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Uso y manejo del microscopio

Erick Semblantes, Hugo Teran y Viviana Alvarado


esemblantes@udlanet.ec; hteran@udlanet.ec; valvarado@udlanet.ec
Microbiologa, Ingenieria agroindustrial y alimentos, Universidad de las
Amricas
1. Introduccin
Mediante el microscopio, podemos observar estructuras o microorganismos
que no logramos ver a ojo desnudo. Hay muchas clases de microscopios, el
ms sencillo es el microscopio simple que es una lupa. Tenemos adems el
microscopio compuesto, el microscopio de ultravioleta, el microscopio de
contraste de fases, el microscopio electrnico entre otros.
El microscopio compuesto es el que se utiliza ms comnmente para la
observacin de microorganismos. Se compone por dos sistemas de lentes:
el ocular y el objetivo.
MICROSCPICAS son clulas que solo se las puede observar con la ayuda
del Microscopio, Se las mide por MICRONES. Un Micrn es la milsima
parte de un milmetro y se representa con la letra u.
-Hongos
Es importante tener en cuenta que en el crecimiento micelial, slo el borde de
la colonia (las puntas de las hifas) crece. La parte central de una colonia
micelial est formada por clulas viejas mientras que el borde de la colonia est
formado por clulas jvenes. Las clulas jvenes se encuentran en trofofase
(fase de alimentacin y crecimiento), mientras que las clulas viejas se
encuentran en idiofase (fase de diferenciacin). Cuando observamos una
colonia micelial (por ejemplo una colonia de moho sobre una naranja), el
crecimiento de la colonia se produce slo por el borde de la parte mohosa y en
la parte central de la colonia se produce la diferenciacin que dar lugar a la
formacin de las esporas y a la aparicin del color verdoso caracterstico.
-Bacterias
Las bacterias pertenecen al reino mnera, son organismos procariotas
unicelulares, es decir que no presentan ncleo verdadero, ni orgnulos.
Las levaduras se multiplican en los medios de cultivo como clulas aisladas
individuales que se dividen y, de esta forma, aumentan su nmero

-Levaduras

Las levaduras: Son hongos unicelulares que crecen en colonias.

Las levaduras son hongos microoscopicos unicelulares, se forman colonias


pastosas. Su estructura celular es eucariota Comprenden 60 generos y
aproximadamente 500 especies. Son agentes de fermentacin, responsables
de la fermentacin alcohlica, esta aplicacin fue reconocida en 1856 por Luis
Pasteur. En ningn caso son mviles. Presentan forma ovoideas, elipsoideas,
alargadas, o esfricas y un tamao que oscila de 1 a 10 m de ancho y 2 a
ms de 20 m de longitud que depender de la especie, nutricin, edad, entre
otros factores. Las levaduras se encuentran formados por conidios, sin
embargo estn formados por diferentes tipos de conidiognesis. (Kendrick,
2001)
Las levaduras se encuentran en el suelo que su principal hbitat, desde el cual
llegan a las plantas, donde se lo encuentra con frecuencia en la superficie de
las hojas y flores, tambin suelen encontrarse en agua de ros y lagos. Su
presencia depende de la temperatura, el pH, la humedad y la disponibilidad de
azcares simples. Por ello cada especie se diferencia por su morfologa, sus
propiedades, forma de reproduccin . (Zamora, 2008)
Las levaduras se multiplican por gemacion en su mayoria, en medio de cultivo
aisladas, se dividen y asi aumentan su numero. Su crecimiento se estimula
cuando se encuentra en un medio acido aproximado a un pH de 4 a 4,5
mientras que en un medio basico no se desarrollan bien a menos que logran
adaptarse. (Zamora, 2008)

Cebolla
La cebolla forma parte de la familia de las liliaceas. Desarrolla un bulbo
infiltrado en la tierra, esta compuesto de varias capas gruesas donde se
centran los nutrientes de la planta.Las capas varian de tamao de manera
decreciente desde el exterior de la cebolla, estan cubiertos sobre un membran
fina, transparente que protege los tejidos de la celula. (Fundacion integral,
2012)
El tejdo epidermico de la cebolla, se asemeja pared de ladrillos distribuidos
simetricamente. Presenta celulas alargadas, donde se distingue claramente el
nucleo, dentro se este encuentran pequeas granulaciones llamados
nucletidos. El color de los tejidos es blanco por la presencia de aminoacidos
que carecen de pigmentos. La cebolla esta compuesta por 90% de agua.

