et de la Prvention Mdicale
RNL
SN
Rpublique
du
Sngal
Rseau National de
Laboratoires du Sngal
1re Edition
Rdaction : Janvier 2004
Rvision : Novembre 2008
REPUBLIQUE DU SENEGAL
MINISTERE DE LA SANTE ET DE LA PREVENTION
RESEAU NATIONAL DE LABORATOIRES
1re Edition
Rdaction : Janvier 2004
Rvision : Novembre 2008
REPUBLIQUE DU SENEGAL
MINISTERE DE LA1 SANTE ET DE LA PREVENTION
RESEAU NATIONAL DE LABORATOIRES
AVANT PROPOS
La mise en place dun manuel de procdures techniques constitue un
besoin qui sest fait sentir trs tt au sein du Rseau National de Laboratoires,
dune part pour renforcer les capacits des techniciens des laboratoires
danalyses mdicales, dautre part pour rpondre un souci dharmonisation
des techniques utilises dans ces laboratoires. Par ailleurs, ce manuel vient
accompagner la mise en place de la dmarche qualit dans nos laboratoires et
constitue un outil de paillasse pour que chaque analyse soit effectue de la
mme manire partout au Sngal.
Le Rseau National de Laboratoires du Sngal est n avec la stratgie
dintgration prne par lOMS, ce qui justifie la multidisciplinarit de ce
document. Seules les techniques danalyses biochimiques manquent encore du
fait de leur diversit ; nous esprons pouvoir procder au meilleur choix lors
de la prochaine rvision. Cest pour nous loccasion de remercier
chaleureusement tous les collgues des diffrentes disciplines biologiques qui
nont mnag aucun effort pour rdiger cet ouvrage, ainsi que ceux qui ont
procd sa correction et tous les participants latelier de validation.
Le prsent manuel de procdures comprend trois parties :
Le paquet minimum dactivits par niveau que chaque laboratoire doit
tre en mesure de raliser,
Lquipement minimal ncessaire pour la ralisation de ce paquet
minimum dactivits,
Les procdures techniques par analyse.
Le manuel de procdures est un outil commun que le Rseau National de
Laboratoires met la disposition de tous les laboratoires. Son utilisation est
indispensable pour atteindre lobjectif dharmonisation des techniques ; cest
pourquoi le Rseau National de Laboratoires en appelle la vigilance de tous
les biologistes chefs de laboratoires et de tous les personnels de laboratoires.
Nous attendons un retour de linformation la pratique pour amliorer
en continu ce document. Les suggestions des utilisateurs sont galement les
bienvenues pour la rvision du manuel.
Professeur Ahmad Iyane Sow
Coordonnateur du RNL du Sngal
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 4)
Sommaire
Chapitre 1 : Paquet minimum dactivits :
1.1 Laboratoire de niveau priphrique :
Pour les maladies potentiel pidmique
En Hmatologie
En Parasitologie
En Bactriologie
En Biochimie
En Anatomie et Cytologie Pathologiques
1.2. Laboratoire de niveau intermdiaire :
Pour les maladies potentiel pidmique
En Hmatologie
En Parasitologie
En Bactriologie
En Biochimie
En Anatomie et Cytologie Pathologiques
1.3. Laboratoire de niveau National :
Pour les maladies potentiel pidmique
En Hmatologie
En Parasitologie
En Bactriologie
En Biochimie
En Anatomie et Cytologie Pathologiques
P. 2
P. 3
P. 3
P. 3
P. 4
P. 4
P. 4
P. 5
P. 5
P. 5
P. 6
P. 6
P. 7
P. 7
P. 8
P. 8
P. 8
P. 9
P. 9
P. 10
P. 11
P. 13
P. 14
P. 15
P. 17
P. 18
P. 24
P. 58
P. 69
P. 84
P. 95
Chapitre 1
PAQUET MINIMUM
DACTIVITES PAR NIVEAU
1.1.2. En Hmatologie
Hmogramme
Vitesse de sdimentation
Test dEmmel
Taux des rticulocytes
Temps de saignement
Temps de Quick (Taux de prothrombine et INR)
Temps de cphaline active (TCA)
Dosage du fibrinogne
Groupage sanguin dans les systmes ABO et Rhsus
1.1.3. En Parasitologie
Dans le sang :
Recherche directe dhmatozoaires : goutte paisse et frottis sanguin
Recherche indirecte dhmatozoaires : Test dimmunochromatographie ICT, Optimal, Paracheck
etc
Recherche directe de Trypanosomes et de microfilaires
Dans les urines
Recherche directe de Schistosoma haematobium, de Trichomonas vaginalis,
de microfilaires, de levures.
Dans les selles :
Recherche des kystes, amibes, ufs et parasites par un examen direct
Identification macroscopique de vers intestinaux
Dans le LCR :
Recherche de cryptocoque lencre de chine.
1.1.4. En Bactriologie
Dans les urines :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Dans le pus :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Dans les scrtions broncho-pulmonaires :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Dans les scrtions ORL :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Scrtions gnitales (voir manuel du programme de lutte contre les IST)
Examen macroscopique
Examen microscopique
1.1.5. En Biochimie
Dans le sang :
- Glycmie
- Azotmie
- Cholestrol total
- Cratininmie
- Ionogramme (Na, K, Cl)
- Protidmie
- Albuminmie
- Bilirubinmie
- Transaminases (ASAT, ALAT)
Dans les urines :
- Albumine
- Sucre
- Corps ctoniques
1.2.2. En Hmatologie
Hmogramme
Vitesse de sdimentation
Test dEmmel
Taux des rticulocytes
Temps de saignement
Temps de Quick (Taux de prothrombine et INR)
Temps de cphaline active (TCA)
Dosage du fibrinogne
Dosage des PDF
Dosage du D-Dimre
Groupage sanguin dans les systmes ABO et Rhsus
Recherche de lantigne D faible
Test de Coombs direct
Test de Coombs indirect
Test de compatibilit au laboratoire entre poche de sang et receveur
Dpistage et identification des agglutinines irrgulires
1.2.3. En Parasitologie
Dans le sang :
Recherche directe dhmatozoaires : goutte paisse et frottis sanguin
Recherche indirecte dhmatozoaires : Test dimmunochromatographie: ICT, Optimal, Paracheck
etc
Recherche directe de Trypanosomes et de microfilaires
Recherche des parasites sanguicoles par des techniques de concentration : leucoconcentration
la saponine (microfilaires), triple centrifugation (trypanosomes)
Dtermination de la parasitmie.
Dans les urines
Recherche directe de Schistosoma haematobium, de Trichomonas vaginalis,
de microfilaires, de levures.
Dtermination de la charge parasitaire
Dans les selles :
Recherche des kystes, amibes, ufs et parasites par un examen direct
Identification macroscopique de vers intestinaux
Recherche des kystes et ufs aprs une technique de concentration
Recherche spciale dufs doxyure et de taenia
Dans le LCR :
Recherche de cryptocoque lencre de chine.
1.2.4. En Bactriologie
Urines :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Dnombrement des germes urinaires
Identification
Antibiogramme
Pus :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Scrtions broncho-pulmonaires :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Scrtions ORL :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
1.2.5. En Biochimie
Dans le sang :
- Glycmie
- Azotmie
- Cholestrol total
- Cholestrol HDL
- Triglycrides
- Cratininmie
- Ionogramme (Na, K, Cl)
- Protidmie
- Bilirubinmie
- Transaminases (ASAT, ALAT)
- Amylasmie
- Calcmie
- Magnsmie
- Phosphormie
- Phosphatases alcalines
- Fer srique
- Electrophorse des protines
- Electrophorse de lhmoglobine
Dans les urines :
- Albumine
- Sucre
- Corps ctoniques
1.3.2. En Hmatologie
Hmogramme (NFS)
Vitesse de sdimentation
Test dEmmel
Taux des rticulocytes
Electrophorse de lhmoglobine
Dosage de lHb F
Dosage de lHb A2
Adnogramme
Mylogramme
Temps de saignement
Temps de Quick (Taux de prothrombine et INR)
Temps de cphaline active (TCA)
Temps de thrombine
Dosage du fibrinogne
Dosage des D-Dimre
Dosage des facteurs de la coagulation
Dosage du facteur Willebrand
Dosage des protines S, C et de lantithrombine
Dtermination des anticorps anti phospholipides (LA et APA)
Groupage sanguin dans les systmes ABO et Rhsus
Recherche de lantigne D faible
Phnotypage tendu
Test de Coombs direct
Test de Coombs indirect
Test de compatibilit au laboratoire entre poche de sang et receveur
Dpistage et identification des agglutinines irrgulires
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 12)
1.3.3. En Parasitologie
Dans le sang :
Recherche directe dhmatozoaires : goutte paisse et frottis sanguin
Recherche indirecte dhmatozoaires : Test dimmunochromatographie : ICT, Optimal, Paracheck
etc
Recherche directe de Trypanosomes et de microfilaires
Recherche des parasites sanguicoles par des techniques de concentration : leucoconcentration
la saponine (microfilaires), triple centrifugation (trypanosomes)
Dtermination de la parasitmie.
Identification des microfilaires
Srologie parasitaire et mycologique
Recherche et culture de Leishmanies
Dans les urines :
Recherche directe de Schistosoma haematobium, de Trichomonas vaginalis,
de microfilaires, de levures.
Dtermination de la charge parasitaire
Test dclosion des ufs de schistosomes
Dans les selles :
Recherche des kystes, amibes, ufs et parasites par un examen direct
Identification macroscopique de vers intestinaux
Recherche des kystes et ufs aprs une technique de concentration
Recherche spciale dufs doxyure et de taenia
Recherche spciale des larves danguillule
Recherche des Cryptosporidies
Recherche des Microsporidies
Recherche dIsospora belli, de Cyclospora
Dans le LCR :
Recherche de cryptocoque lencre de chine.
Prlvements divers
Recherche de parasites.
Recherche de champignon par examen direct, culture et antifongigramme.
