ESCUELA DE INGENIERIA
ANLISIS, MODELACIN Y
SIMULACIN DEL CRECIMIENTO
DE Gibberella fujikuroi Y PRODUCCIN
DE CIDO GIBERLICO SOBRE
SUSTRATO SLIDO INERTE
Profesores Supervisores:
RICARDO PREZ C.
IVN SOLAR M.
ANLISIS, MODELACIN Y
SIMULACIN DEL CRECIMIENTO
DE Gibberella fujikuroi Y PRODUCCIN
DE CIDO GIBERLICO SOBRE
SUSTRATO SLIDO INERTE
ii
AGRADECIMIENTOS
Me gustara agradecer a mis amigos: Andrea B., Andrea Ch., Ariel,
Guillermo, Ingrid, Jos Antonio, Kathleen, Lenka, Marcial, Mario y Mauricio. Gracias
por su vital e incondicional ayuda.
Me gustara agradecer adems a FONDECYT N1960360 y a la Beca
Shell Chile, por su apoyo econmico para la realizacin de esta tesis.
iii
NDICE GENERAL
Pg.
DEDICATORIA....................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................... iii
NDICE DE TABLAS ............................................................................................ vii
NDICE DE FIGURAS ......................................................................................... viii
RESUMEN.............................................................................................................. ix
ABSTRACT ............................................................................................................. x
I.
INTRODUCCIN......................................................................................... 11
1.1 Variables crticas de operacin............................................................... 12
1.1.1 Temperatura .................................................................................. 13
1.1.2 Contenido de agua del lecho slido ................................................ 13
1.1.3 pH......... ........................................................................................ 14
1.1.4 Agitacin....................................................................................... 14
1.1.5 Aireacin....................................................................................... 14
1.2 Modelacin............................................................................................ 15
1.2.1 Crecimiento de biomasa ................................................................. 16
1.2.2 Produccin de metabolitos secundarios .......................................... 18
1.2.3 Transferencia de masa y calor ........................................................ 18
1.2.4 Produccin de cido giberlico....................................................... 20
II.
IV.
CONCLUSIONES......................................................................................... 52
V.
NOMENCLATURA...................................................................................... 53
BIBLIOGRAFA .................................................................................................... 54
Anexo A: Clculo de max........................................................................................ 64
Anexo B: Curvas de crecimiento de biomasa medida ............................................... 69
Anexo C: Gases instantneos y degradacin de urea................................................ 70
NDICE DE TABLAS
Pg.
Tabla 2.1: Modelos estadsticos ajustados a datos experimentales............................ 27
Tabla 2.2: max para distintas condiciones de cultivo ................................................ 29
Tabla 2.3: Biomasa final y GA3 mximo .................................................................. 32
Tabla 3.1: Parmetros del modelo bajo distintas condiciones de T y aw................... 45
Tabla 3.2: Anlisis de correlacin............................................................................ 46
Tabla 3.3: Parmetros ms relevantes del anlisis de sensibilidad ............................. 49
vii
NDICE DE FIGURAS
Pg.
Figura 2.1: Monitoreo y adquisicin de datos .......................................................... 25
Figura 2.2: Biomasa, gases instantneos y urea (25C, aw = 0.992) .......................... 30
Figura 2.3: CO2 acumulado ..................................................................................... 31
Figura 2.4: Produccin de GA3 y consumo de urea (36C, aw = 0.999) .................... 33
Figura 3.1: Anlisis cualitativo de ecuaciones (3.10) y (3.11)................................... 39
Figura 3.2: Ajuste de ecuaciones (3.16) y (3.17)...................................................... 41
Figura 3.3: Resumen de la calibracin del modelo.................................................... 43
Figura 3.4: Ejemplo de simulacin 25C y aw = 0.992 .............................................. 47
Figura 3.5: Parmetros ms relevantes del anlisis de sensibilidad............................ 50
viii
RESUMEN
En este trabajo se estudia la influencia de factores fsicos, tales como
temperatura (25, 31 y 36C) y actividad de agua (0.985, 0.992 y 0.999), adems de
factores nutricionales en el crecimiento del hongo Gibberella fujikuroi y la
produccin de cido giberlico (GA3) sobre sustrato slido inerte en columnas de
Raimbault. Condiciones de temperatura de 31C y actividad de agua (aw) de 0.9850.999 resultaron ser las mejores condiciones para la produccin del metabolito,
alcanzado valores aproximados de 0.70 (mg/g.s.i.).
