100%(2)100% menganggap dokumen ini bermanfaat (2 suara)
2K tayangan11 halaman
Deskripsi:
Hepatitis adalah suatu proses peradangan pada jaringan hati yang memberikan lemah badan, mual ,kencing, seperti air the disusul dengan mata dan badan menjadi kuning. Tidak semua penyakit hepatitis mempunyai bentuk yang klasik seperti ini. Ada hepatitis yang tidak nyata (inapparent hepatitis), ada yang tanpa ikterik,ada bentuk yang jiank(bening)dan ada yang ganas (fulminan). Hepatitis dapat disebabkan oleh virus (penyebab terbanyak), bakteri (salmonella typhy), obat-obatan racun(hepatotoksik)dan alcohol. Kini telah dikenal beberapa virus penyebab peradangan hati yaitu : virus hepatitis A (VHA), Virus hepatitis B(VHB),virus hepatitis C(VHC,non A non B),virus hepatitis D(VHD),Virus hepatitis E(VHE)dan virus hepatitis G(VHG).
Hepatitis adalah suatu proses peradangan pada jaringan hati yang memberikan lemah badan, mual ,kencing, seperti air the disusul dengan mata dan badan menjadi kuning. Tidak semua penyakit hepatitis mempunyai bentuk yang klasik seperti ini. Ada hepatitis yang tidak nyata (inapparent hepatitis), ada yang tanpa ikterik,ada bentuk yang jiank(bening)dan ada yang ganas (fulminan). Hepatitis dapat disebabkan oleh virus (penyebab terbanyak), bakteri (salmonella typhy), obat-obatan racun(hepatotoksik)dan alcohol. Kini telah dikenal beberapa virus penyebab peradangan hati yaitu : virus hepatitis A (VHA), Virus hepatitis B(VHB),virus hepatitis C(VHC,non A non B),virus hepatitis D(VHD),Virus hepatitis E(VHE)dan virus hepatitis G(VHG).
Hepatitis adalah suatu proses peradangan pada jaringan hati yang memberikan lemah badan, mual ,kencing, seperti air the disusul dengan mata dan badan menjadi kuning. Tidak semua penyakit hepatitis mempunyai bentuk yang klasik seperti ini. Ada hepatitis yang tidak nyata (inapparent hepatitis), ada yang tanpa ikterik,ada bentuk yang jiank(bening)dan ada yang ganas (fulminan). Hepatitis dapat disebabkan oleh virus (penyebab terbanyak), bakteri (salmonella typhy), obat-obatan racun(hepatotoksik)dan alcohol. Kini telah dikenal beberapa virus penyebab peradangan hati yaitu : virus hepatitis A (VHA), Virus hepatitis B(VHB),virus hepatitis C(VHC,non A non B),virus hepatitis D(VHD),Virus hepatitis E(VHE)dan virus hepatitis G(VHG).
TUJUAN 1.1 Tujuan Umum Untuk mengetahui cara pemeriksaan rapid test Anti-HCV. 1.2 Tujuan Khusus
Untuk dapat melakukan pemeriksaan rapid test Anti-HCV.
Untuk dapat menginterpretasikan hasil pemeriksaan rapid test AntiHCV.
II.
METODE Metode yang digunakan dalam pemeriksaan Anti-HCV ini adalah Immunochromatography rapid test.
III. PRINSIP Berdasarkan reaksi Immunologis antara antibody spesifik dalam specimen dengan rekombinan antigen HCV capture (inti, NS3, NS4, NS5) pada membrane test yang dilapisi protein A koloidal emas conjugate membentuk
kompleks
antibodi-antigen.
Campuran
bermigrasi
di
sepanjang membrane test dan bereaksi menghasilkan garis berwarna.
IV.
