TITULO DE LA PROPUESTA

Desarrollo de una plataforma teraputica fototrmica para cncer

de mama hormonodependiente basada en complejos moleculares
altamente selectivos para el receptor de estrgeno, a travs de
nanoparticulas liposomales de oro funcionalizadas con
endoxifeno.
DESCRIPCIN DE LA PROPUESTA
El cncer de mama es la neoplasia ms frecuente en mujeres a nivel mundial, se estima que
cada ao se detectan 1.38 millones de casos nuevos. En Mexico, la incidencia es de 23.7%
con una tasa de mortalidad del 14.7%; siendo la tercera causa de muerte entre las mujeres.
El tratamiento estndar para el cncer de mama positivo a estrgeno es el tamoxifeno que
permite una reduccin en la tasa de recurrencia, mejora la supervivencia y reduce la
mortalidad hasta en un tercio. El tamoxifeno es metabolizado por la enzima CYP2D6 para
dar lugar a los metabolitos activos como el endoxifeno. Algunos de los alelos de esta la
enzima, principalmente CYP2D6*4, definen el fenotipo metabolizador con prdida de
actividad enzimtica. Los alelos de CYP2D6 influyen en la supervivencia libre de
enfermedad, recurrencias y sobrevida global. Existe una intensa discusin acerca de la
duracin del tratamiento en las pacientes con cncer de mama (ER+) y en las dosis que se
deben indicar a las pacientes con metabolismo lento; por lo que en este proyecto se plantea
analizar de manera personalizada el metabolismo del frmaco y la actividad sobre el tejido
tumoral de pacientes con cncer de mama que sean metabolizadoras lentas y extendidas de
la isoforma CYP2D6 , ya que no se conoce con certeza que modificaciones a la dosis y al
tiempo de tratamiento con tamoxifeno son mejores para las pacientes de metabolismo lento.
Al aplicar metodologas de cultivo celular en tejido tumoral para determinar la cintica de
los metabolitos y la expresin gnica de marcadores relacionados con la respuesta al
tratamiento, muerte celular y proliferacin se podra determinar en el futuro el tratamiento
ptimo para las pacientes con cncer de mama, mediante el ajuste adecuado de las dosis
que permita lograr una mayor sobrevida y disminuya las recurrencias.
Conociendo el fenotipo metabolizador y otros factores relacionados a la respuesta al
tratamiento en cultivos personalizados, se podr realizar la intervencin farmacolgica ms
adecuada, tanto en la eleccin del medicamento como en la dosis. Este abordaje permite
que los factores no conocidos sean considerados como un todo en el modelo de cultivo
celular, ya que es posible simular diferentes condiciones detectadas clnicamente en la
paciente con cncer de mama como son los niveles de estrgeno y sus metabolitos, as
como otros factores asociados a la paciente como genotipos de riesgo o de respuesta.

La integracin de las metodologas de cultivo celular, expresin de genes, histologa,

inmunohistoqumica y citometra de flujo, permitirn en el futuro personalizar el
tratamiento del cncer, por lo que este abordaje mltiple basado en cultivo celular
individualizado, permite dar un paso ms en la medicina personalizada al generar
conocimiento necesario para el desarrollo de estrategias innovadoras en el tratamiento e
investigacin del cncer.
OBJETIVO GENERAL
Integrar una equipo multidisciplinario para evaluar y comparar la cintica de los
metabolitos de tamoxifeno y la expresin gnica de marcadores relacionados con la
respuesta al tratamiento, apoptosis y proliferacin celular en cultivos celulares de tejido
tumoral de pacientes con cncer de mama estrgeno positivas clasificadas de acuerdo al
genotipo de CYP2D6.
RESULTADOS ESPERADOS

