CROMATOGRAFIA EN PAPEL

En la cromatografa sobre papel, las interacciones del soluto con el papel hacen
que los compuestos se desplacen a velocidades diferentes.
Una pequea mancha de disolucin que contiene la muestra se aplica sobre una
tira de papel cromatogrfico a una distancia aproximada de un centmetro de la
base. La muestra es adsorbida en el papel. Esto significa que la muestra entra
en contacto con el papel y puede establecer interacciones. El papel es
sumergido en un disolvente adecuado (etanol o agua) e introducido en un
contenedor cerrado. A medida que el disolvente asciende por el papel, encuentra
la muestra que empieza a viajar por el papel con el disolvente. Los diferentes
compuestos de la muestra recorren distancias diferentes dependiendo de la
fuerza de sus interacciones qumicas con el papel. La cromatografa en papel
requiere algn tiempo, habitualmente se necesitan varias horas para
completarse.
El cromatograma final puede ser comparado con otros de mezclas conocidas a
fin de identificar los componentes de la muestra. La cromatografa en papel de
dos dimensiones consiste en desarrollar el cromatograma en un disolvente, girar
el papel 90 y desarrollar el cromatograma en un disolvente diferente. Es til
para separar mezclas complejas de compuestos similares.
Actualmente, la cromatografa en papel se utiliza poco y ha sido ampliamente
reemplazada por la cromatografa en capa fina. No obstante, todava se utiliza
como una poderosa herramienta pedaggica.
La cromatografa en papel se utiliza para compuestos muy polares o
polifuncionales. El uso ms comn es para azcares, aminocidos y pigmentos
naturales. En esta cromatografa se utiliza el fenmeno de particin en donde la
fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad
forma parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases mvil y
estacionaria estarn en contacto en una gran interfase, lo que permite una
rpida obtencin de una distribucin de equilibrio del soluto entre ellas.

Cromatografa en capa fina (CCF)

En la cromatografa en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una
capa delgada de un adsorbente (como por ejemplo gel de slice, almina o
celulosa) depositada sobre un soporte plano como una placa de vidrio, o una
lmina de aluminio o de plstico.
La CCF es una tcnica analtica y tiene como objetivo el anlisis de una mezcla
de componentes.
El proceso es similar a la cromatografa de papel con la ventaja de que se
desarrolla ms rpidamente, proporciona mejores separaciones y se puede
elegir entre diferentes adsorbentes. La CCF es una tcnica estndar en el
laboratorio de qumica orgnica. Debido a su simplicidad y velocidad, la CCF se
utiliza a menudo para monitorizar las reacciones qumicas y tambin para el
anlisis cualitativo de los productos de una reaccin, puesto que permite
conocer de manera rpida y sencilla cuntos componentes hay en una mezcla.
La cromatografa en capa fina permite:

- Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar

as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificacin.

- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser

idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma
sustancia.

- Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo

desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo que
es lo mismo, saber cuando la reaccin ha acabado.
Procedimiento
Una placa de CCF es una lmina de vidrio, metal o plstico recubierta con una
capa delgada de un slido adsorbente (gel de slice o almina). Se deposita una
pequea cantidad de la muestra problema en disolucin en un punto en la parte
inferior de la placa. Entonces la placa se introduce en una cubeta
cromatogrfica, de forma que slo la parte inferior de la placa queda sumergida
en el lquido. Este lquido o eluyente es la fase mvil y asciende por la placa de
CCF por capilaridad.
A medida que el eluyente pasa por el lugar donde est la mancha de la mezcla
problema se establece un equilibrio entre las molculas de cada uno de los
componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en
disolucin.
En principio, los componentes se diferenciarn en solubilidad y en la fuerza de
su adsorcin, de forma que unos componentes se desplazarn ms que otros.

Cuando el eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la

cubeta, se seca, y los componentes separados de la mezcla se visualizan.

Visualizacin de las manchas

Si los compuestos son coloreados se pueden observar las manchas a simple
vista. Si no es as, hay varios mtodos para visualizar las manchas
correspondientes a cada componente de la mezcla.
Utilizar luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se adiciona
un colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea fluorescente
en todas partes excepto donde haya una mancha correspondiente a un
compuesto orgnico.
Utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo
inespecfico.
Emplear reactivos especficos para desarrollar coloracin en las manchas. Esto
se puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolucin que los
contenga o en forma de spray.
Clculo del factor de retencin Rf
Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el
valor de Rf (factor de retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza
en la placa. Cada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende del
disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente
del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un
compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido
(preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF).