FACULTAD DE INGENIRA MARTIMA,

CIENCIAS BIOLGICAS, OCENICAS Y

RECURSOS NATURALES
FICHA DE LA PRCTICA PARA
LABORATORIO
CDIGO
MATERIA
LABORATORIO
NOMBRE DE LA
PRCTICA
NOMBRE

Microbiologa

FMAR03749

No. 1
Preparacin de medios de cultivos
Andr dos Santos.

OBJETIVOS GENERALES:

Explicar y determinar las diferencias en composicin qumica de los diferentes medios

de cultivos utilizados en microbiologa.
Especificar los principios que se deben tomar en cuenta para la eleccin del medio y la
relacin que estos tienen con las necesidades para cada bacteria y as alcanzar los
propsitos de laboratorio.

EQUIPOS Y MATERIALES:
Tubos de ensayo
Puntas para micropipeta
Fiola o Matraz Erlenmeyer
Reactivos:
Agar TSA
Agar TCBS
INTRODUCCION:

Los medios de cultivos contienen los nutrientes necesarios para cultivar microorganismos, tales como
bacterias, hongos y otros. Los microorganismos no pueden estudiarse individualmente debido a su tamao
tan pequeo, por lo que solo pueden ser estudiados en poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos en
medios artificiales.
Los medios de cultivo para los microorganismos pueden ser solidos, lquidos o semislidos. Los medios
lquidos se pueden transformar en solidos al adicionarles agar, gelatina o gel de slice. Al disminuir la
cantidad del agente solidificante, se obtiene el medio semislido.
Antes de preparar un medio de cultivo para el cultivo de cualquier microorganismo, es necesario entender
sus necesidades bsicas. Cualquier medio de cultivo debe contener los siguientes factores: agua, carbono,
energa, nitrgeno, minerales, pH y factores de crecimiento.
Los componentes de los medios son muy variados. La eleccin del medio se basa en el propsito del estudio.
Medios sintticos: se preparan utilizando una composicn exacta conocida, generalmente a base de
compuestos altamente purificados.
Medios no sintticos: contienen ingredientes de composicin imprecisa y pueden ser a base de extracto de
carne, adicionados de sangre, suero u otras sustancias complejas.
Medios selectivos: impiden el desarrollo de ciertos grupos microbianos y favorecen el desarrollo de otros.
Medios diferenciales: contienen sustancias nutritivas o indicadoras que permiten desarrollar a las bacterias
con una apariencia colonial distintiva.
Medios para pruebas de caracterizacin e identificacin de los microorganismos: estn adicionados de
sustratos especficos y permiten diferencias unas especies de otras, con base en su capacidad enzimtica
especifica.

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Medios de enriquecimiento: favorecen la multiplicacin y aumento de un cierto grupo de microorganismos.
Aqu se combina un medio selectivo y la variacin de otros factores como pH, temperatura, iluminacin,
aereacion, una fuente nica de carbono, etc.
Medios enriquecidos: algunas bacterias requieren medios especiales, complejos y sofisticados, ya que son
incapaces de crecer en medios comunes.
Medios de mantenimiento: preservan satisfactoriamente la viabilidad de los organismos, conteniendo
concentraciones limitadas de nutrientes.
En la actualidad el trabajo requerido en la preparacin de medios se ha simplificado, mediantes la utilizacin
de medios deshidratados que se obtienen comercialmente en las variedades deseadas. Algo similar a las
mezclas deshidratadas para la elaboracin de pasteles. Solo se requiere disolver una cantidad conocida en un
volumen medido de agua repartir en los recipientes necesarios (tubos de ensayo, matraces, frascos) y
esterilizar.
ESTERILIZACION DE LOS MEDIOS
Es indispensable antes de usarlos, para eliminar todos los microorganismos presentes en ellos, cuidando que
en los recipientes no vuelva a entrar ningn organismo, en esta forma, solo se cultivaran los organismos
deseados. La esterilizacin es un proceso mediante el cual se destruyen todas las formas de vida. Esterilizar
es un termino absoluto. Algo esta esterilizado o no lo est, pero nunca esta medio esterilizado.
Esterilizacin con calor:
La temperatura es elevada puede inactivar muchas enzimas, desnaturalizar protenas y como consecuencia la
muerte de los microorganismos. El efecto depende de la temperatura y del tiempo de exposicin.
El calor hmedo, en forma de vapor saturado a presin es uno de los agentes mas utilizados para la
esterilizacin de medios de cultivo. Con el ambiente hmedo se favorece la penetracin mas rpidamente del
calor a la celula, provocando una coagulacin de las protenas. Comnmente se usa el autoclave, a 121C, 15
libras de presin, por 15 minutos.
El calor seco (aire caliente) utilizado en los hornos, da lugar a la oxidacin de componentes celulares vitales.
Es utilizado en materiales generalmente de vidrio, limpios y secos, como cajas de Petri, pipetas, algunos
instrumentos quirrgicos. Puede esterilizarse a 180C una hora.
Esterilizacion por filtracin:
El uso de filtros bacteriolgicos es til cuando se requiere esterilizar sustancias termolbilies, como
vitaminas, aminocidos u otras similares. Estas deben ser adicionadas a los medios previamente
esterilizados, en condiciones aspticas.
La incineracin: su uso es limitado, como en la esterilizacin del asa microbiolgica, cadveres de animales
de laboratorio, algunos desechos de hospitales y otros similares.
Reparticion de los medios estriles: si los medios esterilizados se van a repartir en cajas de Petri u otros
recipientes, estos deben estar esteriles y se debe trabajar dentro del rea de esterilidad.
PROCEDIMIENTO:
Esterilizacin de diferentes medios de cultivo en autoclave a 121C, 15 libras
de presin, 15 minutos.
1. Medio lquido en tubos de ensayo colocar en un vaso precipitado y materiales secos
colocar directamente . Tape con algodn o use tubos con tapn dejndolos flojos y
esterilice.
2. Prepare 200ml de tripticasa agar soya en un matraz de 500 ml colocando un gorro
de papel aluminio sobre el mismo. Despues de esterilizar reparta en cajas Petri en

