BILIRUBINE T o t a l e

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

et Directe

M t h o d e Ac i d e s u l f a n i l i q u e

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractifs pour le dosage quantitatif de la bilirubine totale (acclrateur : DMSO) et directe

dans le plasma ou le srum humains

02160, Maizy, France

R1 1 x 200 mL
REF 80403 : R2 1 x 200 mL
R3 1 x 40 mL

Bilirubine Totale
Bilirubine Directe
Solution Nitrite

REF 80443 : R1 2 x 200 mL

R3 1 x 40 mL

Bilirubine Totale
Solution Nitrite

REF 80553 : R2 2 x 200 mL

R3 1 x 40 mL

Bilirubine Directe
Solution Nitrite

CODE CNQ : PJ

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) (6)

PREPARATION DES REACTIFS

Au moins quatre sortes de bilirubines coexistent dans le srum : la

bilirubine directe (BD) correspond la bilirubine dite mono et
di-conjugue ( et Bilirubine) ainsi qu la fraction qui est lie trs
fortement lalbumine ; la bilirubine , non conjugue ou bilirubine
indirecte, qui est transporte par lalbumine. La bilirubine totale (BT)
est la somme de ces diffrentes formes.
On distingue les ictres o prdomine la bilirubine indirecte (ictres
hmolytiques, maladie de Biermer, Thalassmie...etc) des ictres o
prdomine la bilirubine directe (obstruction des voies biliaires extra ou
intra-hpatiques, hpatites virales..etc). Enfin, les ictres o les deux
formes de bilirubine sont prsentes sans prdominance (cirrhoses,
maladie de Dubin-Johnson).

Les ractifs sont prts l'emploi.

Pour les sries importantes ou pour utilisation sur automate, il est
possible de prparer un ractif de travail en respectant les proportions
suivantes : R1 ou R2 (20 volumes) + R3 (1 volume).

PRINCIPE (4) (5)

Raction entre la bilirubine et lacide sulfanilique diazot qui conduit
un compos, lazobilirubine, color en milieu trs acide ou basique.
Principe de Malloy-Evelyn modifi par Walters et al : en solution
aqueuse, seule la BD ragit. Pour doser la BT il est ncessaire de
rompre la liaison entre la bilirubine indirecte et lalbumine. Cette tape
est ralise par laddition de dimthyl sulfoxide (DMSO).
Labsorbance de lazobilirubine ainsi produite est proportionnelle la
concentration en bilirubine et est mesure 550 nm (530-580).

REACTIFS
flacon R1

flacon R2

flacon R3

30 mmol/L
130 mmol/L

SOLUTION NITRITE

Nitrite de sodium

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2) (7)

Srum ou plasma (non hmolyss).
La bilirubine est photolabile. Stocker le spcimen labri de la lumire.
Stabilit dans le spcimen :
4 7 jours 2-8C.
2 jours temprature ambiante.
Spcimens pdiatriques ou ictriques : voir MODE OPERATOIRE.

Hmoglobine : sous-valuation partir dune concentration de

100 Imol/L (1,6 g/L) dhmoglobine.
Turbidit :
Pas dinterfrence significative pour la BT.
Pas dinterfrence significative pour la BD jusqu une
concentration de triglycrides quivalente 4,6 mmol/L.
La raction de formation de la diazobilirubine est sensible aux variations
de temprature et doit tre mene temprature constante.
Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le
dosage.

30 mmol/L
7 mol/L
130 mmol/L

BILIRUBINE DIRECTE

Acide sulfanilique
Acide chlorhydrique

Stocker 2-8C dans le flacon dorigine bien bouch et labri de

la lumire.
Les ractifs (flacon R1, R2, R3) sont stables en labsence de
contamination jusqu' la date de premption indique sur ltiquette,
sils sont utiliss et conservs dans les conditions prconises.
Le ractif de travail BT est stable 2 jours 2-8C.
Le ractif de travail BD est stable 7 jours 2-8C.
Ne pas utiliser les ractifs sil sont troubles ou trs colors (Abs.> 0.100
550 nm ).
Ne pas utiliser les ractifs de travail aprs la date de premption indique
sur ltiquette du coffret.

