Profesor Patrocinante:
Dra. Ana Faras M.
Instituto de Acuicultura
AGRADECIMIENTOS
Quisiera agradecer a mi familia, por su comprensin y apoyo durante el desarrollo de mi
tesis, a mi padre que adems me ense a ser mejor persona y a cmo enfrentar el
mundo; y a mi madre y abuelitos que a pesar de la distancia estuvieron siempre
pendientes de m y mi avance.
A la Dra. Ana Faras, por la confianza depositada en mi persona, darme las
herramientas del conocimiento y ensearme que la prolijidad y entereza en el desarrollo
de cada tarea permiten un resultado ptimo.
A Pamela y Jessica, quienes adems instruirme en el manejo de equipos y tcnicas en
el laboratorio, fueron un gran apoyo y grandes amigas.
Tambin a todo el personal del hatchery y laboratorio de microbiologa, especialmente a
Viviana, Lorena y Geraldine, quienes muchas veces me ayudaron y con quienes pase
gratos momentos.
A mis amigos, a pesar de que no nos vemos mucho, siempre estn cuando se
necesitan, Miguel, Gaby, Pedro, Nitza y Juan Eduardo que aunque ya no est presente,
me ha hecho compaa.
A mis profesores Jos Lus Iriarte, Iker Uriarte y Valentn Guiraldes, porque fueron un
gran aporte a los cimientos y desarrollo de esta tesis.
II
finalmente
al
III
NDICE
RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCIN
1.4. HIPTESIS
1.5. OBJETIVOS
2. MATERIALES Y MTODOS
10
10
10
2.1.2. BATCH
10
12
12
12
IV
12
13
13
13
2.2.7
13
2.2.8 LPIDOS
14
2.2.9 PROTENAS
14
2.2.10 CARBOHIDRATOS
14
2.2.11 ENERGA
15
2.2.12 CENIZA
15
16
3. RESULTADOS
17
17
4. DISCUSIN
22
26
26
34
5. CONCLUSIN
36
6. REFERENCIAS
38
7. ANEXOS
46
VI
INDICE DE FIGURAS
semicontinuo FBR.
19
batch.
20
23
VII
INDICE DE TABLAS
21
22
25
literatura.
32
33
VIII
RESUMEN
Es conocido que las microalgas pueden cambiar su composicin proximal a lo largo de
su curva de crecimiento, lo que afecta la calidad nutricional a la hora de utilizarlas como
alimento. En el presente trabajo, un cultivo semicontinuo, en un fotobioreactor tubular
elptico, y un cultivo batch de Isochrysis aff. galbana se realizaron para la comparacin
de la composicin proximal y el rendimiento productivo de la microalga cultivada en
ambos tipos de sistemas. Los experimentos se hicieron en 2 etapas, en la primera se
estudi la curva de crecimiento y se evaluaron parmetros. Luego en la segunda etapa
se evalu la composicin proximal y energtica. Respecto a la curva de crecimiento, se
encontr que I. aff. galbana poda presentar varias fases de crecimiento exponencial en
el sistema semicontinuo al agregar medio de cultivo nuevamente, a diferencia del
sistema batch, y que adems obtuvo una densidad celular y una produccin 4,5 veces
mayor que el segundo sistema de cultivo. Al evaluar la composicin proximal se obtuvo
que el porcentaje de protena en la fase exponencial fue significativamente mayor en la
microalga cultivada en el sistema batch, sin embargo, en la fase estacionaria disminuy
a menos de un tercio mientras que en el sistema semicontinuo se mantuvo
relativamente constante, mientras que los lpidos tendieron a aumentar a partir de la
fase exponencial y los carbohidratos no variaron, lo que ocurri en ambos sistemas de
cultivo. Para mejorar la productividad obtenida, se recomienda aumentar la velocidad
del flujo del sistema semicontinuo, iniciar los cultivos con la mitad de la luminosidad y
aumentar el volumen de cultivo en el FBR para equiparar
ABSTRACT
It is known that algae can change their chemical composition, along its growth curve,
which affects the nutritional quality when used as food. In this paper, a semicontinuous
culture in a tubular photobioreactor elliptical and a batch culture of Isochrysis aff.