Recherche de Pneumocystis carinii
1.3.4. En Bactriologie
Urines :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Dnombrement des germes urinaires
Identification
Antibiogramme
Pus :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Scrtions broncho-pulmonaires :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Scrtions ORL :
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Scrtions gnitales (voir manuel du programme de lutte contre les IST)
Examen macroscopique
Examen microscopique
Isolement, identification
Antibiogramme
Sang : Hmoculture
Srologies :
Srodiagnostic de Widal et Flix
Srodiagnostic des streptococcies : ASLO, ASDOR-B
Srologie syphilitique (voir manuel du programme de lutte contre les IST)
Srodiagnostic des infections VIH (voir manuel du programme VIH)
Antibiogramme
1.3.5. En Biochimie
Dans le sang :
- Glycmie
- Azotmie
- Cratininmie
- Cholestrol total
- Cholestrol HDL
- Triglycrides
- Ionogramme (Na, K, Cl)
- Gaz du sang (pH, PaCO2, PaO2, HCO3)
- Protidmie
- Bilirubinmie
- Transaminases (ASAT, ALAT)
- Phosphatases alcalines
- Gamma GT
- Amylasmie
- Calcmie
- Magnsmie
- Phosphormie
- Fer srique
- Ferritine
- Transferrine
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 14)
Chapitre 2
EQUIPEMENTS ET MATERIELS
NECESSAIRES PAR NIVEAU
Equipement / Matriel
Agitateur type vortex
Quantit minimale
1
1
1
1
2
1
1
2
Centrifugeuse de paillasse
Dminralisateur
1
1
Distillateur deau
Egouttoir
Glacire et accumulateurs de froid
Microscopes optiques
1
2
2
2
2 de chaque
2
1
1
Quantit minimale
1
2
1
1
1
1
1
1
2
1
1
4
2
1
1
1
1
1
1
1
1
2
4
2 de chaque
3
2
3
1
1
2
Minuterie
Platine chauffante
Photomicroscope
Rfrigrateur avec conglateur
Rotateur
Spectrophotomtre
Spectrophotomtre UV-VIS
2
1
1
3
2
1
2
Chapitre 3
PROCEDURES TECHNIQUES
Pot de coproculture
Transport
Le prlvement est immdiatement achemin au laboratoire ; si le transport est diffr, les selles doivent
tre ensemences dans un milieu Cary Blair.
a) Examen macroscopique :
Lexamen macroscopique apprcie lil nu laspect des selles qui, dans les cas typiques, sont liquidiennes,
ressemblant de leau de riz.
Dautres aspects sont cependant possibles.
b) Examen microscopique :
Il sagit surtout dun examen ltat frais (une goutte de selles entre lame et lamelle observe lobjectif x
40) pour rechercher essentiellement une mobilit suspecte des bactries, savoir des bacilles trs mobiles
grce une ciliature polaire, compars des toiles filantes.
Une coloration de Gram peut tre effectue : les vibrions se prsentent alors sous forme de bacilles
Gram ngatif incurvs (en virgule).
Aspect des colonies de V. cholerae sur GNA ( droite) et sur TCBS ( gauche)
d) Identification
Lidentification est ralise en deux tapes sur les colonies suspectes aprs vrification de leur morphologie
et de leur mobilit lexamen microscopique (bacilles trs mobiles par ciliature polaire, Gram ngatif
incurvs) :
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 23)
Les principaux caractres didentification de Neisseria meningitidis sont les suivants : diplocoques
Gram ngatif, arobie stricte, oxydase (+), Maltose (+), Glucose (+).
Les tests dagglutination permettront la confirmation, en prcisant le srogroupe.
g) Antibiogramme : La sensibilit des souches aux antibiotiques suivants sera particulirement surveille :
chloramphnicol, cotrimoxazole, aminopnicilline, cphalosporines de 3e gnration.
h) Acheminement des souches au Laboratoire National de Rfrence :
Les souches identifies et isoles en culture pure seront envoyes au Laboratoire National de Rfrence
sur milieu de conservation qui sera mis la disposition des laboratoires du Rseau, et conformment aux
rgles dexpdition des chantillons infectieux.
3.1.3. Shigellose :
a) Prlvement :
Les selles sont recueillies dans des pots propres.
b) Transport :
Le prlvement est immdiatement achemin au laboratoire ; si le transport est diffr, les selles doivent
tre ensemences dans un milieu Cary Blair.
c) Examen macroscopique :
Il vrifie la consistance des selles, la prsence de glaire, de sang de mucus.
Caractres
S. dysenteriae
S. flexneri
S. boydii
S. sonnei
Mannitol
(-)
(+)
(+)
(+)
Indole
(-)
(-)
ONPG
(-)
(+)
3.2. HEMATOLOGIE
3.2.1. Hmatologie cellulaire
a) Hmogramme (NFS)
Cest ltude quantitative et qualitative des lments figurs du sang.
Le prlvement est effectu sur tube EDTA
(Le sang de contrle (haut, normal et bas) pass une deux fois par jour selon le nombre de
prlvements doit donner des rsultats inclus dans les normes tablies par le laboratoire).
Il doit comporter :
la numration des cellules sanguines (globules rouges, globules blancs et plaquettes)
ltude des constantes hmatologiques :
Fixation
- Placer la lame du frottis sur un support horizontal au dessus dun bac de coloration.
- Verser sur la lame 5 gouttes de colorant May-Grnwald pur de faon recouvrir compltement le
frottis. Laisser agir 3 minutes. Laver leau tamponne ( dfaut utiliser leau de robinet)
Coloration au Giemsa
Prparer une dilution du Giemsa au dixime avec de leau tamponne (eau neutre)
Recouvrir le frottis de la solution dilue
Laisser agir 20 mn
Laver leau
Schage
Laisser scher la lame lair, en position incline, aprs avoir essuy la face infrieure de la lame
avec du papier filtre.
- Attendre au moins 5 minutes avant lexamen microscopique du frottis.
Polynuclaire neutrophile
o Taille: 12 14m, arrondi
o Noyau : 3 5 lobes
o Cytoplasme : acidophile,
petites granulations marron clair
(granulations neutrophiles)
Polynuclaire osinophile
Polynuclaire basophile
o Taille:11 13 arrondi
o Noyau:2 4 lobes denses
o Cytoplasme:acidophile clair
o Granulations:bleu violet fonc,
nombreuses pouvant recouvrir le noyau
Lymphocyte (Petit):
o Taille: 9-11 arrondi
o Noyau: rond et dense
o Cytoplasme: basophile clair
o Granulations: nant
Lymphocyte (Grand):
o Taille: 10-15 arrondi,
dformable
o Noyau: rond, ovale ou en
drapeau
o Cytoplasme: bleu trs clair
Lymphocyte (Granuleux):
o Taille: 10-14 arrondi,
o Noyau: rond, ovale
o Cytoplasme: bleu clair
o Granulations: quelques
granulations azurophiles
Monocyte
o Taille: 18-20 arrondi,
o Noyau: rond ou irrgulier
o Cytoplasme: bleu clair, peut
contenir des vacuoles
o Granulations: trs fines, trs
nombreuses, azurophiles
Monocyte:
Noyau irrgulier, cytoplasme gris
dans lequel on devine de fines
granulations
Paquettes:
Cinq petits lments colors en violet.
NB : une diffrence de taille = aniso
cytose plaquettaire
8 jours 3
mois
3 mois 3
ans
3 6ans
6 15
ans
Hmaties 10.6/L
(Tera/L)
5,0 6,0
3,8 4,8
3,6 5,2
4,1 5,3
4,0 5,4
Leucocytes 10/L
(Giga/L)
10,0 30,0
6,0 18,0
6,0 15,0
4,0 10,0
Plaquettes 10/L
(Giga/L)
150 400
150 400
150 400
150 400
Hmoglobine g/dL
Adulte
H : 4,5 5,8
F : 3,8 5,4
14,5 22,5
10 16
10,5 13,5
10,5
13,5
11,5
14,5
36 44
37 45
H : 13,5
17,5
F : 12,5
15,5
H : 40 50
Hmatocrite %
44 58
38 44
36 44
F : 37 47
VGM fl
100 120
85 96
70 86
73 89
77 91
82 98
TCMH pg
34 38
24 34
23 31
24 30
24 30
> ou = 27
CCMH g/dL
32 36
32 36
32 36
32 36
32 36
32 36
Formule leucocytaire
en 10/L
Polynuclaires neutrophiles
6,0 26,0
1,5 8,5
1,5 8,5
1,5 8,5
1,8 8,0
1,8
7,5
Polynuclaires osinophiles
0,2 0,85
0,2 1,2
0,05 0,7
0,02 0,65
0 0,6
0,04
0,8
Polynuclaires basophiles
0 0,64
0 0,2
0 0,2
0 0,2
0 0,2
0 0,2
Lymphocytes
2,0 11,0
2,0 11,0
4,0 10,5
2,0 8,0
1,5 6,5
1,0
4,5
Monocytes
0,4 3,1
0,05 1,1
0 0,8
0 0,8
0 0,8
0,2
1,0
b) Vitesse de sdimentation
Conditions de prlvement
- Prlvement de sang veineux (en gnral au pli du coude) ; le tube de prlvement contient un anticoagulant :
EDTA ou citrate trisodique 3,8% dans une proportion de 20% (1 volume danticoagulant pour 4 volume
de sang)
- Le prlvement est ralis de prfrence jeun
Principe
Cest la vitesse laquelle les hmaties contenues dans le plasma sdimentent au fond dun tube calibr et
gradu, appel tube de Westergreen. Elle correspond la hauteur de chute des particules sanguines dans
le tube.
Matriel et ractifs
- le tube de Westergreen : cest une pipette de dimensions standardises : longueur totale 300 mm, diamtre
infrieur 2,5 mm. Cette pipette est gradue de 0 200 mm de haut en bas. Elle est en matire plastique
et usage unique.
- le support : gnralement adapt aux pipettes, il permet de les maintenir strictement verticales.
Technique
- Aspirer le sang, bien homognis, dans la pipette de Westergreen jusquau trait 0 en tirant sur la
languette prsente dans la pipette.
- Placer aussitt la pipette sur le support.
Lecture
Lire la hauteur du plasma surnageant (exprime en mm) au bout dune heure.
