UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 01
USO Y CUIDADO DE UN MICROSCOPIO
OBJETIVO:
Conocer la importancia del microscopio en el campo de la Biologa
Celular, as como las partes que lo integran, uso y cuidado del mismo.
FUNDAMENTO:
Un microscopio es un instrumento que permite observar objetos no
perceptibles a simple vista (Ver Fig. 1.1). Ello se consigue mediante un sistema
ptico compuesto por lentes de cristal, que al ser atravesadas por los rayos de
luz reflejados por el objeto, forman una imagen amplificada de l.(5)
Ocular binocular
Anillo de dioptra
Cabezal
Ocular
Tornillo del cabezal
Portaobjetos giratorio
Brazo
Objetivo
Platina
Condensador
Tornillo del carro mvil
Anillo para la abertura del diafragma del
condensador
Tornillo micromtrico
prximo al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que acta como
microscopio simple. Otro prximo al objeto denominado objetivo.(1)
GENERALIDADES:
Descripcin del microscopio compuesto:
Sistema de soporte:
3.
Montar la preparacin que se desea observar.
4.
Separar los binoculares ajustndolos a su propia distancia
interpupilar.
5.
Enfocar entre el ojo derecho y el izquierdo. Los tubos
portaoculares son susceptibles de ajuste, esto se logra enfocando primero
la imagen con el objetivo de menor aumento, usando los tornillos macro y
micromtrico. Si la imagen no es clara, sube o baja el ocular izquierdo
mediante el movimiento del anillo que rodea el tubo portaocular hasta
obtener una imagen ntida, as el microscopio queda ajustado a su propia
visin ocular.
6.
Para enfocar con cualquier objetivo, especficamente el seco
fuerte (40 X) y con el de inmersin (100X), debers acercar el objetivo a la
preparacin, mirndolo de lado para controlar el descenso hasta que la
lente frontal de dicho objetivo quede dentro de la distancia focal. Solamente
entonces debers mirar por el ocular alejando lentamente el objetivo hasta
obtener el enfoque correcto, el cual se obtendr moviendo el tornillo
micromtrico.
A) Objetivos de menor aumento (5X Y 10X): descender el condensador a
fondo, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla), subir el
objetivo con el tornillo macromtrico hasta ver la imagen a travs de los
oculares. Suba un poco el condensador en caso de que la iluminacin
sea insuficiente.
B) Objetivo de gran aumento (40X): Colocar el condensador a la mitad de
la distancia, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla). Subir el
objetivo con el tornillo macromtrico muy lentamente hasta ver la imagen
en el campo y perfeccionar el enfoque con el tornillo micromtrico.
Mover el condensador hasta obtener iluminacin suficiente.
C) Objetivo de inmersin: Colocar la preparacin perfectamente seca,
poner una pequea gota de aceite de inmersin sobre la parte a
examinar, subir el condensador a tope. Observa por los oculares y
enfoca con el tornillo micromtrico.(1)
ABERTURA NUMRICA.
La abertura numrica (A.N.) de un objetivo es una cifra exacta calculada
matemticamente a partir de su dimetro y su longitud focal equivalente, pero a
pesar de ser una caracterstica importante, slo es necesario saber que la
abertura numrica se encuentra marcada sobre la lente, que expresa el
tamao del cono de la luz y que de ella depende la cantidad que atraviesa la
lente y en particular su poder de resolucin y su mxima amplificacin til.(5)
CUIDADOS PARA UN MICROSCOPIO.
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PRCTICA No. 02
MICROTOMO
OBJETIVO:
Aprender a realizar cortes histolgicos utilizando el microtomo.
FUNDAMENTO:
Los microtomos son mquinas o instrumentos empleados para obtener
lminas muy delgadas (cortes) de los tejidos que sern estudiados. Segn el
tipo de trabajo, la forma en que se hizo la preparacin y la inclusin del tejido,
se emplean muchos tipos de microtomos; algunos estn adaptados para un
trabajo especial (Ver Fig. 2.1).