DASAR TEORI Hepatitis adalah suatu proses peradangan pada jaringan hati yang memberikan lemah badan, mual ,kencing, seperti air the disusul dengan mata dan badan menjadi kuning. Tidak semua penyakit hepatitis mempunyai bentuk yang klasik seperti ini. Ada hepatitis yang tidak nyata (inapparent
hepatitis),
ada
yang
tanpa
ikterik,ada
bentuk
yang
jiank(bening)dan ada yang ganas (fulminan). Hepatitis dapat disebabkan
oleh virus (penyebab terbanyak), bakteri (salmonella typhy), obat-obatan racun(hepatotoksik)dan alcohol. Kini telah dikenal beberapa virus penyebab peradangan hati yaitu : virus hepatitis A (VHA), Virus hepatitis B(VHB),virus
Hepatitis C adalah infeksi yang terutama menyerang organ hati. Penyakit ini disebabkan oleh virus hepatitis C (HCV). Hepatitis C seringkali tidak memberikan gejala, namun infeksi kronis dapat menyebabkan parut (eskar) pada hati, dan setelah menahun menyebabkan sirosis. Dalam beberapa kasus, orang yang mengalami sirosis juga mengalami gagal hati, kanker hati, atau pembuluh yang sangat membengkak di esofagus dan lambung, yang dapat mengakibatkan perdarahan hingga kematian. Hepatitis C adalah hepatitis viral yang disebabkan oleh virus Hepatitis C (vhc=hcv), dan tergolong dalam kelompok hepatitis non-A ,non-B(NANB). Hepatitis viral inoi sering terjadi setelah transfuse darah atau pemberian komponen darah sehingga pada masa yang lalu hepatitis C ini disebut sebagai post transfusion NANB hepatitis. Seseorang terutama terkena hepatitis C melalui kontak darah, penggunaan narkoba suntik, peralatan medis yang tidak steril, dan transfusi darah. Sekira 130170 juta orang di dunia menderita hepatitis C. Para ilmuwan mulai meneliti HCV pada tahun 1970-an, dan memastikan keberadaan virus tersebut pada tahun 1989. Virus ini tidak diketahui menyebabkan penyakit pada hewan lain. Dibeberapa daerah didapatkan hepatitis non-A non-B yang tidak mempunyai riwayat transfuse, dan disebut sebagai hepatitis sporadic atauu acquired community. Dari penelitian selanjutnya ternyata 40-50% dari penderita hepatitis ini menunjukkan antibody anti-HCV yang positif. Pada umunya hepatitis C member gejala klinis yang relative ringan bahkan sering tanpa gejala namun mempunyai kecenderungan untuk
menjadi menahun atau serosis hati yang lebih besar bila dibandingkan dengan hepatitis viral yang lain. Peginterferon dan ribavirin merupakan obat-obatan standar untuk HCV. Antara 50-80% pasien yang diobati sembuh. Pasien dengan sirosis atau kanker hati mungkin memerlukan transplantasi hati, namun biasanya virus muncul kembali setelah transplantasi. Tidak ada vaksin untuk hepatitis C. Stuktur Antigen Virus Hepatitis C Virus hepatitis C merupakan virus RNA dengan genom berantai tunggal, dengan polaritas positif, diameter 30-60nm, dan panjang sekitar 10kb. VCH merupakan virus yang peka terhadap pelarut organic seeperti kloroform, terbungkus oleh envelop lipid dan termasuk dalam family antara flavivirus dan pestivirus. Genom VHC terdiri dari sekitar 9413 nukleotida dan mengkode sekitar 3010 asam amino. Menurut beberapa peneliti terdapat enam genotip strain VHC. Di Indonesia genotip yang sering dijumpai adalah subtype 1b, dan subtype 1 baru yang tidak didapatkan di Negara lain. Genotipe VHC yang sering dijumpai di Surabaya adalah subtype 1b, subtype 1 baru, 2a dan subtype baru dari tipe 3. Genom VHC terdiri dari 3 bagian utama sebagai berikut : Region non-coding ,terdiri dari 340 nukleotida dan belum banyak diketahui funggsinya, Region structural, terdiri dari region nukleokapsid atau core (c), dan region envelope(surface=s),dan Region non structural (NS), terdiri dari NS 1-NS5 dan sebagian fungsi NS 2-NS5 tiddak diketahui. Imunopatogenesis Masa inkubasi dari Hepatitis C berkisar antara 2-20 minggu dengan puncaknya antara 6-12 minggu dan rerata sekitar 7-8 minggu. Respon imun yang terjadi setelah masuknya VHC kedalam hepatosit, sama dengan respons imun penyakit yang lain, yaitu respons imun terhadap jasad renik intraseluler dalam sitosol dari sel yang terinfeksi. Antigen dari virus yang