Mediante experiencias a 25C aw = 0.992, 25C aw = 0.999, 31C aw =
0.985, 31C aw = 0.992 se desarroll un modelo matemtico de crecimiento sobre
sustrato slido inerte y produccin de metabolito secundario.
ix
ABSTRACT
This work presents the influence of the temperature (25, 31 and 36C),
the water activity (0.985, 0.992, 0.999) and the nutrients concentration (starch, urea)
on Gibberella fujikuroi growth and gibberellic acid (GA3) production on inert support
in Raimbault columns. The highest biomass concentration is reached when cultures
are performed at 31C and water activity 0.985 or 0.999. The gibberellic acid
concentration obtained under these conditions is 0.70 (mg/g.i.s.).
Experimental data (25C aw = 0.992, 25C aw = 0.999, 31C aw = 0.985,
31C aw = 0.992) have been used to developed a mathematical model for the growth
of the fungus and gibberellic acid production.
11
I.
INTRODUCCIN
12
13
Temperatura
14
pH
Agitacin
La agitacin en reactores de CSS cumple una serie de objetivos [2]:
Aireacin
15
1.2
Modelacin
16
1.2.1
Crecimiento de biomasa
(1.1)
(1.2)
Ecuacin logstica:
dX
= m X
dt
1
X
m
(1.3)
17
decrece una vez que los sustratos limitantes comienzan a agotarse. La ecuacin (1.4)
corresponde a una cintica Monod de crecimiento:
dX
= m X
dt
Cs
K s + Cs
(1.4)
18
19
20
estricos y por sustrato, ii) dependencia de max con la temperatura, iii) un balance de
energa que considera conveccin, conduccin y calor metablico.
Saucedo-Castaeda et al. [10] aplicaron un modelo pseudo-homogneo
para describir la evolucin de los gradientes radiales de temperatura en un reactor de
CSS cilndrico, con aire forzado en rgimen laminar. El balance de energa incluye el
calor metablico generado y la transferencia de calor por dos mecanismos,
conduccin en el lecho slido y conveccin a travs de las paredes del reactor.
Rajagopalan & Modak [29] desarrollaron un modelo heterogneo, en
donde se considera la difusin de oxgeno al interior de una partcula slida. Los
mismos autores [30] desarrollaron un modelo de crecimiento sobre una partcula
esfrica de salvado de trigo. En este caso, la cintica de crecimiento incluye
simultneamente limitaciones por O2 y glucosa, utilizando la ecuacin de Monod en
ambos casos. Simulaciones empleando este modelo mostraron que el agotamiento de
oxgeno al interior del biofilm es la primera causa del cese del crecimiento. No
obstante, a medida que la fermentacin contina, el agotamiento de la glucosa marca
el fin del crecimiento. Por otro lado, para un lecho slido de partculas esfricas
altamente aireado, Thibault et al. [31] concluyeron que la difusin de oxgeno a travs
del biofilm es la limitante ms importante para la transferencia de oxgeno. En este
caso, se utiliz un modelo de transferencia de oxgeno calibrado mediante datos
publicados.
1.2.4
21
hasta que este elemento se vuelve limitante, momento en el cual comienza una fase de
transicin y almacenamiento [32, 33]. Durante esta ltima, y en condiciones de
suficiencia en carbono, se observa un aumento sustancial de los triglicridos y
carbohidratos micelares, concurrentes con la sntesis de GA3. Posteriormente, el
cultivo entra en fase de mantencin, perodo en que ocurre gran parte de la sntesis de
cido giberlico. De esta forma, el GA3 es una hormona vegetal endgena,
biolgicamente activa, y tambin un producto del metabolismo secundario de ciertos
microorganismos. Esta ltima caracterstica ha permitido desde hace varios aos, la
produccin industrial masiva de esta hormona mediante cultivo sumergido.
Los principales usos agrcolas del GA3 incluye tanto a frutas (e.g.
naranjas, uva) como hortalizas (e.g. papas, alcachofas) y cereales. Sin embargo, ms
del 90% del cido giberlico empleado en el mundo, principalmente California, Chile e
Israel, se destina a la obtencin de uva de mesa apirnica (i.e. sin semilla).
En la actualidad, la demanda nacional por GA3 corresponde al 25% del
consumo mundial y el 100% del GA3 es importado. El cido giberlico tiene variados
usos comerciales en el sector agrcola, siendo uno de los ms importantes el caso de
la uva de mesa de exportacin. La aplicacin de GA3 a la uva es la nica forma de
regular el crecimiento de las bayas para obtener racimos de calidad exportable.
