UNIVERSIDAD DE PANAM

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA DE CIENCIAS PECUARIAS
DEPARTAMENTO DE ZOOTECNIA
BIOTECNOLOGA ANIMAL
INFORME DE LABORATORIO # 4
TEMA:
TECNICAS

PRESENTADO POR:
Jonathan Gaitan
4-782-312
PRESENTADO A CONSIDERACION DEL PROFESOR:
MV. Reinaldo De Armas PhD
IV AO
II SEMESTRE
11 de noviembre del 2014

Introduccin
Las grandes expectativas creadas por los procedimientos de produccin de
embriones in vivo se han visto defraudadas con el tiempo. Ello es consecuen-cia
de que su rendimiento no es tan elevado como se supona en un principio, debido
a que el nmero de embriones transferibles obtenido en cada lavado es bajo,
estabilizado en torno a 4.8 en la especie bovina; a la existencia de hembras que
no responden a los tratamientos para inducir una ovulacin mltiple; a la
necesidad de respetar periodos de descanso entre dos recogidas consecutivas y a
la obligatoriedad de que las donantes estn en perfectas condiciones
ginecolgicas, situacin difcil(Herradon,2007)

Estas circunstancias han creado la necesidad de desarrollar un procedimiento

alternativo para la produccin de embriones. Este procedimiento se basa en la
utilizacin de ovocitos inmaduros, recogidos directamente del ovario con
independencia de la edad y de la situacin fisiolgica de la hembra. Esta tcnica
ofrece la posibilidad de convertir a la hembra en productora de gametos,
equiparndola a los machos productores de semen para la inseminacin artificial,
lo que supondra numerosas ventajas en los programas de seleccin. Sin
embargo, existen varias diferencias fisiolgicas entre los machos y las hembras,
que dificultan la consecucin de este objetivo. As, la poblacin de ovocitos
presente en el ovario es limitada y no se renueva, sino que disminuye
progresivamente con la edad como consecuencia de la atresia. Adems, los
ovocitos no son liberados al exterior, siendo preciso extraerlos del oviducto o de la
corteza ovrica. Por otra parte, la poblacin de ovocitos es muy heterognea en
cuanto a su calidad y grado de madurez. ( Herradn, P.G, Quintela, L. A. Becerra,
J, J. Ruibal, S. y Fernndez, M.2007)

Fenmeno o proceso a travs del cual el espermatozoide o clula masculina es

capaz de unirse y penetrar la clula femenina u vulo para formar un nuevo
individuo bajo condiciones de laboratorio (fuera del organismo animal) se conoce
como fecundacinin vitro (FIV). (Hernandez,A. 2004).

Objetivos
Objetivo general

Conocer la tecnica de fertilizacion in vitro (FIV)

Objetivo especficos
Conocer los diferentes mtodos de recoleccin de ovocitos.
Aprender el proceso de Aapiracion folicular transvaginal guiada por ecografa.
Establecer los mtodos de criopreservacin de los embriones bovinos y su transferencia.

Metodologa

Esta prctica se realiz en el laboratorio de Biotecnologa Animal (CEIACHI)

Facultad de Ciencias Agropecuarias, ubicado en el corregimiento de Chiriqu
localizado a los 82214 de latitud norte y 822144 de longitud oeste ,a una
elevacin de 25 msnm, se encuentra dentro de la zona climtica tropical de
sabana , con temperatura anual de 33,2 C ( mxima ) y de 21.6C ( mnima),
precipitacin anual promedio de 2545 mm , es decir 213.33 mm/mes , humedad
relativa promedio de 75%. (Sols, 2011).
El objetivo de esta tcnica es aumentar la capacidad gametica,esta se realizaba
con animales muertos.
Tiene su aplicacin
Aspiracin folicular
Eslaicim,rebanar los folculos.
El dimetro para realizar estas actividades es de 2 y 5 mm.
En estos se utilizan para realizar la maduracin es medio de cultivo 199,FSH y Albumina Bovina.
SE REALIZA LA SEPACION DE LA FRACCION MOTIL
Swimgoff nado hacia arriba 37C por 45 minutos se separa con sobre la fraccin sobrenadante
,centrifuga,tener al menos 100 ml espermatozoides/ml concentracin para la I.A. Se usa el
espectofotometro de conteo gradiente superior usando gradiente .
Dosis de concentracin 50 y 90,se usa buffer ,Hepes, realizar la inseminacin. 10000esp/cada
ovulo, en una placa 10 ovulo por cada gotita de semen que contien microlitros periodo de 18 a 20
horas,cabo de tiempo ya que fueron prenetrados mtodos de desnudar al ovulo se utiliza : Acido
Ialuronina: hialuronidasa , pipoteo mas hialuronidasa.
Fases
Primer da maduracin
Segundo da fertilizacin
Tercer da cultivo

Aspiracin folicular

 Obtener los ovocitos hembras del matadero

Aspiracin folicular transvaginal por ecografa
Ondas foliculares 8 a 41 ovocitos /ondas
Aparato para aspiracin folicular
Ecgrafo con su respectivo bomba de vaci
Gua de aspiracin