NB : les anciennes lectures 2h et 24h nont pas dintrt.
Rsultats
Les valeurs normales sont :
- enfant : 6 25 mm
- femme adulte : 4 20 mm
- homme adulte : 3 10 mm
Causes derreurs
La sdimentation des hmaties peut tre ralentie artificiellement si :
- lchantillon sanguin est partiellement coagul
- la mesure est faite partir dchantillon sanguin prlev depuis plus de 2 heures
- la temprature du laboratoire est basse
La sdimentation des hmaties peut tre augmente artificiellement si :
- la pipette de Westergreen est incline
- lchantillon sanguin est hmolys ou prlev avec un excs danticoagulant
- la temprature du laboratoire est leve.
Conditions de prlvement
le prlvement est effectu sur sang veineux dans un tube avec ou sans anticoagulant
il nest pas ncessaire dtre jeun
Principe
En prsence dun rducteur (mtabisulfite de sodium 2%), les hmaties du drpanocytaire prennent une
forme en faucille ou en feuille de houx .
Matriel et ractifs
Spatule
Mta bisulfite de sodium en poudre
Balance de prcision
Eau distille
Flacon de 125 ml
Papier buvard
Lame
Lamelles
Vernis ongles
Technique
o Prparation du mtabisulfite
- dposer le papier buvard sur le plateau de la balance
- calibrer lappareil
- laide de la spatule, prlever la poudre de mta bisulfite et la dposer sur le papier buvard
- peser exactement 2 grammes de cette poudre
- recueillir les 2 grammes dans un flacon de 125 ml
- ajouter 100 ml deau distille
- mlanger et attendre 15 mn environ pour que la solution soit stable
- tester la solution de mta bisulfite 2% avec les chantillons positifs de la veille
NB : Le contrle de qualit interne exige de prparer le mtabisulfite tous les jours et de le vrifier sur des
chantillons considrs connus positifs et ngatifs.
o Prparation du test
dposer sur une lame propre une goutte de sang et une goutte de la solution de mtabisulfite
mlanger doucement
dposer sur le mlange une lamelle en vitant les bulles dair
essuyer dlicatement lexcs du mlange avec du papier buvard ( dfaut utiliser une compresse)
sceller les bords de la lamelle avec du vernis ongles ou de la paraffine, le but tant dempcher
le contact des hmaties avec loxygne de lair ambiant.
Lecture
Elle se fait au bout de 15 30 mn au microscope un grossissement 40.
Rsultats
- test ngatif : les hmaties gardent leur forme rgulirement arrondie ;
- test positif : prsence de nombreuses hmaties en forme de faucille .
Causes derreurs
Etalement mal fait avec hmaties traumatises
Prsence de bulles dair
Conditions de prlvement
sang veineux sur tube EDTA ou sang capillaire
il nest pas ncessaire dtre jeun
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 38)
Principe
Les rticulocytes sont des globules rouges jeunes qui possdent encore des ribosomes et des
mitochondries. Ils sont ds lors capables dun mtabolisme assez intense et ils synthtisent encore activement
de lhmoglobine. On les reconnat le plus facilement au moyen de colorations utilisant le bleu de crsyl ou
le bleu de mthylne nouveau : dans ces conditions les organites cellulaires cits plus haut sont rendus
visibles sous la forme dune substance granulo-filamenteuse caractristique.
Matriel et ractifs
tube hmolyse
bain marie
pipette Pasteur
lame
Technique
dans un tube hmolyse, dposer 1goutte de sang et 1goutte de bleu de crsyl (si le taux dHb est
infrieur 11g/dL, mettre 2 gouttes de sang et 1 goutte de bleu de crsyl)
puis confectionner un frottis et lire au microscope au grossissement 100 avec de lhuile immersion
(idalement lire sur dix champs ; compter le nombre de rticulocytes et de globules rouges et
exprimer le pourcentage de rticulocytes sur le nombre globules rouges).
Rsultats
Le rsultat est exprim en pourcentage et surtout en valeur absolue de rticulocytes par mm3 de sang. Le
taux normal est de :
-
Le taux des rticulocytes traduit lactivit de lrythropose mdullaire. Il est un indicateur du type danmie.
Frottis avec prsence de rticulocytes (3 rticulocytes sont visibles sur chaque frottis)
Causes derreurs
corps de Jolly
corps de Heinz
Conditions de prlvement
sang veineux
utiliser un tube avec de lhparine (EDTA contient des sels)
Principe
Les hmaties, qui in vivo sont dans un milieu isotonique, se comportent in vitro dans des solutions
hypotoniques comme des osmomtres. Par osmose, leau diffuse du milieu le moins concentr en osmoles
vers le compartiment le plus concentr en osmoles.
Dans les solutions hypotoniques, leau pntre dans les hmaties qui gonflent grce aux proprits dlasticit
de la membrane plasmique. Au-del dun volume maximal, les hmaties clatent en librant lhmoglobine
dans le milieu extrieur : il y a hmolyse.
Dans certaines pathologies et notamment lors danmies hmolytiques, la rsistance globulaire osmotique
(ou RGO) des hmaties peut tre :
- augmente : lhmolyse apparat pour des solutions de concentration en NaCl infrieure celle
provoquant normalement lhmolyse, donc pour des solutions dhypotonie suprieure. Cest le
cas lors de thalassmies
- diminue : lhmolyse apparat pour des solutions de concentration en NaCl suprieure celle
provoquant normalement lhmolyse, donc pour des solutions dhypotonie infrieure. Cest le cas
lors de la microsphrocytose.
tubes hmolyse
portoir
eau distille
NaCl
Pipette
Etuve
Centrifugeuse
Matriel
Technique
La dtermination de la RGO se ralise sur sang total ou sur sang dplasmatis, 37C pendant une heure.
On ralise une gamme de solutions de NaCl hypotoniques par rapport au plasma. Les concentrations en
NaCl de ces solutions varient de 2,6 6g/L et sont croissantes de 0,2 en 0,2g/L.
- disposer les 18 tubes hmolyse sur un portoir et les numroter
- prparer les 18 solutions de NaCl partir dune solution mre 7g/L et deau distille selon le
protocole prsent dans le tableau suivant :
N des tubes
29
28
14
15
16
17
18
18
19
20
21
22
27
26
17
16
15
14
13
5,2
3,4 3,2
2,8
2,6
Lecture
o Lecture directe
Faire la lecture de la gamme de gauche droite en partant des solutions les moins hypotoniques. Observer :
- dans les premiers tubes, le surnageant est incolore, les hmaties sont intactes et forment un culot
rouge au fond du tube : il ny a pas dhmolyse
- partir dun certain tube, le surnageant devient jaune, quelques hmaties ont t lyses et ont
libr leur hmoglobine : il y a hmolyse partielle ; dans les tubes suivants, le culot globulaire
diminue de plus en plus et la couleur du surnageant saccentue
- partir dun certain tube, le culot globulaire a disparu, toutes les hmaties sont dtruites, lhmolyse
est totale : il reste un petit culot blanchtre compos de restes membranaires.
Noter les concentrations en NaCl des solutions des 2 tubes :
- Hi ou hmolyse initiale : premier tube o le surnageant est jaune
- Ht ou hmolyse totale : premier tube o le culot globulaire a disparu.
o Lecture ou spectrophotomtre
Complter la lecture en mesurant labsorbance de chaque surnageant 540 nm afin de doser la quantit
dhmoglobine libre. Labsorbance du surnageant du premier tube de la gamme correspondra 0%
dhmolyse et labsorbance du surnageant du dernier tube correspondra 100% dhmolyse.
Tracer la courbe % dhmolyse = f (concentration en NaCl)
Dterminer la valeur de la concentration en NaCl correspondant 50% dhmolyse (H50%)
Rsultats
o Lecture directe
Les valeurs normales sont les suivantes :
Valeurs normales de la RGO
Hi
Sang total
4,4 4,6 g/L
Hmaties dplasmatises
4,8g/L
Ht
3,4g/L
3,6g/L
Lecture au spectrophotomtre
Interprtation
pour des valeurs obtenues suprieures la normale, la RGO est diminue, les hmaties sont plus
fragiles.
Pour des valeurs obtenues infrieures la normale, la RGO est augmente, les hmaties sont plus
rsistantes
b) Adnogramme
Principe
Cest ltude cytologique du suc ganglionnaire aprs ponction laiguille fine. Ladnogramme permet un
diagnostic dorientation des prolifrations lymphodes, quelles soient bnignes ou malignes.
Matriel
aiguille fine (23 G de prfrence) et seringue
lames
coton
alcool
Technique
c) Mylogramme
Principe
Cest ltude cytologique de la moelle osseuse.
Sites de la ponction
La moelle osseuse rouge est essentiellement situe dans les piphyses des os longs et dans les os plats. Le
site de ponction prfrentiel chez ladulte est le sternum et lpine iliaque chez lenfant. Chez le nourrisson,
il faut prfrer lpine iliaque ou la tubrosit tibiale antrieure.
Matriel
La ponction est ralise laide dun trocart : le trocart de Mallarm qui est compos de 2 lments
distincts :
- une aiguille creuse, lextrmit infrieure effile. Sa partie suprieure est compose de 2 branches
perpendiculaires laxe de laiguille, branches permettant une bonne prise en main par loprateur ;
- un mandrin lextrmit suprieure aplatie afin de pouvoir exercer une pression suffisante. Le
mandrin traverse laiguille creuse.
Aiguille et mandrin doivent avoir une extrmit pointue, tranchante et non mousse.
Prlvement
Au site de la ponction :
- la peau est soigneusement dsinfecte
- le trocart tenu fermement par loprateur, est enfonc perpendiculairement la peau et la surface
osseuse avec un mouvement de rotation jusqu ce que lon franchisse la corticale osseuse
- aprs pntration, le mandrin est retir et remplac par une seringue qui aspire de la substance
mdullaire (volume prlev est infrieur 0,5cc)
- enlever la seringue et replacer le mandrin
- le contenu de la seringue est dpos directement sur la lame pour un frottis mdullaire ralis de la
mme faon quun frottis sanguin
NB : si la premire aspiration a ramen du matriel, laiguille peut tre retire et un pansement lgrement
compressif est appliqu au point de ponction.