Factor influyente por la tension que provica, que define en la expasicion de las
celulas dentro de los tejidos. ( (Fundacion integral, 2012)

2. Objetivo
Objetivo general
Aplicar el conocimiento del uso y manejo del microoscopio en la observacin
celulas de la cebolla, hongos, bacterias y levaduras.
Objetivo especifico
1. Disponer correctamente el microscopio para las observaciones
2. Identificar fcilmente las partes de un microscopio compuesto
3. Manejar adecuadamente la tcnica de preparar y observar diferentes
muestras provenientes de frotis o cortes de muestras en gota fresca y con
tincin simple para identificar estructuras celulares.
4. Poder comparar tamaos de clulas de diferentes organismos eucariotas
3. Materiales

Material de laboratorio

Material de laboratorio
Asas microbiolgicas

Azul de metileno

Bisturi de laboratorio

Caja petri

(Castro, Tomate, 2011) (Justicia, 2011)

(Justicia, 2011)

Cmara de Neubauer

CubreobjetosPortaobjetos

Microscopio
compusto

(Justicia, 2011)

(Larrea, 2006)

Gotero o frasco
lavador

(Justicia, 2011)
(creadores de blogs
personales, 2010)

Pipeta graduada (5 ml) Suero


fisiolgico
(solucin salina 0.1%)

(Justicia, 2011)
(Justicia, 2011)

Material biolgico
Bacteria Sterephyta

Cebolla

(Aguirre, 2010)

Hongos de la raz de la Hongos fruta de la mora


mora

(Aguirre, 2010)

(Aguirre, 2010)

Levadura

4. Mtodo experimental

Observacin de los hongos de la fruta de la mora

Observacin de los hongos de la raz de la fruta de la mora

Observacin de la bacteria Sterephyta

Observacin de la cebolla

Observacin de las levaduras

1. Se deposito una gota de solucin salina sobre un porta objetos.


2. Con un asa microbiolgica, se recupero un poco de levadura y se las
coloc sobre el porta objetos.
3. Se cubrio la muestra con un cubre objetos
4. Se observo la preparacin al microscopio utilizando objetivos 10x y 40x
5. Se tom fotografias de lo observado.
6. Se estimo el tamao de las clulas observadas.

Observacin de la levadura en la cmara

1. Se deposito un grano de levadura en un primer tubo de ensayo. Se


realizo tres disoluciones consecutivas en los tubos con suero fisiolgico.
2. Se procedi a depositar 1 ml de solucin en la cmara de Neubauer.
3. Se contabilizo un numero aproximado de clulas que tiene en la cmara
4. Se procedi de igual forma con las dos diluciones siguientes.

5. Resultados

Observacin de los hongos de la fruta de la mora (Rubus


ulmifolius)

Para realizar la contabilizacion celulas, tomamos un fila horizontalmente.

Tipo de celula

Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

Hinfas

62.5 m

Esporas

109

9.25 m

Tabla 1. Cantidad de celulas encontradas en hongos de la fruta de la mora


(Rubus ulmifolius)

Observacin de los hongos de la raz de la fruta de la mora


(Rubus ulmifolius

Un esporangio es una estructura comnmente globosa con una membrana


simple que contiene innumerables esporas, generalmente en el extremo de un
esporforo.
Las estructuras de resistencia son las clulas de pared gruesa llamadas
clamidosporas y los esclerocios que estn formados por un conjunto
macroscpico de hifas apelmazadas como un tejido.
Si las esporas forman en un esporangio se denomina esporangiosporas
Para realizar la contabilizacion celulas, tomamos un fila horizontalmente.
Tipo de celulas

Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

Esporangios

78

6.41 m

Tabla 2. Cantidad de celulas encontradas en hongos de la raz de la fruta


de la mora (Rubus ulmifolius)

Observacin de la bacteria Sterephyta

Para realizar la contabilizacion celulas, tomamos un fila horizontalmente.

Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

210

0.19 m

Tabla 3. Cantidad de celulas encontradas de la bacteria Sterephyta

Observacin de la cebolla (Allium cepa)

Se realizo con corte transversal del tejido epidrmico de la parte externa de la


cebolla. En donde se distinguen clulas epidrmicas que apenas presentan
color amarillentas, casi trasparentes de forma hexagonal, la pared celular, el
citoplasma y el ncleo. Presenta una distribucin laminar.
Observamos las clulas vegetales y su forma hexadrica (en celdas) y
alargadas. En 4x logramos diferenciar la membrana y el citoplasma; en 10x
vimos en las celdas que tenan ms proporcin de azul de metileno uno
diminutos puntos (ncleo). En 40x y 100x aunque divisbamos ms grandes
las clulas no pudimos ver el ncleo en su mayor proporcin.
Miden entre 250 a 400 mLa pared celular de las clulas vegetales es rgida,
lo que determina las formas geomtricas que encontramos en los tejidos
vegetales, como el hexagonal observado en las clulas de la cubierta de la tela
de la cebolla.
Los componentes principales en todas las clulas son: Membrana celular,
De acuerdo con las observaciones realizadas a la clula vegetal de la
epidermis de la cebolla, solo se pudo observar la pared celular delimitando al
citoplasma que a su vez rodea al ncleo.
La clula epidrmica de la cebolla es de forma de rombos alargados, que son
la pared celular (que est formada por celulosa y principalmente por agua).
Si poseen adaptacin porque la forma de rombos alargado le permite a la
cebolla su forma caracterstica adems su elevado contenido acuoso

Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

12

166.66 m

Tabla 4. Cantidad de celulas encontradas de la cebolla (Allium cepa)

Observacin de las levaduras

Figura 5.- Observacin en microscopio (10x) de las levaduras.

Para realizar la contabilizacion celulas, tomamos un fila horizontalmente.


-Cantidad de clulas
Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

120

4.16 m

Tabla 5. Cantidad de celulas encontradas de las levaduras

Observacin de la levadura en la cmara

Figura 6.- Observacin en microscopio (10x) de la disolucin con 2


granos de levaduras del tubo de ensayo #1 en la cmara

Cantidad de clulas

Tamao estimado de
cada celula

522

0.96 m

Tabla 6. Cantidad de celulas encontradas de las levaduras

La reticula completa mide 3mm x 3mm de lado. Subdivida a su vez en 9


cuadrados de 1mm de lado cada uno. Se debe realizar una muestra con una
concentracion apta para su reconteo
Concentracion_ numero de celulas
Numero de cuadrados

6. Discusin

Observacin de los hongos de la fruta de la mora (Rubus


ulmifolius)

Observamos a traves del microoscopio los hongos de la fruta de la mora.


Observarmos dos tipos de celulas hinfas, que presentan una estructura
alargada, de forma cilindrica, en que logramos contabilizar 8, con un diametro
de 62.5 m. Y esporas que son de estructura mas pequea, presentan una
forma esferica, encontramos 109, con un diametro aproximado de 9.25 m
Hifas miden alrededor de 10 a 100 m, estas pueden estar divididas en
segmentos por medio de unas paredes llamadas septos, las cuales nunca se
encuentran cerradas en su totalidad, dejando un poro de apertura, que permite
el flujo del material celular, es por ello que presenta un tamao que las
esporas, para almacenar los metablicos y nutrientes que requiere para realizar
sus funciones metablicas. (Herrera, 2008)
Sin embargo posee adems una pared celular formada de polisacridos,
especialmente de quitina (lo que le diferencia de las plantas), lo
suficientemente rgida para resistir la presin osmtica, dado por la
acumulacin de sustancias del medio exterior. Debido a que en ausencia de la
pared celular, se desplomara la membrana celular, destruyendo a toda la
estructura del hongo. Y debido a aquella presin ejercida, es que se forma la
estructura morfolgica de la hifa. (Herrera, 2008)
Tambin observamos esporas, formadas en los extremos de las hifas,
agrupadas en racimos, presentan un dimetro alrededor de 1 a 100 m. Las
esporas cumplen una funcin muy importante en los hongos, la reproduccin,
son en equivalencia la semilla en caso de las plantas, presentan una forma
esfrica, pequea y ligera que les permite dispararse y germinar para formar

nuevas colonias, es por ello que presentan una estructura mas pequea y son
mas abundante en relacin a hifas. (Herrera, 2008)

