Anda di halaman 1dari 44

LAPORAN RESMI

PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi :
SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

Oleh :

Kelompok

: IV/ Rabu pagi

Adisty Kurnia Rahmawati

NIM : 21030113120072

Laboratorium Dasar Teknik Kimia I


Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Diponegoro
Semarang
2013

LAPORAN RESMI
PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi :
SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

Oleh :

Kelompok

: IV/ Rabu pagi

Adisty Kurnia Rahmawati

NIM

: 21030113120072

Laboratorium Dasar Teknik Kimia I


Jurusan Teknik Kimia Fakultas Teknik
Universitas Diponegoro
Semarang
2013

HALAMAN PENGESAHAN
Laporan resmi ini diajukan untuk memenuhi tugas mata kuliah Praktikum Dasar
Teknik Kimia 1 Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universits Diponegoro
Semarang

Judul Laporan

: Spektrofotometri organic

Disusun oleh

: Adisty Kurnia Rahmawati

NIM

: 21030113120072

Asisten pendamping

:Muhammad Hilman Haidar

Kelompok

: IV/ Rabu Pagi

Rekan

: 1. Nadia Fridasaniya Azaria

NIM

: 21030113130115
: 2. Firman Agum

NIM

: 21030113140152

Semarang, 19 Desember 2013


Menyetujui,
Asisten Pendamping,

Muhammad Hilman Haidar


NIM. 21030110120009

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

ii

PRAKATA
Alhamdulillahirabbilalamin, segala puji dan puji bagi Allah atas karunia luar
biasa sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan ini, berbagai kesulitan telah
penulis rasakan dan tlah diupayakan untuk senantiasa melakukan perbaikan demi
terselesaikannya laporan ini.
Laporan ini ditulis berdasarkan keinginan penulis untuk dapat membagikan
ilmu yang berguna bagi generasi muda. Spektrofotometri adalah salah satu metode
analisa kimia yang dapat sangat bermanfaat bagi industry di Indonesia sehingga
kelak akan membantu membawa Indonesia menjadi Negara yang lebih sejahtera
melalui industry.
Terselesaikannya laporan ini tidak lepas dari campur tangan berbagai pihak,
untuk itu penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada pihak-pihak yang telah
membantu terselesaikkanya laporan ini.
Meskipun telah berusaha untuk menghindarkan kesalahan, penulis menyadari
juga bahwa kesalahan dan kekurangan laporan ini pasti ditemukan. Oleh karena itu,
penulis berharap agar pembaca berkenan menyampaikan kritikan. Dengan segala
pengharapan dan keterbukaan, penulis menyampaikan rasa terima kasih dengan
setulus-tulusnya. Secara khusus, penulis berharap semoga laporan ini dapat
menginspirasi generasi bangsa ini agar menjadi generasi yang tanggap dan
tangguh. Jadilah generasi yang bermartabat, kreatif, dan mandiri.

Semarang, 19 Desember 2013

Adisty Kurnia Rahmawati

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

iii

DAFTAR ISI
HALAMAN PENGESAHAN ......................................................................................... ii
PRAKATA .................................................................................................................... iii
DAFTAR ISI ................................................................................................................. iv
DAFTAR TABEL ......................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... vii
INTISARI .................................................................................................................... viii
SUMMARY .................................................................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN
a. Latar belakang ....................................................................................................1
b. Tujuan percobaan ...............................................................................................1
c. Manfaat percobaan..............................................................................................1

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................................2

BAB III METODE PERCOBAAN

a. Bahan dan alat yang digunakan ...........................................................................4


b. Gambar alat ........................................................................................................5
c. Keterangan alat ...................................................................................................6
d. Cara kerja ...........................................................................................................7

BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

a. Hasil percobaan ................................................................................................ 10


b. Pembahasan ...................................................................................................... 11

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

iv

BAB V PENUTUP
a. Kesimpulan ...................................................................................................... 14
b. Saran ................................................................................................................ 14
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 15

LAMPIRAN
a. Lembar perhitungan ...................................................................................... A-1
b. Laporan sementara .......................................................................................... B-1
c. Referensi ........................................................................................................ C-1

LEMBAR ASISTENSI ............................................................................................... D-1

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

DAFTAR TABEL
Tabel panjang gelombang vs absorbansi ..................................................................... 10
Table data absorbansi larutan warna strawwbery ......................................................... 10
Table data factor pengenceran ..................................................................................... 10
Table data konsentrasi antosianin ................................................................................ 11
Table data konsentrasi sampel ..................................................................................... 11

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

vi

DAFTAR GAMBAR
Gambar 3.1 Spektrofotometer ........................................................................................... 5
Gambar 3.2 Kuvet............................................................................................................. 5
Gambar 3.3 Tabung Reaksi ............................................................................................... 5
Gambar 3.4 Pipet Tetes ..................................................................................................... 5
Gambar 3.5 Kertas lakmus ................................................................................................ 5
Gambar 3.6 Beaker Glass.................................................................................................. 5
Gambar 3.7 Pipet Ukur ..................................................................................................... 6
Gambar 3.8 Labu Takar .................................................................................................... 6
Gambar grafik hubungan Absorbansi dengan konsentrasi ............................................... 13

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

vii

INTISARI
Spektrofotometri merupakan salah satu analisa kuantittif yang didasarkan
pada absorbansi serta transmitansi suatu larutan pada panjang gelombang tertentu
yang dipancarkan oleh suatu sumber cahaya. Keuntungan dari pengunaan metode
ini adalah termasuk metode yang sederhana untuk penetapan kuantitas yang sangat
kecil. Tujuan dari dilakukannya percobaan ini adalah untuk mengetahui ,
menentukan, dan menganalisa konsentrasi antosianin pada sampel dengan
menggunakan alat spektrofotometer dan dengan metode spektrofotometri. Dimana
pada percobaan kali ini sampel yang digunakan adalah ekstrak buah strawberry.
Komponen penting di dalam spektrofotometri antara lain yaitu sumber,
monokromator, detector,pengganda, dan piranti baca. Kata spektrofotometri sendiri
digunakan untuk ilmu yang mengacu pada absorbsi, emisi , scaterring, dan cahaya
dari molekul, ion, ataupun atom. Digunakan untuk mengidentifikasi suatu komponen
atau konsentrasi dalam larutan yang didasarkan pada pengukuran serapan sinar
monokromatis di suatu larutan berwarna. Banyaknya sinar atau cahaya yang
diabsorbsi tergantung pada jenis larutan, panjang sel/kuvet, serta konsentrasi
larutan. Hokum yang mendasarinya adalah Hukum Lambert-Beer, dimana dari
hukum tersebut dapat dinyatakan bahwa hubungan antara absorbansi vs konsentrasi
akan memberikan garis yang linear.
Di dalam analisa dibutuhkan beberapa bahan serta alat yang dapat
menunjang proses analisis. Bahan yang dibutuhkan anatara lain adalah aquadest,
KCl, Natrium asetat, serta ekstrak strawberry yang akan dianalisis. Sedangkan alatalat yang dibutuhkan adalah spektrofotometer, beaker glass, tabung reaksi, pipet
ukur, pH meter, serta labu takar. Sebelum dilakukan analisa kadar antosianin dalam
ekstrak strawberry maka terlebih dulu dicari panjang gelombang optimumnya.
Dimana panjang gelombang optimum adalah panjang gelombang yang dibutuhkan
agar larutan dapat memiliki nilai absorbansi maksimal dan nilai transmitansi
minimal.
Dari hasil analisa yang dilakukan maka diperoleh hasil bahwa kadar
antosianin pada ekstrak strawberry sebesar 198,7 mg/L. Hasil ini terlalu kecil jika
dibandingkan dengan kadar antosianin strawberry yang terdapat pada suatu jurnal.
Perbedaan ini dipengaruhi oleh beberapa hal antara lain perbedaan varietas,
pengaruh cahaya, dan perbandingan jenis pelarut. Selain itu pH diatur pada trayek
4,5 dan 1, hal ini bertujuan untuk memisahkan antosianin dari senyawa-senyawa
lainnya, sehingga diperoleh adar antosianin murni tanpa impuritas.
Sebagai saran untuk menghindari terjadinya kesalahan pada saat analisa
maka di dalam melakukan penelitian diperlukan ketelitian dan ketepatan pada
penambahan aqudest ke dalam ekstrak strawberry . begitu pula pada penambahan
KCl agar pH menjadi 4,5 dan 1. Di dalam pencatatan nilai transmitansi dari
spektrofotometer harus ditunggu sampai angka yng menunjukkan skala tidak
berubah lagi. Serta harus dilakukan kalibrasi sebelum pergantian sampel dan
panjang gelombang.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