Coloration
Les frottis confectionns sont schs lair et colors au May Grunwald Giemsa mais ventuellement avec
des colorants cytochimiques.
Lecture
Elle se fera dabord au faible grossissement pour apprcier la richesse cellulaire puis au fort grossissement
pour ltude des diffrentes lignes.
3.2.2. Hmostase
Lexploration de la coagulation doit se faire sur des prlvements avec comme anticoagulant le citrate
trisodique raison dun volume danticoagulant pour 9 volumes de sang.
Les tests doivent tre raliss dans les 4 heures qui suivent le prlvement.
Les outils du contrle de qualit reposent sur deux types dchantillons biologiques :
- des pools de plasmas normaux ou anormaux prpars localement et aliquots
- des plasmas lyophiliss prpars industriellement par diffrentes firmes pharmaceutiques qui
sont soit des plasmas talons ou standards de calibration ou alors des plasmas de contrle
ayant une valeur moyenne et un intervalle de confiance dtermine selon la technique utilise.
Ces diffrents chantillons sont utiliss pour le contrle de qualit journalier qui permet la validation
quotidienne des rsultats. Il est prfrable de passer ces contrles en dbut et en cours de srie et de
mentionner les rsultats sur un graphe. Lensemble des procdures de contrle de qualit interne doit tre
clairement dcrit dans un cahier technique qui doit tre rgulirement mis jour. Le contrle de qualit
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 44)
interne doit aussi vrifier les tapes pr analytiques (prlvements) et post analytiques (validation, rendu et
archivage des rsultats).
a) Temps de saignement
Principe
Cest un test global qui explore lhmostase primaire dans son ensemble (ladhsion, lagrgation et le
facteur Willebrand)
.Il est ralis in vivo et mesure la dure de lhmorragie provoque par une incision de la couche superficielle
de la peau des les conditions normalises.
Nous dcrirons la mthode dIvy 3 points qui est la mthode de rfrence.
Matriel
tensiomtre
vaccinostyle strile
papier buvard
ther
chronomtre
Technique
- Placer le brassard tension au bras gonfl 40 mm Hg, pression qui sera maintenue constante toute
la dure du test,
- dsinfecter la peau de lavant bras avec lther (lalcool entrane une vasodilatation), laisser scher,
- raliser 3 piqres distantes de 2 cm chacune au niveau de lavant bras laide du vaccinostyle
- dclencher immdiatement le chronomtre,
- lexcs de sang est pong dlicatement toutes les 30 secondes laide du papier buvard (viter de
toucher et de frotter les berges des points de piqre) ;
- noter le temps au bout duquel le saignement sarrte au niveau de chaque point de piqre et faire la
moyenne
Rsultats
La valeur normale chez ladulte doit tre infrieure 5 mn.
Principe
Cest le temps de coagulation dun plasma citrat, pauvre en plaquettes recalcifi en prsence de
thromboplastine tissulaire. Le TQ explore la voie extrinsque de la coagulation.
Matriel et ractifs
o Matriel (commun pour les autres tests dhmostase)
- Billes magntiques
- Barrettes
- Plasma Citrate
- Micropipette
- Coagulomtre au moins semi automatique (type ST art)
- Embouts
o Ractif
- Thromboplastine calcique (ractif dclenchant)
Technique
dposer les barrettes dans la zone dincubation
distribuer une bille dans chaque cupule
mettre 50L de plasma citrat dans chaque cupule
incuber pendant 1mn
transfrer dans la zone de lecture
dclencher la coagulation en distribuant 100L de thromboplastine calcique (princube 37C)
dans chaque cupule
Rsultats
o Expression en pourcentage dactivit prothrombinique
En pratique courante, le temps de Quick (TQ) est converti en taux de prothrombine (TP) exprim en
pourcentage. La conversion du TQ en TP se fait laide dune droite dtalonnage ou droite de Thivolle ,
tablie partir de plasmas normaux tests en dilution.
Les valeurs moyennes normales sont comprises entre 70 et 100%.
o Expression des rsultats lors des traitements aux antivitamines K (AVK)
Pour la surveillance des traitements aux AVK le pourcentage utilis dans lexpression du TQ ne convient
pas, car les thromboplastines commerciales utilises ont une sensibilit ingale aux AVK. Le rapport
international normalis (ou International Normalized Ratio : INR) est un nombre sans dimension, gal au
rapport entre le TQ du malade (TQm) et le TQ du tmoin (TQt), rapport lev lindex international de
sensibilit (ou International Sensitivity Index : ISI).
LISI est dtermin pour chaque thromboplastine commerciale par rapport une prparation de rfrence.
Il est fourni par le fabricant chaque utilisateur.
INR= (TQm /TQt) ISI
Les valeurs exprimes en terme dINR dfinissent deux niveaux danticoagulation :
- anticoagulation faible : INR= 1,5 3
- anticoagulation leve : INR= 3 5
Un INR suprieur 5 est associ un risque hmorragique excessif
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 46)
Ractifs
ractif cphaline activateur
solution de CaCl2
Technique
placer les barrettes dans la zone dincubation
mettre une bille dans chaque cupule
ajouter 50L de plasma citrat et 50L de cphaline activateur
incuber pendant 3mn
transfrer la barrette en zone de lecture
dclencher la coagulation en ajoutant 50L de solution de CaCl2
d) Temps de thrombine
Principe
Cest le temps de coagulation dun plasma citrat pauvre en plaquettes, recalcifi 37C en prsence
dune quantit dtermine de thrombine, quantit choisie de faon entraner la coagulation en 20 secondes
dun plasma tmoin.
Le temps de thrombine explore la fibrinoformation.
Matriel
Solution de thrombine calcique.
Technique
mettre 100L de plasma dans les barrettes places en zone dincubation et contenant des billes
incuber 2 mn
dclencher la coagulation en ajoutant 100L de solution de thrombine calcique
Rsultats
Un temps de thrombine est gnralement infrieur 22 s. Tout cart suprieur ou gal 5s entre le temps
de thrombine du plasma tester et le temps de trombine du plasma tmoin est considr comme significatif.
e) Dosage du fibrinogne par mthode chronomtrique (Clauss)
Principe
Le temps de coagulation dun plasma citrat pauvre en plaquettes, dilu dans des proportions adquates,
mis en prsence dun excs de thrombine 37C et en optimum calcique, est directement fonction du taux
de fibrinogne fonctionnel plasmatique.
Ractifs
solution de thrombine contenant un inhibiteur spcifique de lhparine permettant le dosage du
fibrinogne sur le plasma des patients traits par cet anticoagulant.
Tampon pH 7,35 permettant la dilution du plasma (tampon Owren-Koller)
Technique
raliser une dilution du plasma au 1/20 avec le tampon
mettre 100L de la dilution dans les cupules places en zone dincubation et contenant des billes
incuber 1mn
Transfrer la barrette en zone de mesure et dclencher la coagulation en ajoutant 50L de solution
de thrombine calcique.
Rsultats
Le taux de fibrinogne normal est compris entre 2 et 4 g/L (le temps de coagulation mesur est compris
entre 8 et 20 secondes.
f) Dosage des D-Dimres
Principe
Les D-Dimres sont des structures spcifiques des produits de dgradation de la fibrine. Ils sont mis en
vidence directement dans le plasma citrat par une raction dagglutination passive utilisant des particules
de latex sensibilises avec un anticorps monoclonal anti D-Dimres ne ragissant pas avec le fibrinogne.
Les particules de latex sont sensibilises de telle sorte que lon observe une agglutination partir dune
concentration plasmatique des D-Dimres gale ou suprieure 500ng/mL.
Ractifs
suspension de latex sensibilise avec des anticorps anti D-Dimres
plasma contrle positif
plasma contrle ngatif
solution tampon pH 8,2
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 48)
Technique
o Protocole qualitatif
- sur une carte, dposer
50 L de contrle positif
-
50 L de plasma tester
50 L de contrle ngatif
Mesure du Facteur Willebrand Antigne (vWAg) : ce facteur peut tre dos par des mthodes
immunologiques laide dantisrum htrologue par lectro-immuno-diffusion (Laurell), immunoenzymologie (ELISA), ou radio-immunologie.
Les protines S, C et lantithrombine sont les inhibiteurs physiologiques de la coagulation. Leur mesure
repose sur des techniques chronomtriques ou immunologiques (en centre spcialis uniquement).
j) Dtermination des anticorps anti phospholipides (LA et APA)
Les anti phospholipides de type lupus anticoagulant (LA) sont dpists devant un allongement dun temps
de la coagulation non corrig par ladjonction dun plasma normal.
Le principe des tests spcifiques didentification de cet anticoagulant circulant est bas, soit sur des tests
de potentialisation en diluant la cphaline ou la thromboplastine, soit sur des tests de neutralisation en
apportant un excs de phospholipides.
Les antiphospholipides de type anticardiolipine (APA) ne perturbent pas les tests de coagulation. Leur
diagnostic est ralis par des tests immunologiques (Elisa ou radio-immunologie).
3.2.3. Immuno-hmatologie et transfusion sanguine
Les prlvements peuvent tre raliss soit sur tube sec soit sur tube avec anticoagulant.
Le contrle de qualit interne repose sur lanalyse quotidienne dchantillons de contrle effectue dans
les mmes conditions que celles appliques aux chantillons biologiques.
a) Groupage sanguin dans les systmes ABO
Principe
Le groupage sanguin dans le systme ABO repose sur deux preuves ralises simultanment et
complmentaires, toutes deux tant des ractions dagglutination directe :
- preuve de Beth Vincent (ou preuve globulaire) : les hmaties tester sont mises en contact avec
des anticorps sriques connus afin didentifier les allo-antignes de ces hmaties.
- preuve de Simonin (ou preuve srique) : des hmaties tests, dont les allo-antignes du systme
ABO (H) sont connus, sont mises en contact avec le srum tester afin didentifier les anticorps
du systme ABO(H) prsents dans ce srum
Ractifs
o Srums tests
- srum-test anti-A
- srum-test anti-B
- srum-test anti-AB
o Hmaties tests
Ce sont des hmaties humaines prleves sur une solution anticoagulante et conservatrice, laves 3 fois en
srum physiologique, puis remises en suspension dans cette solution.