Revisin de literatura
DEFICIENCIAS Y DEFICIENCIAS DE LA TCNICA
Desde 1981, ao en el que naci el primer ternero procedente de un embrin
producido in vitro (Brackett et al., 1982) esta tcnica ha experimentado en la
especie bovina una evolucin considerable. As, en la actualidad se est aplicando
para mejorar el potencial reproductivo de las vacas donantes dentro de los
programas MOET y en algunas ocasiones sustituye a la utilizacin de la
superovulacin. Los datos estadsticos publicados por la IETS indican que durante
el ao 2003 se obtuvieron 330.000 embriones bovinos a nivel mundial mediante
fecundacin in vitro, de los que fueron transferidos 106.200, lo que representa el
14,2% del total de los embriones transferidos (Thibier, 2004).
La utilizacin de la fecundacin in vitro para la produccin de embriones bovinos
ha permitido demostrar sus numerosas aplicaciones, entre las que podemos
destacar:
Aumentar el rendimiento de los programas de produccin de embriones a
partir de hembras de elevado valor gentico, ya que este procedimiento permite
obtener ovocitos en novillas de ms de seis meses de edad y en vacas durante el
primer trimestre de gestacin y a partir de las 2-3 semanas del posparto (Galli et
al., 2001). Esta tcnica no interfiere con los ciclos productivos o reproductivos de
la hembra donante y, adems, evita la necesidad de utilizar gonadotropinas.
Los pasos para la aspiracin folicular (OPU) se puede resumir de la siguiente
manera:
1. La OPU precisa de la tranquilizacin previa del animal, esta se llevara a cabo
con el animal en pie en un potro de contencin (fotografa 2), mediante xilacina
(i.m.) al 2%.
2. Posteriormente, se debe administrar anestesia va epidural para reducir los
esfuerzos expulsivos y facilitar la manipulacin del ovario
(Fuente. Serizier. A)
4. Se introducir el transductor en la vagina (fotografa 5), convenientemente
lubricado y protegido por una cubierta sanitaria de ltex.

Para la visualizacin de los folculos ovricos empleamos un ecgrafo equipado

con una sonda transvaginal de 5-75 MHz y un handgrip o mango de OPU de 60
cm de longitud donde se colocara la gua de puncin. Por la gua se introducir
una aguja de puncin desechable (20 G, 09 x 70mm) conectada a un tubo estril
de 50 ml mediante una conduccin de Tefln. El equipo de OPU se completa con
una bomba de vacio accionada por pedal con la que se aplicara una aspiracin
constante de 50-53 mm Hg (20 ml/min)

El tubo de recogida debe mantenerse atemperado a 37oC en bao termosttico

5. Los ovarios se posicionaran va rectal delante de la sonda para ovricos visibles
de ms de 3 mm de dimetro. Antes de iniciar la sesin de puncin se drenara el
sistema aspirando una pequea cantidad de medio de recogida. Tras la aspiracin
de cada 3-4 folculos se realizara un lavado exhaustivo del fluido folicular en la
aguja de aspiracin y en el sistema de recoleccin con medio de lavado y recogida
[PBS suplementado con heparina sdica (22 UI/ml) y suero fetal bovino (1%)].
6. El fluido obtenido de cada animal contenido en un tubo de recogida de 50 ml
ser inmediatamente filtrado (fotografa 6), los restos de sangre sern eliminados
por continuos lavados en PBS fresco y se pasara a una placa de Petri para
localizar y evaluar morfolgicamente bajo estereomicroscopio los complejos
cumulus ovocito (COCs) aspirados

Discusin de resultados

La FIV comprende tres etapas:

1. Maduracin del vulo o gameto femenino.
2. Fecundacin propiamente dicha.
3. Cultivo embrionario
Maduracin. Consiste en propiciar la progresin en el desarrollo del vulo de la
vaca o novilla, una vez obtenido de ovarios de matadero o animales vivos por
aspiracintransvaginal. Esto se logra colocando estos vulos en medios
enriquecidos y suplementadoscon hormonas, como la hormona folculo
estimulante (FSH), lahormona luteinizante (LH) o los estrgenos (E_) durante un
periodo de 24 horas.
Fecundacin. Consiste en incubar los vulos madurados (producto de la fase
anterior) con espermatozoides vivos y mviles durante un periodo de 6 a 24 horas,
luego de un proceso de seleccin y capacitacin espermtica que nos permitir a
suvez de deshacernos de componentes del plasma seminal, crioprotectores y
espermatozoides muertos o con escasa vitalidad. La capacitacin espermtica
generalmente selogra exponiendo los espermatozoides vivos a concentraciones
de heparina ycafena, entre otras. Estas sustancias logran estimular el proceso de
capacitacin del espermatozoide
que lo prepara para interaccionar y fecundar el vulo.
Cultivo. Aquellos embriones de 4 o ms clulas resultantes de la FIV son
cambiadosdel medio de fecundacin a un medio de cultivo embrionario donde los
embriones continan su divisin celular a 8, 16 y 32 clulas hasta llegar a mrulas
y blastocistos. Al llegar a estos estadios, los embriones pueden ser transferidos a
vacas receptoras (en fresco) o congelados para su posterior uso. Durante esta
etapa destacan la presencia en el medio de cultivo de diversas fuentes de energa
como la glucosa y aminocidos esenciales y no esenciales.

Conclusin

Se logr conocer los diferentes mtodos de recoleccin de ovocitos.

Se logr aprender el proceso de Aapiracion folicular transvaginal guiada por ecografa.
Se logr establecer los mtodos de criopreservacin de los embriones bovinos y su
transferencia.

Bibliografa
Herradn, P.G, Quintela, L. A. Becerra, J, J. Ruibal, S. y Fernndez, M.2007,
Reunin APPA,CUSCO PERU
HERNANDEZ A,2004,FERTILIZACION IN VITRO

Filipiak, Y.2007, Manual de fertilizacin in vitro en bovinos.