Observacin de los hongos de la raz de la fruta de la mora


(Rubus ulmifolius)

Observamos a traves del microscopio los hongos de la raz de la fruta de la


mora. A diferencia de los observados hongos en la fruta de la mora,
encontramos un tipo de celula, esporangios, estructura en forma de saco que
contiene esporas. Observamos alrededor de 78 esporangios, con un dimetro
de 6.41 m. (Herrera, 2008)
Tanto la cantidad, como el tamao de estos hongos depender del tipo,
nivel de concentracin y diversidad microbitica y materia orgnica que se
presenta en suelo. Los hongos han desarrolla una gran capacidad de
adaptarse a suelo desde extremo acido a alcalino a diferencia de otros
microorganismos, a aquella ausencia en la competencia entre microorganismo,
ha provocado que algunas reas los hongos dominen a la sociedad
microbiana. (Herrera, 2008)

Observacin de la bacteria Sterephyta

Observamos a traves del microscopio la bacteria Sterephyta. Encontramos


alrededor de 250 bacterias, presentaban una estructura esfrica, con bordes
lisos, conocida como cocos dentro de la clasificacin morfolgica de las
bacterias. (Pedrique & Castro , 2001)
Las bacterias, presentan por lo general un tamao que oscila entre 0,2 a 5 m.
Sin embargo se han realizado varios descubrimientos en los que se ha logrado
observar bacterias con un tamao menor y mayor tamao alcanzando hasta los
100 y 750 m de dimetro. La bacteria Sterephyta, observada en el presente
laboratorio, presenta un tamao de 0,19 m, realizando una aproximacin de
los decimales se encuentra dentro del rango dado, sin embargo presentando el
tamao mnimo dentro del rango establecido. (Pedrique & Castro , 2001)
Como pudimos observar y comprobar con la teora, las bacterias son los
microorganismos ms pequeos en relacin a las hongos y levaduras
observadas. Como ya se menciono anteriormente, las bacterias son
organismos procariotas, ello influye directamente en la proporcin de su
tamao. Dado que los organismos procariotas son mas pequeos que los
organismos eucariotas. Dentro de los conceptos de la teora celular,
conocemos que la morfologa de las clulas va determinado por la funcin que
cumplen. (Darnell, 1993.)

Las clulas procariotas al ser mas pequeas, poseen un volumen de la


superficie exterior mayor, por lo que permite un flujo ms rpido en el trasporte
e intercambio de sustancias con medio externo. De esta manera acelera los
procesos metablicos y de crecimiento de las clulas, es decir las bacterias
realizan procesos metablicos y mayores tasas de crecimiento que los hongos
en menor tiempo que los hongos y levaduras, siendo organismos eucariotas.
Es por ello y por su capacidad de adaptarse a diversos medios, que las
bacterias son los microorganismos ms abundantes. Siendo a su vez, los
microorganismos con mayor influencia para generar cambios significativos, en
los parmetros fisicoqumicos de un ecosistema en tiempos relativamente
cortos. (UNLPam. O., 2007)

Observacin de la cebolla (Allium cepa)

Observamos a traves del microscopio las celulas de la cebolla. Encontramos


alrededor de 12 clula, presentaban una forma alargada, polihedrica, tpica de
las clulas vegetales. El tamao de las clulas de las cebolla oscila entre los
250 a 400 m, clulas de gran tamao en relacin con los microorganismos
estudiados. Las clulas de la cebolla observadas median aproxidamente
166.66, presentado un tamao menor dentro del rango establecido, la cebolla
observada era pequea sin embargo el tamao de las clulas de las cebolla
varia segn diversos factores. (Armstrong, 2012)
El reino plantae y el reino fungi, comparten una caracterstica similiar presentan
clulas eucariotas, sin embargo posee muchas diferencias. Las clulas del las
plantas presentan una estructural celular mas compleja, tiene la capacidad de
formar tejidos verdaderos, son seres auttrofos lo que con lleva a poseer
organelos mas especializados. Es por ello, que las clulas vegetales presentan
un tamao significativamente mayor a los microorganismos observados.
(Audesirk, Audesirk, & Byers, 2003)