dibuat di dalam sitosol hepatosit akan merangsang MHC kelas 1 untuk
membuat polipeptida yang mengangkut antigen tersebut ke permukaan sel untukdiikat oleh reseptor ddari limposit T CD8 sehingga sel ini teraktivasi. Limposit TCD8 yang teraktivitas tersebut akan mengeluarkan sitokin yang menghancurkan sel hepar, dan virus yang berada didepannya. Akibatnya akan terjadi peningkatan kadar ALT dalam serum penderita yang sering kali disertai oleh viremia. Beberapa menduga bahwa VHC dapat merusak sel hati secara lansung (directly cytopathic) sebab ada kaitan antara beratnya kerusakan sel hati dengan banyaknya virus. Pola fluktuasi ALT serum pada hepatitis C khas periode peningkatan ALT di selingi oleh periode ALT yang normal atau mendekati normal. VHC atau beberapa bagian virus yang berada ekstraseluler dapat ditangkap oleh beberapa reseptor pada permukaan limfosit B, dimasukan kedalam vokuol, dan diproses, lalu dipaparkan pada permukaan limfosit B dan ditangkap oleh reseptor limfosit T CD4 Th2. Sel CD4 Th2 yang teraktivitasi akan mengalami transformasi blas menjadi sel plasma yang mensekresi antibody spesifik terhadap antigen VHC. Serenkonversi sel plasma yang mensekresi antibody spesifik terhadap antigen VHC. Serekonversi biasanya terjadi 11-12 minggu setelah infeksi, behkan dengan uji anti-HCV generasi II, antibody tersebut dapat dilacak 7-8 minggu setelah infeksi. Namun pada beberapa kasus, antibody tersebut baru timbul setelah infeksi berjalan setelah 6-12 bulan. Antibody
pertama
yang
biasa
timbul
adalah
antibody
terhadap core, dan biasanya dapat dilacak sesaat sebelum atau bersamaan dengan peningkatan ALT serum.Antibody terhadap NS 3 biasanya timbul bersamaan atau sesaat setelah antibodi terhadap protein core, namun kadang kala (anti-C33c) dapat juga timbul sebelum anti-core, dapat dideteksi. Anti C 100-3 (NS4) baru timbul 10-15 minggu setelah peninghktan ALT. Hepatitis Cdikatakan menjadi menahun bila kenaikan kadar ALT serum dan anti-HCV positif terjadi lebih dari 6 bulan atau 1 tahun. Factor yang berperan dalam perubahan hepatitis C akut menuju
menahun yaitu tingginya kadar ALT, sifat polifaksin, usia lanjut dan gangguan imunologis. Tes human anti HCV lgG antibody dikembangkan untuk mendeteksi sirkulasi anti HCV lgG antibody dinyatakan sebagai petunjuk infeksi hepatitis C virus, tes ini berdasarkan prinsip yang menggunakan rekombinan HCV protein sebagai viral antigen. Pada langkah pertama anti HCV lgG dalam specimen bila ada akan terikat pada protein rekombinan HCV yang dilabel pada permukaan sumur microtitir. Setelah inkubasi bagian specimen yang tidak terikat akan dipisahkan melalui pencucian, pada pencucian ke dua anti human lgG konjugat ditambahkan akan mengikat antibody spesifik manusia anti HCV lgG pada permukaan sumur akan membentuk sandwich complex.
V.
ALAT DAN BAHAN
5.1 Alat: Mikropipet 10 l Yellow / white tip Pipet disposible Stopwatch Wadah limbah 5.2 Bahan: Sampel serum HCV 9 Rapid test Anti HCV (ACON)
VI.
CARA KERJA 1. Alat uji dikeluarkan dari dalam bungkus. 2. Diteteskan 10 L sampel, plasma atau darah pada lubang sampel. 3. Ditambahkan 4 tetes diluent assay pada kolom sampel yang sama. 4. Hasil dibaca dalam 5 20 menit. Jangan membaca hasil lebih dari 20 menit karena akan memberikan hasil yang salah.
VII. INTERPRETASI HASIL
Negatif : hanya muncul garis warna pada daerah control C Positif : muncul garis warna pada control C dan test T Invalid : tidak muncul garis warna pada control C
VIII. HASIL PENGAMATAN
No.
Gambar
Keterangan
1.
a. Diluent assay HCV
tes b. Strip test HCV (merk ACON)
(a)
2.
(b)
Sampel serum pasien dengan
kode HCV 9
3.
Diteteskan 10 L sampel dan
4 tetes diluent assay pada lubang yang sama. Setelah diinkubasi selama 20 menit, diperoleh dengan
hasil munculnya
negatif garis
warna hanya pada daerah
control C.
IX.