Sont utilises :
- des hmaties-tests A
- des hmaties tests B
- des hmaties tests O
NB : les hmaties tests doivent tre prpares quotidiennement au laboratoire.
Les diverses techniques
Elles doivent toujours tre ralises:
- deux fois
- par deux manipulateurs diffrents
Elles sont varies :
- technique en plaque
- technique en tube hmolyse
- technique en microplaque (technique manuelle ou automatise
- technique en gel (technique manuelle ou automatise)
Les tmoins
Les preuves de Simonin et de Beth Vincent doivent tre obligatoirement valides par des tmoins :
Tmoin AB : mlanger une goutte de srum AB et une goutte de culot dhmaties tester.
Ce tmoin ne doit pas prsenter dagglutination. Il permet de sassurer que les hmaties testes ne sont
pas agglutines par des anticorps sriques autres que les Ac anti-A ou anti-B. La prsence
dagglutination signifie une poly agglutinabilit
Le tmoin AB permet de contrler lpreuve de Beth Vincent.
Tmoin allo : mlanger une goutte de srum tester et une goutte de culot dhmaties tests O.
Ce tmoin ne doit pas prsenter dagglutination. Il permet de sassurer quil ny a pas dans le srum
tester, dAc susceptibles de ragir avec des structures rythrocytaires autres que les Ag A et B.
La prsence dagglutination attesterait de la prsence dallo Ac en dehors du systme ABO.
Le tmoin allo permet donc de contrler lpreuve de Simonin.
Tmoin auto : mlanger une goutte de srum tester et une goutte de culot dhmaties tester
Ce tmoin, ralis partir des hmaties et du srum du sujet ne doit pas prsenter dagglutination. Il
permet de sassurer que dans le srum du sujet, il ny a pas dauto-anticorps dirigs contre des structures
de membrane des hmaties et que les hmaties ne sont pas auto-agglutinables.
Il permet donc le contrle des agglutinations observes dans les deux preuves.
Quelques causes derreurs
o Erreurs de manipulation : - erreurs dtiquetage des chantillons
- existence dhomonymes
- technicit dfaillante
o Erreurs srologiques :
- agglutination faible ou incomplte
- double population dhmaties (aprs une transfusion htrogroupe ou incompatible)
- altrations des rythrocytes : on observe une positivit dans tous les tests sriques.
a) le Phnotypage Rhsus
Principe
Cest la recherche la surface des hmaties testes des allo Ag courants du systme Rhsus, lAg D, lAg
C, lAg E, lAg c et lAg e, en mettant en contact ces hmaties avec des Ac spcifiques connus :
- anti-D
- anti-C
- anti-c
- anti-E
- anti-e
Ractifs ncessaires
srum-test anti-D dorigine humaine ou monoclonale
srum-test anti-E dorigine humaine ou monoclonale
srum-test anti-e dorigine humaine ou monoclonale
srum-test anti-C dorigine humaine ou monoclonale
srum-test anti-c dorigine humaine ou monoclonale
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 53)
o Mode opratoire
prlever dans un mlange constitu du mme volume de culot globulaire et de plasma
dlimiter sur la plaque chauffante dun microscope, huit espaces spars les uns des autres de 2
3 cm
au niveau de chaque espace, raliser rapidement les dpts comme indiqus ci-dessous
Technique du phnotypage Rhsus
1
1goutte de
sang
tester
2
1goutte
hmaties
O
Rhsus+
3
1goutte
hmaties
O rhsus
+
1goutte de
srum
tmoin
albumineux
+
1goutte
de srum
test
anti-D
+
+
1goutte 1 goutte
de srum de srum
test
test
anti-D
anti-D
4
5
1goutte
1goutte
de sang de sang
tester
tester
+
1 goutte
de srum
test
anti-C
6
1goutte
de sang
tester
7
1goutte
de sang
tester
8
1goutte
de sang
tester
+
1 goutte
de srum
test
anti-c
+
1 goutte
de srum
test
anti-E
+
1 goutte
de srum
test
anti-e
1 : tmoin ractif
Il ne doit pas prsenter
dagglutination. Une image
dagglutination peut tre
due :
- une auto-agglutination des
hmaties testes en raison
dune altration membranaire
ou de la prsence dauto-Ac
dans le srum
- une formation de rouleaux
dhmaties dus la BSA et
pouvant tre confondus avec
des agglutinants
2 : tmoin positif
Il doit prsenter une
agglutination. Il permet de
tester lefficacit du srum
anti-D en milieu albumineux
en sassurant que dans ces
conditions, les Ac anti-D
agglutinent bien les hmaties
porteuses dAg D.
3 : tmoin ngatif
Il ne doit pas prsenter
dagglutination. Il permet de
vrifier :
- la spcificit des Ac anti-D
en vrifiant quils ne donnent
pas de ractions croises
avec dautres Ag
- la non formation de
rouleaux dhmaties par le
srum anti-D.
Ractifs ncessaires
srum test anti-D
hmaties O Rhsus standard +
hmaties O Rhsus standard
srum antiglobuline humaine
srum albumineux sans Ac anti-D
Technique
* dans un tube hmolyse, mettre 1ml de sang tester
* laver les rythrocytes tester en srum physiologique et prparer, partir de ces rythrocytes, une
suspension 5% dans du srum physiologique
* prendre 4 tubes hmolyse et introduire dans les tubes 2, 3, et 4 : 100 L de srum anti D et dans
le tube 1 : 100 L de srum albumineux tmoin sans anti-D
* ajouter : - en 1 : 50 L drythrocytes examiner
- en 2 : 50 L drythrocytes O Rh standard +
- en 3 : 50 L drythrocytes O Rh standard - en 4 : 50 L drythrocytes examiner
* incuber les 4 tubes au bain marie pendant 45mn
* laver 3 fois la pastille globulaire en eau physiologique de la faon suivante :
- remettre les hmaties en suspension dans leau physiologique, centrifuger 1 mn 750 g
- la mme opration est rpte 3 fois
- aprs le dernier lavage, la totalit du surnageant doit tre bien limine
* ajouter 100 L de srum antiglobuline
* agiter doucement pour remettre les rythrocytes en suspension
* centrifuger 1 mn 400 g
* faire la lecture aprs agitation douce
o Premier cas
Lagglutination nest observe que dans le tube 2 : cela signifie que les rythrocytes tests ne possdent
pas dAg D faible. Le sujet est donc Rh standard
o Deuxime cas
Lagglutination nest observe que dans les tubes 2 et 4 : cela signifie que les rythrocytes tests possdent
lAg D faible. Le sujet est donc D faible.
o Troisime cas
Les tubes 1, 2 et 4 prsentent une agglutination :
- lagglutination du tube 2 est normale
- lagglutination dans le tube 1 tmoigne de la prsence dauto-Ac sur les rythrocytes ou de formation
de rouleaux en prsence de BSA. Le rsultat positif dans le tube 4 ne peut tre valid.
o Quatrime cas
Aucune agglutination nest observe dans le tube 2 (ni dans aucun des 3 autres tubes), il sagit dune erreur
ou de mauvais ractifs notamment le srum anti D. il faut donc recommencer.
b) Phnotypage tendu
Il consiste rechercher un ou plusieurs antignes rythrocytaires autres que ceux qui sont dfinis par le
groupage ABO-D et le phnotypage Rhsus.
Pour un systme donn, la recherche de chaque antigne est base sur lutilisation de lanticorps monoclonal
spcifique et du tmoin adquat.
Le contrle de qualit interne doit utiliser deux chantillons de contrle de phnotypes garantis, lun tant
ngatif, et lautre dexpression htrozygote .
c) Test de Coombs direct
Principe
Le test direct lantiglobuline ou test de Coombs direct permet la mise en vidence de la sensibilisation in
vivo des hmaties humaines par des anticorps de nature Ig G et/ou des fractions du complment. Ce test
doit tre ralis sur un chantillon de prfrence anti coagul.
Il repose sur lutilisation dantiglobuline humaine polyspcifique ou monospcifique.
Le contrle de qualit utilise des hmaties pralablement sensibilises par une antiglobuline in vitro par des
Ig G et ventuellement du complment.
Technique
Principe
Ce test met en prsence le srum tester dans lequel on recherche des anticorps libres, avec des hmaties
comportant des sites antigniques spcifiques de ces anticorps. Le test est positif lorsquil existe une
agglutination des hmaties en prsence dune antiglobuline.
Faire un panel O+
Diluer le pannel 5%
Mettre dans un tube hmolyse 1goutte de la dilution
Ajouter 3 gouttes de srum tester
Incuber 45 mn au bain marie prchauff 37C
Aprs incubation lire une premire fois
Sil ny a pas dagglutination faire 3 lavages leau physiologique
Bien goutter leau du troisime lavage
Ajouter une goutte dantiglobuline
Centrifuger une minute 1000 tr/mn
Remettre doucement les hmaties en suspension,
Agiter et incliner pour dceler la prsence dagglutination ou observer au microscope x 40 (entre
lame et lamelle)
Technique
Lecture
On recherche dans un srum des Ac irrguliers en incubant le srum en prsence dhmaties porteuses des
Ag spcifiques. Les anticorps, sils sont prsents, sunissent aux Ag : on obtient des hmaties sensibilises,
mais souvent sans provoquer une agglutination, en raison :
- des forces de rpulsion lectrostatiques importantes entre hmaties voisines
- du caractre masqu, peu accessible de certains antignes
Provoquer lagglutination en ralisant un pontage spcifique entre Ac unis des hmaties voisines grce
des antiglobulines spcifiques des pitopes des Ig humaines.
Il sagit donc dune raction dagglutination active indirecte.
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 57)
Le sang examin doit tre, de prfrence, prlev sur tube sec, les agglutinines sont alors recherches sur
le srum.