A nivel de laboratorio, la produccin de cido giberlico por Gibberella
fujikuroi ha sido estudiada ampliamente en cultivo agitado [32, 33, 34] y en medio
slido. En este ltimo caso, se ha investigado la influencia de factores nutricionales
[23, 35, 36], fsicos (humedad, tiempo de autoclavado, pH) [37], perfiles de
alimentacin fed-batch [35, 38], adems de diferentes sustratos de cultivo [23, 24]. Se
han desarrollado modelos matemticos de crecimiento de G. fujikuroi [39, 40], sin
embargo, no se ha modelado la produccin de GA3 en medio slido. Probablemente,
esto ltimo se deba a la dificultad en modelar la evolucin de la biomasa activa y la
limitacin de GA3 por nitrgeno.
Finalmente, a escala piloto se han desarrollado reactores de cultivo en
medio slido para la produccin de GA3 [5, 38, 41], con resultados prometedores.
22
23
II.
2.1
Materiales y mtodos
2.1.1
24
2.1.2
Control de la aw y temperatura
25
5
6
2
2.1.5
26
27
2.10
Mtodos estadsticos
Modelo
X (t ) =
a
a
1 + 1 e c t
b
S (t ) = S 0 f 1 e g t
GA3 (t ) = a 0 + a1 t + a 2 t 2 + a 3 t 3 + a 4 t 4 + a 5 t 5
Gases instantneos
ig (t ) = i1 + i2 t i3 e i4 t
28
2.2
Resultados y discusin
2.2.1
Crecimiento de biomasa
29
30
Biomasa (mg/g.s.i.)
25C, aw=0.992
40
30
20
10
(a)
0
0
50
100
150
2,4E-06
6,0
1,8E-06
(b)
4,5
1,2E-06
3,0
6,0E-07
1,5
0,0E+00
0
50
100
Urea (mg/g.s.i.)
Gases instantneos
(mol/g.s.i. min)
25C, a w =0.992
0,0
150
Tiempo (h)
Figura 2.2: (a) Datos experimentales de biomasa medida (); las lneas
superiores e inferiores representan los intervalos de 95% de confianza; la lnea
intermedia representa el valor promedio de biomasa. (b) Relacin entre
produccin de CO2 (), O2 () y evolucin de urea ().
31
0.005
25C, a w =0.992
31C, aw =0.985
0.004
31C, aw =0.992
0.003
36C, a w =0.999
0.002
31C, a w =0.999
0.001
25C, a w =0.999
0.000
0
50
100
150
Tiempo (h)
2.2.2
Produccin de GA3
32
aw
0.992
0.999
0.985
0.992
0.999
0.999
Xmax
(mg/g.s.i.)
39.71.3
30.72.8
11.31.0
18.40.8
8.40.5
13.70.8
(GA3)max
(mg/g.s.i.)
0.570.04
0.360.04
0.730.04
0.470.02
0.670.07
0.250.01
Produccin especfica
(mg GA3/mg biomasa)
0.0140.001
0.0120.002
0.0650.009
0.0260.002
0.0800.013
0.0180.002
33
por los autores fue salvado de trigo enriquecido con una solucin nutritiva. Por otro
lado, utilizando un reactor piloto de 50 (kg) de capacidad, Agosin et al. [41] informan
rendimientos de 5.2 (mg GA3/g materia seca inicial) en 6 das de cultivo utilizando
salvado de trigo.
Se comprob que la produccin de cido giberlico comienza cuando la
concentracin del nutriente nitrogenado es baja, debido a que ste inhibe la aparicin
de GA3 [57, 58]. El GA3 excretado por el hongo present en algunos casos una clara
degradacin (31C aw = 0.985; 31C aw = 0.992; 36C aw = 0.999), posiblemente
producto de una hidrlisis qumica al entrar en contacto con el medio acuoso y a una
metabolizacin de ste por parte del hongo [59, 60]. La figura 2.4 ejemplifica lo
expuesto:
0,4
6,0
0,3
4,5
0,2
3,0
0,1
1,5
Urea (mg/g.s.i.)
GA3 (mg/g.s.i.)
36C, aw=0.999
0,0
0
50
100
150
Tiempo (h)
34
35
III.