galbana were conducted to compare the proximate composition and production
performance of the microalgae grown in both types of systems. Experiments were done
in 2 stages, first, It was studied the growth curve and parameters were evaluated. Then,
in the second stage was assessed the proximate composition and energy. Regarding
the growth curve, it was found that I. aff. galbana could present various stages of
exponential growth in the semicontinuous system by adding culture medium again,
unlike the batch system, and also earned a production and a cell density 4,5 times
greater than the second culture system. In assessing proximate composition was
obtained that the percentage of protein in the exponential phase was significantly higher
in the microalgae grown in batch system, however, in the stationary phase decreased to
less than one third while in the semicontinuous system remained relatively constant,
whereas lipid tended to increase after the exponential phase and carbohydrates did not
change, which occurred in both culture systems. To improve the productivity gained, it is
recommended to increase the speed flow of the semicontinuous system, start the
cultures with half of the light and increase the volume of culture in the FBR to match
production in the batch culture system in a single harvest.
1. INTRODUCCIN
1.1.
1.2.
La fase de latencia, adaptacin o lag es la primera fase que suele presentarse (figura
1a), donde la tasa de crecimiento exponencial es significativamente menor que en la
fase siguiente (exponencial), pudiendo deberse a un periodo de ajuste fisiolgico a los
cambios en los nutrientes del medio o condiciones de cultivo. Tambin, puede ocurrir si
el inculo posee clulas no viables, provenientes de la fase estacionaria o cercanas a la
senescencia (Lee & Shen, 2004), debido a que la edad fisiolgica de la clula afecta su
capacidad de multiplicacin (Becker, 1994).
1.4.
microalgal en un Hatchery.
La constante necesidad de produccin de microalgas para la alimentacin de animales
como
peces, hacen que los costos de produccin sean relativamente altos, variando entre el
20 al 50% de los costos de operativos de un hatchery (Coutteau & Sorgeloos, 1992)
debido a que, en general, se utilizan sistemas de cultivo batch, implicando una gran
cantidad de ciclos de sembrado y limpieza. Sin embargo, estos costos de produccin
6
Materassi, 1992; Pulz, 1994; Borowitzka, 1996 y Hu & Richmond., 1996) ya que al
parecer tienen ventajas de produccin por sobre otros modelos. En especfico, un FBR
tubular helicoidal diseado por Biotechna Ltd (the BiocoilTM Robinson et al., 1988) ha
probado ser uno de los ms efectivos en trminos de productividad en estudios de
laboratorio y escala piloto en exteriores en UK y Australia (Chrismadha & Borowitzka,
1994; Borowitzka, 1996; Watanabe & Hall, 1996) y ha sido utilizado para el cultivo de
microalgas como Tetraselmis, Isochrysis, Chaetoceros, Pavlova, Nannochloropsis,
Spirulina, Chlorella, entre otras.
En el presente estudio, se trabajar con I. aff galbana (clon T-ISO), la que ser
cultivada en 2 tipos de FBRs, continuo y cerrado (tipo batch), evaluando
comparativamente, las concentraciones alcanzadas y analizando su composicin
proximal y energtica.
1.5. HIPTESIS:
La produccin de la microalga I. aff. galbana en un FBR semicontinuo genera
mayor biomasa y presenta una composicin proximal ms estable que la produccin de
la misma microalga en cultivo cerrado o batch, ya que el aporte peridico de medio de
cultivo del FBR semicontinuo permiten tener una mayor tasa de crecimiento y evitar la
variacin de composicin proximal que se da en un cultivo batch.
1.6. OBJETIVOS:
1.6.1. GENERAL:
Evaluar comparativamente el rendimiento productivo y los parmetros biolgicos
de un FBR semicontinuo frente a cultivo batch.
1.6.2. ESPECFICOS:
i.
ii.
I. aff galbana
2.
MATERIALES Y MTODOS
El desarrollo de esta tesis se llev a cabo en las dependencias del HIM (Hatchery
10
sistema FBR y el batch fue de 4.000 y 2500 mol m-2s-1 respectivamente, la que fue
medida en la superficie ms directa y frente a la fuente luminosa de cada sistema.