Integracin de un equipo multidisciplinario en la investigacin de cncer de mama

con simulaciones en cultivo celular de los efectos de los frmacos (tamoxifeno y
endoxifeno).
Establecer una red robusta para la investigacin en nanotecnologa y farmacologa
en cncer, con plataformas basadas en cultivo celular y marcadores moleculares.
Un artculo cientfico en una revista arbitrada a nivel internacional al trmino del
tercer ao.
Una patente del procedimiento del cultivo celular de tejido tumoral de pacientes con
cncer de mama.
Una tesis de licenciatura.
Un alumno graduado de licenciatura

ANTECEDENTES

Tamoxifeno (TAM) es un tratamiento estndar para el cncer de mama positivo a

receptores de estrgeno (ER+), se indica en enfermedad metastsica , terapia adjuvante del
cncer de mama, tratamiento preventivo en mujeres con riesgo alto, carcinoma ductal in
situ pos-reseccin y para prevencin de cncer contralateral. Entre los beneficios del
tratamiento con tamoxifeno son: reduccin importante en la tasa de recurrencia, mejora la
supervivencia y reduce la mortalidad hasta en un tercio (15).

Tamoxifeno (TAM) es un frmaco modulador de los efectos del estrgeno a travs de la

inhibicin de receptores estrognicos, es el frmaco ms utilizado como terapia adyuvante
endcrina y algunos estudios refieren un resultado benfico en la prevencin del cncer de
mama al ser metabolizado en el hgado, genera un metabolito con potente actividad
antiestrognica llamado endoxifeno (ENDOX), responsable de gran parte de los efectos
farmacolgicos benficos en cncer de mama (ER+). El tamoxifeno es metabolizado
despus de su administracin oral en varios metabolitos (Figura 1). El N-desmetil
tamoxifeno, es el principal metabolito que se encuentra en el plasma de los pacientes, ste
sufre metabolismo secundario a 4-hidroxi-N-desmetil tamoxifeno (endoxifeno). La enzima
que realiza esta reaccin es el citocromo P450 2D6 (CYP2D6), la cual tambin convierte al
tamoxifeno a 4-hidroxi tamoxifeno. Este ltimo metabolito se convierte tambin a
ENDOX. La mayora de los efectos antiproliferativos de TAM se deben a sus metabolitos
activos (68). El 4-hidroxi tamoxifeno tiene al menos 100 veces la afinidad por el receptor
de estrgenos y 100 veces el efecto antiproliferativo, comparado con tamoxifeno. El
endoxifeno tiene una afinidad por el receptor de estrgeno y efecto antiproliferativo similar
a 4-hidroxi tamoxifeno (9,10), y est presente en altas concentraciones en plasma.
Cualquier factor que interfiera con la produccin de estos metabolitos activos puede
impactar en la eficacia del tamoxifeno (9,11). Algunos metabolitos de tamoxifeno inhiben a
la enzima aromatasa que influye en la sntesis de estrgeno (12).

Tamoxifeno

4-OH Tamoxifeno

CYP2D6

Endoxifeno

CYP2D6
N-desmetil
Tamoxifeno
N-didesmetil
Tamoxifeno

Metabolito X

Figura 1. La biotransformacin de tamoxifeno, se lleva a cabo principalmente por la isoforma CYP2D6 del
citocromo P450.

Algunos de los alelos de esta isoforma, principalmente CYP2D6*4, definen de manera

importante el fenotipo metabolizador con prdida de actividad enzimtica (13). Los alelos
de CYP2D6 influyen en la supervivencia libre de enfermedad, recurrencias y sobrevida
global, ver figura 2.

Supervivencia libre de enfermedad en meses

Figura 2. Curva de Kaplan-Meier. Supervivencia libre de enfermedad en mujeres tratadas con tamoxifeno con
metabolismo lento (lnea gris plido, alelos CYP2D6 *4/*4, *4/*41, *1/*5 y *2/*5) y metabolismo rpido
(lnea gris obscuro, resto de alelos CYP2D6). Tomado y modificado de Ramn Y Cajal T, Alts A, Par L,
Del Rio E, Alonso C, Barnadas A, et al. Impact of CYP2D6 polymorphisms in tamoxifen adjuvant breast
cancer treatment. Breast Cancer Res Treat. 2010;119:338.