INTERFERENCES (3)

BILIRUBINE TOTALE

Acide sulfanilique
DMSO
Acide chlorhydrique

STABILITE ET CONSERVATION

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

0,74 mmol/L

1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.

2. Srums de contrle normaux et pathologiques

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

CALIBRATION
Utiliser le facteur exprimental indiqu au CALCUL ou un calibrant
raccord sur une solution ou une mthode de rfrence,
BIOLABO-Multicalibrator REF 95015.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance
indiques, mme aprs utilisation dun deuxime flacon de srum
de contrle frachement reconstitu.
Version : FT 80403 12 02 2009

Temprature de conservation

REF

Rfrence du produit

Consulter la notice

LOT

Numro de lot

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : PJ

BIOLABO EXATROL-N (taux I) REF 95010.

BIOLABO EXATROL-P (taux II) REF 95011.
BIOLABO PAEDIATRIC CONTROL (valeurs pdiatriques)
REF 95403
Tout autre srum de contrle titr pour cette mthode et pour le
mode opratoire slectionn.
Programme externe de contrle de la qualit.
Il est recommand de contrler dans les cas suivants :
Au moins un contrle par srie.
Au moins un contrle par 24 heures.
Changement de flacon de ractif.
Aprs opration de maintenance sur lanalyseur.
Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance indiques, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter le test en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un srum
de contrle frachement reconstitu et rpter le test.
3. Avec facteur : Vrifier les paramtres de lanalyse : longueur
donde, temprature, volume spcimen/volume ractif, temps de
mesure et facteur de calibration.
4. Utiliser un autre flacon de ractif et rpter le test.
5. Avec calibrant : Si la valeur obtenue reste en dehors des limites,
utiliser un autre calibrant ou un calibrant frachement reconstitu et
rpter le test.
6. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
7. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service
technique BIOLABO ou le revendeur local.

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.

Procdure n1 :
Mesurer dans des tubes essais:

Ractif R1

Prmatur
< 20
< 80
< 120
< 160

Adulte
(et enfant > 5 jours)

> 5 jours-60 ans

60-90 ans
> 90 ans

Eau distille

1 mL

1 mL

Blanc

Essai

1 mL

1 mL

50 IL

Ractif R3 (Nitrite)

50 IL
50 IL

50 IL

Mlanger
Spcimen

100 IL

100 IL

100 IL

Prmatur
[< 34]
[< 137]
[< 205]
[< 274]

Procdure n2 : Spcimens pdiatriques ou ictriques

Mesurer dans des tubes essais:

Ractif R1

Eau distille

Bilirubine totale
mg/L
[Imol/L]
3-12
[5-21]
2-11
[3-19]
2-9
[3-15]

terme
[< 34]
[24-149]
[58-197]
[26-205]

Bilirubine directe
mg/L
[Imol/L]
<2
[< 3.4]
<2
[< 3.4]
<2
[< 3.4]

LIMITE DE LINEARITE
Mode opratoire n1 : jusqu 200 mg/L (342 Imol/L).
Au-del, ne pas diluer le spcimen : appliquer le mode opratoire n2.
Mode opratoire n2 : jusqu 1000 mg/L (1710 Imol/L)

100 IL

Bien mlanger et dclencher un chronomtre lors de l'addition du spcimen.

Lire les absorbances 550 nm (530-580) contre les blancs
BT : lecture aprs > 3 minutes 37C ou > 5 minutes temprature ambiante.
BD : lecture exactement 3 minutes 37C ou 5 minutes temprature
ambiante.

[Dmol/L]

terme
< 20
14-87
34-115
15-120

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres valeurs

de rfrence pour la population concerne.