viii

SUMMARY
Spectrofotometry is one of cuantitative analysis based on absorbance and
transmittance of a solution at a particular wavelength that emitted by a light source .
The advantage of this method is can use for determine the anthocyanins until small
quantity. The purpose of this experiment is to determine , define, and analyze the
anthocyanin concentration in the sample using a spectrophotometer by
spectrophotometry In this experiment we use extract of strawberry as the sample
that analyzed.
The important component in the spectrophotometric are the source of light ,
monochromator , detector , amplhyfier , and reading devices. Spectrofotometry used
to identify a concentration in a solution that is based on the measurement of
monochromatic light absorption in a colored solution . Light that is absorbed
depends on the type of the solution , the length of the cell / cuvette , and the
concentration of the solution . Base of Lambert-beer laws, which of these laws can
be stated that the relation between the absorbance and concentration will give a
linear line .
In the analysis need some materials and tools to support the analysis process
. The materials are distilled water , KCl , sodium acetate , and strawberry extract to
be analyzed . While the tools needed are a spectrophotometer , glass beaker , test
tubes , measuring pipettes , pH meters , and labu takar . Before analyze the
anthocyanins in strawberry, found the optimal wave length before. Optimum wave
length is wave length that needed the solution for get maxium value of absorbance
and minimum vaue of transmittance.
From the analysis, obtained results that the anthocyanin content of
strawberry extract was 198.7 mg / L. This result is too small when compared with the
levels of strawberry anthocyanins that wrote in the journal . This difference are
influenced by several factors ,those are , differences in varieties , the influence of
light , and a comparison of the type of solvent . In addition the pH have to arrange
become 4.5 and 1 , it purpose to separate anthocyanins from other compounds , so
the anthocyanin will be found without impurity.
As a suggestion to avoid errors during the analysis, required accuracy and
precision when aqudest addition to the strawberry extract . As well as the addition of
KCl to make pH 4.5 and 1 . In the recording transmittance value of the
spectrophotometer must wait until figures show the scale does not change anymore .
And must be done calibration before changed the wave length.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

ix

BAB I
PENDAHULUAN
I.1

Latar Belakang
Spektrofotometri dapat digunakan untuk menganalisa konsentrasi
suatu zat didalam larutan berdasarkan absorbansi terhadap warna dri larutan
pada panjang gelombang tertentu. Metode spektrofotometri memerlukan
larutan standar yang telah diketahui konsentrasinya. Larutan standar terdiri
dari beberapa tingkat rendah sampai konsentrasi tinggi.
Keuntungan utama dalam pemilihan metode ini adalah metode ini
merupakan metode yang sangat sederhana untuk mendpatkan kuantitas yang
sangat kecil. Spektrofotometri diapliksikan didalam menentukn beberapa
parameter ekologi laut. Tingkat kesuburan suatu perairan ditunjukkan oleh
besarnya produksi zat organic yang dihasilkan atau juga disebut produktivitas
primer. Salah satu cara yang sudah umum dan uas dipakai adalah mengetahui
banyaknya biomassa plankton di laut dngan menentukan kadar klorofil
fitoplankton dengan metode spektrofotometri.

I.2

Tujuan Percobaan
a. Menentukan panang gelombang optimum pada sampel dengan alat
spektrofotometer dan metode spektrofotometri.
b. Menentukan kurva standar dari suatu sampel.
c. Menentukan konsentrasi antosianin pada sampel.

I.3

Manfaat Percobaan
a. Mampu menemukan konsentrasi antosianin dengan spektrofotometer
metode spektrofotometri.
b. Mampu

menentukan kurva

hubungan konsentrasi antosianin vs

absorbansi pada panjang gelomang optimumnya dengan spektrofotometer


metode spektrofotometri.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.1

Pengertian
Spektrofotometri adalah kata yang digunakan untuk ilmu yang
mengacu pada absorbsi, emisi, scattering, dan cahaya dari molekul, ion, atom.
Spektrofotometri (teknik spectroscopy) merupakan metode analia untuk
menentukan identitas suatu komponen/ konsentrasi dalam larutan yang
didasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis di suatu larutan
berwarna.
Tabel 2.1.1 Hubungan antara energy terabsorbsi dengan gerakan molekul
Gerakan Molekul

Cahaya yang Diabsorbsi

Energy

Rotasi

Microwave, infrared

Rendah

Vibrasi

Infrared

Sedang

Transit Elektron

Tampak, Ultraviolet

Tinggi

Persen transmitan adalah perbandingan antara intensitas cahaya yang


keluar dari sampel terhadap intenstas yang masuk : % T = I/Io x 100% sedang
absorbansi dinyatakan sebagai : A =log 1/T = - log (I/Io) = 2 log (%T)

Tabel 2.2.2 Spektrum sinar tampak dan warna komplementer (vogel 1989)
Panjang Geombang

Warna (terabsorbsi)

(nm)

Warna komplementer
(terlihat)

400-435

Violet

Kuning hijau

435-480

Biru

Kuning

480-490

Hijau-Biru

Orange

490-500

Biru-Hijau

Merah

500-560

Hijau

Ungu

560-580

Kuning hijau

Violet

580-595

Kuning

Biru

595-610

Orange

Hijau-Biru

610-750

Merah

Biru-Hijau

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

Banyaknya cahaya / sinar yang diabsorbsi tergntung pada jenis


larutannya, panjang sel / kuvet, konsentrasi larutan. Parameter 2 tersebut
dinyatakan secara matematis, Hukum Beer : A = log (Io/It) = abc
Dimana : Io

= intensitas sinar dating

It

= intensitas sinar yang diteruskan

= Absorbansi

= Absorbtivitas

= Panjang kuvet

= Konsentrasi (mg/L)

Pada praktikum ini nilai a dan b tidak berubah, sehingga a dab b


dianggap konstanta baru, k sehingga persamaan (3) = A = kc atau bisa
dinyatakan dengan persamaan garis lurus. Dari hokum Beer dapat dinyatakan
bahwa hubungan ntara absorbansi vs konsentrasi akan memberikan garis
lurus.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
III.1