Los cultivos se iniciaron siempre con un inculo de 3,5104 clulasml-1 de T-ISO en
todos los experimentos y sistemas.
11
12
es el volumen (ml);
2.3.
Y BATCH
Para determinar la composicin proximal y energtica de las microalgas, se realizaron
muestreos en cada fase exponencial y estacionaria de ambos sistemas a partir de la
13
2.3.1. LPIDOS
Los lpidos totales de la clulas microalgales fueron extrados por el mtodo de
Folch et. al. (1957) y evaluados gravimtricamente.
2.3.2. PROTENAS
Las protenas totales fueron determinadas por analizador elemental de marca
Leco, CHN 900, convirtiendo en nitrgeno la protena (N 6,25) (Kjeldahl).
2.3.3. CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos solubles fueron cuantificados por el mtodo de Dubois et. al.
(1956), modificado por Hellebust & Craige (1978).
14
2.3.4. ENERGA
La energa de la microalga T-ISO en ambos sistemas ser determinada por
calorimetra indirecta, es decir la adicin de las cantidades de energa bruta aportada
por cada uno de los componentes orgnicos (Guillaume et al., 2004),
lo cual se
15
2.4.
ANLISIS ESTADSTICO
A los parmetros productivos , TD, BTC y concentracin mxima al igual que los
ndices de composicin proximal se les realiz un anlisis de varianza no paramtrico
de Kruskal-Wallis.
Para realizar el anlisis estadstico de los resultados obtenidos se utiliz el software
STATISTICA 8.0 y para el diseo de los grficos SigmaPlot 11.0
16
3. RESULTADOS
3.1
COMPORTAMIENTO
DE
LA
CURVA
DE
CRECIMIENTO
PARMETROS DE PRODUCTIVIDAD
La fase Lag se observ solo en un 80% de los cultivos en fotobioreactor y en ningn
cultivo realizado en los sistemas batch (ver Anexo 4).
La fase exponencial para ambos sistemas de cultivo tuvo una duracin promedio de
3,9 0,6 das, la cual se dio en forma repetida en los cultivos semicontinuos (FBR)
presentando en promedio 3 fases de crecimiento exponencial, mientras que el cultivo
batch solo 1 para todas sus rplicas. La tasa de crecimiento exponencial y el tiempo
de duplicacin o generacin TD obtenidos en este periodo no presentaron diferencias
entre ambos sistemas de cultivo (p =0,5582 y 0,6242 respectivamente) (tabla 1).
En la fase exponencial del sistema FBR se pudo observar en diferentes intensidades el
decantamiento de las clulas, formando capas heterogneas en la manguera de cultivo
(Anexo 3, a).
La fase estacionaria se alcanz con un mximo de 4,09106 0,75106 clml-1 para el
cultivo batch mientras que la mxima concentracin celular alcanzada por el FBR fue
4,4 veces mayor que sta (tabla 1). Luego, no se observ diferencia en el nmero de
das que tardaron ambos tipos sistemas en alcanzar su mxima concentracin (p
=0,1039). Se pudo observar que la duracin de la fase estacionaria se mantuvo de 4 a
25 das en el cultivo batch y en el FBR fue de 1 a 3 das (figura 3, 4 y Anexo 4).
17
La BTC (biomasa total cosechada) del FBR fue de 7,37 1,46 g en 13,5 L de cultivo,
mientras que el sistema batch produjo 19,4 2,51 g en 167 L del volumen cultivado. En
cuanto a la eficiencia, esta fue mayor en el sistema FBR, que present 546,0 108,2
gml-1 bien 0,56 gL-1, (H (1, N= 9) =6,0 P=0,0143) y (H (1, N= 9) =6,0 P=0,0143),
siendo estas producciones alrededor de 4,4 veces ms que lo obtenido en el sistema de
cultivo batch (tabla 2).
En todos los experimentos realizados, en el FBR solo fue posible una cosecha, luego
de la cual los cultivos alcanzaban una concentracin menor a la que fueron cosechados
y decaan rpidamente hasta su muerte (figura 3).