Actualmente se indican 5 aos de tratamiento con TAM para el tratamiento del cncer de
mama (ER+), sin embargo se ha demostrado que la extensin del tratamiento a 10 aos
disminuye la mortalidad y las recurrencias(14). Existe una intensa discusin acerca de la
duracin del tratamiento en las pacientes con cncer de mama (ER+) y en las dosis que se
deben indicar a las pacientes con metabolismo lento.
Martnez de Dueas y Saladores, ambos en el 2014 determinaron que los pacientes
portadores de los alelos para metabolismo lento necesitan una mayor dosis de TAM para
tratar pacientes con cncer de mama, siendo las dosis utilizadas para este estudio de 20, 40
y 60 mg respectivamente, observando mejores resultados para este grupo de pacientes dosis
de 60 mg (21,22). Estos resultados son similares a lo reportado por el grupo de Muroi, 2014
en cultivos celulares con diversas variables allicas de CYP2D6(23).
Por lo anterior, podemos mencionar, la importancia de los fenotipos de CYP2D6 para
establecer dosis en pacientes con cncer de mama tratadas con TAM.

HIPOTESIS
Existen diferencias estadsticamente significativas en la cintica de los metabolitos de
tamoxifen y la expresin gnica de marcadores relacionados con la respuesta al tratamiento,
apoptosis y proliferacin celular entre los cultivos celulares de tejido tumoral de pacientes
con cncer de mama estrgeno positivas con metabolismo lento y extendido de CYP2D6.

JUSTIFICACIN
La variacin en el genoma humano es parcialmente responsable de que la respuesta a los
medicamentos sea diferente en cada individuo y determina un riesgo diferencial entre las
poblaciones. Con los avances en biologa molecular ha surgido una rama de la farmacologa
llamada farmacogentica, la cual es parte de la tendencia hacia una medicina personalizada
basada en marcadores moleculares, como expresin de genes, mutaciones, polimorfismos
de ADN y protemica. Este paradigma ha generado las lneas de investigacin de mayor
auge en el mbito cientfico en oncologa. Conocer e investigar la relacin que existe entre
los marcadores genticos y moleculares con el riesgo de cncer, as como predecir la
respuesta al tratamiento a travs de estos mismos marcadores, es fundamental para
optimizar el tratamiento de forma integral e individualizada.
Anteriormente no se han probado los medicamentos en clulas cancerosas provenientes de
pacientes mexicanas, solamente se han probado los medicamentos en cultivo celular de
lneas celulares estandarizadas, sin embargo estas clulas no representan directamente las
variables encontradas una paciente mexicana en particular.
Actualmente es de importancia vital para el tratamiento de cncer de mama desarrollar
estrategias que puedan inhibir los efectos proliferativos del estrgeno en mujeres con
cncer de mama, para lo cual es necesario investigar modelos que aporten informacin
acerca del comportamiento celular de los tumores directamente cultivados de pacientes
mexicanas con cncer de mama estrgeno positivos tratados con inhibidores de los efectos
estrognicos como tamoxifeno. Existe una intensa controversia en relacin con el manejo
de las pacientes con cncer de mama (ER+) con metabolismo lento, no se conoce con
certeza que modificaciones a la dosis y al tiempo de tratamiento con tamoxifeno es mejor
para este tipo de pacientes. Al aplicar estas metodologas de cultivo celular para determinar
la cintica de los metabolitos y la expresin gnica de marcadores relacionados con la
respuesta al tratamiento, muerte celular y proliferacin se podra determinar en el futuro el
tratamiento ptimo para las pacientes con cncer de mama.
Conociendo el fenotipo metabolizador y otros factores relacionados a la respuesta al
tratamiento en cultivos personalizados, se podr realizar la intervencin farmacolgica ms
adecuada, tanto en la eleccin del medicamento como en la dosis. Este abordaje permite
que los factores no conocidos sean considerados como un todo en el modelo de cultivo
celular, ya que es posible simular diferentes condiciones detectadas clnicamente en la
paciente con cncer de mama como son los niveles de estrgeno (premenopausia y
postmenopausia) y sus metabolitos, as como otros factores asociados a la paciente como
genotipos de riesgo o de respuesta.