Bahan dan Alat

III.1.1 Bahan
1. Air demin secukupya
2. KCl 20 ml
3. Natrium Asetat 20 ml
4. Ekstrak strawberry 100ml
III.1.2 Alat
1. Spektrofotometri Optima Sp-300
2. Beaker glass 250 ml
3. 6 buah tabung reaksi beserta rak tabung reaks
4. 1 pipet ukur 10 cc
5. pH meter
6. 4 buah beaker glass 50 cc

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

III.2

Gambar alat

Gambar 3.1 spektrofotometer

Gambar 3.2 Kuvet

Gambar 3.3 Tabung Reaksi

Gambar 3.4 Pipet tetes

Gambar 3.5 Kertas Lakmus

Gambar 3.6 Beaker Glass

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

Gambar 3.7 pipet ukur

Gambar 3.8 Labu Takar


III.3

KETERANGAN ALAT
1. Spektrofotometer

: Alat yang digunakan untuk mendeteksi besarnya


transmitansi ataupun absorbansi dari suatu larutan
terhadap cahaya pada anjang gelombang tertentu.

2. Kuvet

: Digunakan sebagai tempat atau wadah ketika


larutan

akan

transmitansinya

dihitung
dengan

absorbansinya

menggunakan

spektrofotometer.
3.

Tabung reaksi

: Digunakan sebagai temat mereasikan suatu larutan


atau zat.

4.

Pipet tetes

: Digunakan untuk mengambil larutan dalam jumlah


kecil (tetes).

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

5.

Kertas lakmus

:Digunakan untuk mengindikasikan derajat keasaman


ataupun derajat kebasaan dari suatu larutan.

6.

Beaker glass

: Digunkan untuk menyimpan larutan-larutan yang


akan ataupun telah direaksikan / dapat sebagai
wadah.

7.

Pipet ukur

: Digunakan untuk mngambil larutan dalam jumlah


yang sesuai dengan yang diinginkan.

8.

Labu takar

: digunakan untuk mengencerkan suatu zat yang akan


dianalisa.

III.4

CARA KERJA
III.4.1 Menentukan panjang gelombang optimum untuk antosianin
1. Menghidupkan optima sp-300 dengan memutar tombol power
sampai bunyi klik dan indicator lamu menyala. Dibiarkan dalam
kondisi ini selama 20 menit untuk pemanasan sebelum digunakan
2. Mengatur

panjang

gelombang

yang

diinginkan

dengan

menggunakan tombol pengatur panjang gelombang.


III.4.2

Cara kalibrasi alat spektrofotometri


1. Mengosongkan tempat sampel (1) pada spektrofotometer, kemudian
tutup. Skala pembacaan transmitan diatur 0% menggunakan tombol
(7)
2. Mengambil cuvet (seperti barang yang sederhana tetapi dari bahan
gelas dengan super kualitas, berharga 3 juta) dan membersihkan
kemudian mengisi cuvet dengan air demi sampai nya (disebut
dengan blangko). Bagian luar cuvet dibersihkan dengan hati-hati.
3. Membuka tutup sampel pada spektrofotometer (1) masukkan cuvet
dan tutup kembali (tinggi larutan disesuaikan dengan tanda yang
ada).
4. Mengatur pembacaan transmitan 100% (A=0)untuk larutan blangko
dengan tombol 6
5. Mengambil cuvet dari tempat sampel kemudian tutup. Pembacaan
skala transmitan dapat diliha pada layar (4). Dalam tahap ini

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

pembacaan transmtan harus 0%. Jika tidak, ulangi langkah a.3


hingga pembacaan dperoleh pembacaan transmitan yang konsisten.
6. Jika sudah diperoleh pembacaan untuk 0 dan 100% konsisten,
simpan cuvet dengan larutan blangko tersebut sampai praktikum
selelsai.
7. Mengisi cuvet lainnya dengan larutan sampel, bersihkan bgian luar
cuvet, masukkan kedalam tempat sampel, dan tutup kembali, baca
skala transmitan dan hilang absorbansinya, A=2-log%T.
8. Menaikkan panjang gelombang 10 nm dengan menggunakan tombol
(2), ulangi langkah 1-7.
9. Membuat kurva hubungan antara absorbansi vs panjang gelombang,
kemudian tentukan nilai panjang gelombang optimum untuk jenis
larutan target.
III.4.3

Membuat kurva kalibrasi antara absorbansi versus konsentrasi


antosianin
1. Membuat larutan warna pada berbagai veriasi sampel.
2. Mengatur panjang gelombang sesuai dengan hasil yang diperoleh
pada tujuan (a) menggunakan tombal (2).
3. Melakukan kalibrasi alat spektrofotometri (langkah 1-6)
4. Mengisi cuvet lainnya dengan larutan sampel no.2, bersihkan luar
cuvet, masukkan kedalam tempat sampel, tutup kembali, baca skala
transmitan dan hitung absorbansinya (A), A=2-log( %T), ulangi
untuk sampel no. 3,4,5, dan 6.

III.4.4

Menentukkan kadar antosianin total dalam larutan


1. Membuat larutan KCl 0,025 M sebagai larutan buffer pH 1.
Kemudian diukur pH nya dan diatur pH nya supaya sama dengan 1
dengan menambahka larutan HCl.
2. Membuat larutan Natrium Asetat (CH3COONa.3H2O) 0,4 M.
kemudia diukur pH nya dan diatur supaya larutan mempunyai pH
4,5 dengan menggunakan larutan HCl

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

3. Mengambil 1 buah beaker glass 50 cc dan mengisi dengan larutan


no 2 sebanyak 5 ml dengan pipet ukur. pH larutan dibuat sama
dengan 1 dengan menambahkan larutan buffer KCl dengan pipet
ukur, hitun berapa jumlah volume yang telah ditambahkan sehingga
pH=1. Hal serupa dilakukan pada sampel no. 3, 4, 5, dan 6.
4. Mengatur panjanggelombang pada 520 nm, kemudian lakukan
kalibrasi alat langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian
panjang gelombang). Setelah itu masukkan larutan no 2 pH 1 ke
dalam cuvet hingga bagian. Catat persen transmitan dan hitung
absorbansinya, begitu juga untuk sampel no 3, 4, 5, dan 6.
5. Mengatur panjang gelombang pada 700 nm, kemudian lakukan
kalibrasi alat langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian
panjang gelombang). Setelah itu masukkan larutan no 2 pH 1
kedalam cuvet hingga bagian. Catat % transmitansi dan hitung
absorbansinya, begitu juga untuk sampel no 3, 4, 5, dan 6.
6. Ulangi langkah 1-5 dengan membuat pH lartan sam denga 4,5
dengan menambah larutan buffer NaAsetat.
7. Menghitung konsentrasi antosianin total sesuai dengan rumus :
pigmen antosianin (ekivalen dengan cyaniding-3-glucoside, mg/l).
C=

1000

Dengan :

8.