18
2,0x107
FBR
Clml-1
1,6x107
1,2x107
8,0x106
4,0x106
0
0
10 12
14
16 18
20
22 24
26
28
Das
Figura 2: I. aff. galbana, sistema de cultivo semicontinuo FBR. Lneas de color naranjo,
verde, rojo, negra y celeste remarcan las diferentes fases exponenciales presentes a lo
largo del cultivo. Flechas moradas representan el abono a los cultivos en los das 7 y
13, y la flecha roja indica proceso de cosecha.
19
6x106
5x106
Clml-1
4x106
3x106
2x106
1x106
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39
Das
Figura 3: I. aff. galbana, sistema de cultivo batch. Flecha roja y morada indican da de
muestreo considerado como fase estacionaria temprana y tarda respectivamente.
20
Tabla 1: I. aff. galbana. Parmetros de productividad de la microalga cultivada en FBR y Batch. Presentando de izquierda
a derecha el volumen total del cultivo (ml), Concentracin mxima del cultivo [mx] (clml-1), El nmero de das en
alcanzar la concentracin mxima del cultivo, la mxima tasa de crecimiento exponencial (da-1), el nmero de fases log
(exponenciales), el porcentaje de correlacin de , la duracin de cada fase logartmica (das) y el tiempo de duplicacin
TD (das). Valores promedio error estndar.
Sistema
Vol.
Cultivo
(ml)
[ mx]
(106 clml-1)
N das para
[mx]
Correlacin
(%)
Duracin
fase log
(das)
TD
(Das)
FBR
13.500
18,2 1,61 a
93,1 2,69
3,8 0,37a
1,00 0,11 a
Batch
167.000
4,09 0,37 b
97,4 0,75
4 0,00 a
1,04 0,02 a
(da-1)
N de
fases log
Diferentes superndices indican diferencias significativas en los resultados (p 0,05) Kruskal-Wallis (Anexo 2).
21
Eficiencia
Sistema
Vol.
Cultivo
(ml)
BTC
(g)
Produccin por
ml (gml-1)
Produccin por
L (gL-1)
FBR
13.500
7,37 1,46 b
546,0 108,2 a
0,55 0,11 a
Batch
167.000
19,40 2,51 a
122,9 22,4 b
0,12 0,02 b
3.2
Composicin proximal y energtica en las diferentes fases de ambos
sistemas de cultivo.
En la primera fase exponencial (tabla 3a) de ambos sistemas se encontr que no hubo
diferencias en cuanto a la composicin de lpidos y carbohidratos. Donde s existieron
diferencias, fue en el porcentaje de protena (H (1, N=9) =5,4 P=0,0201) y en el ndice
protena/energa (H (1, N=9) =5,4 P =0,0201), donde en ambos casos fue mayor en la
microalga producida en el batch. En la energa total no se pudo realizar anlisis
estadstico por falta de rplicas.
En la fase estacionaria de la curva de crecimiento (tabla 3b y figura 4), el sistema de
cultivo FBR obtuvo mayores porcentajes lpidos (H (1, N=11) =7,0 P=0,0082) y protena
(H (1, N=11) =7,5 P=0,0062). En la cantidad carbohidratos no se observaron diferencias
22
Sistema de cultivo batch, fase logartmica y estacionarias temprana y tarda (log, est 1 y
est 2 respectivamente). Diferentes letras indican diferencias significativas en los
resultados (p 0,05).
Por otro lado en la fase estacionaria del batch, temprana y tarda (Tabla 3c y figura 4),
los porcentajes de lpidos (H (1, N=13) =9,0 P=0,0027) y protena (H (1, N=11) =7,5
P=0,0062) fueron superiores en la fase estacionaria tarda al igual que el ndice
23
24
Tabla 3: I. aff. galbana (Clon T-Iso). Composicin bioqumica expresada en porcentaje de protena, lpidos, carbohidratos y
cenizas del peso seco de la microalga, energa E (Kjg-1) e ndice protena/energa (mgProtenaKj-1) en: a) Primera fase
exponencial de los sistemas FBR y batch; b) Primera fase estacionaria de los sistemas FBR y batch; c) Fases estacionarias
temprana y tarda del sistema de cultivo batch (muestras tomadas segn figura 4) y d) Primera y siguientes fases exponenciales
del sistema de cultivo FBR. Valores promedio error estndar.