MODELACIN Y SIMULACIN
3.1
Modelo
3.1.1
Biomasa viva
dX
= X kd X
dt
3.1.2
(3.1)
Biomasa medida
36
(3.2)
Degradacin de urea
(3.3)
dN I
X
= 0.47 k
YX / N I
dt
(3.4)
37
dS
X
=
ms X
dt
YX / S
3.1.5
(3.5)
Produccin de GA3
dGA
dt
3.1.6
= X k P GA 3
(3.6)
Produccin de CO2
(3.7)
O2 utilizado
(3.8)
38
Ecuaciones constitutivas
max N I
(N I + k n )
(3.9)
etam N I
+ N I + K i N I2
(3.10)
etam
1+ Ki NI
(3.11)
39
0,8
0,6
0,4
Ecuacin (3.11)
0,2
0,0
0
10
NI
3.2
Estimacin de parmetros
Determinacin de max
En primer lugar, como fue analizado en el Captulo 2, el trmino max se
obtiene a partir del logaritmo natural de la curva acumulada de CO2 y O2, en el
intervalo de mayor pendiente [46] (ver Anexo F). Sin embargo, este mtodo
40
considera que todos los gases generados o utilizados son producto del crecimiento del
microorganismo, despreciando la respiracin por mantencin.
Determinacin de coeficientes de mantencin y muerte
El estudio de respirometra utilizado permiti obtener estimaciones de la
constante de muerte del hongo (kd) y los trminos de mantencin de CO2 y O2 (mCO2 y
mO2 respectivamente). En primer lugar, a partir de t0 horas de cultivo es posible
despreciar el trmino de crecimiento de la ecuacin (3.1), transformndose en:
dX
= k d X
dt
(3.12)
X = X 0 e k d ( t t 0 )
(3.13)
(3.14)
dCO2
= mCO2 X 0 e kd ( t t0 )
dt
(3.15)
41
CO2 (t ) = (CO +
0
2
kd
mCO2 X 0 e kd (t t0 )
kd
(3.16)
mO2 X 0
kd
mO2 X 0 e kd (t t0 )
kd
(3.17)
0.25
CO2 y O2 acumulados
(gr/gr.s.i.)
25C, aw =0.992
0.20
CO2
0.15
O2
0.10
0.05
0.00
0
50
100
150
Tiempo (h)
42
43
X0, CO2, O2
Estimacin de max, mCO2,
mO2 y kd (EXCEL)
mediante EXCEL
U
Estimacin de la constante
de degradacin de urea (k)
X
Ajuste de kn
simultneamente
YX/NI
S
Ajuste de YX/S y ms
GA3
Ajuste de etam, Ki
y kp
CO2
Ajuste de YX/CO2 y
recalibracin mCO2
O2
Ajuste de YX/O2 y
recalibracn mO2
Figura 3.3: Resumen de la secuencia para determinar los parmetros del modelo.
44
3.3
Resultados y discusin
45
25C
aw=0.992
25C
aw=0.999
31C
aw=0.985
31C
aw=0.992
0.21
0.24
0.21
0.19
7.810-4
4.610-4
3.010-4
2.410-4
kd (1/h)
0.027
0.039
0.027
0.025
k (1/h)
1.310-4
510-4
1.510-4
1.310-4
21.0
17.0
5.0
9.6
YX/S (g X/g S)
0.89
0.18
0.12
0.18
ms (g S/g Xh)
0.09
0.08
0.85
0.21
1.15
1.96
0.75
1.73
0.13
0.17
0.43
0.24
2.60
3.80
1.22
2.56
0.05
0.07
0.24
0.12
6.1110-4
5.5810-4
3.110-3
8.810-4
Ki (1/ g NIg.s.i.)
2.95105
2.95105
9.53106
1.33105
0.0016
max (1/h)
kn (g NI/g.s.i.)
kp (1/h)
46
R2 (T, aw)
aw
YX/CO2
0.98
YX/O2
0.98
kn
0.91
YX/NI
0.88
+
-
+
+
+
47
50
Biomasa (mg/g.s.i.)
25C, aw=0.992
40
30
20
(a)
10
0
0
50
100
150
5,0
1,0
Urea (mg/g.s.i.)
4,0
0,8
3,0
0,6
2,0
0,4
(b)
1,0
0,2
0,0
0
50
Nitrgeno intermediario
(mg/g.s.i.)
25C, a w =0.992
0,0
150
100
25C, aw =0.992
GA3 (mg/g.s.i.)
0,60
0,45
0,30
0,15
(c)
0,00
0
50
100
150
Tiempo (h)
Figura 3.4: (a) curva de biomasa medida (lnea gruesa) y biomasa viva
(lnea punteada), (b) consumo de urea y nitrgeno intermediario, (c)
produccin de GA3.
Para las experiencias a 25C y actividades de agua 0.992 y 0.999, se
cumpli que una vez agotada la urea del medio, el nitrgeno intermediario se
encontraba en altas concentraciones. Esto ltimo permiti que la biomasa continuara
su crecimiento hasta agotarse el intermediario. Por otro lado, se observ que los
niveles de nitrgeno intermediario a 31C y aw = 0.985 y 0.992 se agotaron junto con
la urea, deteniendo con ello el crecimiento de la biomasa alrededor de las 25 (h). Los
48
Anlisis de sensibilidad
Si =
Xi
+ /
t
Xit*
Xit+ / Xit*
t
max
(3.18)
49
Parmetros
X
Xm
NI
S
GA3
CO2
O2
kd
YX/NI
YX/NI
YX/NI
kd
mCO2, YX/NI
mO2, YX/NI
50
60
1.2
25C, aw=0.992
(b)
Biomasa (mg/g.s.i.)