= konsentrasi antosianin (mg/l)

= (A520-A700)pH1 (A520-A700)pH4,5

MW

= bobot molekul = 449,2 gram/mol

DF

= Faktor Pengenceran

= 26900 L/mol cm

1000

= konversi dari gram ke mgr

= panjang sel/cuvet

buatlah persamaan Beer untuk konsentrasi antosianin, dengan


persamaan : A=kc

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Percobaan

Table 4.1 panjang gelombang vs absorbansi ekstrak strawberry


no Panjang gelombang

% transmitansi

absorbansi

490 nm

33,3

0,477

500 nm

33,6

0,473

510 nm

33,2

0,478

520 nm

34,3

0,464

530 nm

36,6

0,436

540 nm

40,4

0,393

550 nm

42,9

0,367

560 nm

47,1

0,326

Table 4.2 Data Absorbansi Larutan warna strawberry


No

Aquades Strawberry

sampel

(ml)

(ml)

transmitan

10

33,2

0,478 198,7

34,2

0,465 448,4

42,3

0,373 153,9

59,2

0,227 57,5

72,4

0,140 329,5

10

100

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

10

Table 4.3 Fator Pengenceran


No

Volume

V2 pH

V2

DF pH

DF pH

sampel

(ml)

1 (ml)

pH4,5

4,5

18

3,6

19

5,3

3,8

1,06

18

5,2

3,6

1,04

25

5,6

1,12

15

5,5

1,1

Table 4.4 Konsentrasi Antosianin


No

Vol %T 520
pH 1

A 520
pH

pH 1

4,5

pH

%T 700

A 700

pH 1

pH 1

4,5

pH
4,5

C
pH
4,5

34,3

43,7

0,464

0,359

88,3

69,8

0,054

0,156

198,7

75,6

21,3

0,121

0,671

89,4

70,2

0,048

0,153

448,4

87,3

37,4

0,058

0,427

95,6

74,2

0,019

0,129

153,9

63,2

46,9

0,199

0,328

97,3

80,3

0,011

0,095

57,5

33,9

80,9

0,469

0,092

98,0

96,2

0,008

0,016

329,5

Table 4.5 data sampel


Sampel

A (Absorbansi)

C (konsentrasi)

Sampel 1,5 ml

0,044

122,5 mg/L

Sampel 4,5 ml

0,186

170,8 mg/L

Sampel 9 ml

0,402

184,6 mg/L

IV.2 Pembahasan
IV.2.1 Kadar Antosianin pada Strawberry
Dari hasil analisa yang kami lakukan diketahui bahwa jumlah kadar
antosianin di dalam ekstrak buah strawberry yang kami anaisa yaitu 44,15
mg/L. Sedangkan kadar antosianin dari ekstrak strawberry pada jurnal yang

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

11

kami temukan yaitu antara 200-600 mg/L. Dari hasil tersebut, dapat
disimpulkan bahwa kadar antosianin pada ekstrak strawberry yang kami
analisa jauh lebih kecil jika dibandingkan dengan kadar antosianin pada
ekstrak strawberry dalam jurnal. Berikut ini adalah beberapa factor yang
melatarbelakangi terjadinya perbedaan tersebut,
a) Perbedaan spesies dan varietas
Jenis strawberry yang digunakan didalam sampel pada jurnal dengan
jenis strawberry yang kami analisa tentu saja ber eda jenis. Hal ini yang
menyeabkan perbedaan kadar antosianin antara yang ada pada jurnal
dengan yang kami analisa. Sebagai contoh konsentrasi antosianin pada
strawberry jenis Oso grande dan Camarosa sekitar 185,015 mg/L dab
840,25,7 mg/L. dari hal tersebut telah membuktikan bahwa perbedaan
spesies ataupun varietas pada masing-masing strawberry akan
memberikan hasil konsentasi antosianin yang berbeda pula.
b) Pengaruh cahaya
Pada saat dilakukan percobaan, ada cahaya yang masuk ke dalam
spektrofotometer sehingga mempengaruhi pembacaan absorbansi.
Karena cahaya dapat mempercepat laju degradasi warna antosianin. Hal
inilah yang menyebabkan nilai absorbansi dan kadar antosianin yang
kami temukan lebih kecil dibandig nilai absorbnsi dan kadar antosianin
pada jurnal yang kami temukan.
c) Perbandingan jenis pelarut
Berdasarkan analisis ragam dapat diketahui bahwa perbandingan jenis
pelrut berpengaruh nyata terhadap kadar antosianin. Sifat kepolaran
pelarut berpengaruh, semakin besar kepolaran pelarut maka kadar
antosianin akan semakin tinggi. Menurut sari (2005), ekstraksi
antosianin menggunakan pelarut air dan pelarut yang dikombinasi,
menunjukkan kadar yang lebih tinggi dibandingkan ekstraksi dengan
pelarut etanol, iso propanol dan kombinasi etanol-iso propanol. Hal nni
diperkuat oleh pernyataan Sudarmanto (1989), yang menyatakan bahwa
pigmen antosianin bersifat larut dalam air.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

12

IV.3 Hubungan Antara Konsentrasi dengan Absorbansi

absorbansi

Grafik Hubungan Absorbansi dengan Konsentrasi


500
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0

y = 474.8x + 64.81
R = 0.292

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

konsentrasi (mg/L)

Gambar 4.1 Grafik hubungan absorbansi dengan konsentrasi

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

13

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
V.1 Kesimpulan
1. Kadar antosianin yang ditemukan didalam 100 ml strawberry yaitu
sebesar 44,15 mg/L.
2. Panjang gelombang optimum terletak pada panjang gelombang 510
nm. Sebab pada 510 nm diperoleh transmitansi minimum dan
absorbansi maksimum.
3. Pengaturan pH pada 4,5 dan 1 bertujuan untuk memisahkan antosianin
dari senyawa linnya (pengotor).

V.2 Saran
1. Dalam melakukan pengenceran dibutukan kesabaran dan ketelitian
agar didalam perhitungan dF sebagai perhitungan C diperoleh hasil
yang akurat.
2. Lakukan kalibrasi secara berulang setiap saat setelah atau sebelum
mengganti panjang gelombang.
3. Usahakan pH mendekati bilangan yang telah ditentukan agar dapat
diperoleh hasil yang akurat
4. Setelah

kuvet

dimasukkan

ke

dalam

spektrofotometer,

alat

(spektrofotometer) harus segera ditutup untuk menghindari serapan


cahaya dari luar yang berlebihan.
5. Pada pencatatan skala yang ditampilkan harus ditunggu sampai angka
konstan atau tidak berubah lagi.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