Botn
micromtrico
Soporte de
muestra
Botn para
desbastar
Portanavajas
Cabezal
Los microtomos consisten bsicamente en una base pesada que soporta una
superficie por la que se desliza una cuchilla, un tornillo que acerca el material y
lo ponga al alcance del filo de la navaja, de modo que siempre su avance
ofrezca la misma medida del material. (1)
GENERALIDADES:
La tcnica histolgica comprende la preparacin de los tejidos para su
estudio microscpico, lo cual se logra sometiendo a la totalidad o a una parte
seleccionada del tejido por examinar, a una serie de procesos: fijacin,
deshidratacin, aclaracin, inclusin, corte y tincin. El tipo de muestras que se
procesa con el microtomo es diverso, puede realizarse el corte de cualquier
material animal o vegetal; pero lo ms comn son los cortes de rganos
perfundidos.
Fijacin: Es el proceso mediante el cual los elementos constitutivos de las
clulas, y por tanto de los tejidos, son fijados en cuanto a su estado fsico, y
parcialmente en su estado qumico, de manera que puedan resistir el
tratamiento sucesivo con varios reactivos sin prdida, distorsin importante o
descomposicin. La mayora de los agentes fijadores actan desnaturalizando
o precipitando las protenas, que forman entonces una esponja o malla que
tiende a englobar los otros componentes celulares. En condiciones ideales, un
fijador debe penetrar rpidamente al tejido, su accin debe ser inmediata, y
debe causar una prdida y una alteracin qumica y fsica mnima de las
clulas y de sus componentes; debe adems ser barato, estable y de fcil
manejo.
La mayora de los fijadores producen cierto endurecimiento tisular, facilitando
as el corte; pero, generalmente este efecto endurecedor es reforzado por la
accin de los alcoholes, que son empleados durante el proceso de
deshidratacin. Los fijadores tambin aumentan, por lo general, la
diferenciacin ptica de las estructuras celulares y tisulares; al mismo tiempo,
hacen que la clula resista a las soluciones hipo e hipertnicas que son
empleadas despus de la fijacin; reducen tambin el riesgo de infeccin en las
personas que manejan los tejidos.
Deshidratacin: Los tejidos contiene gran cantidad de agua, tanto intra como
extracelular, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina. Este proceso
debe ser realizado mediante el uso de alguna sustancia que se mezcle con el
agua y tenga cierta afinidad con ella, de manera que pueda penetrar fcilmente
entre las clulas de los tejidos. El alcohol etlico es el mejor agente para la
deshidratacin, esto se logra utilizando alcoholes en distinta concentracin,
empezando por el 70%. No se aconseja el paso directo del tejido de formol al
alcohol concentrado, porque provoca distorsin de los tejidos; cuando estos
son delicados, la deshidratacin debe ser ms gradual. Algunos agentes
aclarantes actan parcialmente como deshidratantes. La deshidratacin es
tambin indispensable antes de que puedan montarse los cortes teidos.
Aclaramiento: Permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado por un
lquido que disuelva la parafina con la cual el tejido va a ser impregnado. Los
aclaradores adems de eliminar el alcohol, muchas de estas sustancias tienen
la propiedad de volver transparentes los tejidos. Ello se debe a sus elevados
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7)
Si el corte realizado sale completo, se toma por un
extremo con la ayuda de un pincel ligeramente humedecido para
colocarlo en el bao de flotacin.
8)
Este bao tiene como fin extender la parafina para
colocarla en el portaobjetos.
9)
Teniendo ya el portaobjetos rotulado, se introduce en el
bao por debajo de la muestra y se levanta hacia la muestra para que se
coloque sobre este, una vez fro y seco se puede observar.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES :
CUESTIONARIO:
1) Qu es el microtomo y para que sirve?
2) Qu precisin tiene el microtomo al realizar los cortes?
3) Qu importancia tiene usar el bao de flotacin?
4) Por qu es necesario utilizar el proceso de fijacin?
5) Cul es la importancia de utilizar el aclaramiento en una muestra?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
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PRCTICA No. 03
PREPARACIONES TEMPORALES
OBJETIVO:
Aprender a realizar una preparacin temporal, til en la observacin de
diversos tipos de muestras.
FUNDAMENTO:
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una
preparacin temporal es aquella que es utilizada en el momento de la
observacin, ya que requiere que el medio de montaje no se evapore tan
rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve por un
tiempo (algunos das) en condiciones de ser observado; las frescas solo se
usan durante la prctica y posteriormente se lavan. Y las permanentes son
aquellas preparaciones que duran para siempre, por lo que se debe hacerse
con un material especial como el blsamo de Canad, para que el cubreobjetos
permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos (Ver Fig.