a)
7,5 0,5b
29,7 2,1a
15,5 1,1a
19,8 2,9a
% Carbohidratos % Ceniza
37,3 2,3a
33,0 3,3a
16,4 5,7
-
E (Kjg-1)
E/P (mgProtenaKj-1)
8,7 0,7a
21,3 1,7b
7,6*
13,7 0,6
Diferentes letras indican diferencias significativas en los resultados (p 0,05). *: No existe rplica.
b)
sistema
% Protena % lpidos
FBR
Batch
10,7 0,5b
7,4 0,4a
22,3 0,6b
10,0 0,8a
11,9 0,2a
34,0 5,7a
E/P (mgProtenaKj-1)
13,1 0,6a
19,1 2,5 14,9 0,7a
8,3 0,5b
4,9 0,4a
c)
Estacionaria
Temprana
Tarda
% Protena % lpidos
7,4 0,4a 10,0 0,8a
18,6 2,3b 18,3 1,3b
% Carbohidratos
34,0 5,7a
39,9 1,1a
% Ceniza E (Kjg-1)
E/P (mgProtenaKj-1)
a
14,9 0,7
4,9 0,4a
19, 1 2,6 11,6 2,7 a
16,0 0,7b
d)
Exponenciales
% Protena
% lpidos
Primera
Siguientes
7,5 0,5a
17,2 2,7b
15,5 1,1a
18,2 0,9a
7,6*
16,4 0,1 14,0 1,8
E/P (mgProtenaKj-1)
9,9 0,7a
12,3 1,8a
Diferentes letras indican diferencias significativas en los resultados (p 0,05). *: No existe rplica.
25
4. Discusin
4.1.
exponencial fue mayor (de 7 a 10 das). Lo anterior se puede atribuir a una menor
temperatura (20C) disminuyendo su tasa metablica, tal como lo demuestra Renaud et
al. (2002). Estos autores experimentaron con la temperatura del cultivo, indicando que
al cultivar con temperaturas ms altas, los cultivos aumentaban su hasta llegar a una
temperatura lmite para el crecimiento, donde los cultivos de T-ISO disminuan su
(33C) y luego el cultivo presentaba un negativo hasta su muerte (35C) por una
interrupcin en el metabolismo celular (Richmond, 1986).
Tambin se comprob que la dinmica de crecimiento de un FBR es diferente a la de
un cultivo batch ya que an cuando se les adicion medio de cultivo a ambos sistemas,
slo el FBR volvi a retomar un crecimiento exponencial, ocurriendo esto hasta el
segundo abono del medio donde alcanz su mxima densidad de cultivo
1,821070,36107 clml-1. Distinto ocurri para el cultivo batch ya que present un
crecimiento muy bajo o nulo, interpretado como fase estacionaria, despus de que se le
abonara con medio de cultivo.
La fase estacionaria fue diferente para ambos sistemas, ya que en el FBR solo se
mantuvo un par de das, en cambio el sistema batch permaneci hasta 25 das en esta
etapa. Varas (2000) y Pino (1999) tambin observaron una permanencia de la fase
estacionaria en sus cultivos batch al rededor de 10 hasta 20 das.
Las cosechas realizadas de 4,5 L en el FBR al final de cada etapa exponencial, indican
que al ejecutar alrededor de 8 cosechas se igualara la produccin del cultivo batch
considerando el volumen completo (167 L) y en la mxima densidad celular. Por lo
27
29
espacios oscuros antes de volver a recibir luz, el llamado efecto sombra, a lo que
muchos autores han indicado que un aumento de la agitacin o mezclado del cultivo lo
contrarresta, aumentando la tasa fotosinttica y la productividad (Hu y Richmond, 1996;
Grobbelaar, 1994 ).
31
Tabla 4: Condiciones de cultivo para I.aff. galbana. presentando de Izquierda a derec8sha el Autor (es), la especie y cepa
utilizada, recipiente, volumen y medio de cultivo, Luminosidad aplicada el sistema de cultivo, forma de homogeneizar,
utilizacin de CO2 y sistema de cultivo empleado.