14

DAFTAR PUSTAKA
Aryaulilalbab, 2013, Stabilitas Antosianin, diakses dari
https://aryaulilalbab-fkmI2.web.unair.ac.id/ artikel-61402ilmu%20-antosianin.html, diakses pada tanggal 13 Oktober
2013 pukul 23.03 WIB
Barners,kw,dkk,2005.determination of otal morometric antosianin
pigmen content of fruit,beverage,natural colorants,an louise by
the ph differential Groggins,pH . 1950.unit proses in organic
synthesis.5 ed.PP.700-783 Mc.Graw Hill Book Company.Inc,
New York.
Fatima lope da silva, 2007, Anthocyanins pigments in strawberry,
diakses dari https://bibitodedigital.ipb.pt/bit
stream/10198/4556/3/LWT%20(40)%202007.pdf.diakses pada
tanggal 13 Oktober2 013 pukul 23.40 WIB
J.pharm.2006.solubiization and quantification of lycopene in aqueous
media in the form of cyclodextrin Binari System. Diakses
tanggal 4 Mei 2013
Kerr,R.W.1950, Chemistry and industry of starch,2&d,PP375-403.
Academic press,Inc,New York.
Method Collaboration study, Journal of AOAC international,Vol
85,rb.5.PP 1269-1278
Munkramin.Baso.2012,Spektrofotometri-absorbansi dan konsentrasi
(hukum Lambert beer) diakses tanggal 27 April 2013
Penelope,perkins veanic.2002.Composition of orange, yellow, and red
fleshed watermelon.
Rahayu, 2013, diakses dari http://ayuayurahayu.blogspot.com, diakse
pda tanggal 14 Oktober 2013 pada pukul 17.56 WIB
Vogel, 1989.textbook of quantitative Chemical analysis. Longman
scientific and technical.PP 646-676 great Britain.
Woodman,A.1941. Food analysis.4 ed.PP 264-261,Mc Graw Hill
Book Company Inc. New York.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

15

LEMBAR PERHITUNGAN
1. Penentuan optimum dengan mencari A terbesar dan T terkecil. Dari
instrument diperoleh data %T=33,2 (yang paling kecil).
A = log (1/0,332)
= 0,0478 (paling besar)
optimum yaitu 510 nm sebab dari perhitungan yang sama pada
berbagai , paling ptimum adalah 510 nm.
2. Perhitungan absorbansi larutan warna strawberry pada berbagai
komposisi sampel.
a. 10 ml strawberry + 0 ml aquadest
% T = 33,2
A = log (1/0,332)
= 0,478
C = 1000 25 2
C=

0,464 0,054 0,3590,156 449,2 2,3 1000 25


26900 1

= 198,76 mg/L
b. 8 ml strawberry + 2 ml aquadest
% T = 34,2
A = log (1/0,342)
C=
=

1000

25 2

0,121 0,048 0,671 0,156 449,2 2,43 1000 25


26900 1

= 448,4 mg/L
c. 6 ml strawberry + 4 ml aquadest
% T = 42,3
A = log (1/0,423)
C = 1000 25 2
=

0,158 0,019 0,427 0,129 449,2 2,32 1000 25


26900 1

= 153,997 mg/L
d. 4 ml strawberry + 6 ml aquadest
% T = 59,2

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

A-1

A = log (1/0,592)
= 0,2277
C = 1000 25 2
=

0,1990,011 0,328 0,095 449 ,2 3,06 1000 25


26900 1

= 57,5 mg/L
e. 2 ml strawberry + 8 ml aquadest
% T = 72,4
A = log (1/0,724)
= 0,140
C = 1000 25 2
=

0,4690,008 0,092 0,016 449,2 2,05 1000 25


26900 1

= 329,5 mg/L
f. 0 ml larutan strawberry + 10 ml aquaddest
% T = 100
A

=0

= 0 mg/L

3. Perhitungan data sampel


a. Sampel 1,5 larutan strawberry + 8,5 aquadest
A = 0,044
C = 1000 25 2
=

0,044 449,2 6,67 1000 25


26900 1

= 122,5 mg/L

b. Sampel 4,5 larutan strawberry + 5,5 aquadest


A = 0,186
C = 1000 25 2
=

0,186 449,2 2,2 1000 25


26900 1

= 170,8 mg/L

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

A-2

c. Sampel 9 ml larutan strawberry + 1 ml aquadest


A = 0,402
C = 1000 25 2
=

0,402 449,2 1,1 1000 25


26900 1

= 184,6 mg/L

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

A-3

LAPORAN SEMENTARA
PRAKTIKUM DASAR TEKNIK KIMIA I

Materi :
SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

NAMA

: ADISTY KURNIA RAHMAWATI

GROUP

: IV/ RABU PAGI

REKAN KERJA

: 1. NADIA FRIDASANIYA AZARIA


2. FIRMAN AGUM
LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA
TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-1

I. TUJUAN PERCOBAAN
a. Menentukan panang gelombang optimum pada sampel dengan alat
spektrofotometer dan metode spektrofotometri.
b. Menentukan kurva standar dari suatu sampel.
c. Menentukan konsentrasi antosianin pada sampel.

II. PERCOBAAN
2.1 Bahan yang Digunakan
1. Air demin secukupnya
2. KCl 20 ml
3. Natrium asetat 20 ml
4. Ekstrak strawberry 100 ml

2.2 Alat yang Digunakan


1. Spektrofotometer OPTIMA sp-300
2. Beaker glass 250 ml
3. 6 buah tabung reaksi beserta rak tabung reaksi
4. 1 pipet ukur 10 cc
5. pH meter
6. 4 buah beaker glass 50 cc

2.3 Cara Kerja


2.3.1 Menentukkan

panjang

gelombang

optimum

untuk

antosianin
1. Menghidupkan optima sp-300 dengan memutar tombol power
sampai bunyi klik dan indicator lamu menyala. Dibiarkan
dalam kondisi ini selama 20 menit untuk pemanasan sebelum
digunakan
2. Mengatur

panjang gelombang

yang diinginkan dengan

menggunakan tombol pengatur panjang gelombang.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-2

2.3.2 Cara kalibrasi alat spektrofotometri


1. Mengosongkan tempat sampel (1) pada spektrofotometer,
kemudian tutup. Skala pembacaan transmitan diatur 0%
menggunakan tombol (7)
2. Mengambil cuvet (seperti barang yang sederhana tetapi dari
bahan gelas dengan super kualitas, berharga 3 juta) dan
membersihkan kemudian mengisi cuvet dengan air demi sampai
nya (disebut dengan blangko). Bagian luar cuvet dibersihkan
dengan hati-hati.
3. Membuka tutup sampel pada spektrofotometer (1) masukkan
cuvet dan tutup kembali (tinggi larutan disesuaikan dengan
tanda yang ada).
4. Mengatur pembacaan transmitan 100% (A=0)untuk larutan
blangko dengan tombol 6
5. Mengambil cuvet

dari tempat

sampel kemudian tutup.

Pembacaan skala transmitan dapat diliha pada layar (4). Dalam


tahap ini pembacaan transmtan harus 0%. Jika tidak, ulangi
langkah a.3 hingga pembacaan dperoleh pembacaan transmitan
yang konsisten.
6. Jika sudah diperoleh pembacaan untuk 0 dan 100% konsisten,
simpan cuvet dengan larutan blangko tersebut sampai praktikum
selelsai.
7. Mengisi cuvet lainnya dengan larutan sampel, bersihkan bgian
luar cuvet, masukkan kedalam tempat sampel, dan tutup
kembali, baca skala transmitan dan hilang absorbansinya, A=2log%T.
8. Menaikkan panjang gelombang 10 nm dengan menggunakan
tombol (2), ulangi langkah 1-7.
9. Membuat kurva hubungan antara absorbansi vs panjang
gelombang, kemudian tentukan nilai panjang gelombang
optimum untuk jenis larutan target.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-3

2.3.3

Membuat kurva kalibrasi antara absorbansi versus konsentrasi


antosianin
1. Membuat larutan warna pada berbagai veriasi sampel.
2. Mengatur panjang gelombang sesuai dengan hasil yang
diperoleh pada tujuan (a) menggunakan tombal (2).
3. Melakukan kalibrasi alat spektrofotometri (langkah 1-6)
4. Mengisi cuvet lainnya dengan larutan sampel no.2, bersihkan
luar cuvet, masukkan kedalam tempat sampel, tutup kembali,
baca skala transmitan dan hitung absorbansinya (A), A=2-log(
%T), ulangi untuk sampel no. 3,4,5, dan 6.