La integracin de las metodologas de cultivo celular, expresin de genes, histologa,

inmunohistoqumica y citometra de flujo, permitirn en el futuro personalizar el
tratamiento del cncer, por lo que este abordaje mltiple basado en cultivo celular
individualizado, permite dar un paso ms en la medicina personalizada al generar
conocimiento necesario para el desarrollo de estrategias innovadoras en el tratamiento e
investigacin del cncer.
10 pacientes con cncer de
mama (ER+) premenopasicas

10 pacientes con cncer de

mama (ER+ )posmenopasicas

5 metabolizadoras extensas
5 metabolizadoras lentas

5 metabolizadoras extensas
5 metabolizadoras lentas

5 Biopsias
Metabolismo lento

Biopsia y cultivo
celular
Cultivo
tratado con
Tamoxifeno

Cultivo
tratado con
Endoxifeno

5 Biopsias
Metabolismo extenso

5 Biopsias
Metabolismo lento

Biopsia y cultivo
celular
Cultivo
tratado con
Tamoxifeno

Cultivo
tratado con
Endoxifeno

Biopsia y cultivo
celular
Cultivo
tratado con
Tamoxifeno

Cultivo
tratado con
Endoxifeno

5 Biopsias
Metabolismo extenso

Biopsia y cultivo
celular
Cultivo
tratado con
Tamoxifeno

Cultivo
tratado con
Endoxifeno

OBJETIVO GENERAL
Integrar un equipo colaborativo integral interinstitucional, multi y transdisciplinario para la
evaluacin y comparacin de la cintica de los metabolitos de tamoxifen y la expresin
gnica de marcadores relacionados con la respuesta al tratamiento, apoptosis y proliferacin
celular en cultivos celulares de tejido tumoral de pacientes con cncer de mama estrgeno
positivas clasificadas de acuerdo al genotipo de CYP2D6.

OBJETIVOS PARTICULARES
Determinar el comportamiento de las concentraciones de tamoxifeno, estrgeno y sus
metabolitos al aplicarlos en cultivo celular de cncer de mama (ER+) de mujeres mexicanas
clasificadas segn el metabolismo CYP2D6.
Conocer las concentraciones de endoxifeno y estrgenos en el suero de pacientes
mexicanas con cncer de mama (ER+) clasificadas segn el metabolismo CYP2D6.

Cuantificar los niveles de expresin (PCR tiempo real y citometra de flujo) de genes de
respuesta a estrgeno, apoptosis y proliferacin en cultivo celular de cncer de mama
(ER+) tratado con tamoxifeno y endoxifeno de mujeres mexicanas clasificadas segn el
metabolismo CYP2D6.
Evaluar los cambios morfolgicos y marcadores histolgicos (inmunohistoqumica,
inmunofluorescencia) en cultivo celular de cncer de mama estrgeno positivo tratado con
tamoxifeno y endoxifeno de mujeres mexicanas clasificadas segn el metabolismo
CYP2D6.
Comparar los resultados de las cuantificaciones y evaluaciones de los marcadores
moleculares e histolgicos antes mencionados, entre cultivos celulares de pacientes con
cncer de mama (ER+) con metabolismo lento y pacientes con cncer de mama (ER+) con
metabolismo extenso.