3.1).(2)
GENERALIDADES:
En general una preparacin microscpica se define como el resultado de
una serie de operaciones destinadas a colocar material de observacin en una
capa de poco espesor, lo ms pequea y representativa posible. Pudiendo ser
en seco, lquido o en vivo, o en partes sobre una superficie de vidrio
transparente (portaobjetos) y cubierta algunas veces con otra de menor
aumento
y
ms
delgada
(cubreobjetos). (Ver
Fig. 3.2) (4)
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PRCTICA No. 04
DIVERSIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Establecer las semejanzas y diferencias entre las clulas vegetales y
animales.
FUNDAMENTO:
La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea de los
organismos vivos. Se compone de partes caractersticas, cuyo trabajo esta
coordinado de tal manera que cada tipo de clula lleva a cabo una funcin
estructural bioqumica nica. Las clulas realizan numerosas reacciones
qumicas para dar origen al proceso vital que se lleva a cabo de manera
compartimentalizada; es decir, estructuras especializadas dentro de la clula
efectan reacciones qumicas aisladas, las cuales estn coordinadas unas con
otras para mantener con vida tanto la clula como los tejidos, rganos,
sistemas y todo el organismo.(4)
Regulan el flujo de entrada y de salida de los materiales a fin de
asegurar las condiciones ptimas para el proceso vital prevaleciente dentro de
ellas. Asimismo, utilizan su informacin gentica para guiar la sntesis de la
mayora de sus componentes y dirigir gran parte de sus actividades qumicas;
entre stas, la generacin de ATP, por desdoblamiento de los nutrientes, la
sntesis molecular, la transportacin de las molculas dentro y entre las clulas,
la remocin de los desechos y el movimiento parcial o incluso de toda la clula.
GENERALIDADES:
Las unidades bsicas de todos los organismos tienen muchas
caractersticas en comn, pero no todas ellas poseen todo el conjunto de
componentes. (1)
Caractersticas de las clulas animales, clulas vegetales y protistas.
Las clulas animales se pueden distinguir fcilmente de las vegetales en
virtud de marcadas diferencias. Los animales poseen ciertos sistemas
organizados caractersticos, son capaces de moverse por s mismos y
dependen completamente de sustancias preformadas para obtener energa y
carbono; stas son nicamente algunas de sus caractersticas ms notorias.
17
Las plantas superiores contienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que les
permite efectuar la fotosntesis, son generalmente inmviles y tienen sistemas
organizados de manera peculiar.
Un nmero considerable de organismos unicelulares exhiben caracteres
tanto de plantas como de animales, a estos como poseen esta peculiaridad los
clasifican como protistas.(5)
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Plastos.
Son
Fig. 4.2 Clula vegetal
estructuras citoplasmticas unidas
que se encuentran en las clulas de las
plantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero nunca en las
clulas de animales superiores. Aunque su tamao, forma y color pueden variar
de manera considerable, segn el tejido de que se trate, del organismo y de las
condiciones de desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos
discoides o esfricos que se encuentran libremente en el citoplasma.(3)
MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Porta y cubreobjetos.
Gotero con bulbo.
Corcho de botella.
Navaja de rasurar nueva.
Pinzas.
Hisopos estriles.
Lancetas estriles.
Torundas con alcohol.
Tubos al vaco Vacutainer de tapa morada.
Ligadura.
Pipeta pasteur.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Centrfuga clnica.
Frascos de boca ancha limpios y secos.
MATERIAL BIOLGICO:
Bulbo de cebolla.
Sangre.
Semen.
Orina.
Polen.
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REACTIVOS:
Solucin salina isotnica.
Solucin de Locke.
Azul de metileno al 1%.
Colorante de Wright.
Buffer de Fosfatos.
Aceite de inmersin.
TCNICA PARA LAS CLULAS DEL CORCHO:
1.
Toma el corcho con la mano izquierda, sujeta firmemente y corta
una rebanada muy fina colocando la navaja un poco oblicua a la superficie.
2.
Cuando se haya obtenido el corte lo suficientemente delgado, se
coloca en un portaobjetos y se le agrega una gota de agua y se cubre.