Autor
Presente trabajo
Especie
I. galbana CCMP
1324
Bougaran et al.,
2003
I. galbana
Molina Grima et
al.,1994
I. galbana ALII-4
Isochrysis sp T-ISO.
TK1
Recipiente
cultivo
volumen
cultivo (L)
Medio
cultivo
luminosidad
forma de
CO2 Sistema
(mol m-2 s-1)
homogenizar
lux
tubular
helicoidal
cilindro
cilindro
serpentn
botella cultivo
celular
167
50
200
1,6
Walne
256
cilindro
2,2
walne
110
1,5
F/2
Walne
James et
al., 1986
Fidalgo et
al., 1995
botella
Erlenmeyer
botelln
14
Walne
c/ NaNO3
4000
bombeo
no
continuo
2500
100
Solar
burbujeo
burbujeo
airlift
shaker y
burbujeo
agitado 120
RPM
no
si
*si
batch
batch
continuo
si
batch
*si
continuo
80
burbujeo
*si
batch
burbujeo
shaker y
burbujeo
no
continuo
*si
batch
115
burbujeo
no
batch
frasco
0,1
botella
0,8
Walne
200
burbujeo
no
batch
Serpentn
horizontal
50
c/ NaNO3
Solar
airlift
*si
continuo
manga
85
f/2
100
burbujeo
si
continuo
batch
Tabla
5: Continuacin tabla 4, presentando de Izquierda a derecha el Autor (es), la especie y cepa utilizada, el sistema de
T
cultivo, el inculo en millones de clml-1, la(s) temperatura(s) de cultivo, la tasa de crecimiento exponencial (da-1), la
productividad (gL-1) y la mxima densidad celular en millones de clulas (clml-1).
Autor
Mx. densidad
(106clml-1)
18,3
4,1
25
86
20
1,3
0,45
15,0**
0,5
27
0,14
7a 9
0,81
0,97
0,89
0,68
-0,04
0,12*
0,12*
0,08*
0,02*
0,01*
5,78
4,97
3,55
1,5
0,55
0,35
25
batch
continuo
Presente trabajo
continuo
batch
batch
continuo
Produc.
(gL-1)
0,56
0,12
0,75**
2,58**
T (C)
Sistema
20
15
Tasa de crec.
exp. (da-1)
0,64
0,79
0,91
0,39
Inculo
(106clml-1)
Especie
batch
25
27
30
33
35
Varas, 2000
continuo
0,5
20
0,34 a 0,52
0,51*
14
Isochrysis sp.
batch
19-21
24-26
29-31
0,12
0,16
0,13
0,12**
0,195**
0,12**
4
6,5
4
batch
2,5
18
0,78
0,75**
25
Zhu et al.,1997
I. galbana
batch
15
30
0,34
0,62
0,56
0,52
18,7**
17,3**
Molina Grima et
al.,1994
I. galbana
ALII-4
Isochrysis sp TISO.
continuo
20
0,38
4,15
138,3**
continuo
batch
n
n
22
22
N
N
0,14*
0,23*
4
7
TK1
n: No hay informacin; *: Calculado en base al peso seco de la microalga informado en el trabajo; **: Calculado
en base a un peso estndar de 30 pgcel-1.
33
4.2.
al., 1993; Molina Grima et al., 1994). As, lpidos en el FBR tendieron a aumentar como
fuente de reserva a diferencia de los carbohidratos, ocurriendo lo opuesto en el cultivo
batch, no obstante esto ltimo no se logr comprobar por la gran variabilidad de los
datos obtenidos.
La manipulacin de la composicin proximal de las microalgas tiene una gran
importancia desde el punto de vista prctico, debido a que varios animales acuticos
pueden mejorar su potencial de crecimiento al manejar la composicin relativa entre
carbohidratos y protenas (Faras & Uriarte, 2002; Brown et al., 1993). Ejemplo de ello
son las larvas de moluscos bivalvos requiriendo mayor cantidad proporcin de protenas
para aumentar su tasa de crecimiento (Webb & Chu, 1983). Es por esto que se requiere
mantener una composicin proximal abundante en protenas y esencialmente constante
en el tiempo.
