhar et al. / Bioresource Technology 83 (2002) 199-202

Y 350 g l A1 glucosa en ambos 30 y 42 C, respectivamente.

Concentraciones de etanol se determinaron mediante alta
Entre los cuatro aislamientos Presin cromatografa de gases (HPGC, Hewlett Packard
4890 D, poropack-Q, tamao de malla 80-100 lm) equipado
(VS 1 , 2 VS , VS 3 y VS 4 ),
Con detector de ionizacin de llama. El cromatograma se
Aisladas de las muestras de
suelo recogidas en el caliente Ejecutar a 160 C temperatura del horno a 170 C por va intravenosa
Temperatura utilizando nitrgeno como gas portador y el hidrgeno
Las regiones de Kothgudem
Planta de Energa Trmica, VS 1 Como AMING gas tanto a un caudal de 32 ml min A1 . Todos
Los experimentos se repitieron dos veces y media la
y
Los valores se presentaron. Una variacin de aproximadamente el 5% se considera
VS 3 cepas mejor
2. Mtodos

termotolerancia,
osmotolerance
Tolerancia y etanol en
comparacin con otras cepas
estudiadas.
Por lo tanto, VS 1 VS 3 cepas y
se seleccionaron para UV
Mutagnesis para mejorar an
ms su termotolerancia,
Osmotolerance tolerancia y
etanol.
Entre los dos experimentos.
2.1 . Media
2.4 . Anlisis estadstico
VS 1 VS 3 cepas y mantiene en YEPD agar fueron
Inoculado en erlenmeyer de
Los datos obtenidos tras mutacin experimentos fueron
250 ml con 100 ml ASKS YEPD Sometido a anlisis estadstico mediante t-test.
Medio que contiene extracto de
levadura, peptona 1 %, 2 %,
Dextrosa 2 %, pH - 5.5 y el ASKS se incubaron a
30 C en un agitador a 150 rpm
3. Resultados y discusin
2.2 . Mutagnesis UV
Tratamiento de los rayos UV se ha encontrado 50 LD 150 s
y
diferentes platos expuestos a
Crecimiento exponencial (16
h) VS 1 VS 3 y culturas
Diferentes intervalos de tiempo fueron seleccionados, sobre la base de
Se lavaron despus de la
colonia
centrifugacin, una suspensin
Morfologa y tamao. Cinco por ciento de inculo 100
de 0,1 M
Las colonias, que se cultiva en caldo YEPD a 30 C fue trasladado
Buer de fosfato pH-7.0 y
Erlenmeyer de 250 ml a ASKS que contiene 100 ml de YEPD
ajustada a 10 8 clulas por
Medio. Estos ASKS fueron incubados a 42 C
Turbidometric ml por un
Seleccionar las mejores termotolerantes mutantes, capaces de
mtodo. Unos 10 ml de VS 1 y
Mostrando un buen crecimiento a esa temperatura. El mejor
VS 3 culturas fueron
Realizar cinco cepas de VS 1 VS 3 y se analizaron para
trasladados a un estril
Su produccin de etanol a los 30 y 42 C con 150 g l A1
petriplates y
Glucosa.
Irradiados por 6 min con una
lmpara UV de 30 W a un dis2.3 . Mtodos analticos
Asistencia de 30 cm.
Mutagnesis UV se llev a
Termotolerancia de los mutantes se prob con 2%
caboGlucosa por estimar el rendimiento de biomasa en 42 C. Para
Segn el mtodo de Vashishat
Estimacin de la biomasa las clulas se centrifugaron y el
y- (1983).
Peso hmedo del pellet. El rendimiento del etanol
Las muestras fueron tomadas
Los mutantes termotolerantes fue probado a los 30 y 42 C con
despus de cada 15 segundos,
150 G l A1 glucosa. Osmotolerance de los mutantes se
y despus de serie
Probado por calcular la cantidad de biomasa producida
Dilucin en buer, colocadas
150, 200, 250, 300 y 350 g l A1 glucosa en ambos 30
en las placas y YEPD incuY a 40 C. El etanol tolerancia de los mutantes se ha probado
Gran expectacin a 30 C.
Al estimar la cantidad de etanol producido con 250
Alrededor de 100 colonias de

100% Muerte de las clulas se obtuvieron C. El

a los 5 min. ms bioMisa fue producida por VS 3 VS 1 100 y 40
mutantes
Con 2% de glucosa. Por lo tanto, slo 100
VS 3 VS 1 y 40
Mutantes en todos los experimentos se
utilizaron. La biomasa
Producida por VS 3 mutante fue 0:20 g l A1
1:80 g l A1
Ms de los padres VS 3 cepa (1:60 g l A1 )
mientras que la
Biomasa producida por mutantes VS 1 fue
0:25 g l A1
(1:75 G l A1 ) ms que el padre VS 1 1:50
g l A1 con
2% DE glucosa. Estos resultados indicaron
que los rayos UV mutagnesis
Es ecaz en mejorar el rendimiento de
biomasa de VS 1 y
VS 3 cepas que fue estadsticamente
signicativa, como se muestra
En la Tabla 3.
Despus de probar el rendimiento de
biomasa, estos mutantes se
Prueba de su produccin de etanol a los
30 y 42 C con
150 G l A1 glucosa. La cantidad de etanol
producido por
De rayos ultravioletas 40 VS 1 mutante de
8:2 g l A1
(58:2 G l A1 ) ms que el padre VS 1 50:0 g
l A1 . Mientras
La cantidad de etanol producido por los
rayos UV-tratado VS 3 100
Mutante slo aument en 1:2 g l A1 ( 59:2
g l A1 ) comComparada a la de padres VS 3 (58:0 g l
A1 ) a 42 C, el
Cantidad de etanol producido por estas
mutantes a 30 C
Era la misma que la de sus padres. La imConoci en etanol de VS 1 cepa fue
estadsticamente
Importante en comparacin con la de VS 3
a 42 C.
Para aislar los mejores osmotolerant
mu, El inculo de 100 colonias obtenidas de
los rayos UV
Tratamiento fueron inoculadas en medio
YEPDConteniendo 150, 200, 250, 300 y 350 g l
A1 glucosa y
Se incuba a 30 y 40 C. La biomasa y el
etanol
Rendimiento de la empresa matriz,
mutado VS 1 VS 3 cepas y conDiferentes concentraciones de glucosa a
los 30 y 40 C se muestran
En la Tabla 1. Se observ que la
osmotolerance fue
Ms termotolerantes en mutantes.
El mximo de biomasa producida por
mutantes VS 1
0:60 G l A1 ms que los padres VS 1 a 30

M. Sridhar et al. / Bioresource Technology 83 (2002) 199-202

Tabla 1
La biomasa de los padres y la mutada VS

201

VS 3 cepas y utilizando diferentes concentraciones de 30 y 40 C

Concentracin de

Proteccin contra tirones

glucosa (g l
150 POR

200 POR

30 C

40 C

30 C

40 C

250 POR

300 POR

30 C

350 POR

40 C 30

40 C 30

40 C

(primario)

1,80

1.00

1,70

0,90

1,60

0,80 1.20

0,80 1.20

0,40

VS 3 (primario)
UV-VS 3 100
UV-VS 1 de 40

1,90
2.10
2.10

1.10
1.20
1.10

1,80
1,90
1,90

1.00
0,90
0,90

1,70
1,80
1,90

0,90 1,50
1.00 1,80
0,90 1,90

0,90 1,30
0,90 1,50
0,90 1,50

0,60
0,70
0,60

VS

DE rendimiento de biomasa en g l

A1 .

Tabla 2
Rendimiento Etanol (EY) de los padres y de rayos ultravioletas y VS 1 VS 3 mutantes en
Los 30 y 42 C con 250 y 350 g l A1 glucosa

250 EY

Proteccin contra tirones

VS

(primario)

A1 )

350 EY

30 C

40 C

30 C

40 C

88,0

50.0

83,0

38,0

Aument en
8:0 g l A1 de
250 g l A1
glucosa y
13:0 G l A1 con
350 g l A1
glucosa.
Estos
resultados
indican
Que los rayos
ultravioleta
son efectivos
a la hora de
mejorar el
etanol
Tolerancia de
cepas de
levadura a los
30 y 42 C.
La
can
tida
d
de
eta
nol
pro
duci
do
por
mut
ant
es
VS
3
fue
Aume
nt en
3.0 y
1:0 g l
A1 de
250 g
l A1
glucos
a

61,0
62,0
58,0

VS 3 (primario)
95,0
UV-VS 3 100
98,0
UV-VS 1 40
93,0
EY rendimiento Etanol en g l

82,0
88,0
86,0

50.0
53,0
51,0

Valor de t
(0,05 %).

T-c valor
calculado

Signicacin

2,776

4,724

2,776

4,652

2,776

2,776
0,7507

A1 .

Y 6.0 y 3:0 g l A1
con 350 g l A1
glucosa a los 30 y
42 C,
respectivamente.
La mejora del
etanol tolerAnce de VS 1 fue
estadsticamente
signicativa en
ambos 30 y
42 C mientras
que mutantes VS
3 fue
estadsticamente
signicativa
Slo a 30 C con
250 y 350 g l A1
glucosa.

Tabla 3
Anlisis estadstico de la biomasa y de los rendimientos de etanol de rayos ultravioletas VS
Y VS 3 mutantes con t-test
Muestra

Biomasa
UV-VS 1
YEPD a 42 C
UV-VS 3 de
YEPD a 42 C

4. Conclusin
Los resultados
obtenidos indican
que de rayos
ultravioletas muSenta de VS 1 VS
3 y adquiri ms
osmotolerance,
Etanol
termotolerancia y
tolerancia de sus
padres
Estos mutantes y
contrapartes ser
ms til a
Produccin de
etanol.

Etanol
UV-VS 1
UV-VS 3
(+): Estadsticamente signicativa; ( ): estadsticamente no signicativa.

13,80

Agradecimientos

Estamos muy
agradecidos
a Comisin
de Subsidios
de la
Universidad,
Nueva Delhi para una subvencin de ayuda durante esta
investigacin.
Mxima cantidad de biomasa producida por de rayos ultravioletas
VS 3 mutante fue 0:40 g l A1 ms que los padres VS 3
Cepa a 30 C. El rendimiento de biomasa de VS 3 VS 1 y mu30
Senta es el mismo que el de los padres en las cepas
C,
40 C. Esto puede ser debido al efecto combinado de alta
mie
Temperatura inicial y alta concentracin de azcar en la
ntra
Crecimiento de estos organismos. Estos resultados indican que
s
Mutagnesis UV es ecaz en mejorar la osmoque
Tolerancia a 30 C.
la
Estos mutantes tambin se haba sometido a la prueba de su etanol tolcant
Intolerancia a los 30 y 42 C con 250 y 350 g l A1 glucosa.
idad
El etanol los rendimientos de los padres y mutantes VS 1 VS 3 y
de
Las cepas se muestran en la Tabla 2. VS 1 mutante produca
etan
Ms etanol de los padres VS 1 en ambos 30 y 42 C
ol
Con 250 y 350 g l A1 glucosa. La cantidad de etanol
prod
Producida por mutantes VS 1 aument en 5:0 g l A1 con
ucid
250 G l A1 glucosa y 3:0 g l A1 con 350 g l A1 glucosa en

o a 42 C

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