Observacin de las levaduras

Han perdido la capacidad de formar micelo


La observacin de las levaduras la realizamos bajo dos mtodos, el primero
observamos un cultivo puro a travs del microoscopio, en la que encontramos
alrededor de 120 levaduras. Sus celulas presentaban una forma esferica, muy
comn en las levaduras. (KIDA, 2008)

Las levaduras al igual que las bacterias son microorganismos unicelulares, sin
embargo presentan un sistema celular ms complejo, sistema estructural
eucariota. Es por ello que presenta un diferencia significativa en su tamao en
relacin a las bacterias, presentando un diametro de 4.16 m,
aproximadamente 22 veces ms que la bacteria Sterephyta. El dimetro en el
oscila en general las levaduras es alrededor de 2 a 5 m, presentando dentro
del rango establecido. (Kendrick, 2001)
Sin embargo presentar un tamao mayor tiene sus desventajas. Las levaduras
tienen ciclos de reproduccin cortos, es por ello que realizan la
descomposicin, mediante la fermentacin de manera muy rpida, sin embargo
as como se reproducen, muchas mueren. Las levaduras al ser de mayor
tamao tienen una relacin superficie/ volumen en el exterior menor, es decir
tiene un intercambio menor con el medio, de esta manera la cantidad de
sustancias que entran a la clula por difusin pasiva ser menor, por lo que
se le dificultara mas obtener los nutrientes necesarios para su normal
sobrevivencia. Es por ello que las levaduras son muy sensibles a diversos
factores, como son la temperatura, elementos minerales, una alimentacin
apropiada rica en azcares, sustancias nitrogenadas etc. (Zinni, 2004)

La otra observacin se realizo una disolucion de levaduras en un medio


acuoso, en la que se observo con la ayuda de la camara de Neubauer en el
microoscopio, para poder realizar un conteo mas efectivo. Se realizo
concentracion de levaduras en la disoluccin adecuada para su conteo, y lo
suficientemente diluidas para que no se sobrepongan y se encuentren
uniformemente distribuidas. Se contabilizo alredeor de 522 clulas, y
presentaban un diametro aproximado de 0.96 m. (Bastidas, 2013)
En medio acuoso los microorganismo crecen de manera mas acelerada. En un
principio el incremento en el nmero de clulas es lento, sin embargo despus
llega a ser de forma exponencial, hasta que las clulas logran adaptarse a las
nuevas condiciones del medio incubacin al que han sido transferidas.
(Rodrguez Valera , 2012)

7. Conclusiones

La clula acta como un sistema abierto en el que hay un constante


intercambio de materia y energa con el entorno. La clula es capaz de admitir
selectivamente esos materiales organizarlos y aprovecharlos en su interior y,
despus, eliminar residuos resultantes de su metabolismo.

La clula es la unidad estructural de los organismos, existen dos clases


eucariota y procariota, que se diferencian principalmente porque la eucariota
posee organelos y la otra no, y el tamao de la procariota es menor al de la
eucariota y adems la procariota no tiene ncleo definido.
Se reconocieron en el microscopio, las diferencias morfolgicas fundamentales
entre clulas eucariotas y procariotas.
La diferencia ms notoria entre la clula procariota y la eucariota, radica en que
la primera no posee nucle, mientras la segunda s.
El empleo de colorantes en la observacin de clulas representa una gran
ventaja ya que permite identificar con mayor facilidad las estructuras bsicas de
la misma, siempre y cuando se empleen concentraciones bajas, de lo contrario
se convierte en problema porque si el colorante es muy concentrado no deja
diferenciar nada en la clula.

8. Referencias

9. Anexos
Anexo 1.- Calculo del campo ptico de las levaduras
Lente 4x 5000 m
Lente de mayor aumento 40x

Campo visual en lente objetivo de mayor aumento:

Si 500 m 522 clulas


X m

1 clula

En una clula el campo ptico es de 0,95 m

Anexo 2.-

En 1997, Heidi Schulz descubri en los sedimentos ocenicos de las costas de


Namibia, un procarionte an ms grande: Thiomargarita namibiensis, es una
bacteria esfrica entre 100 y 750 m de dimetro