50
(a)
Nitrgeno intermediario
(mg/g.s.i.)
+P
25C, aw =0.992
+P
0.8
40
-P
30
-P
0.4
20
10
-P
+P
0
0
50
0
100
150
50
100
150
350
25C, aw =0.992
-P
0.45
210
0.30
140
-P
70
(c)
0
0
50
+P
0.15
(d)
+P
0.00
100
150
50
100
150
Tiempo (h)
0.30
0.60
GA3 (mg/g.s.i.)
Almidn (mg/g.s.i.)
25C, a w=0.992
280
+P
25C, a w =0.992
0.25
CO2
(e)
0.20
-P
0.15
+P
O2
0.10
-P
0.05
0.00
0
50
100
150
Tiempo (h)
Figura 3.5: Anlisis de sensibilidad. Caso de estudio 25C, aw = 0.992. Las lneas gruesas
representan el caso nominal. +P y P corresponden a las perturbaciones positivas
(+30%) y negativas (-30%) en los parmetros. En la curva de biomasa viva (a) y
produccin de GA3 (d) se perturb a kd. En la curva de biomasa medida (a), nitrgeno
intermediario (b) y almidn (c) se perturb al parmetro YX/NI. En las curvas de gases
acumuladas (e) fueron perturbados mCO2 y mO2.
51
52
IV.
CONCLUSIONES
53
V.
NOMENCLATURA
ai
b
ii
k
kd
Ki
kN
kp
mCO2
mO2
ms
NI
S
S0
Si
s.i.
t
U
X
Xit+/Xit*
Xm
YX/CO2
YX/NI
YX/O2
YX/S
etam
max
54
BIBLIOGRAFA
[1]
[2]
PREZ-CORREA, J.R., AGOSIN, E. (1999) Automation of solidsubstrate fermentation processes. Flickinger M. & Drew, S. ed., The
Encyclopedia of Bioprocess Technology: Fermentation, Biocatalysis and
Bioseparation, John Wiley & Sons Inc., New York.
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
55
[9]
[10]
[11]
[12]
[13]
[14]
[15]
[16]
56
[17]
[18]
[19]
[20]
[21]
COX, P.W., PAUL, G.C., THOMAS, C.R. (1998) Image analysis of the
morphology of filamentous micro-organisms. Microbiology, 144, N4,
817-827.
[22]
[23]
[24]
57
[25]
[26]
[27]
[28]
[29]
[30]
[31]
[32]
[33]
58
[34]
[35]
KUMAR, P.K.R., LONSANE, B.K. (1988) Batch and fed-batch solidstate fermentations: kinetics of cell growth, hydrolytic enzymes
production, and gibberellic acid production. Process Biochemistry,
April, 43-47.
[36]
[37]
[38]
[39]
[40]
[41]
59
[42]
www.chem.eng.usyd.edu.au/pgrad/bruce/unifacal/bottom1.htm
[43]
[44]
[45]
[46]
SAUCEDO-CASTAEDA,
G.,
TREJO-HERNNDEZ,
M.R.,
LONSANE, B.K., NAVARRO, J.M., ROUSSOS, S., DUFOUR, D.,
RAIMBAULT, M. (1994) On-line Automated Monitoring and Control
Systems for CO2 and O2 in Aerobic and Anaerobic Solid-State
Fermentations. Process Biochemistry, 29, 13-24.
