Evaluacin Espectroscpica de Quitina y -Dglucanos del Hongo Comestible Lentinula edodes

Cultivado sobre Madera de Vid, Manzano y

Encino
Gonzlez, M., Goycoolea, F., Snchez, A. y
Esqueda, M.
Trabajo de tesis de licenciatura del primer autor, realizado en el rea de
Tecnologa de Alimentos de Origen Animal

En todo el mundo, el cultivo de hongos comestibles es una alternativa excelente en la

produccin de alimentos para el consumo y nutricin del hombre. Entre stos, destaca shiitake
[Lentinula edodes (Berk.) Pegler], nombre que se deriva de su asociacin con el rbol shiia en Asia. Su
cultivo y consumo ha aumentado aceleradamente en los ltimos aos, ocupando el segundo lugar de
produccin en el mbito mundial entre los hongos cultivados.
Shiitake es altamente cotizado no slo por su excelente aroma, sabor y caractersticas nutritivas
sino tambin por sus propiedades medicinales, atribuido sobre todo a la presencia de polisacridos
estructurales, entre stos: quitina, -D-glucanos y heteropolisacridos, as como otros componentes
como

la

eritadenina

terpenoides.

Por

lo

anterior

que

muchos

hongos presentan dichas propiedades, recientemente numerosos estudios se han centrado en la

caracterizacin de la composicin qumica de polisacridos aislados de hongos a travs de distintos
mtodos, tales como: Espectroscopa de infrarroja con transformada de Fourier (FT-IR), espectroscopa
de resonancia magntica nuclear (1H y

13

C NMR), caracterizacin por HPLC, filtracin en gel, entre

otros, siendo considerada la espectroscopa FT-IR un mtodo confiable y sencillo.

La composicin qumica del basidioma de Lentinula edodes vara significativamente de acuerdo
a la naturaleza del medio donde se cultiva. Debido a esto, el presente trabajo se realiz con el fin de
conocer el efecto del tipo de sustrato sobre el contenido de quitina y -D-glucanos, mediante una

evaluacin espectroscpica FT-IR. Lo cual implic el desarrollo de un mtodo analtico de

cuantificacin de quitina en el cuerpo fructfero de shiitake, evalundose dos cepas (IE-105 y SO1).
Los hongos fueron previamente liofilizados y analizados por FT-IR. Las bandas caractersticas del
grupo NH (1556 cm-1) de la molcula de quitina y de los -D-glucanos (892 cm-1) no presentaron
picos definidos, por lo que fue necesaria su purificacin para cuantificarlos.

Aislamiento y Purificacin del Complejo Quitina y -D-Glucano

300 mg de Hongo Liofilizado

ARQUITECTURA MOLECULAR DE LA PARED

CELULAR DE Lentinula edodes

NaOH 0.1 M por 2 h a 25C

25C y Filtrar

(1
(16)6)- -D-glucano

NaOH 0.5
0.5 M por 2 h a 25C
Lavadas secuenciales
(15 mL)

Manoprote
Manoprotena

Cloroformo por 30 min a 25C

Complejo Quitina

Cloroformo/metanol
loroformo/metanol (2/1) ) por 30 min a 25C

--glucano
--glucano

(1
(13)3)- -D-glucano
-(1
(13),
3), (1
(14)4)-D-glucano

Dimetl Sulfxido por 30 min a 25C

Quitina

Agua destilada por 30 min a 25 C

Secar en estufa a 60
60C por 24 h

Fosfol
Fosfolpidos de la
membrana

(1
(13)3)--D-glucano sintetasa

Moler en mortero
Leer en Infrarrojo

Heux et al. (2000)

Las muestras se clasificaron de acuerdo al sustrato (manzano, encino y vid), medio enriquecido
y sin suplementar, as como la cepa. El mtodo evaluado permiti la extraccin de la pared celular en
todas las muestras, las cuales presentaron el espectro formado por un complejo quitina--D-glucano,
que apareci en el rango de 1500 a 1700 cm-1, con bandas mximas de absorcin de 1560 cm-1 (amida
II) y 1657 cm-1 (amida I), caractersticas de quitina. La banda de los -D-glucanos no present pico
definido.
Para la determinacin de quitina y -D-glucanos se realiz un mtodo analtico a travs de
curvas de calibracin de quitina. En promedio se obtuvo 31.8% de quitina y 68.2% de -D-glucanos,
calculados por diferencia (Tabla 1). El mayor porcentaje de quitina por tratamiento fue cuando el
hongo se cultiv sobre encino con 37.7 6.9%. La validacin del mtodo a partir de una mezcla

quitina--D-glucanos-KBr a travs de FT-IR, mostr 31.3% de quitina y 68.8% de -D-glucanos. As

mismo, se obtuvo 2.5% de N, siendo un 36.3% quitina. No se encontr diferencia significativa (p>0.05)
entre los tratamientos.

Tabla 1. Contenido de Quitina y -D-glucanos

en Lentinula edodes

9-VPSO1

32.24

67.76

10-VP105

33.07

66.93

11-VSO1

27.58

72.42

12-V105

31.27

68.73

a = Calculado por diferencia.

V = Vid
M = Manzano
E = Encino
P = Pacumbaba

4000

1075
1046

835

1661
3000

2000

1041

Complejo

1500

605

69.17

Muestra FII

575

30.83

1043

8-E105

-D-glucanos

1159

76.20
68.30

1249

23.80
31.70

1436
1375
1318

6-EPSO1
7-ESO1

1415

61.90
59.35

1732

38.10
40.65

1655
1560

4-MPSO1
5-EP105

1651

69.28

3360

30.72

2924

3-MP105

3382

70.32
67.75

2919

29.68
32.25

3349

1-M105
2-MSO1

1365

Comparacin de Espectros FT-IR

% de -D-glucanoa

2927

% de Quitina

A b so rb an cia

Muestra

1000

QuitinaQuitina- -D-glucano

Lentinula edodes
liofilizado

500

Nmero de onda (cm-1)

Estos resultados permitieron confirmar que la banda de absorcin centrada en 1556 cm-1 es cuya
intensidad guarda la mejor correlacin con la concentracin de quitina, independientemente de su
estado cristalino ( o -quitina). Esta banda asociada a la vibracin de amida II y N-H,

es

caracterstica de quitina, siendo prcticamente la nica banda que no se sobrepone con las del espectro
de -glucano. En virtud de lo cual se pudo calibrar un mtodo cuantitativo, basado en la intensidad de
la banda a 1556 cm-1, para determinar el contenido de quitina en estado slido de pared celular de L.
edodes. Se estableci un nuevo mtodo cuantitativo de quitina por FT-IR para L. edodes, el cual
factiblemente puede ser aplicado al anlisis de otro tipo de hongos. La tcnica mostr una alta
sensibilidad, requirindose pequeas cantidades de muestra; adems es de fcil y rpida aplicacin.