2.3.3 Menentukkan kadar antosianin total dalam larutan


1. Membuat larutan KCl 0,025 M sebagai larutan buffer pH 1.
Kemudian diukur pH nya dan diatur pH nya supaya sama
dengan 1 dengan menambahka larutan HCl.
2. Membuat larutan Natrium Asetat (CH3COONa.3H2O) 0,4 M.
kemudia diukur pH nya dan diatur supaya larutan mempunyai
pH 4,5 dengan menggunakan larutan HCl
3. Mengambil 1 buah beaker glass 50 cc dan mengisi dengan
larutan no 2 sebanyak 5 ml dengan pipet ukur. pH larutan dibuat
sama dengan 1 dengan menambahkan larutan buffer KCl dengan
pipet ukur, hitun berapa jumlah volume yang telah ditambahkan
sehingga pH=1. Hal serupa dilakukan pada sampel no. 3, 4, 5,
dan 6.
4. Mengatur panjanggelombang pada 520 nm, kemudian lakukan
kalibrasi alat langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian
panjang gelombang). Setelah itu masukkan larutan no 2 pH 1 ke
dalam cuvet hingga bagian. Catat persen transmitan dan
hitung absorbansinya, begitu juga untuk sampel no 3, 4, 5, dan
6.
5. Mengatur panjang gelombang pada 700 nm, kemudian lakukan
kalibrasi alat langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-4

panjang gelombang). Setelah itu masukkan larutan no 2 pH 1


kedalam cuvet hingga bagian. Catat % transmitansi dan
hitung absorbansinya, begitu juga untuk sampel no 3, 4, 5, dan
6.
7. Ulangi langkah 1-5 dengan membuat pH lartan sam denga 4,5
dengan menambah larutan buffer NaAsetat.
8. Menghitung konsentrasi antosianin total sesuai dengan rumus :
pigmen antosianin (ekivalen dengan cyaniding-3-glucoside,
mg/l).
C=

1000

Dengan :

= konsentrasi antosianin (mg/l)

= (A520-A700)pH1 (A520-A700)pH4,5

MW

= bobot molekul = 449,2 gram/mol

DF

= Faktor Pengenceran

= 26900 L/mol cm

1000

= konversi dari gram ke mgr

= panjang sel/cuvet

9. buatlah persamaan Beer untuk konsentrasi antosianin, dengan


persamaan : A=kc
2.4

Hasil Percobaan

Table 4.1 panjang gelombang vs absorbansi ekstrak strawberry


no Panjang gelombang

% transmitansi

Absorbansi

490 nm

33,3

0,477

500 nm

33,6

0,473

510 nm

33,2

0,478

520 nm

34,3

0,464

530 nm

36,6

0,436

540 nm

40,4

0,393

550 nm

42,9

0,367

560 nm

47,1

0,326

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-5

Table 4.2 Data Absorbansi Larutan warna strawberry


No

Aquades Strawberry

sampel

(ml)

(ml)

transmitan

10

33,2

0,478 198,7

34,2

0,465 448,4

42,3

0,373 153,9

59,2

0,227 57,5

72,4

0,140 329,5

10

100

Table 4.3 Fator Pengenceran


No

Volume

V2 pH

V2

DF pH

DF pH

sampel

(ml)

1 (ml)

pH4,5

4,5

18

3,6

19

5,3

3,8

1,06

18

5,2

3,6

1,04

25

5,6

1,12

15

5,5

1,1

Table 4.4 Konsentrasi Antosianin


No

Vol %T 520
pH 1

A 520
pH

pH 1

4,5

pH

%T 700

A 700

pH 1

pH 1

4,5

pH
4,5

C
pH
4,5

34,3

43,7

0,464

0,359

88,3

69,8

0,054

0,156

198,7

75,6

21,3

0,121

0,671

89,4

70,2

0,048

0,153

448,4

87,3

37,4

0,058

0,427

95,6

74,2

0,019

0,129

153,9

63,2

46,9

0,199

0,328

97,3

80,3

0,011

0,095

57,5

33,9

80,9

0,469

0,092

98,0

96,2

0,008

0,016

329,5

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

B-6

Table 4.5 data sampel


Sampel

A (Absorbansi)

C (konsentrasi)

Sampel 1,5 ml

0,044

122,5 mg/L

Sampel 4,5 ml

0,186

170,8 mg/L

Sampel 9 ml

0,402

184,6 mg/L

Mengetahui,
Praktikan ,

Adisty Kurnia Rahmawati


NIM. 2103011310072

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

asisten

Muhammad Hilman Haidar


NIM. 21030110120009

B-7

REFERENSI

Isolasi Antosianin dari Buah Strawberry

Antosianin adalah zat penyebab warna merah, orange, ungu, dan biru.
Banyak terdapat pada bunga dan buah-buahan seperti bunga mawar, pacar air,
kembang sepatu, bunga tasbih atau kana, krsan, pelargonium, aster cina, dan buah
apel, chery, anggur, stoberi, buah manggis serta umbi ubi jalar. Penggunaan zat
pewarna alami, misalnya pigmen antosianin masih terbatas pada beberapa produk
makanan, seperti produk minuman (sari buah, juice, dan susu) (Saati, 2006).
Pigmen antosianin yang merupakan flavonoid merupakan pigmen yang
paling luas dan penting karena banyak tersebar pada berbagai organ tanaman,
terutama pada bunga (ditetukan hampir 30% terkandung dalam berat keringnya).
Pelarut yang sering digunakan untuk mengekstrak antosianin adalah alkohol, etanol
dan metanol, isopropanol, aseton atau dengan air (aquadest) yang dikombinasikan
dengan asam, seperti asam klorida (HCL), asam aserat, asam format, atau asam
askorbat (Saati, 2006).
Proses isolasi antosianin dari buah strawberry, yaitu:
Preparasi Sampel.
Ekstraksi Senyawa Antosianin dari Buah Sroberi melalui maserasi dengan
variasi pelarut yang menggunakan methanol dan HCl 1% dengan perbandingan (9:1).
Buah Stroberi diambil yang berwarna merah matang kemudian dibersihkan dari
kotoran-kotoran yang ada, kemudian dipotong kecil-kecil setelah itu ditimbang
sebanyak 100 gr.

