Qu queremos estudiar?
Modificaciones en el ADN
afectaran la funcin biolgica
Cualquier modificacin en la
secuencia nucleotdica del
ADN
Puede ser un reordenamiento,
un cambio de base o
variaciones en la cantidad.
Muestra
disponible
Diagnstico
prenatal o
postnatal
Indicacin
clnica
TCNICAS
CITOGENTICAS
MOLECULARES
Son un conjunto de
herramientas que
aprovechan la estructura y
propiedades del ADN
(cido desoxirribonuclico)
La molcula de ADN es
una doble hlice
El dimetro es uniforme
en toda la molcula
La curvatura de ADN es
hacia la derecha
Las dos cadenas corren
en distinta direccin son
antiparalelas
12
La estructura de
azcar y fosfato se
ubican en el
exterior de la
molcula de doble
hlice
La base
nitrogenada en la
regin interior
Las bases
complementarias se
unen por puente de
hidrgeno
13
5
14
16
Extraccin de ADN
Corte con enzimas de restriccin
Electroforesis en Agarosa
Southern Blot
PCR
Clonado
Ejemplos
- Corea de Huntington
- Sndrome de X frgil
- Cncer
Ejemplos de
Aplicacin
5...CAG CAGCAG.3
8 a 35
NORMAL
Recesiva
Afecta 1/2000 r.n. de raza blanca
Compromete glndulas excrinas de todo
el cuerpo por defecto del transporte del Clen la membrana de los epitelios
glandulares
Muerte entre edad de 10 a 20 aos por
complicaciones pulmonares y cardacas
Gen en 7q21
muy grande (230 kb) 27 exones
Protena: CFTR (canal de Cl-)
Existen ms de 1000
La mayora en exones 10 y 11
70% corresponde a F 508 que es una
delecin de 3 bases en el exn 10 y
provoca la prdida de un aa
Existen aproximadamente 20
mutaciones ms frecuentes y el resto
son muy raras.
Se expresan en homocigosis por ser
recesivas
Tcnicas Aplicaciones
Ventajas
Desventajas
Bandeo G
Identificar AC estructurales y
numricas
Bajo costo
Pesquisa de todo el
genoma
Bandeo G
AR
Identificar AC estructurales y
numricas
Precisar puntos de ruptura
Bajo costo
Pesquisa de todo el
genoma
El anlisis de todo el
cariotipo es muy tedioso
FISH
Determinar la presencia,
nmero de copias y
localizacin de secuencias
de ADN
Multi FISH
/ SKY
Detecta rearreglos
cromosmicos complejos que
involucran ms de un
cromosoma e identifica
cromosomas marcadores
Pesquisa de todo el
genoma
Clarifica rearreglos
cromosmicos complejos
a CGH
Pesquisa de todo el
genoma
No necesita clulas
en divisin
CONCLUSIONES:
- Todas las tcnicas son
complementarias pero no excluyentes.
- No todas las tcnicas descriptas se
realizan en la Argentina.
Solo algunos laboratorios realizan
FISH con fines diagnsticos, debido al
costo de reactivos y equipamiento .
- Estas tcnicas citogenticas pueden
complementarse con otras que son de
biologa molecular exclusivamente.
a-CGH
Muchas
gracias por su
atencin
Diana Radakoff de Doldan