3.
4.
Obsrvese con menor aumento sobre todo las orillas del corte
donde habitualmente es ms delgado.
5.
Dibuja una pequea porcin de este material e indica la forma y el
tamao de las clulas.
6.
Responde lo siguiente:
a) Qu estructura se ve dentro de ella?
b) Qu parte de la clula es la que evita que el agua penetre en
las clulas?
22
3.
Se fija la vena en posicin, sosteniendo el brazo del paciente con
la mano mientras se estiran y comprimen los tejidos blandos situados
debajo de donde se va a puncionar. Se toma el maneral del vacutainer y
haciendo un ngulo de 15 con el brazo, se perfora la piel a lo largo de la
cara lateral de la vena. Se hace avanzar la punta de la aguja debajo de la
piel de 0.5 a 1 cm y luego se perfora la pared de la vena. La introduccin se
hace con suavidad pero con suficiente rapidez para reducir las molestias.
Una vez que est saliendo la sangre, se retira la ligadura para evitar
hemlisis.
4.
Cuando la aguja haya penetrado la vena, se introduce el tubo en
el maneral de sujecin, el que se mantiene fijo con la otra mano, hasta que
el tapn del tubo sea atravesado por la aguja situada dentro del maneral.
Una vez que el tubo se llen, se extrae y se repite la operacin con tantos
tubos como sea necesario.
5.
Se invita al paciente a abrir su puo. La aguja se retira en sentido
inverso a como se introdujo tambin de manera suave pero con un solo
movimiento. De inmediato, se coloca una torunda impregnada de alcohol en
el sitio de puncin, ejerciendo presin sobre la zona y mantenindola as
por lo menos de 3 a 4 minutos para evitar la formacin de hematomas.
6.
Una vez extrada la muestra, es indispensable mezclarla,
invirtiendo la muestra para que se mezcle con el anticoagulante y de esta
manera evitar una posible coagulacin de la misma.
FROTIS DE SANGRE:
1. Coloca una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos y con otro
extiende hacia el otro extremo.
2. Seca el frotis al aire.
3. Una vez seco el frotis se coloca en un puente de tincin, para realizar la
tincin de Wright de la siguiente manera: con un gotero, agregar
colorante de Wright a todo el frotis y dejarlo reposar 5 minutos, una vez
pasado el tiempo agregar sobre el mismo colorante con otro gotero
buffer de fosfatos y dejarlo reposar durante 15 minutos, a intervalos de 5
minutos, soplar sobre el frotis con una pipeta pasteur hasta observar la
presencia de capa verde metlica.
4. Una vez cumplido el tiempo, quitar el colorante al chorro de agua
durante 5 30 segundos.
5. Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando el frotis y
tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior
del portaobjetos.
6. Secar las preparaciones al aire.
23
a) Neutrfilo segmentado
b) Basfilo
d) Monocito
c) Eosinfilo
e) Linfocito
Figura 4.3 Tipos de leucocitos
24
NOTA:
25
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LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 05
CLULAS PROCARITICAS Y EUCARITICAS
OBJETIVO:
Establecer algunas diferencias morfolgicas entre clulas procariticas y
eucariticas, as como entre clulas vegetales y animales mediante la
observacin de las mismas.
FUNDAMENTO:
Desde que Robert Hooke observ las celdas de corcho, otros cientficos
se dieron a la tarea de investigar cmo estaban formados los seres vivos.