Fijacin con formalina

Criopreservacin

Histologa, e
inmunohistoqumica

Tumor de mujeres con

Metabolismo lento o
Extenso

Cultivo celular tratado con Tamoxifeno y Endoxifeno

Genotipifacin CYP2D6: PCR tiemop real y secuenciacin Sanger.
Expresin Gnica: PCR tiempo real, Inmunohistoqumica
Niveles de estrgeno y metabolitos: ELISA
Niveles de Tamoxifeno y metabolitos: HPLC
Apoptosis y Proliferacin: Histologa, Citometra de flujo, Inmunohistoqumica, Inmunofluorescencia

Flujograma del proceso de tratamiento del tejido obtenido de pacientes con cncer de mama
estrgeno positivo
META
La integracin de una red temtica para el desarrollo y estandarizacin de las metodologas
de cultivo celular, expresin de genes, histologa, inmunohistoqumica y citometra de
flujo, permitirn en el futuro personalizar el tratamiento del cncer, por lo que este abordaje

mltiple basado en cultivo celular individualizado, permite dar un paso ms en la medicina

personalizada al generar conocimiento necesario para el desarrollo de estrategias
innovadoras en el tratamiento e investigacin del cncer.
METODOLOGA
Se reclutarn 20 pacientes con cncer de mama confirmado mediante estudio
histopatolgico positivas a ER2, de las cuales 10 sern pre-menopausicas y 10 postmenopausicas vrgenes al tratamiento. Se identificar el genotipo de CYP2D6 mediante
sondas especficas en la plataforma de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) en
tiempo real y se confirmar mediante secuenciacin Sanger. Con base en el genotipo
CYP2D6 se clasificarn a las pacientes en metabolizadoras lentas y metabolizadoras
extensas. Se tomar tejido tumoral de cada paciente durante la mastectoma, el cual se
dividir en tres fragmentos, una parte del tejido se criopreservar para hacer anlisis de
expresin basal mediante PCR en tiempo real, otra se fijar en parafina para llevar a cabo
estudios de histopatologa e inmunohistoqumica y el tercer fragmento se cultivar para
someterlo a un ensayo de reto tumoral con tamoxifeno, endoxifeno y estrgenos cuyos
niveles reflejaran las condiciones de la paciente para posteriormente evaluar la expresin de
las vas metablicas mediante PCR en tiempo real y la muerte celular mediante citometra
de flujo.
El flujo de trabajo para el manejo de la muestra que se seguir se presenta en la siguiente
imagen:

Genotipificacin de CYP2D6
Se proceder a extraer el DNA de cada paciente de una muestra de sangre perifrica
mediante un kit comercial, el DNA se cuantificar mediante el uso del espectrofotmetro
nanodrop y se ajustarn a una dilucin homognea para todas las muestras. Posteriormente,
se realizara la identificacin de los genotipos de CYP2D6 por PCR en tiempo real mediante
sondas Taqman especficas para los alelos de metabolismo lento y extendido. Los genotipos
se confirmarn mediante secuenciacin de Sanger.
Niveles de endoxifeno
La cuantificacin de los niveles de endoxifeno se llevara a cabo mediante cromatografa
liquida de alta resolucin (HPLC), se identificarn los niveles del endoxifeno tanto en el
suero de las pacientes como en el sobrenadante de los cultivos celulares obtenidos del tejido
tumoral de cada paciente.