[47]
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60
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61
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[64]
[65]
[66]
[67]
62
[68]
63
ANEXOS
64
1.6E-06
25C, a w =0.992
1.2E-06
1.2E-06
8.0E-07
8.0E-07
O2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
CO2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
25C, a w =0.992
4.0E-07
4.0E-07
(a)
(a)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
0.0008
10
15
0.0004
0.0004
0.0002
0.0002
O2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
0.0006
(b)
(b)
0
10
15
20
25
10
15
20
25
-6
10
15
20
25
10
15
20
25
-6
-7
-7
25C, a w =0.992
25C, a w =0.992
-8
ln(O2)
ln(CO2)
25
25C, a w =0.992
0.0006
-8
-9
-9
-10
y = 0.21x - 11.79
y = 0.21x - 12.21
y = 0.23x - 12.79
y = 0.24x - 12.52
-11
(c
)
y = 0.19x - 11.74
(c)
y = 0.19x - 11.30
-10
20
0.0008
25C, a w =0.992
CO2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
-11
Tiempo (h)
Tiempo (h)
65
1.6E-06
1.6E-06
25C, aw=0.999
1.2E-06
1.2E-06
8.0E-07
8.0E-07
4.0E-07
O 2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
CO 2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
25C, aw=0.999
4.0E-07
(a)
(a)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
6.0E-04
10
15
20
25
30
6.0E-04
25C, aw=0.999
25C, a w =0.999
4.5E-04
4.5E-04
3.0E-04
3.0E-04
1.5E-04
O2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
CO 2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
1.5E-04
(b)
(b)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-6
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-8
0
-7
25C, aw=0.999
25C, aw=0.999
-9
-9
-10
ln(O 2)
ln(CO 2)
-8
-10
y = 0.20x - 13.26
y = 0.19x - 12.39
-11
-11
y = 0.23x - 13.22
y = 0.27x - 14.35
(c)
y = 0.23x - 13.80
(c)
y = 0.26x - 14.54
-12
-12
Tiempo (h)
Tiempo (h)
66
1.6E-06
1.6E-06
31C, aw=0.985
1.2E-06
1.2E-06
8.0E-07
8.0E-07
4.0E-07
O2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
CO2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
31C, aw=0.985
4.0E-07
(a)
(a)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
1.6E-03
10
15
20
25
31C, aw=0.985
1.2E-03
8.0E-04
8.0E-04
4.0E-04
O2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
1.2E-03
4.0E-04
(b)
(b)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-6
-6
31C, aw=0.985
31C, aw=0.985
-7
-7
-8
-8
y = 0.17x - 10.42
ln(O 2)
ln(CO 2)
30
1.6E-03
31C, aw=0.985
CO2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
y = 0.16x - 10.54
-9
-9
y = 0.19x - 10.93
y = 0.22x - 11.66
-10
y = 0.17x - 10.92
(c)
y = 0.20x - 11.42
(c)
-10
Tiempo (h)
Tiempo (h)
67
1.6E-06
1.6E-06
31C, aw=0.992
1.2E-06
1.2E-06
8.0E-07
8.0E-07
4.0E-07
O 2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
CO 2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
31C, aw=0.992
4.0E-07
(a)
(a)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
8.0E-04
10
15
20
4.0E-04
0.0004
2.0E-04
O2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
0.0006
0.0002
(b)
(b)
0.0E+00
0
0
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-6
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-7
31C, aw=0.992
31C, aw=0.992
-8
ln(O 2)
ln(CO 2)
0
-6
-7
-10
30
31C, aw =0.992
6.0E-04
-9
25
0.0008
31C, a w=0.992
CO 2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
-8
-9
y = 0.18x - 11.09
y = 0.18x - 11.57
y = 0.20x - 11.61
-10
y = 0.23x - 12.353
-11
(c)
(c)
y = 0.19x - 11.94
y = 0.21x - 12.41
-11
Tiempo (h)
Tiempo (h)
68
1.6E-06
1.6E-06
36C, aw =0.999
1.2E-06
1.2E-06
8.0E-07
8.0E-07
4.0E-07
4.0E-07
CO2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
CO2 Instantneo
(mol/g.s.i. min)
31C, a w =0.999
(a)
(a)
0.0E+00
0.0E+00
0
10
15
20
25
30
0.0016
10
15
20
30
36C, a w =0.999
0.0012
0.0008
0.0008
0.0004
0.0004
CO2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
0.0012
(b)
(b)
0
0
0
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-6
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
-6
0
31C, aw=0.999
36C, a w=0.999
-7
-7
-8
ln(CO2)
ln(CO2 )
25
0.0016
31C, a w =0.999
CO2 Acumulado
(mol/g.s.i.)
-8
y = 0.14x - 9.82
y = 0.14x - 9.93
y = 0.14x - 10.19
y = 0.15x - 10.05
-9
-9
y = 0.15x - 10.57
(c)
-10
(c)
y = 0.17x - 11.07
-10
Tiempo (h)
Tiempo (h)
69
50
50
25C, aw=0.992
25C, aw=0.999
40
40
30
30
20
20
10
10
0
0
0
50
100
50
Biomasa (mg/g.s.i.)