Fueron tres de ellos quienes conformaron lo que conocemos ahora como la
Teora Celular: el botnico Matthew Schleiden quien propuso a la clula como
la unidad estructural de las plantas, el zologo Theodor Schawn que hizo lo
mismo con los animales, y el mdico y fisilogo Rudolph Virchow que conjunt
las propuestas anteriores y propuso que la clula se origina de otra clula.(4)
Existen dos tipos de clulas en la naturaleza: las procariticas como las
bacterias, que estn conformadas por una membrana celular, citoplasma,
material gentico y ribosomas (Ver Fig. 5.1). Y las eucariticas como las de los
protistas, hongos, plantas y animales, que adems de las estructuras de las
bacterias, tiene organelos membranosos, con material gentico encapsulado
en un ncleo (Ver Fig.5.2). Todo esto se conoce gracias a la microscopa
electrnica.(1)
27
GENERALIDADES:
Las clulas comparten muchas caractersticas estructurales, pero hay
una clara diferencia entre la organizacin de las clulas procariticas y la de las
eucariticas. En particular, las clulas de los procariotes (bacterias, algas
verde-azules y algas herbiverdes) son pequeas y simples. Tienen una
Figura 5.2 Tipos
de clulas
membrana citoplsmica, generalmente
delimitada
por una pared celular rgida;
un nucleoide que consta de una sola molcula de ADN circular y que
representa todos los genes del organismo (genoma); y un citoplasma que
contiene ribosomas y una gran variedad de molculas que median el
metabolismo pero carecen de membranas internas permanentes. Al carecer de
estas membranas sus clulas no poseen un ncleo, no poseen mitocondrias, ni
cloroplastos, ni retculo endoplsmico, ni aparato de golgi, ni lisosomas, ni
peroxisomas, ni vacuolas. Si bien, algunas bacterias poseen flagelos, estos
constan de un solo filamento, a manera de un solo microtbulo. No est
presente, pues, el ordenamiento multifilar que se encuentra en los cilios y
flagelos de otros organismos.(3)
El trmino procaritico se utiliza a menudo para distinguir las clulas de
las bacterias y de las algas, de las clulas provistas de ncleo o eucariticas,
de todos los dems organismos. Todos los procariotes son organismos
unicelulares.
En contraste, las clulas de los cuatro reinos de los organismos
eucariticos (protistas, hongos, animales y vegetales) son ms grandes y estn
28
29
relaciones evolutivas entre los tipos de las clulas modernas no estn todava
muy claras, pero los procariontes son, sin duda, ms antiguos y comparten un
ancestro comn con los organismos eucariticos. Todas las clulas ofrecen
similitud en la estructura de su membrana, en sus mecanismos para
almacenamiento y transferencia de informacin y en su metabolismo; de modo
que es posible que estos aspectos hayan evolucionado muy temprano y hayan
sido retenidos desde entonces en todos los linajes descendientes. Los nuevos
mtodos del anlisis molecular podrn aclarar estos hechos evolutivos
fundamentales.(5)
MATERIAL:
Lupa.
Microscopios.
Porta y cubreobjetos.
Hisopos estriles.
Mechero Bunsen.
Caja petri.
Gotero.
Aguja de diseccin.
Navaja.
Palillo de dientes.
MATERIAL BIOLOGICO:
Agua de estanque o de acuario (agua verde).
Pan y frutas con mohos.
Sarro dentario.
REACTIVOS:
Lugol.
Fucsina bsica.
Cristal violeta.
Alcohol de 90.
Azul de metileno.
TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE BACTERIAS:
1.
Disolver en una gota de agua sobre un portaobjetos, una pequea
porcin de sarro dentario y con sta se realiza un frotis o extensin.
Enseguida fijarlo a la llama de un mechero bunsen, para esto pasar varias
veces el portaobjetos sobre la flama cuidando que no hierva la preparacin.
2.
Coloca dentro de una caja petri el portaobjetos, cubrindolo con la
solucin de cristal violeta por un minuto. Lavar al chorro de agua cuidando
que no se arrastre la muestra.
3.
agua.
4.
Decolorar con alcohol de 90. Esta operacin debe ser rpida
para que no se elimine todo el colorante.
30
5.
Cubrir con fucsina bsica por medio minuto. Escurrir el colorante
y lavar al chorro de agua.
6.
7.
Observar al microscopio con objetivo de inmersin. Algunas
bacterias se vern teidas de color rosa y otras de violeta.
8.
Hacer esquemas de las observaciones, sealando con su nombre
las estructuras que se puedan distinguir.
TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS Y ALGAS:
1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua verde de estanque o
bien raspar las paredes de un acuario con un portaobjetos.
2. Colocarle un cubreobjetos para observar en el microscopio con los
objetivos seco dbil y seco fuerte.
3. Realizar esquemas de los organismos observados y sealar los
nombres de las estructuras que se puedan visualizar.
TCNICA
PARA
LA
OBSERVACIN
DE
MOHOS
(HONGOS
PLURICELULARES):
1. Colocar algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el moho del
pan y verduras mediante una aguja de diseccin, con movimientos
suaves para no destruirlo).