-
raliser un pannel O+
laver les hmaties 3 fois leau physiologique (le surnageant du dernier lavage doit tre compltement
limin)
remettre les hmaties en suspension dans leau physiologique (dilution 3%)
Prendre 3 tubes hmolyse, dposer dans chaque tube, 1goutte de la dilution et 3 gouttes de
srum tester
Incuber le tube 1 37, le tube 2 25 (temprature ambiante) et le tube 3 4 pendant 45 mn
Faire une premire lecture en agitant le tube tout doucement
Si le test est ngatif, faire trois lavages leau physiologique (le surnageant du dernier lavage doit
tre compltement limin)
Dans chaque tube mettre une goutte dantiglobuline
Centrifuger 1 mn 1000 tours/mn
Lecture
- Sil y a prsence dagglutination dans lun des 3 tubes la RAI est positive et il faut spcifier la
temprature
- Sil ny a pas dagglutination, la RAI est ngative
NB : les chantillons positifs doivent faire lobjet dune seconde tape didentification qui utilise au
moins 10 hmaties tests de groupe O qui doivent porter sparment diffrents antignes (les diffrents
Ag du systme rhsus, Ag Kell, Kidd, Duffy, MNS, Lewis, Lutheran)
Le contrle de qualit interne utilise des chantillons de contrle comportant des anticorps de spcificit et
de titre connus et sur des hmaties comportant lantigne correspondant dexpression htrozygote .
h) Test de compatibilit au laboratoire entre poche de sang et receveur
Cest une analyse qui consiste tester lchantillon de srum ou de plasma du receveur vis--vis des
hmaties de la tubulure du produit sanguin transfuser.
Ce test comporte la slection des units de sang transfuser en respectant les bonnes rgles de distribution,
puis prparer des hmaties de la tubulure afin quelles puissent tre testes dans les mmes conditions
techniques que la RAI, et enfin lexcution technique du test qui est identique celle utilise par la RAI.
Le contrle de qualit interne doit utiliser des chantillons identiques ceux utiliss pour la RAI.
3.3. PARASITOLOGIE
3.3.1. Examen parasitologique des selles :
a) Prlvement :
Emettre au laboratoire la totalit des selles dans un rcipient adapt lusage, tanche et rsistant. Les
techniques danalyse demandent un minimum de matires fcales et certains lments parasitaires sont
faiblement reprsents dans les selles.
Lorsque lmission au laboratoire est impossible, lacheminement de lchantillon doit tre immdiat.
b) Examen macroscopique :
Il renseigne sur ltat de la selle (diarrhe / constipation), sur la prsence danneaux de taenia, dadultes
dhelminthes.
c) Examen microscopique frais :
Il est fait partir dun frottis de selles tales dans une goutte deau. La totalit de la prparation doit tre
examine au grossissement 10 puis au 40.
Il permet de mettre en vidence : des flagells ou des amibes mobiles, des kystes, des ufs et larves
dHelminthes intestinaux.
d) Examen microscopique aprs coloration
La coloration de lugol ou du M.I.F prcisent certains lments morphologiques des protozoaires intestinaux.
* Coloration au lugol (solution iodo iodure 1%)
- dposer une goutte de selles liquides (ou rendues liquides avec de leau physiologique) ;
- ajouter une goutte de lugol sur la prparation et mlanger avant de recouvrir dune lamelle.
Le lugol colore en jaune les kystes et en brun fonc les vacuoles intra cytoplasmiques.
Le noyau, les cristallodes et la membrane cytoplasmique apparaissent par rfringence.
Le lugol dtruit les formes vgtatives de trichomonas intestinalis
* Coloration au MIF (Mercurothiolate-Iodo-Formol)
- Le mlange MIF est prpar au moment de lemploi de la manire suivante : dans un tube hmolyse,
mettre 0,15 ml de solution iodo iodure 5% puis 2,35 ml de solution mre MF et mlanger par
retournement du tube
- Ajouter au mlange ainsi ralis une parcelle de selles, homogniser laide dun agitateur. - Laisser
sdimenter 30 min puis recueillir avec une pipette Pasteur, la partie suprieure du culot o sont rassembls
les parasites.
Le MIF colore en rouge le cytoplasme, la membrane nuclaire et le caryosome des protozoaires. La
chromatine non colore apparat par rfringence. Les kystes murs apparaissent en blanc sur fond ros de
la prparation.
e) Examen microscopique aprs la concentration de Ritchie modifi :
Diluer une noix de selles dans de leau formole 10%. Aprs avoir tamis, transvaser 9 ml dans un tube
conique et ajouter 3 ml dther. Agiter et centrifuger 1 mn 1000 tours/ mn. Rejeter le surnageant, prlever
et examiner le culot.
ufs dAscaris :
ufs dAnkylostomes :
Anneaux
ufs
Kyste
ufs de tnia
Schistosoma mansoni :
Trypanosomes :
Filaires :
Accouplement de schistosomes
3.4. BACTERIOLOGIE
3.4.1. Urines :
a) Prlvement
Conditions :
. De prfrence, recueillir les urines du matin avant toute miction ; dfaut, on peut prlever les urines
tout moment, aprs une rtention dau moins 2 heures.
. Chez le malade sous sonde, viter de prlever directement dans la poche : clamper la tubulure et
ponctionner en amont du clampage aprs nettoyage soigneux.
. Prlever idalement avant toute antibiothrapie
. Respecter une asepsie rigoureuse
Technique
. Chez ladulte et grand enfant :
Au cours dune miction physiologique, il faut nettoyer le mat urinaire, rejeter les premires gouttes durines
et recueillir les urines en milieu de jet dans un pot strile.
. Chez le Nourrisson et le petit enfant :
Appliquer une poche adhsive strile autour des organes gnitaux externes et la changer toutes les 30
minutes en labsence de miction.
. En cas de rtention aigue durines, le recueil des urines se fait par sondage vsical ou par ponction
sus pubienne
Transport
Procder un envoi immdiat de lchantillon au laboratoire avec une fiche de renseignements bien remplie.
Les urines peuvent aussi tre conserves +4C pendant 2 heures.
b) Examen macroscopique :
Il permet dapprcier lil nu laspect des urines : claires, troubles, purulentes, hmatiques.
c) Examen microscopique :
Lexamen ltat frais est effectu sur les urines totales et permet une apprciation quantitative ou
semi quantitative des leucocytes, des hmaties, des cellules pithliales (en nombre / champ ou en croix).
Cet examen permet galement de vrifier la prsence de cristaux, de levures, de parasites (Trichomonas
vaginalis, ufs de bilharzies), et de prciser la morphologie et la mobilit des bactries.
La coloration de Gram est effectue sur un frottis ralis partir du culot de centrifugation. Elle
apporte des informations supplmentaires sur les caractres morphologiques des bactries. Elle permet de
mieux apprcier la flore bactrienne.
d) Culture : Dnombrement des germes urinaires
Elle se fait sur des milieux permettant un dnombrement des germes urinaires pour dterminer le seuil
dinfection.
Il existe plusieurs mthodes dont celle de la lame glose qui consiste immerger la lame de DGU dans les
urines et la mettre en incubation 37C pendant 24 heures. La lecture consistera comparer la densit
des colonies bactriennes obtenue avec les modles fournis dans le kit. Une infection du tractus urinaire est
retenue lorsque le DGU donne un rsultat suprieur ou gal 105 bactries / ml avec une culture en souche
pure et la prsence de leucocyturie. Des mthodes alternatives peuvent tre utilises en labsence de lames
gloses.
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 70)
e) Identification
A partir des colonies isoles, une galerie didentification est ensemence pour tudier les caractres
biochimiques. Lidentification est parfois complte par des tests immunologiques avec des srums
agglutinants.
f) Antibiogramme
Les antibiotiques sont choisis en fonction de lespce identifie. Les antibiotiques limins sous forme
active par voie urinaire sont toujours inclus dans la liste.
3.4.2. Pus et liquides dpanchement :
a)
Introduction
Le but est de dtecter lagent tiologique dun panchement.
Il existe diffrents types de foyers infectieux suppurs :
. foyers superficiels : plaies chirurgicales, mdicales ou traumatiques, escarres, brlures etc.
. foyers profonds : abcs : collection de pus dans une cavit
exemples : furoncles, anthrax, abcs des viscres
phlegmons : inflammation localise non collecte (prlvement souvent impossible)
adnites
. foyers des sreuses : pleursie : purulente, sro-fibrineuse
pritonite purulente, ascite
pricardite : purulente, sreuse
synovite : purulente, sreuse
b)
Prlvements
* Indications :
- on ne prlve que les collections fermes
- ne pas prlever les pus de plaies ouvertes car inexploitables
* Techniques
- nettoyer la peau avec de lalcool iod
- soit on prlve le pus avec une seringue
- soit on incise la collection avec un bistouri et on prlve le pus avec une pipette Pasteur ou un
couvillon
* Transport conservation
- transporter immdiatement le pus au laboratoire,
- utiliser des milieux de transport / conservation si ncessaire (grande distance)
- transporter le pus labri de loxygne (si germes anarobies rechercher)
c) Technologie au Laboratoire
/ Examen macroscopique
- noter la consistance du pus
. purulent
. sreux ou citrin : exsudat, transsudat
- noter la couleur du pus
. bleue : faisant penser au bacille pyocyanique
. chocolat : faisant penser au pneumocoque
- noter lodeur : trs ftide (voquant les anarobies)
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 71)
/ Examen microscopique
- Coloration de May Grunwald Giemsa : oriente vers une infection bactrienne ou virale
. polynuclaires altrs : bactries pyognes
. lymphocytes : virus, BK
. absence de cellules : exsudat, transsudat
- Coloration de Gram : oriente le choix des milieux ensemencer
. qualit de la flore : monomicrobienne ou polymicrobienne
. quantit de la flore : abondance de germes
/ Culture :
- milieux
. gloses au sang frais ou sang cuit
. bouillon thioglycolate, ou bouillon cur-cervelle
- technique : mthode des quadrants
- recherches particulires
. anarobies : milieu de Rosenow, milieu de Schaedler
. glose de Lwenstein-Jensen pour la culture des BK
/ Rsultats et interprtation
- flore monomicrobienne : cest lidal
- flore polymicrobienne
. peut se voir en cas de pleursie ou de pritonite
. il sagit dune association de germes anarobies et de germes arobies
Caractristiques des liquides pleuraux
Composition
du liquide
Cellules/mm3
Lymphocytes
Neutrophiles
Germes
Culture
Protine g/l
Interprtation
Clair
> 500
+++
Rares
0
BK
> 20
Exsudat
(tuberculose)
Louche
> 500
+++
0
+
> 20
Exsudat
Pleursie
Purulent
> 2000
Rares
+++++
+++
+
> 50
Exsudat
Abcs
Hmatique
+
+
+ ou 0
; BK
> 20
Exsudat
Aspect
Coagulation
spontane
Leucocytes/mm3
Neutrophiles %
GS/GL X 100*
Culture
Normal
Septique
Tuberculose
inflammation
Clair
Non
Trouble
Oui
Trouble
Oui
trouble
Oui
<200
<25%
50000- 200000
25000
>80%
Variable
<50%
<50%
100%
Ngative
Variable
BK
Dosage des protines : sans intrt
5000-50000
50%
75%
Ngative
Produit pathologique
Examen macroscopique
- sreux, purulent
- crmeux, fluide
- pais, grains
- ftides
Collections fermes
- fluidifier
- homogniser
Ne pas cultiver
Culture
- milieux classiques
- milieux spciaux
Cytologie
- pharynges
- bronchiques
- alvolaires
- leucocytes
Plaies
Examen microscopique
Coloration de Gram
Coloration de Ziehl-Neelsen
e) Technologie au Laboratoire
Examen macroscopique :
/ expectorations muqueuses, muco-purulentes, purulentes, hmoptoques etc.