Debido a que la fase logartmica del batch donde es rica protenas es muy corta (4
das), para luego decaer rpidamente en menos de la mitad del porcentaje de
protenas, se tendran que utilizar varios batch de mediano a pequeo tamao para
cosecharlos completamente en este corto periodo, lo que ocupara demasiado espacio
dentro de las instalaciones, tiempo en ciclos de limpieza y sembrado. En cambio el
sistema FBR, obtuvo una composicin en protenas menor relativamente constante, lo
que es conveniente para mantener una dieta de calidad estndar y a la vez disminuir en
gran medida el gasto de recursos requeridos por un batch.
35
5. CONCLUSIN
36
37
6. REFERENCIAS
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light
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44
45
Code
102
103
Valid
2
4
Sum of Ranks
5,00000
16,00000
Code
102
103
Valid
3
6
Sum of Ranks
6,00000
39,00000
Code
102
103
Valid
2
5
Sum of
8,00000
20,00000
Valid
Sum of
FBR
102
6,00000
Batch
103
39,00000
46
b) Fase Estacionaria
Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks; % lpidos
Independent (grouping)variable: sistema
Kruskal-Wallis test: H ( 1, N= 11) =7,000 p =,0082
Code
Valid
Sum of Ranks
Valid
Sum of Ranks
FBR
102
38,00000
FBR
102
51,00000
Batch
103
28,00000
Batch
103
15,00000
FBR
102
3,00000
FBR
102
51,00000
Batch
103
7,00000
Batch
103
15,00000
Code
Valid
Sum of Ranks
Valid
Sum of Ranks
FBR
102
3,000000
Batch
103
7,000000
Valid
Sum of Ranks
Code
Valid
Sum of Ranks
1 lineal
101
28,00000
1 lineal
101
15,00000
2 lineal
102
63,00000
2 lineal
102
51,00000
47
1 lineal
4,00000
17,00000
101
2 lineal
102
Code
Valid
Sum of Ranks
1 estacionaria
103
6,000000
2 estacionaria
104
4,000000
Valid
Sum of Ranks
1 estacionaria
103
15,00000
2 estacionaria
104
51,00000
Valid
Sum of Ranks
Code
Valid
Sum of Ranks
2 log
101
60,00000
2 log
101
12
110,0000
1 log
102
6,00000
1 log
102
10,0000
2 log
83,00000
2 log
101
12
90,00000
22,00000
1 log
102
15,00000
1 log
101
102
12
2
Code
Valid
Sum of Ranks
48
2. Comparacin
proximal
energtica
entre
las
fases
de
crecimiento
0,757678
0,757678 0,035463
0,097162
0,035463
0,097162
0,059371
Fase est
0,188082
Fase log2
0,059371
Fase est
0,188082
1,000000
1,000000
Fase log1
Fase log2
0,977256 0,179801
Fase log1
0,977256
0,405437
Fase est
Fase log2
0,441897
0,179801
Fase est
0,557630
0,405437
0,441897
0,557630
1,000000
1,000000
1,000000
Fase est
1,000000
Fase log2
1,000000
Fase est
1,000000
1,000000
1,000000
49
Fase est1
0,053423
0,053423
1,000000
Fase est2
1,000000
0,003309
0,003309
1,000000
Fase est1
1,000000
Fase est2
0,532590
0,000508
Fase est2
0,118775
0,216202
0,532590
Fase log
0,669052
Fase est1
1,000000
Fase est2
1,000000
0,669052
0,216202
1,000000
1,000000
0,855148
0,855148
Fase est1
0,000631
Fase est1
0,000631
Fase est2
0,155813
Fase est2
0,155813
0,191562
0,191562
50
Code
Valid
Sum of Ranks
101
35,00000
Sistema
FBR
102
10,00000
Batch
Code
Valid
Sum of Ranks
101
27,00000
102
18,00000
Batch
Batch
Code
Valid
Sum of Ranks
Sistema
FBR
101
23,00000
102
22,00000
Batch
Batch
Code
Valid
Sum of Ranks
Valid
Sum of Ranks
101
23,00000
102
22,00000
Code
Valid
Sum of Ranks
101
31,50000
102
13,50000
Code
Code
Valid
Sum of Ranks
101
35,00000
102
10,00000
35,00000
Sistema
FBR
10,00000
Batch
Code
Valid
Sum of Ranks
15,00000
30,00000
51
Tabla a: I aff. galbana. Parmetros productivos en ambos sistemas de cultivo (FBR y batch)indicando de izquierda a derecha:
Sistema de cultivo; la fecha de inoculacin; volumen de cultivo; nmero de das que tard en alcanzar la mxima concentracin
celular; la tasa especfica de crecimiento, el porcentaje de correlacin; el nmero de das que dur la fase exponencial; el
nmero de fases exponenciales obtenidas; el tiempo de duplicacin en das; Las cantidad de clulas en una cosecha y total en
millones de clulas; y luego en gramos; y finalmente la productividad en: microgramos por mililitro y gramos por litro obtenidos.
