1.

INTRODUO
A colorao de Gram um mtodo de colorao de bactrias desenvolvido
pelo mdico dinamarqus Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em
1884, e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano,
fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol, lcool-acetona e
funciona fenicana. Essa tcnica permite a separao de amostras bacterianas
em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinao da morfologia e do
tamanho das amostras analisadas. A colorao de Gram um dos mais
importantes mtodos de colorao utilizados em laboratrios de microbiologia
e de anlises clnicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a
caracterizao de amostras de bactrias. A tcnica tem importncia clnica
uma vez que muitas das bactrias associadas a infeces so prontamente
observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas em
esfregaos de pus ou de fluidos orgnicos. Essa informao permite ao
clnico monitorar a infeco at que dados de cultura estejam disponveis.
possvel a anlise de vrios esfregaos por lmina, o que facilita a
comparao de espcimes clnicos. As lminas podem ser montadas de
forma permanente e preservadas como documentao (JUNIOR, 1996).

2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GERAL
Determinar e interpretar o mecanismo de reao de Gram, como um
mtodo de colorao de diferencial; Discutir as vrias etapas da
metodologia de Gram, com base na execuo de exerccios de colorao.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Desenvolver habilidades para executar as tcnicas de preparao de
esfregaos e para o mtodo de colorao de Gram, sabendo diferenciar e
classificar as bactrias de acordo com a colorao obtida;
Adquirir habilidade, tambm para utilizar o microscpio ptico, observando
as bactrias aps a colorao de Gram.

3. MATERIAIS E METODOS
3.1 MATERIAIS
Culturas bacterianas
Reagentes:
Cristal violeta
Lugol
lcool acetona
Fucsina fenicada
Equipamentos:
Microscpio ptico
Bico de Bunsen
Ala de inoculao
leo de imerso
Pina

3.2 PROCEDIMENTO
Primeiro fez-se um esfregao fino da cultura bacteriana sobre a lamina,
depois cobriu-a com a soluo de Cristal violeta e deixou agir por 30
segundos; Logo aps escorreu o excesso de corante; Sem lavar com agua,
cobriu a lamina com a soluo de Lugol para Gram deixando-o agir durante
um minuto. Verteu o excesso da soluo; Sem lavar com agua, gotejou sobre
a lamina a soluo de lcool-acetona at que no desprenda mais liquido na
cor rsea; Lavou a lamina com agua corrente; Cobriu a lamina com fucsina
fecnicada de Gram deixando agir por 30 segundos; Depois escorreu o
corante, lavou a lamina com agua, secou-a e procedeu a leitura com a
objetiva de imero.

4. RESULTADOS E DIRCURSO
4.1 RESULTADOS
Tabela 1. Colorao diferencial de Gram
Microrganismos
Esc. Coli
Subtilis
5
6
8

Morfologia celular
Bacilo
Coco
Micrococo
Coco
Coco

Arranjo celular
Simples
Estreptococo
Simples
Diplococos
Sarcina

Gram
+
+
+
-

Com os resultados, observamos que a maior parte das bactrias foi

identificada com Gram +. Foi possvel identificar todos os arranjos devido uma
boa realizao do experimento.

5. CONCLUSO
Atravs da colorao Gram, encontramos bactrias dos tipos Gram negativas
e positivas. As Gram negativas (coloradas de vermelho) e as Gram positivas
(coloradas de violeta). E em relao as formas s foram observadas cocos e
bacilos. O processo de colorao Gram, nos permitiu observar na pratica que
existem diferenas na parede celular da bactrias e atua como ferramenta
para a identificao de bactrias fito patognicas, pois a maioria das bactrias
patognicas so Gram -.

6. QUESTES
1. A colorao de Gram exerce alguma importncia em diagnsticos
clnicos de bactrias isoladas de infeces humanas e animais? Citar
um exemplo.
SIM, Algumas bactrias, tais como a NEISSERIA, apresenta caractersticas
peculiares. Assim o achado de diplococos Gram-negativos, intra e
extracelulares em secrees pode sugerir uma GONORRIA, no caso da
secreo uretral, ou uma MENINGITIDE, no caso do material for um LIQUOR.
2. Sabe-se que a parede celular o sitio preferido pela fixao da reao
de Gram. Fazer um esquema mostrando esta associao, para o caso
tpico de uma bactria Gram positiva.
A parede celular da Gram + so constitudas principalmente por
peptidioglicano que permite a passagem da primeira tintura, que tinge at o
interior das clulas, o mordente, fecha os poros da parede celular, que no e
destruda pela lavagem com lcool, e por isso a segunda tintura no penetra
na clula.
3. Sendo a colorao de Gram um mtodo de colorao diferencial, como
esta reao pode ser empregada para a verificao do estado de pureza
de uma determinada cultura?
Uma cultura pura apresentara somente indivduos Gram +, ou somente Gram
-, caso contrrio a cultura no pura, fica evidente que esses indivduos
possuem parede celular de composies distintas.
A realizao peridica do exame de uma cultura pura demonstra que todas as
colnias apresentam a mesma caracterstica morfotintorial.
4. Como o mtodo de colorao de Gram pode ser til na identificao de
bactrias?
A colorao de Gram separa as bactrias em dois grupos: as Gram + e as
Gram -. As Gram so potencialmente mais patognicas.

7. REFERENCIAS
JUNIOR, M, J, P. Microbiologia Conceitos e Aplicaes. Makron Books 2
Ed. So Paulo, 1996.
TORTORA, J, G. Microbiologia. ARTEMED, 8 Ed. Porto Alegre, 2005.
VERMELHO, A, B. Prticas de Microbiologia. Guanabara Koogan, S, A. Rio
de Janeiro, 2006.