2. Cubrirlas con una solucin de azul de metileno por 2 minutos.
3. Escurrir el colorante con cuidado y colocar un cubreobjetos sobre las
hifas. Observar a seco dbil. Realizar los esquemas correspondientes,
sealando las estructuras visibles.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cules fueron las diferencias que observaste al microscopio entre las
clulas eucariontes y procariontes?
2) Clasifica las clulas observadas en:
Clulas Procariticas
Clulas Eucariticas
31
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda
edicin. Editorial Mdica Panamericana. Pgs. 53-57
2. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 41-46
3. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.
23-25
4. Nelson J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 10-12
5. Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Dcima
edicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 17-22
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LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 06
OBSERVACIN DE ORGANELOS CELULARES
OBJETIVO:
Identificar las estructuras que integran las clulas vegetales y animales
como plastos, ncleo, etc., mediante la observacin de las preparaciones.
FUNDAMENTO:
Los organelos son estructuras especializadas que tienen formas
caractersticas y realizan funciones especficas en el crecimiento,
mantenimiento y reproduccin de las clulas (Ver Fig. 6.1). Muchas reacciones
qumicas ocurren en una clula simultneamente, sin embargo hay poca
interferencia entre los distintos tipos de reacciones porque ocurren en
diferentes organelos.
32
GENERALIDADES:
La parte interior de la clula se llama citoplasma y este se divide en dos
componentes: el citosol y los organelos.
Citosol: Es la parte liquida en la que circundan los organelos y
constituye aproximadamente el 55% del volumen total de la clula. Si
bien vara en su composicin y consistencia de una parte a otra de la
clula, contiene de 75 a 90 % de agua ms componentes disueltos y
suspendidos. Entre ellos hay varios iones, glucosa, aminocidos,
cidos grasos, protenas y lpidos, ATP y productos de desecho.
Tambin estn presentes varias molculas orgnicas que se agregan
en masas y son almacenadas. Dichas molculas pueden aparecer y
desaparecer varias veces a lo largo de la vida de las clulas.(1)
Los organelos a su vez se dividen en varios tipos y realizan funciones diversas.
Centrosoma: Se ubica cerca del ncleo, consta de dos componentes, el
rea pericentriolar y los centrolos. El rea pericentriolar constituye una
regin del citosol compuesta por una densa red de pequeas fibras de
protena. Esta zona es un centro de organizacin para el huso mittico,
33
34
35
36
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Realiza un cuadro sinptico describiendo cada organelo y su funcin
dentro de la clula.
2) Elabora una tabla comparativa de organelos entre la clula animal y la
vegetal.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 71-82
2. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 162-175
3. Weisz, P. 2000. La Ciencia de la Biologa. Mxico D.F. Segunda
edicin. Editorial Omega, S.A. Pgs.69-75
4. Ramrez, I. 2000. Biologa celular. Mxico D.F. Primera edicin.
Educacin superior tecnolgica. Editorial dgeta. Pgs. 10-17
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 52-56
6. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 64-73
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LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 07
PERMEABILIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs
de la difusin en una membrana celular por medio de la hemlisis.
FUNDAMENTO:
Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor
parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria
37
Hipotnica
Isotnica
Hipertnica
38
2 ml. de sol.
0.5 M
Urea
Etilenglicol
Glicerol
Glucosa
Peso
Molecular
Suspensin
de eritrocitos
2 gotas
2 gotas
2 gotas
2 gotas
Tiempo
Hemlisis
de
39
2.
Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para cada
sustancia.
3.
Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos y observar tanto
macroscpica como microscpicamente si se presenta la lisis.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?
2) Por qu se dice que la bicapa de la membrana constituye una barrera
natural?
3) Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs
de la membrana celular?
4) Cmo esta constituida la membrana celular de tal manera que permite
la permeabilidad?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Decima
edicin. Editorial Prentice-Hall. Pgs. 63-68
2. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda
edicin. Editorial Revert. Pgs. 55-61
3. Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera
edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-91
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 34-39
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PRCTICA No. 08
FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS
OBJETIVO:
Aprender a realizar la determinacin de la fragilidad osmtica de los
eritrocitos para demostrar el fenmeno de osmosis.