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condiciones esteriles, cuando el medio aun este caliente (aproximadamente a
70C). referencia: sea soportable al tocar con la mano.
3. Prepare 200 ml de agua salina al porcentaje que indique el profesor para ser
preparado luego de ser esterilizado con el agra tcbs.
4. Todos los recipientes deben marcarse con un marcador permanente y pueden
esterilizarse juntos en la misma autoclave. A cada uno colocar una tira indicador
para autoclave, el cual cambiar de color si la esterilizacin se realizo
correctamente.
5. Luego de esterilizado el tsa preparado puede ser colocados directamente sobre las
cajas Petri para la siembra de la muestra. Para el Tcbs aun no preparado, se
preparan 200 ml en el matraz esterilizado enriquecido con agua salina y se mezcla
hasta diluir todo el polvo, cuidando no dejar presencia de grumos. Luego de esto
esta listo para la siembra.
RESULTADOS:
TSA
Medio utilizado para propsitos generales, favorece el desarrollo u aislamiento de una gran
variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos.
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogneo, libre deslizamiento
Medio de cultivo preparado: color mbar.

TCBS
Medio de cultivo nutritivo selectivo y diferencial mas adecuado para el aislamiento de las
especies de Vibrio
Medio de cultivo deshidratado: color tostado claro, homogneo, libre deslizamiento
Medio de cultivo preparado: color verde azulado

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OBSERVACIONES
No se observo ninguna alteracin en el proceso, se completo correctamente la esterilizacin
verificado por la tira indicadora. Tener muy en cuenta el estado tcnico del autoclave, fallas
pueden alterar o retrasar el tiempo de esterilizado evitando completar el procedimiento
estndar correcto.
RECOMENDACIONES
Verificar estado tcnico del autoclave. Una vez esterilizado evitar cualquier contacto con polvo
de los materiales para evitar contaminacin de cualquier tipo. Trabajar con un autoclave
dentro del mismo laboratorio en donde se trabaja, y refrigerar medios para evitar su alteracin
en composicin, manteniendo de 4-8C una vez preparado. Por ultimo evitar la presencia de
grupos al diluir el agar y mezclar con el liquido ya que en la siembra e incubacin se podran
presentar dificultades para los microorganismos.
CONCLUSIN:
Se logro una utilizacin del material y esterilizado bajo los mtodos estndar guiados por
nuestro profesor. El funcionamiento del equipo de autoclave no presento fallas en el tiempo de
esterilizado. y se logro una bueno dilucin y vaciado en placas del agar.
BIBLIOGRAFA
- Britania. (1960). TCBS. Buenos Aires, Argentina. Recuperado el 16 de Noviembre de
2014, de http://www.britanialab.com/productos/601_hoja_tecnica_es.pdf
- Britania. (1960). Triptena Soya Agar. Buenos Aires, Argentina. Recuperado el 16 de
Noviembre de 2014, de http://www.britanialab.com/productos/277_hoja_tecnica_es.pdf
- Olivas, E. E. (2012). Manual de practicas laboratorio de microbiologa. Ciudad juarez,
Mxico: ICB. Recuperado el 16 de Noviembre de 2014