Ekstraksi Senyawa Antosianin dengan metode maserasi


Buah stroberi yang telah dipotong dan ditimbang seberat 100 gr dimaserasi
dalam 250 mL pelarut campuran methanol: HCl 1% (9:1). Setelah itu disaring
dengan corong Buchner. Filtrat hasil penyaringan dimasukkan ke dalam corong pisah
yang kemudian ditambahkan 50 mL petroleum eter. Kemudian diekstrak sebanyak 3
kali. Setelah itu akan didapatkan ekstrak kasar yang kemudian dipekatkan dengan
Rotary Evaporator untuk memperoleh ekstrak pekat.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 1

Dengan adanya penurunan kadar antosianin maka dapat dikatakan bahwa


senyawa antosianinkehilangan warna merahnya. Lama penyimpanan merupakan
factor yang berkaitan dengan terjadinya degradasi warna antosianin, semakin lam
waktu penyimpanan maka hasil degradasi antosianin akan semakin tinggi.
Menurut Cai dan Corke (1999), penigkatan lama penyimpanan menyebbkan
akumulasi senyawa hasil degradasi flavillium menjadi pseudobasa hingga akhirnya
menjadi kalkon terus meningkat. Hal tersebut menyebabkan berkurngnya derajat
kemerahan dan peningkatan kecerahan. Penurunan kadar antosianin diduga terjdi
karena dekomposisi antosianin dari bentuk aglikon menjafi kalkon yang tidak
berwarna dan akhirnya mmbentuk -diketon yang berwarna coklat, serta oksidasi
antosianin sehingga katio flavium yang berwarna merah kehilangan proton dan
berubah struktur menjadi karbinol yang tidak member warna ( markakis 1982).
http://www.slideshare.net/telematika/aplikasi-antosianin-rosela-pada-produk-yogurt7898827
Stabilitas Antosianin
Diposting oleh aryaulilalbab-fkm12 pada 15 oktober 2012
Di ilmu pangan
Pigmen antosianin sangat dipengaruhi oleh pH dimana dalam suatu larutan
kestabilan strukturnya bisa berwarna sampai tidak berwarna. Bentuk kation (ion
flavilium)yang berwarna merah, stabil padapH rendah dan kestabilannya berubah
menjadi tidak berwarna jika pH meningkat menjadi pH netral. Beberapa antosianin
berwarna merah pada larutan asam, ungu jika berada dalam larutan netral, dan biru
dalam larutan alkali. Kebanykan antosianin sangat berwarna pada pH<4 (Vargaz and
Lopes, 2003).
Antosianin umumnya tidak stabil pada pengolahan sehingga berakibat
hilngnya warna selama proses pengalengan, embotolan, dan pemanasan. Buah dan
sayuran mengandung enzim yang dapat menyebabkan kehilangan warna pada
antosianin meskipun dapat diinaktifkan dengan blanching. Beberapa enzim yang

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 2

menyebabkan oerubahan warna antosianin adalah polipenol oxidase, antosianise, dan


peroxidase (Eskin, 1990).
Factor lain yang juga penting dalam antosianin adalah harus diproses dan
diolah pada temperature rendah dengan sedikit kehadiran oksigenserta cahaya. Efek
suhu terhadap stabilitas antosianin pada produk makanan telah diselidiki oleh banyak
peneliti dan kesimpulan secara umum bahwa antosianin akan rusak dengan
pemanasan dan penyimpanan. Markakis (1982), menunjukkan bahwa pengolhan
strawberry pada 100C dalam 1 hari menghasilkan 50% keruskan antosianin dan bila
disimpan pada suhu 38C dapat bertahan hingga 10 hari. Kerusakan warna antosianin
disebabkan oleh berubahnya kation flavilium yang berwarna merah menjadi basa
karbinol yang tidak berwarna da akhirnya menjadi khalkone yang tidak berwarna
(Purnomo,1995). Menurut Laili (2004), perlakuan pemanasan 70C selama 15 menit,
menunjukkan bahwa ekstrak bunga rosella yang diperoleh mempunyai kandungan
antosianin sebesar 4,587 mg tiap 15 gram bunga kering.
Arya

Ulil

Albab,

2012.

Stabilitas

Antosianin.http://aryaulilalbab-

fkm.web.unair.ac.id/artikeldetail-61402-ilmu%20PanganStabilitas%20Antosianin.html diakses pada tanggal 13 oktober 2013


Kadar Antosianin
Berdasakan analisis ragam diketahui bahwa perbandingan jenin pelarut
berpengauh nyata terhadap kadar antosianin. Nilai rata-rata kadar antosianin pada
perlakuan perbandingan jenis pelarut disajikan pada table 2 berikut
Perbandingan pelarut

Kadar antosianin (%)

(air:asam asetat:etanol)
1:0:0

3,07

2:1:2

2,80

1:0:1

2,40

2:0:1

2,58

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 3

Sifat kepolaran pelarut berpengaruh, semakin polar pelarut maka kadar


antosianin semakin tinggi. Menurut Sari (2005), ekstraksi antosianin menggunakan
pelarut air dan pelarut yang dikombinasi, menunjukkan kadar yang lebih tinggi
dibandingkan dengan ekstarksi dengan pelarut etanol, isopropanol, dan kombinasi
etanol-isopropanol. Hl ini diperkuat oleh pernyataan Sudarmanto (1989), yang
menyatakan bahwa pigmen antosianin bersifat larut dalam air.
Jurnal Teknologi Pertanian Vol. 11 No. 2 (Agustus 2010) 87-93
http://e-journalwinayamukti.ac.id

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 4

Anthocyanin pigments in strawberry

Fa tima Lopes da Silva 1, Mara Teresa Escribano-Bailo n, Jose Joaqun Pe rez Alonso,
Julia n C. Rivas-Gonzalo, Celestino Santos-Buelga
1.

Introduction

Strawberry fruits (Fragaria _ ananassa


Duch.) have been
shown to possess high in vitro antioxidant
activity that has
been positively correlated with the content of
polyphenolic
compounds and, specifically,
anthocyanins, the type of
polyphenols quantitatively most important
in strawberry
(Heinonen, Meyer, & Frankel, 1998; Wang
& Jiao, 2000;
Wang & Lin, 2000). The anthocyanin
composition in
strawberry has been the object of various
studies, but is still
not fully characterized regarding minor
pigments. Strawberry anthocyanins derive from
pelargonidin (Pg) and
cyanidin (Cy) aglycones (Fig. 1a) (Mazza &
Miniati, 1993).
The major anthocyanin in the fruits is Pg 3glucoside (Pg 3gluc), as firstly identified by Robinson
and Robinson
(1931). In smaller proportions the
presence of Cy 3glucoside (Cy 3-gluc) seems also constant
in all varieties
Corresponding author. Fax:
+34923294515.
E-mail address: csb@usal.es (C. SantosBuelga).
1Current address: Escola Superior Agra r
ia de Braganc-a, Campus de
Santa Apolo nia, P-5301-855 Braganc-a,
Portugal.