FUNDAMENTO:
Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor
parte son fsicos. Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria
como al celofn, por lo que es conveniente comparar los anteriores modelos
utilizando clulas vivas, como en este caso sern glbulos rojos. La forma de
disco bicncavo del eritrocito normal, implica un exceso de extensin superficial
40
41
MATERIAL:
Centrfuga.
Gradilla.
16 tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Equipo de venopuncin.
Papel parafilm.
Pipetas graduadas de 5 ml.
Pipeta graduada de 0.2 ml.
MATERIAL BIOLGICO:
Sangre obtenida con EDTA.
REACTIVOS:
Solucin salina al 1% tamponada, pH 7.4
TECNICA:
1.
Se obtienen 5 ml de sangre venosa y se mezclan perfectamente.
2.
Se colocan 16 tubos de ensayo en una gradilla y se numeran de
izquierda a derecha.
3.
Montar la prueba de la siguiente manera:
# de tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
ml de sol. salina al
1% tamponada
3.8
3.6
3.4
3.2
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
ml de agua
destilada
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
Concentracin de
la solucin (%)
0.76
0.72
0.68
0.64
0.60
0.56
0.52
0.48
0.44
0.40
0.36
0.32
0.28
0.24
0.20
0.16
4.
Mezclar del contenido de los tubos.
5.
Agregar a cada tubo 0.2 ml de sangre. Invertir cuidadosamente
cada tubo con papel parafilm, para asegurar la mezcla.
6.
Las gradillas que contienen los tubos se dejan reposar a
temperatura ambiente durante 30 minutos.
7.
Transcurrido el tiempo indicado se mezcla cuidadosamente su
contenido y se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 5 minutos.
42
8.
Examinar los tubos observando macroscpicamente en que punto
comienza la hemlisis y en que punto es completa. El menor indicio de
color rojo en el lquido sobrenadante indica el inicio de la hemlisis de los
glbulos menos resistentes; la hemlisis completa queda indicada por una
solucin rojo claro y ausencia de eritrocitos residuales en el fondo del tubo
o enturbiamiento al agitar el tubo ligeramente.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu es la fragilidad osmtica?
2) Qu es osmolaridad?
3) Qu importancia clnica tiene la fragilidad osmtica?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Balcells, A. 1998. La ciencia y el laboratorio. Medicina. Barcelona,
Espaa. 18 Edicin. Editorial Masson-Salvat. Pgs. 87-93
2. Mckenzie, S. 2000. Hepatologa clnica Editorial El Manual Moderno.
Segunda edicin. Mxico D.F. Pgs. 104-112
3. Lynch, M. 1992. Mtodos de laboratorio. Mxico. Segunda edicin.
Editorial interamericana. Pgs. 358-365
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70, 622-626
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FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 09
FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE DIFUSIN
OBJETIVO:
Aprender a establecer el efecto de la concentracin y la temperatura
sobre la velocidad de difusin de un colorante orgnico.
FUNDAMENTO:
El estudio de la difusin como proceso biolgico que se lleva acabo a
nivel de la membrana celular, puede ser estudiado utilizando un modelo fsico,
cuyo manejo sea sencillo con el propsito de conocer los factores que afectan
a dicho fenmeno.(1)
43
44
Contesta lo siguiente:
a)
Qu efecto tiene la concentracin sobre la velocidad de
difusin?
b)
A qu obedecen los resultados obtenidos?
46
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PRCTICA No. 10
PERMEABILIDAD DE MEMBRANA
OBJETIVO:
Comprobar la selectividad de la membrana celular por medio de
reacciones qumicas en un modelo artificial.
FUNDAMENTO:
47
REACTIVOS:
Lugol.
Reactivo de Benedict
Solucin de albmina.
cido ntrico concentrado.
Agua destilada.
Hidrxido de amonio concentrado.
Reactivo de Biuret y de Fehling.
Solucin de almidn al 1%.
Solucin de glucosa al 30%.
Solucin de nitrato de plata al 1%.
Solucin de cloruro de sodio al 5%.
TCNICA:
1.
Preparar la pelcula de gel utilizando gelatina libre de azcares,
bacteriolgica bioxon 2g en 50ml de agua destilada. Colocarla en un molde
circular para obtener la forma de ste, procurando que la capa sea delgada
(mx. 5 mm) puede ser una tapa, cristalizador o caja petri colocando entre
este y el gel un pedazo de bolsa de plstico para que no pegue el gel en el
recipiente.