PEMBAHASAN Pemeriksaan Anti-HCV merupakan pemeriksaan darah untuk mendeteksi keberadaan antibodi terhadap virus Hepatitis C (HCV). Bila hasil Anti-HCV positif (reaktif), hal tersebut tidak menunjukkan terbentuknya imunitas tubuh melainkan sebaliknya, maka sebaiknya segera dikonsultasikan ke dokter. Pada praktikum kali ini dilakukan pemeriksaan Rapid Test AntiHCV (Hepatitis C Virus) pada sampel serum kode HCV9 dengan metode rapid kromatografi immunoassay. Tujuan pemeriksaan ini adalah untuk mendeteksi secara kualitatif ada tidaknya antibodi virus hepatitis C dalam sampel serum pasien. Sampel serum yang dipergunakan sudah disiapkan sebelumnya. Seacara visual, sampel serum yang digunakan berwarna kuning dengan konsistensi kental. Sebelum memulai praktikum, semua perangkat test dan sampel dikondisikan pada suhu ruang (15-30 oC). Hal ini dikarenakan pada serum terdapat antibodi dimana
antibodi merupakan
protein dan protein dapat bereaksi optimal pada suhu ruang. Pemeriksaan HCV ini dapat menggunakan plasma/serum/wholeblood tergantung dari reagen dan test kit yang dipergunakan. Kebanyakan menggunakan plasma/serum sebab sebagian besar antigen dalam bentuk glikoprotein yang tersekresi lebih dari 48 kDa di supernatant membran plasma/serum. Selanjutnya cassete test dikeluiarkan dari bungkusnya dan ditempatkan di tempat yang datar dan kering. Pada praktikum ini pengujian dilakukan dengan menggunakan perangkat uji Rapid Test Anti-HCV (ACON). Sampel serum dihomogenkan terlebih dahulu agar semua komponen yang ada di dalamnya bercampur merata sehingga sampel uji dapat representatif. Sebanyak 10l sampel serum diteteskan secara vertikal pada sumur sampel (tanda S) dari cassete test menggunakan disposible dropper yang ada dalam test kit. Tujuan pemipetan secara vertikal adalah agar volume yang dihasilkan tidak berkurang/tidak ada sampel yang bersisa pada pipet (volume tepat 10l). Saat pemipetan juga sebaiknya ujung tip tidak menyentuh cassete test/sumur sampel secara langsung untuk mencegah
kontaminasi. Setelah itu assay diluent dihomogenkan lalu diteteskan
sebanyak 4 tetes (90-120l) kedalam sumur yang sama dengan sampel. Penetesan diluent juga sebaiknya vertikal dan berjarak 1cm dari sumur untuk menghindari kontaminasi pada ujung botol diluent. Diluent berfungsi untuk mengatur PH selama terjadinya reaksi, membantu dalam bermigrasi, dan mengencerkan serum dengan rekombinan virus HCV sehingga terbentuk kompleks. Hasil pemeriksaan dibaca dalam 15-20 menit dari penambahan diluent (waktu inkubasi). Jika hasil dibaca setelah 20 menit akan menunjukkan hasil invalid dan pemeriksaan harus diulang. Pembacaan yang lebih dari 20 menit dapat menyebabkan hasil yang sebenarnya/tadinya positif berubah menjadi negatif akibat terlepasnya ikatan konjugat koloid emas antigen HCV dengan antibodi spesifik dalam sampel dan secara otomatis kompleks antigen-antibodi tidak akan terbentuk lagi (hilang). Waktu 15-20 menit merupakan operating time yaitu waktu optimum yang diperlukan untuk membentuk kompleks antigen antibodi. Membran test yang dilapisi dengan protein koloidal emas berupa antigen virus HCV yang akan bereaksi dengan antibodi spesifik pada sampel pasien. Ikatan antigen dan antibodi akan bermigrasi secara kromatografi ke daerah uji dan membentuk garis warna. Pada pengujian yang dilakukan terbentuk garis warna merah muda hanya pada daerah control (C) dimana dapat diinterpretasikan didapat hasil negatif. Hal ini berarti dalam sampel serum kode HCV9 tidak mengandung antibodi HCV (pasien tidak mengalami infeksi virus hepatitis C). Hal-hal yang harus diperhatikan selama praktikum antara lain : Spesimen hemolisis, lipemia atau ikterik (hiperbilirubinemia) dapat mempengaruhi pengujian. Jika memungkinkan sebaiknya digunakan sampel segar. Spesimen dapat disimpan pada suhu 2o-8oC selama 7 hari dan untuk waktu yang lama dapat disimpan beku pada suhu -25o-6oC. Hindari pembekuan dan pencairan (thawing) sampel berkali-kali. Antikoagulan seperti heparin, EDTA, dan sodium sitrat tidak mempengaruhi test.
Digunakan pipet kapiler disposible atau tip pipet secara terpisah
untuk mencegah kontaminasi silang dari setiap sampel yang mengakibatkan kesalahan hasil.
X.
KESIMPULAN Dari hasil pemeriksaaan Anti HCV pada sampel dengan kode HCV 9 didapakan hasil negatif dengan ditandai munculnya garis warna hanya pada daerah control C. hal ini juga menunjukan sampel HCV 9 negatif Hepatitis C.
DAFTAR PUSTAKA Sutrimo,
Wayan.
2013.
Uji
HCV.
Online.
Available.
http://analiskesehatankendariangkatan5.blogspot.com/20 13/01/uji-hcv_14.html. diakses pada 13 Oktober 2014. Ahmad,