/ aspects des liquides daspiration
/ fluidifier, homogniser
Examen microscopique :
/ fluidifier, homogniser
/ cytologie : coloration de May Grunwald Giemsa
. cellules pharynges < 25/champ (si > 25/champ : rejeter lchantillon)
. leucocytes
: > 25/champ : chantillon bon
: < 25 + flore monomorphe : chantillon bon
: < 25 + flore polymorphe : rejeter lchantillon
. autres cellules : bronchiques, alvolaires
/ Bactriologie : coloration de Gram
. flore monomorphe + PN > 25/ champ : cultiver
. prdominance dun germe + PN > 25/champ : cultiver
. autres situations : ne pas cultiver
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 74)
Culture :
/ milieux
. ensemencer toujours : GSO et GSC + Facteurs de croissance
. autres milieux : en fonction du Gram
/ technique
. diluer les prlvements au 1/1000
. appliquer mthode des quadrants
Rsultats :
/ Devant des bactries pathognes spcifiques
- bronchopathies
. S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus
. B. catarrhalis, N. mucosa,
. Bacille pyocyanique, entrobactries
- pneumopathies
. pneumonie : S. pneumoniae
. abcs : K. pneumoniae, S. aureus, anarobies
. pneumopathies atypiques : M. pneumoniae,
Chlamydia, Legionella pneumophila
/ Interprtation ncessaire
- expectorations et aspirations non protges
. seuil : 107 bactries / ml de prlvement
. bactrie commensale : 105 bactries/ml
. signification douteuse : 106 bactries/ml
. Cytologie > 25 leucocytes/ml de prlvement
- aspirations bronchiques protges, trans-trachales
. seuil : 103 bactries / ml de prlvement
. prsence de cellules bronchiques et pulmonaires
* Prlvement
/Technique
-
/ Transport conservation
- transport immdiat, sans dlai (risque de desschement)
- milieux de transport-conservation disponibles
- humidifier les prlvements si culture retarde
* Technologie au Laboratoire
/ Examen microscopique
- coloration de Gram
. apprcier qualit/quantit de la flore
. chercher isoler le germe prdominant
- coloration au bleu de mthylne
. pour apprcier la prsence de levures, la cytologie etc.
/ Culture
-
milieux
. gloses au sang frais + acide nalidixique
. glose au sang cuit + complexe vitaminique
. bouillon denrichissement : streptosel, BGT
. spciaux : au srum de buf coagul ; Hoyle
technique : mthode des quadrants
/ Recherches particulires
- Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum
- Candida albicans
- virus : Herpes simplex virus
/ Rsultats
- angines rouges ou rythmato-pultaces
. S. pyogenes, S. pneumoniae , Streptocoque du groupe C , Streptocoque du
groupe G
. Staphylococcus aureus, H. influenzae
. Candida albicans
. virus = 50%
- angines pseudomembraneuses
. Corynebacterium diphteriae
. Staphylococcus aureus
. virus : EBV (mononuclose infectieuse)
- angines ulcro-ncrotiques
. angine de Vincent : association de 2 germes
. chancre syphilitique : Treponema pallidum
- angines vsiculeuses : elles sont virales
RNL Sngal : Manuel de Procdures techniques (Page 76)
Prlvement de gorge
Types dangines
Microscopie
- rythmateuse
- pseudomembraneuse
- ulcro-ncrotique
Bleu de
mthylne
Gram
- qualit flore
- quantit flore
Culture
Glose Sabouraud
- Isolement
- Identification
- Antibiogramme
* Prlvements
/ Techniques
- Otite externe : ponction de furoncle
- OMA : faire une paracentse (acte mdical)
: nettoyer le CAE (antisepsie)
: poser un spculum et inciser
: aspirer le pus
/ Transport conservation
- transport immdiat au laboratoire
- milieux de transport-conservation
* Technologie au Laboratoire
/ Examen macroscopique
- Scrtions fluides, purulentes
- Odeur : ftides (anarobies)
/ Examen microscopique
- coloration de Gram : flore monomicrobienne
- bleu de mthylne : levures, cytologie etc.
/ Culture
- milieux : GSO, GSC + complexe vitaminique
- technique : mthode des quadrants
/ Rsultats
-
3.4.5. Hmoculture
a) Introduction
Il sagit de rechercher un agent tiologique dans le sang lors dune infection
Le sang est normalement strile, et la prsence de bactries dans le sang peut signifier :
. une bactrimie : dcharges transitoires de bactries dans le sang pouvant tre physiologique
(aprs les repas) ou pathologique ( partir dun foyer infectieux),
. une septicmie : dcharges rptes de bactries dans le sang avec fivre trs leve. Les
causes frquentes sont : lendocardite, la thrombophlbite, la fivre typhode.
Les indications de lHmoculture sont :
- toute fivre inexplique chez un cardiaque, une femme enceinte, un immunodprim
- tableau de septicmie
- hypothermie
b) Prlvement :
* Techniques :
- moment du prlvement : quand prlever ?
. quand ? : avant toute antibiothrapie, au moment des pics fbriles, loin des repas
. rythme : faire une hmoculture toutes les 6H
- techniques : comment et o prlever ?
. o : tout territoire veineux disponible
. comment (technique) : badigeonner la peau lalcool
poser un garrot
ponctionner la veine avec une seringue strile
recueillir 10 ml de sang chez ladulte, 5 ml chez lenfant et
1 ml chez le nouveau-n.
* Hmoculture ngative
- absence dinfection bactrienne du sang
- HC faite tardivement dans lvolution de la maladie
- malade sous antibiotique
- quantit de sang prleve insuffisante
- milieux ou conditions de culture inappropris
- dlai dobservation trop court
Ballon dhmoculture
Incubation-observation
(atmosphre aro/anarobie)
Hmoculture positive
- dlai : 2-3 jours
Cas particuliers
Hmoculture ngative
- dlai : 7 jours
Examen
microscopique
Identification
- Etat frais
- Gram
- galerie
- recherche dAg
- ABG
3.4.6. Srologies :
A/ Srodiagnostic de Widal et Flix
Cest le diagnostic indirect ou srologique des salmonelloses par la recherche danticorps spcifiques des
antignes O, H, Vi de Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A , B, C, Salmonella Enteritidis et Salmonella
Typhimurium.
v Indications
Diagnostic des fivres typhode et paratyphodes
v Prlvement
sang veineux chez un patient jen
srum recueilli aprs centrifugation
v Ractifs
srums agglutinants de trois types :
- srums contenant des Antignes O = Ag somatiques, dnaturs lalcool
TO AO BO CO
- srums contenant des Antignes H = Ag flagellaires, dnaturs au formol
TH AH BH CH ENH -TMH
- srums contenant des Antignes Vi = Ag capsulaires, dnaturs lalcool de
S. Typhi, S. Paratyphi C, S. Dublin
v Principe
Raction dagglutination entre Ag et Ac (Srum tudier et suspensions antigniques)
v Technique
Se fait en deux temps :
- Dtecter la prsence des Anticorps anti O, H, et Vi aux dilutions 1/100e et 1/200e
- Procder au titrage de ces Anticorps
1- DETECTION DES ANTICORPS
v Interprtation
Elle permet de prciser le srotype de Salmonelle en cause et de dterminer la priode de la maladie
grace ltude de la cintique des anticorps
Agglutinines O : apparaissent vers le 8e jour, montent puis atteignent le titre de 400.
Ils disparaissent aprs 2 3 semaines
Si le taux est > 100 : infection rcente ou en cours
Agglutinines H : apparaissent entre le 10e et 12e jour, atteignent rapidement le titre de 800 1600, mais
persistent titre faible pendant plusieurs mois voire annes
On les retrouve seuls lors dinfection ancienne ou dune infection rcente avec antibiothrapie prcoce.
Leur association avec lAg O signe une infection rcente ou en cours
- Le srodiagnostic est normalement positif pour un srotype de Salmonella
- Possibilit de communaut antignique entre diffrents srotypes : coagglutination
- Une srologie ngative nlimine pas une Salmonellose
- Contrle au bout de 2 3 semaines : volution des taux
NB : Manque de sensibilit et de spcificit
Il existe des faux positif : paludisme, dysglobulinmie, typhus exanthmantique
v But
Recherche danticorps antistreptolysine O dans le srum humain.
v Principe
Cest un test bas sur une raction dagglutination sur carte.
Le ractif est constitu par un antigne fait de particules de latex polystyrne recouvertes de streptolysines
O.