BILIRUBINE
DIRECTE

BILIRUBINE
TOTALE
Blanc

Essai

1 mL

1 mL

Blanc

Essai

1 mL

1 mL

50 IL

Ractif R3 (Nitrite)

50 IL
50 IL

50 IL

Mlanger
Spcimen

20 IL

20 IL

20 IL

20 IL

Bien mlanger et dclencher un chronomtre lors de l'addition du spcimen.

Lire les absorbances 550 nm (530-580) contre les blancs
BT : lecture aprs > 3 minutes 37C ou > 5 minutes temprature ambiante.
BD : lecture exactement 3 minutes 37C ou 5 minutes temprature
ambiante.

Remarque :
1. Faire le zro sur de l'eau distille et bien goutter la cuve. Lire
d'abord tous les blancs d'une srie puis tous les essais en vidant
bien la cuve entre chaque tube, mais SANS RINCER A L'EAU : Le
mlange de la solution ractionnelle avec des traces d'eau
provoque des stries qui peuvent fausser les mesures d'absorbance.
2. Des procdures spcifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.

CALCUL
Avec calibrant (Procdure n1 uniquement) :

Spcimen pdiatrique : appliquer le mode opratoire n2

Rsultat =

PERFORMANCES (PROCEDURE N1)

Abs(Essai - Blanc) dosage

x concentration du calibrant

Abs (Essai - Blanc) calibrant

Avec facteur

BILIRUBINE TOTALE
Intra-srie
N = 23

Taux
normal

Taux lev

Inter-srie
N = 20

Taux
normal

Taux lev

Moyenne mg/L

6,83

41,33

Moyenne mg/L

6,7

38,49

S.D. mg/L

0,201

1,039

S.D. mg/L

0,219

0,684

C.V. %

2,94

2,52

C.V. %

3,27

1,78

BILIRUBINE DIRECTE
Intra-srie
N = 20

Taux
moyen

Taux lev

Inter-srie
N = 20

Taux
moyen

Taux lev

Moyenne mg/L

11,54

27,9

Moyenne mg/L

10,88

27,36

S.D. mg/L

0,224

0,148

S.D.mg/L

0,284

0,899

C.V. %

1,94

0,53

C.V. %

2,6

3,3

Limite de dtection :

Essai

Ractif R2

(mg/L)

Nouveau-n
Dans le cordon
0-1 jour
1-2 jours
3-5 jours

Blanc

BILIRUBINE
DIRECTE

Ractif R2

INTERVALLES DE REFERENCE (2)

Bilirubine totale

BILIRUBINE
TOTALE

BT : environ 1,3 mg/L (2,2 Imol/L)

BD : environ 1,8 mg/L (3,1 Imol/L)
Sensibilit pour 1 mg/L : 8,8 mAbs 550 nm.
Comparaison avec ractif du commerce :
BT : y = 1,0145 x + 0.0513
r = 0,9976
BD : y = 1,0002 x 0,0796
r = 0,9972

Procdure n1 :

mg/L = [Abs. essai Abs. Blanc] x 114*

Imol/L = [Abs. essai Abs. Blanc] x 195*

Procdure n2 :

mg/L = [Abs. essai Abs. Blanc] x 530*

Dmol/L = [Abs. essai Abs. Blanc] x 906*

* Ces facteurs sont donns titre indicatif et peuvent varier lgrement

suivant l'appareillage utilis et le lot de ractif. Il est conseill de les
vrifier l'aide d'un srum de contrle taux lev (Procdure n1 :
utiliser BIOLABO EXATROL-P, Procdure n2 : utiliser BIOLABO
PAEDIATRIC CONTROL).

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 1133-1137.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 88-91.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p.3-90 3-110
MALLOY H.T., EVELYN K., J Biol. Chem.(1937), 119, p.481-490
WALTERS M, GERARDE H, Microchem J (1970) 15 , p.231-243
BERNARD S., Biochimie clinique, 2me d. Maloine, (1989), p.127-129 et
p.280-282.
Henry RJ, Clin Chem : Principles and technics. Harper and Row,p.592 (1965).

Made in France

Version : FT 80403 12 02 2009