Niveles de estrgenos
La concentracin de estrgenos en suero de pacientes y en los cultivos celulares de tejido
tumoral se realizar a travs del inmunoensayo tipo ELISA mediante el uso de kits
comerciales ya validados.
Expresin de vas metablicas
Se realizar una extraccin de RNA a partir del tejido tumoral mediante un kit de
extraccin comercial, se cuantificar la cantidad de RNA total y se proceder al anlisis de
expresin de las principales vas metablicas que se llevara a cabo con el uso de kits
comerciales basados en la qumica de agentes intercalantes para uso en plataforma de PCR
en tiempo real. La expresin se evaluar en el tejido criopreservado (anlisis basal) y en los
sobrenadantes de los cultivos celulares del tejido tumoral.
Anlisis Histopatolgico
Una parte del tejido tumoral extraido de la paciente se fijar en parafina para realizar los
estudios histopatolgicos que permitirn conocer la morfologa y caractersticas del tumor
mediante tinciones con hematoxilina y eosina. Adems se realizarn inmunohistoqumica e
inmunofluorescencia para marcadores de proliferacin y muerte celular como Ki-67, p53,
AR.
Cultivo celular
A partir del tejido extrado en la mastectoma se har un corte con un vibrotomo para
asegurar la confiabilidad de las condiciones biolgicas del tejido y se cultivar en medio
libre de estrgenos enriquecido con suero fetal bovino y antibiticos. Una vez que se
alcance la confluencia celular adecuada se proceder a simular las condiciones fisiolgicas
de estrgenos y metabolitos de cada paciente en el cultivo celular obtenido a partir del
tumor, despus de tres das se analizaran los diferentes parmetros de muerte celular,
proliferacin, expresin. Los cultivos se mantendrn a 37C en atmosfera enriquecida con
5% de CO2.
Muerte celular y viabilidad
La actividad del tamoxifeno sobre el tejido tumoral llevado a cabo en el reto in vitro se
analizar a travs de citometria de flujo para identificar el porcentaje de clulas que estn
en apoptosis mediante marcadores como anexin; as como la viabilidad de las clulas.

GRUPO DE TRABAJO

Hospital Civil Fray

Antonio Alcalde
Instituto
Jalisciense de
Cancerologa

Centro
Universitario
de Tonal
UdG
RED DE
DIAGNSTICO
MOLECULAR Y
NANOTECNOLOGA

Universidad
Autnoma de
Yucatn

Centro
Universitario
de Ciencias
de la Salud
UdG

Centro de
Investigacin
Biomdica de
Occidente

Centro de
Investigacin y
Asistencia en
Tecnologa y Diseo
del Estado de Jalisco

Responsable Tcnico:
Dr. Rodolfo Henandez Hernndez Gutirrez, Doctor en patologa experimental, responsable
del desarrollo del proyecto y direccin de los equipos multidisciplinarios.
Dra. Blanca Miriam Guadalupe Torres Mendoza. Mdico cirujano y partero con maestra y
doctorado en ciencias por la Universidad de Guadalajara. Encargada de coordinar las
actividades de la investigacin, escritura del informe tcnico final, anlisis de resultados,
escritura y revisin del artculo cientfico.
Dr. Adrian Daneri. Mdico cirujano y partero con maestra y doctorado en ciencias por la
Universidad de Guadalajara. Encargado de analizar los datos de citometria de flujo de los
marcadores de viabilidad y muerte celular, elaborar artculo cientfico y revisin del mismo.
Dr. Jose Alfonso Cruz Ramos. Mdico cirujano y partero con especialidad en patologa y
maestra en Gentica Humana de la Universidad de Guadalajara. Encargado de los estudios
histopatolgicos, inmunohistoqumicos y de microscopa del proyecto, anlisis de datos
estadsticos mediante software especializado y elaboracin de artculo cientfico.

Dra. Gracia Viviana Gonzlez Enrquez. Licenciatura en Qumico farmacobiologo con

maestra y doctorado en Genetica humana por la Universidad de Guadalajara. Encargada de
los ensayos de cuantificacin de endoxifeno por HPLC, conservacin de cultivos celulares
obtenidos de los tejidos tumorales y expresin en PCR tiempo real de los genes
involucrados en el metabolismo elaboracin de artculo cientfico.
Dr. Rodrigo Rub Castellanos. Licenciatura en Qumico farmacobiologo con maestria y
doctorado en Genetica Humana por la Universidad de Guadalajara. Encargado de la
extraccin de DNA, genotipificacin de la isoforma CYP2D6, anlisis de los datos
poblacionales.
Dra. Ana Fletes Rayas. Licenciatura en Enfermeria con doctorado en Genetica Humana por
la Universidad de Guadalajara. Encargada de los estudios de citometria de flujo para los
marcadores de viabilidad y muerte celular, ensayos de ELISA, anlisis de datos y escritura
de artculo cientfico.
Emma Alejandra Garca Olivares. Pasante de la Licenciatura en Enfermera por la
Universidad de Guadalajara.