150
50
100
150
100
150
100
150
50
31C, aw=0.985
31C, aw=0.992
40
40
30
30
20
20
10
10
0
0
50
100
150
50
50
50
31C, aw=0.999
36C, aw=0.999
40
40
30
30
20
20
10
10
50
100
Tiempo (h)
150
50
Tiempo (h)
70
2.4E-06
25C, aw=0.992
25C, aw=0.999
6.0
1.8E-06
4.5
1.2E-06
4.5
1.2E-06
3.0
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
0.0
150
2.4E-06
3.0
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
0.0
150
2.4E-06
31C, aw=0.985
31C y aw=0.992
6.0
1.8E-06
6.0
1.8E-06
4.5
1.2E-06
4.5
1.2E-06
3.0
3.0
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
0.0
150
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
0.0
150
2.4E-06
2.4E-06
31C, aw=0.999
36C y aw=0.999
6.0
6.0
1.8E-06
1.8E-06
4.5
4.5
1.2E-06
1.2E-06
3.0
3.0
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
Tiempo (h)
0.0
150
6.0E-07
1.5
0.0E+00
0
50
100
0.0
150
Tiempo (h)
Urea (mg/g.s.i.)
Gases instantneos
(mol/g.s.i. min)
6.0
1.8E-06
71
0.8
25C, aw=0.999
25C, aw=0.992
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0.2
C/N = 55
C/N = 40
0
50
100
150
200
0.8
50
100
150
200
0.8
31C, aw=0.985
31C, aw=0.992
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0.2
C/N = 49
C/N = 87
0
0
0
50
100
150
200
50
100
150
200
0.8
0.8
31C, aw=0.999
36C, aw=0.999
0.6
0.6
0.4
0.4
0.2
0.2
C/N = 8
C/N = 6
0
0
0
50
100
Tiempo (h)
150
200
50
100
150
200
Tiempo (h)
72
0.005
25C, a w =0.992
31C, aw =0.985
0.004
31C, aw =0.992
0.003
36C, a w =0.999
0.002
31C, a w =0.999
0.001
25C, a w =0.999
0.000
0
50
100
150
O2 acumulado (mol/g.s.i.)
0.005
0.004
31C, a w =0.985
25C, a w =0.992
0.003
0.002
31C, a w =0.992
0.001
25C, a w =0.999
0.000
0
50
100
150
Tiempo (h)
2.5
2.0
25C, aw=0.992
R.Q.
1.5
31C, aw=0.992
1.0
31C, aw=0.985
0.5
25C, aw=0.999
0.0
0
50
100
150
Tiempo (h)
73
400
25C, aw=0.992
25C, aw=0.999
300
300
200
200
100
100
50
100
400
Almidn (mg/g.s.i.)
150
50
100
150
400
31C, aw=0.992
31C, aw=0.985
300
300
200
200
100
100
50
100
150
50
100
150
400
400
31C, aw=0.999
36C, aw=0.999
300
300
200
200
100
100
0
0
50
100
Tiempo (h)
150
50
100
150
Tiempo (h)
74
CO2
0.15
0.10
O2
0.05
0.00
0
50
100
150
0.25
CO2 y O2 acumulados
[gr/gr.s.i.]
31C, a w =0.985
0.20
CO2
0.15
0.10
O2
0.05
0.00
0
50
100
150
0.25
31C, aw=0.985
0.20
CO2
0.15
0.10
O2
0.05
0.00
0
50
Tiempo [h]
100
150
75
50
5.0
25C, aw =0.992
40
4.0
30
3.0
20
Urea (mg/g.s.i.)
Biomasa (mg/g.s.i.)
25C, aw=0.992
2.0
(a)
(b)
1.0
10
0.0
0
0
50
100
150
50
100
150
1.2
25C, aw =0.992
280
Almidn (mg/g.s.i.)
Nitrgeno intermediario
(mg/g.s.i.)
350
25C, aw =0.992
210
0.8
(d)
(c)
140
0.4
70
0.0
0
0
50
100
150
50
100
150
0.25
25C, a w =0.992
25C, aw=0.992
0.60
GA3 (mg/g.s.i.)
0.20
CO2
0.45
0.15
O2
0.30
0.10
0.15
0.05
(e)
(f)
0.00
0.00
0
50
100
Tiempo (h)
150
50
100
150
Tiempo (h)
76
50
5.0
25C, a w =0.999
40
4.0
30
3.0
20
2.0
(a)
10
Urea (mg/g.s.i.)
Biomasa (mg/g..s.i.)
25C, aw =0.999
(b)
1.0
0
0
50
100
150
0.0
0
50
100
150
350
25C, a w =0.999
1.2
280
Almidn (mg/g.s.i.)
Nitrgeno intermediario
(mg/g..s.i.)