(Bridle & Garcia-Viguera, 1997; Hong &


Wrolstad, 1990a;
Lukton, Chichester, & MacKiney,
1955) and Pg 3-rutinoside (Pg 3-rut) is also commonly
found (Bakker, Bridle, &
Bellworthy, 1994; Co &
Markakis, 1968; Hong &
Wrolstad, 1990b). Furthermore, Pg 3arabinoside (Fiorini,
1995; Goiffon, Mouly, & Gaydou,
1999) and Cy 3rutinoside (Bridle & Garcia-Viguera,
1997) have been cited
in some strawberry cultivars, as well
as various acylated
anthocyanins. In particular, Pg 3-(6malonylglucoside) was
unequivocally identified by Tamura,
Takada and Yoshida
(1995) and indicated as one of the main
pigments in several
Japanese cultivars, comprising 5-30% of
total anthocyanin
content (Tamura et al., 1995;
Yoshida, Koyama, &
Tamura, 2002). Other acylated
anthocyanins also reported
in strawberry are Pg 3-acetylglucoside
(Hong & Wrolstad,
1990b) and Pg succinylglucoside
(Bakker et al., 1994).
In a previous study by our group
(Lopes-da-Silva, de
Pascual-Teresa, Rivas-Gonzalo, &
Santos-Buelga, 2002),
the anthocyanin composition in
strawberries of cv.
Camarosa was analysed using
electrospray ionization mass
spectrometry ESI-MS coupled to HPLC.
In addition to the
major anthocyanins (i.e. Pg 3-gluc, Pg 3rut and Cy 3-gluc)

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 5

2. Materials and methods


2.1. Samples
Strawberries (Fragaria _ ananassa
Duch.) from five
selected cultivars (cv. Camarosa, Carisma,
Eris, Oso Grande
and Tudnew) grown at an experimental station
at Instituto
de la Grasa-CSIC in Seville (Spain)
and picked at
commercial maturity were collected in
years 2001 and
2.3. HPLC-DAS-MS analyses
Analyses were performed in a
Hewlett-Packard 1100
series liquid chromatograph. Separation
was achieved on a
5-mm AQUA s C18 150 mm _ 4.6mm
column (Phenomenex s, Torrance, CA) thermostatted at 35
1C. Solvents used
were: (A) 0.1% triuoroacetic acid
in water, and (B)
HPLC-grade acetonitrile, establishing
the following gradient: isocratic 10%B for 5 min, 1015%B over 15 min,
isocratic 15%B for 5min, 15-18%B
over 5 min, and
1
18-35%B over 20 min, using a ow
rate of 0.5 ml min .
Double on-line detection was carried
out in a diode array
spectrophotometer (DAS), using 520 nm
as the preferred
wavelength, and in a mass spectrometer
(MS) connected to
the HPLC system via the DAS cell
outlet.
The mass spectrometer was a
Finnigan LCQ (San Jose,
CA) equipped with an ESI source and
an ion trap mass
analyser, which were controlled by
the LCQ Xcalibur
software. Nitrogen was used as both
auxiliary and sheath
1

2.3. HPLC-DAS-MS analyses


Analyses were performed in a
Hewlett-Packard 1100
series liquid chromatograph. Separation
was achieved on a
5-mm AQUA s C18 150 mm _ 4.6mm
column (Phenomenex s, Torrance, CA) thermostatted at
35 1C. Solvents used
were: (A) 0.1% triuoroacetic acid
in water, and (B)
HPLC-grade acetonitrile, establishing
the following gradient: isocratic 10%B for 5 min, 1015%B over 15 min,
isocratic 15%B for 5min, 15-18%B
over 5 min, and
1
18-35%B over 20 min, using a ow
rate of 0.5 ml min .
Double on-line detection was carried
out in a diode array
spectrophotometer (DAS), using 520
nm as the preferred
wavelength, and in a mass spectrometer
(MS) connected to
the HPLC system via the DAS cell
outlet.
The mass spectrometer was a
Finnigan LCQ (San Jose,
CA) equipped with an ESI source and
an ion trap mass
analyser, which were controlled by
the LCQ Xcalibur
software. Nitrogen was used as both
auxiliary and sheath
1
gas at ow rates of 6 and 1.2 lmin ,
respectively. The
capillary voltage was 4 V and the
capillary temperature
195 1C. Spectra were recorded in
positive ion mode
between m=z 150 and 1500. The
MS detector was
programmed to perform a series of three
consecutive scans:
a full scan, a zoom scan of the most
abundant ion in the

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 6

The three major anthocyanins


in strawberry were
quantified from the areas of their
chromatographic peaks
recorded at 520 nm by
comparison with calibration curves
obtained with external
standards of Cy 3-gluc (for
cyanidin-based anthocyanins)
and of Pg 3-gluc (for
pelargonidin-based anthocyanins).
Strawberry extracts
were analysed in triplicate.
Santos-Buelga, & Rivas-Gonzalo,
1988). Thus, lmax of the
peaks of the Pg-based
anthocyanins vary from 500 nm
(peak 6) to 508nm (peak 23).
The presence of Pg as
anthocyanidin in those peaks
was further confirmed by
their mass spectra, which showed
an MS 2 signal at m=z
[M] + 271. In addition, five peaks
(5, 8, 9, 18 and 24) were
identified as Cy derivatives
based on the presence of a
signal at m=z [M] 287 in their MS
2 spectra. Mass spectral
characteristics also allowed to
assign five other peaks to
anthocyanin-derived pigments as
discussed below.
Major peaks in the HPLC
chromatograms in all samples
corresponded to Pg 3-gluc (peak
10), Pg 3-rut (peak 12)
and Cy 3-gluc (peak 5). Besides
them, compounds 1, 2, 3,
19 and 21 were also found in all the
samples analysed. Peak
21 would correspond to Pg 3acetylglucoside, as previously

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

.3. Results and discussion


3.1. Pigment identification
In the different strawberry
varieties analysed 25 anthocyanin pigments were detected
for which suitable information
concerning
their
UVvis
or
mass
spectral
characteristics could be obtained.
Fig. 2 shows the HPLC
anthocyanin profiles in the
samples of the five strawberry
cultivars analysed (i.e. cv.
Tudnew, Carisma, Camarosa,
Eris and Oso Grande). Peak
data obtained in the HPLCDAS-MS analyses (retention
time in the HPLC system,
lmax in the visible region,
molecular ion and main
fragments observed in MS ) are
summarized in Table 1,
together with the strawberry
varieties in which each peak
was detected. In addition to the
compounds indicated in
that table, other very minor
pigments were also detected
although no good absorption or
mass spectra could be
obtained to allow speculation
about their identity.
and 24) were
identified as Cy derivatives
based on the presence of a
signal at m=z [M] 287 in their
MS 2 spectra. Mass spectral
characteristics also allowed to
assign five other peaks to
anthocyanin-derived pigments as
discussed below.
Major peaks in the HPLC
chromatograms in all samples
corresponded to Pg 3-gluc (peak
10), Pg 3-rut (peak 12)
and Cy 3-gluc (peak 5). Besides
them, compounds 1, 2, 3,
19 and 21 were also found in all
the samples analysed. Peak
21 would correspond to Pg 3acetylglucoside, as previously

C- 7

e increase in the
percentage of acetonitrile in the mobile
phase (Hebrero,
Santos-Buelga, & Rivas-Gonzalo, 1988).
Thus, lmax of the
peaks of the Pg-based anthocyanins
vary from 500 nm
(peak 6) to 508nm (peak 23). The
presence of Pg as
anthocyanidin in those peaks was
further confirmed by
their mass spectra, which showed an MS
2 signal at m=z
[M] + 271. In addition, five peaks (5, 8,
9, 18 and 24) were
identified as Cy derivatives based on
the presence of a
signal at m=z [M] 287 in their MS 2
spectra. Mass spectral
characteristics also allowed to assign five
other peaks to
anthocyanin-derived pigments as discussed
below.

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

C- 8

LEMBAR ASISTENSI
DIPERIKSA
NO

KETERANGAN

TANDA
TANGAN

TANGGAL

9/12/2013

Bab 1,2 dan 3

11/12/2013

Bab 4, 5, dapus, lampiran

13/12/2013

Pengesahan dan tanda tangan

Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1

D-1