AGREGAR DR. GENARO GABRIEL ORTIZ

ACADEMICOS TONAL
INSTITUCIONES PARTICIPANTES
Universidad de Guadalajara, Centro Universitario de Ciencias de la Salud.
Instituto Jalisciense de Cancerologa.
Universidad Autnoma de Yucatn.
CALENDARIO DE ACTIVIDADES
NMERO DE ETAPA. 001
DURACIN. 12 meses
DESCRIPCIN DE LA ETAPA

Captacin de pacientes con diagnstico de cncer de mama confirmado por estudio

histopatolgico positivas a ER2. Identificacin del genotipo de CYP2D6 de los sujetos de
estudio y cuantificacin de los niveles de estrgeno en suero.
DESCRIPCIN DE LA META
Identificar el genotipo de la isoforma CYP2D6 de las pacientes captadas con cncer de
mama; as como conocer sus niveles de estrgeno en suero.
DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
Para dar inicio al proyecto se requiere captar a 20 pacientes con cncer de mama
confirmado por biopsia y estrgeno positivo, a estas pacientes se les determinar mediante
PCR y secuenciacin el genotipo de CYP2D6 y se medirn en suero sus niveles de
estrgenos para posteriormente utilizar esos datos para los estudios in vitro de la siguiente
etapa. Con los datos de la genotipificacin se clasificarn a las pacientes en
metabolizadoras lentas y metabolizadoras con genotipo extendido. Todo esto con la
finalidad de identificar posteriormente sus niveles de endoxifeno que producen y reproducir
esas condiciones en los cultivos celulares que se realizaran en la etapa 2.
PRODUCTOS DE LA ETAPA
Captacin de 20 pacientes con cncer de mama positivas a ER2. Genotipos de CYP2D6 de
cada paciente y clasificacin en metabolizadoras lentas e intermedias.
NMERO DE ETAPA. 002
DURACIN. 12 meses
DESCRIPCIN DE LA ETAPA
Establecimiento de los parmetros fsicos y bioqumicos de cultivo celular para clulas
tumorales extradas de pacientes con cncer de mama ER2 positivas. Anlisis de los niveles
de endoxifeno en suero de las pacientes con cncer de mama. Estudios histopatolgicos e
inmunohistoquimica para la evaluacin de la morfologa, marcadores de muerte y
viabilidad celular.
DESCRIPCIN DE LA META
Conocer las caractersticas morfolgicas del tejido tumoral de las pacientes con cncer de
mama; as como identificar marcadores de viabilidad y muerte celular. Analizar los niveles

de endoxifeno en el suero de las pacientes. Establecer los parmetros adecuados para el