25C, a w =0.999
210
0.8
(d)
(c)
140
0.4
70
0.0
0
0
50
100
150
50
100
150
0.25
25C, a w =0.999
25C, a w =0.999
0.60
GA3 (mg/g.s.i.)
0.20
CO2
0.45
0.15
0.30
0.10
0.15
O2
0.05
(e)
(f)
0.00
0.00
0
50
Tiempo (h)
100
150
50
100
150
Tiempo (h)
77
50
5.0
31C, aw=0.985
31C, aw =0.985
4.0
30
Urea (mg/g.s.i.)
Biomasa (mg/g.s.i.)
40
3.0
(a)
(b)
20
2.0
10
1.0
0.0
0
0
50
100
150
50
100
150
350
31C, aw =0.985
31C, aw=0.985
280
Almidn (mg/g.s.i.)
Nitrgeno intermediario
(mg/g.s.i.)
1.2
210
0.8
(d)
(c)
140
0.4
70
0
0.0
0
50
100
150
50
100
150
0.25
31C, a w=0.985
31C, aw =0.985
0.60
GA3 (mg/g.s.i.)
0.20
CO2
0.45
0.15
0.30
O2
0.10
0.15
0.05
(e)
(f)
0.00
0.00
0
50
Tiempo (h)
100
150
50
100
150
Tiempo (h)
78
50
5.0
31C, a w=0.992
40
4.0
(a)
(b)
30
3.0
20
2.0
10
1.0
Urea (mg/g.s.i.)
Biomasa (mg/g.s.i.)
31C, aw =0.992
0.0
0
50
100
150
50
100
150
350
31C, aw=0.992
1.2
280
Almidn (mg/g.s.i.)
Nitrgeno intermediario
(mg/g.s.i.)
31C, aw =0.992
210
0.8
(d)
(c)
140
0.4
70
0
0
0
50
100
150
50
100
150
0.25
31C, aw =0.992
GA3 (mg/g.s.i.)
0.60
0.20
0.45
CO2
0.15
0.30
0.10
0.15
O2
0.05
(e)
(f)
0.00
0.00
0
50
Tiempo (h)
100
150
50
100
150
Tiempo (h)
31C, a w =0.992
79
NI
+30%
-30%
S+
S-
<S>
S+
S-
<S>
S+
S-
<S>
S+
S-
<S>
0.27
0.147
0.58
0.73
0.66
0.15
0.27
0.21
0.60
0.66
0.63
0.15
0.29
0.22
0.40
0.36
0.38
0.11
0.13
0.12
0.66
0.46
0.56
0.12
0.12
0.12
0.86
1.00
0.93
0.04
0.04
0.04
0.27
0.15
0.21
0.51
0.70
0.61
0.45
0.56
0.51
0.12
0.19
0.16
1.00
0.70
0.85
0.11
0.20
0.16
10.110
-4
0.0346
-
Xm
1.7310
-4
5.4610
-4
0.0186
0.9310
-4
27.29
14.70
1.00
0.77
0.89
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
1.1618
0.6256
0.27
0.49
0.38
0.1186
0.0638
0.88
0.85
0.87
GA 3
CO 2
O2
Xi*
+30%
-30%
S+
S-
<S>
S+
S-
<S>
S+
S-
<S>
max
0.21
0.27
0.147
0.76
0.88
0.82
0.15
0.29
0.22
0.15
0.29
022
kn
7.810 -4
10.110 -4
5.4610 -4
0.69
0.53
0.61
0.11
0.12
0.12
0.12
0.12
0.12
kd
0.0266
0.0345
0.0186
1.00
1.00
1.00
0.58
0.81
0.70
0.58
0.80
0.69
1.3310 -4
1.7310 -4
0.9310 -4
0.18
0.29
0.24
0.11
0.21
0.16
0.11
0.21
0.16
Y X/NI
20.99
27.29
14.70
0.55
0.39
0.47
0.97
1.00
0.99
0.99
1.00
1.00
mCO 2
0.1322
0.1719
0.0925
1.00
1.00
1.00
Y X/CO 2
1.154
1.50
0.808
0.17
0.32
0.25
mO 2
0.0544
0.0707
0.0381
1.00
1.00
1.00
Y X/O 2
2.604
3.385
1.823
0.18
0.33
0.26
6.1110 -4
7.9410 -4
4.2810 -4
0.74
0.50
0.62
Ki
2.95105
3.8410 5
2.07105
0.10
0.10
0.10
kp
0.0016
0.0021
0.0011
0.05
0.03
0.04
80
(1)
(2)
(3)
(4)
81
kd t
e
(5)
Donde CO21 y CO22 son las cantidades de CO2 acumulado para los
tiempos t1 y t2 respectivamente.