En prsence danticorps antistreptolysines O dans le srum tester, il se forme une agglutination visible
lil nu.
v Matriel ncessaire
- Kit ractif qui comprend : ractif, contrle positif, contrle ngatif, tigettes, carte dagglutination ( le kit
est conserv +4C)
- Agitateur mcanique (non indispensable)
v Mode opratoire
Sortir les ractifs et les laisser temprature ambiante
Prlever le sang du patient, centrifuger et recueillir le srum
A laide dune carte sur laquelle sont individualiss des cercles, dposer 50ul de srum
tester dans un cercle et une goutte de chaque contrle positif et ngatif dans dautres cercles
Agiter le ractif ASLO et ajouter une goutte cot de chaque chantillon.
Mlanger, laide dune tigette usage unique, de faon recouvrir toute la surface
du cercle (changer de tigette pour chaque cercle)
Agiter la carte 100 tours/mn ou imprimer un mouvement de rotation avec les mains
pendant 2 minutes
Lire la raction obtenue.
v Lecture et Interprtation
- Absence dagglutination : raction ngative = absence danticorps antistreptolysine O
- Prsence dagglutination : raction positive = prsence danticorps antistreptolysine O
Une raction positive traduit un taux >200UI/ml (seuil de positivit du ractif utilis, Bio Mrieux)
Tout srum positif doit tre titr.
Pour titrer, on procde des dilutions sries de 2 2 (1/2,1/4,1/8 etc)
Le taux final sera dfini comme tant la plus grande dilution qui donne une raction positive (srum positif
la dilution 1/A : titre = A x seuil
exemple : un srum positif la dilution 1/8 correspond un titre de 8 x 200 soit 1600 UI/ml.
Un taux dASLO < ou = 200UI/ml est considr comme normal chez le sujet africain.
Un taux > 200UI/ml signe une infection rcente.
3.5. Antibiogramme
Source: Comit de Lantibiogramme de la Socit Franaise de Microbiologie - Recommandations 2007
3.5.1 - Enterobacteriaceae, bacilles Gram ngatif non fermentaires (Pseudomonas
aeruginosa, Acinetobacter spp., Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia ),
Staphylococcus spp., Enterococcus spp.
- Inoculum
A partir dune culture de 18-24 h sur milieu glos non slectif, prparer une suspension en bouillon
Mueller-Hinton ou en solution saline (0,9 % NaCl) quivalente au standard McFarland 0,5 (~ 108 UFC/
ml).
Cette suspension peut galement tre prpare partir dune culture en bouillon Mueller-Hinton obtenue
aprs incubation 37 C au bain-marie agit pendant 3 5 h, et dont la densit est ajuste au standard
McFarland 0,5.
- Milieu
Glose Mueller-Hinton
- Ensemencement
Diluer la suspension inoculum au 1/100 (~ 106 UFC/ml) et ensemencer par couvillonnage ou par inondation
en respectant les mesures de scurit ncessaires.
Cas particulier : Pour Staphylococcus aureus et pour loxacilline, diluer la suspension inoculum au 1/10
(~ 107 UFC/ml) et incuber 30C sur milieu non supplment en chlorure de sodium ou 37C sur milieu
hypersal (2 4%).
Prolonger ventuellement lincubation jusqu 48 h si la croissance apparat faible aprs 24 h.
- Lecture
Aprs 18-24 h dincubation 35-37 C.
- Antibiotiques tudier
v Enterobacteriaceae
Amoxicilline ou Ampicilline
Imipnme
Chloramphnicol
ampicilline/sulbactam
Ticarcilline
Gentamicine
Pipracilline ou M ezlocilline
Kanamycine
Mcillinam
Tobramycine
Cfalotine
Cotrimoxazole
Cfoxitine
Colistine
Ceftriaxone ou cfotaxime
Ntilmicine
Ceftazidime
Acide nalidixique
Cfixime
Aztronam
Ciprofloxacine
Nitrofuranes
Charge
disque
30
30 UI
50
1,25/23,75
300
305
5
5
5
S
8
4
2
2/38
32
5
0,5
0,5
1
R
16
8
2
8/152
128
16
1
1
4
Diamtre critique mm
S
R
23
19
19
17
15
15
16
10
17
14
20
15
25
22
25
22
22
16
v Pseudomonas aeruginosa
Ticarcilline
Ticarcilline/ac. clavulanique
Gentamicine
Pipracilline
Tobramycine
Aztronam
Amikacine
Cefsulodine
Ntilmicine
Ceftazidime
Colistine
Imipnme ou mropnme
Pfloxacine
Aztronam
Ciprofloxacine
Chloramphnicol
Antibiotique
TIC
TCC
PIP
IMP
ATM
CAZ
CFS
CFM
TM
AN
GM
NET
CS
CIP
RIF
64
64/2
64
8
32
32
32
32
4
16
4
4
4
2
19
22
18
22
18
18
12
Amikacine
22
17
Ntilmicine
20
15
Tobramycine
21
15
22
14
Chloramphnicol
21
15
Ttracycline
16
14
17
15
Colistine
16
14
Cotrimoxazole
19
17
22
19
Ciprofloxacine
22
19
19
14
TIC
TCC
PIP
IMP
ATM
CAZ
CFM
TM
AN
GM
NET
C
TE
CS
PEF
CIP
SXT
Charge
disque
75
75/10
75
10
30
30
30
10
30
15
30
30
30 UI
50
5
5
1,25/23,75
16
16//2
16
4
4
4
4
4
8
4
4
8
4
4
1
1
2/38
Diamtre critique mm
S
R
64
64/2
64
8
32
32
32
4
16
4
4
16
8
4
4
2
8/152
22
22
18
22
20
21
21
16
17
16
19
23
19
22
22
22
16
18
18
12
17
15
15
15
14
15
14
17
19
17
19
16
19
10
v Staphylococcus spp.
Pnicilline G
Acide fusidique
Cotrimoxazole
Cfoxitine
Chloramphnicol
Gentamicine
Ttracycline
Kanamycine
Pfloxacine
Tobramycine
Ciprofloxacine
Erythromycine
Fosfomycine
Lincomycine
Vancomycine
Pristinamycine
PG
OX
FOX
K
TM
GM
E
L
P
PEF
CIP
C
TE
FA
RIF
VAN
SXT
Charge
disque
6
5
30
30 UI
10
15
15 UI
15
15
5
5
30
30 UI
10
30
30
1,25/23,75
0,25
2
0,25
2
8
1
1
1
2
1
1
1
8
4
2
0,5
4
2/38
16
1
1
4
8
2
4
2
16
8
16
16
8
8/152
Diamtre critique mm
S
R
29
20
27
15
20
20
22
21
22
22
22
23
19
22
29
17
16
29
20
23
133
20
20
17
17
19
16
19
19
17
15
14
10
v Enterococcus spp.
Ampicilline
Chloramphnicol
Oxacilline
Ttracycline
Kanamycine
Erythromycine
Gentamicine
Lincomycine ou clindamycine
Nitrofuranes
Pristinamycine
Vancomycine
Cotrimoxazole
Fluoroquinolones
AM
K
GM
C
TE
E
L
P
SXT
VAN
Charge
disque
10
1000
500
30
30 UI
15 UI
15
15
1,25/23,75
30
4
250
250
8
4
1
2
1
2/38
4
Diamtre critique mm
S
R
16
500
500
16
8
4
8
2
8/152
8
19
14
17
23
19
22
21
22
16
17
14
12
11
19
17
17
17
19
10
-
Pnicilline G
Chloramphnicol
Ampicilline ou amoxicilline
Cotrimoxazole
Oxacilline
Fosfomycine
Cfotaxime ou ceftriaxone
Lincomycine
Gentamicine
Pristinamycine
Kanamycine
Norfloxacine
Ttracycline
Vancomycine
Erythromycine
OX
K
GM
C
TE
E
L
P
SXT
CIP
VAN
Charge
disque
5
1000
500
30
30 UI
15 UI
15
15
1,25/23,75
5
30
250
250
8
4
1
2
1
2/38
0,12
4
Diamtre critique mm
S
R
21
14
17
23
19
22
21
19
16
30
17
500
500
16
8
4
8
2
8/152
2
8
10
11
19
17
17
17
10
19
-
Pnicilline G
Lincomycine
Ampicilline ou amoxicilline
Pristinamycine
Oxacilline
Chloramphnicol
Gentamicine
Cotrimoxazole
Kanamycine
Fluoroquinolones
Ttracycline
Vancomycine
Erythromycine
OX
K
GM
C
TE
E
L
P
SXT
CIP
VAN
Charge
disque
5
1000
500
30
30 UI
15 UI
15
15
1,25/23,75
5
30
250
250
8
4
1
2
1
2/38
0,12
4
500
500
16
8
4
8
2
8/152
2
8
Diamtre critique mm
S
R
26
14
17
23
19
22
21
19
16
30
17
10
11
19
17
17
17
10
19
-
Chloramphnicol
Amoxicilline/ac. clavulanique
Kanamycine
Cfalotine
Gentamicine
Cftriaxone
Fluoroquinolones
Ttracycline
Cotrimoxazole
AM
CF
AMC
TE
SXT
C
RIF
K
GM
NA
Charge
disque
2
30
20/10
30 UI
1,25/23,75
30
30
30 UI
15
30
2/1
2
0,5/9,5
2
2
8
2
1
8
4
1/19
4
4
16
4
Diamtre critique mm
S
R
21
23
24
28
24
18
15
20
17
18
24
20
15
14
21
- Antibiotiques tudier
Pnicilline G
Chloramphnicol
Oxacilline
Spiramycine
Amoxicilline
Ciprofloxacine
Cfotaxime ou ceftriaxone
Cotrimoxazole
Gentamicine
Erythromycine
Charge
disque
OX
OX
C
RIF
5
1
30
30
2
0,25
4
-
Diamtre critique mm
S
R
18
11
30
30
Pnicilline G ou amoxicilline
Chloramphnicol
Ceftriaxone
Erythromycine
Spectinomycine
Acide nalidixique
Ttracycline
Ciprofloxacine ou ofloxacine
Charge
disque
SPT
TE
NA
100
30 UI
30
64
1
64
4
Diamtre critique mm
S
R
20
-
20
19
25
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