crecimiento de las clulas tumorales de las pacientes in vitro.
DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
Realizar la inclusin en parafina de los tejidos tumorales de las pacientes para mediante
tincin con hematoxilina y eosina analizar la morfologa, hacer estudios de
inmunohistoqumica e inmunofluorescencia en la biopsia de marcadores indicativos de
proliferacin y muerte celular. Cuantificar los niveles de endoxifeno en el suero de las
pacientes con cncer de mama y correlacionarlos con el genotipo de CYP2D6 identificado
previamente, esto permitir conocer los niveles de endoxifeno que se utilizaran en los
estudios de cultivo celular. Establecer los parmetros fsicos como pH, temperatura, etc. Y
bioqumicos como concentracin de estrgenos, antibiticos, suero fetal bovino, etc.
necesarios para la adecuada proliferacin y mantenimiento celular del tejido tumoral de
cada paciente con cncer de mama.
PRODUCTOS DE LA ETAPA
Resultados de los anlisis de cuantificacin de endoxifeno en suero y su correlacin con el
genotipo de CYP2D6.
Resultados de los estudios histopatolgicos de las biopsias del tejido tumoral para analizar
la morfologa; as como de los marcadores histolgicos de proliferacin y muerte celular.
Parametros fsicos y bioqumicos requeridos para el adecuado crecimiento celular de los
tejidos tumorales de las pacientes con cncer.
NMERO DE ETAPA. 003
DURACIN. 12 meses
DESCRIPCIN DE LA ETAPA
Estudios de expresin de genes de respuesta a estrgeno, apoptosis y proliferacin en
cultivo celular de cncer de mama (ER+) tratado con tamoxifeno y endoxifeno de mujeres
mexicanas clasificadas segn el metabolismo CYP2D6. Comparacin de la expresin de
genes, marcadores de proliferacin y muerte celular entre las metabolizadoras lentas y con
genotipo extendido para CYP2D6.
DESCRIPCIN DE LA META

Conocer la expresin de genes de respuesta a estrgeno, apoptosis y proliferacin en el

cultivo celular personalizado de pacientes con cncer de mama tratados con tamoxifeno y
endoxifeno y comparar entre los genotipos de metabolismo lento y extendido para la
isoforma CYP2D6.
DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
Realizar mediante PCR en tiempo real y citometra de flujo la expresin de genes
involucrados en la respuesta a estrgeno, apoptosis y proliferacin celular en los cultivos de
tejido tumoral de cada paciente con cncer de mama, utilizar las condiciones de cultivo
establecidas en la etapa previa as como los niveles de endoxifeno y estrgenos de cada
paciente para poder establecer una comparacin entre las mujeres con metabolismo lento y
extendido para la isoforma CYP2D6. Una vez concluida la etapa experimental realizar el
anlisis estadstico con software especializado para con la informacin obtenida elaborar un
artculo cientfico.
PRODUCTOS DE LA ETAPA
Resultados de los estudios de expresin del reto tumoral in vitro. Elaboracin de un artculo
de investigacin.
INFRAESTRUCTURA EN LA INSTITUCIN
La Universidad de Guadalajara en su Centro Universitario de Ciencias de la Salud cuenta
con las instalaciones como laboratorios necesarios para llevar a cabo las actividades del
proyecto. Estos laboratorios se encuentran equipados con los siguientes aparatos
indispensables para la correcta y oportuna ejecucin del proyecto. Se cuenta con un
secuenciador Illumina, un termociclador en tiempo real One Step de Life Technologies,
campana de flujo laminar, incubadora con CO2, refrigeradores, congelador de -20 C,
ultracongelador de -80C, tanque de nitrgeno, citometro de flujo, microscopio ptico,
microscopio de fluorescencia, centrifugas refrigeradas, lector de placas de ELISA y
Nanodrop.
El nico equipo que se adquirira en el proyecto es el vibratomo necesario para hacer los
cortes del tejido tumoral que se utilizar para los cultivos celulares, este equipo asegura una
reproducibilidad de las condiciones fisiolgicas originales del material biolgico en el
ensayo in vitro.
PRESUPUESTO GLOBAL
Se solicitaron al fondo 2 000 000, para ejecutar el proyecto en tres etapas de un ao cada
una.

RESULTADOS ENTREGABLES
Un artculo cientfico en una revista arbitrada a nivel internacional al trmino del tercer
ao.
Una patente del procedimiento del cultivo celular de tejido tumoral de pacientes con cncer
de mama.
Una tesis de licenciatura.
Un alumno graduado de licenciatura
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