Sistema Fecha
Vol.
Cultivo
(ml)
[ mx]
(cl/ml)
N das
Correl. N das
para
[mx] (Da-1)
(%)
fase exp.
n de
Fases
log
(Millones de
clulas)
TD
(Das) cosecha
FBR
FBR
10
11
0,54
0,82
87,7
86,7
4
4
2
2
1,29
0,85
FBR
10
0,99
92,8
FBR
FBR
12
16
0,99
0,59
99,6
98,8
3
5
3
5
Promedio
Total
(gramos)
cosecha Total
DW/vol
g/ml
gr/L
63.338
81.900
190.013
245.700
1,90
2,46
5,70
7,37
422,3
546,0
0,42
0,55
0,98
91.294
273.881
2,74
8,22
608,6
0,61
0,70
1,18
103.500
69.469
310.500
208.406
3,11
2,08
9,32
6,25
690,0
463,1
0,69
0,46
18.200.000
11,80
0,79
93,1
3,80
3,00
1,00
81.900
245.700
2,46
7,37
546,0
0,55
Error estndar
1.613.144
1,11
0,10
2,69
0,37
0,55
0,11
7.259
21.777
0,22
0,65
48,39
0,05
Batch
280111 167.000
3.620.000
0,63
96,4
1,11
16.290
604.540
0,49
18,14
108,6
0,11
Batch
Batch
280111 167.000
220311 167.000
3.300.000
4.675.000
7
10
0,63
0,67
96,2
97,8
4
4
1
1
1,09
1,03
14.850
21.038
551.100
698.498
0,45
0,63
16,53
20,95
99,0
140,3
0,10
0,13
Batch
220311 167.000
4.787.500
11
0,63
99,4
1,10
21.544
732.742
0,65
21,98
143,6
0,13
4.095.625
373.453
9,00
0,91
0,64
0,01
97,4
0,75
4
0,00
1,00
0,00
1,08
0,02
18.430
1.680
646.720
41.836
0,55
0,05
19,40
1,26
122,8
11,20
0,12
0,01
Promedio
Error estndar
52
Anexo 3: Figuras
53
Figura b: Isochrysis aff. galbana, imagen de 3 clulas , visto en microscopio con objetivo
de 40x.
54
Anexo 4
Curvas de crecimiento en sistema de cultivo FBR y batch de la primera y segunda
etapa de los experimentos. Figuras a y b corresponden a experimentos de la primera
etapa; c, d y e a la segunda etapa.
2,0x107
FBR
1,8x107
1,6x107
-1
Cl ml
1,4x107
1,2x107
107
8,0x106
6,0x106
4,0x106
2,0x106
0
0
10
11
Das
4,0x106
batch
3,5x106
-1
Cl ml
3,0x106
2,5x106
2,0x106
1,5x106
106
5,0x105
0
0
10
11
Das
55
2,0x107
FBR1
Cl ml-1
1,6x107
1,2x107
8,0x106
4,0x106
0
0
10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Das
2,4x107
FBR
7
2,0x10
Cl ml-1
1,6x107
1,2x107
8,0x106
4,0x106
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
Das
56
6x106
5x106
Cl ml-1
4x106
3x106
2x106
1x106
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839
Das
57