2.
Una vez que se tenga la pelcula de gel, colocarla en el embudo y
agregarle 5 ml de las soluciones de almidn, glucosa, NaCl y albmina.
(Observar esquema en el catalogo de imgenes)
3.
Colocar el embudo con la pelcula de gel en un vaso con agua
destilada hasta tener contacto con la pelcula, al agua se le habrn
practicado previamente las pruebas para almidn, glucosa, protenas y
cloruros, para asegurarse que el agua no contenga ninguna de stas
sustancias.
4.
Se deja reposar el embudo con el vaso, en posicin vertical
durante 24 hrs.
5.
Los procedimientos para realizar las pruebas de identificacin de
almidn, glucosa y protenas se describe a continuacin:
PRUEBA DEL LUGOL PARA IDENTIFICAR ALMIDN:
a) Colocar una pequea cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.
b) Agregar 2 a 3 gotas de lugol.
c) Observar la reaccin. Si la muestra contiene almidn con lugol adquirir
una coloracin azul oscuro (reaccin positiva).
PRUEBA DE FEHLING PARA IDENTIFICACIN DE AZCARES
REDUCTORES:
a) Colocar una pequea cantidad de la muestra en un tubo de ensayo.
50
51
caractersticas de los resultados de las pruebas para cuando son positivas y/o
negativas.
5. Tomar cuatro muestras del agua destilada donde estuvo sumergida la
pelcula de gel en tubos de ensayo numerados y efectuar las reacciones para
las sustancias de la mezcla, anotando en cada caso, si la reaccin fue
positiva y/o negativa de acuerdo con la informacin del cuadro que se
presenta a continuacin:
REACCIONES DE IDENTIFICACIN
SUSTANCIA REACTIVOS
REACCIONES
POSITIVAS
Glucosa
Fehling
Coloracin o
precipitado cafrojizo
Almidn
Lugol
Solucin color azul
oscuro
Albmina
Xantoprotica
Precipitado amarillo
huevo
Biuret
Solucin violcea
Cloruro
sodio
de Nitrato de plata
Precipitado blanco
REACCIONES
NEGATIVAS
Solucin del color del
reactivo.
Solucin del color del
reactivo.
Solucin del color de
la albmina
Solucin del color del
reactivo.
Solucin transparente
incolora.
Informe de resultados
En el siguiente cuadro anotar los resultados de las pruebas realizadas al agua
donde se sumergi la pelcula de gel.
PRUEBA
Fehling
Lugol
Biuret
Nitrato de plata
Xantoprotica
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) De las sustancias utilizadas incluyendo el agua, decir cules son de
alto peso molecular y de bajo peso molecular.
Alto peso molecular
Bajo peso molecular
2) Indicar qu sustancias se encontraban en ambos lados de la
membrana de gel en el siguiente esquema:
52
Interior
Exterior
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PRCTICA No. 11
OSMOSIS EN PLANTAS
OBJETIVO:
Demostrar el fenmeno de smosis mediante un modelo fsico que
simule este mecanismo en las clulas vegetales.
FUNDAMENTO:
53
54
Miel de abeja.
REACTIVOS:
Solucin de almidn al 1%.
Solucin de glucosa al 30%.
TCNICA:
1. Realizar un corte en uno de los extremos de la papa del tamao del
tapn de hule que se va a utilizar.
2. Quitar la pulpa dejando una capa delgada sin romper las orillas (5 mm
aproximadamente).
3. En el lado contrario pelar y dejar la superficie lisa. Esta parte ser la que
entre en contacto con el agua.
4. Llenar la papa con miel de abeja y coloca el tapn con el tubo de vidrio,
haz un poco de presin hasta que la mezcla suba ligeramente por el
tubo.
5. Ahora coloca la papa dentro del frasco embonndola sin romper, si no
puede sostenerse as, colocarle transversalmente los palillos para
dientes por debajo del tapn de hule para sostenerla dentro del frasco.
Llena el frasco con agua y coloca la papa en el frasco de manera que la
parte superior quede afuera del agua.
6. Marcar el tubo de vidrio donde se encuentre el nivel de la miel al
comienzo del experimento. Djalo en reposo durante 48 horas
aproximadamente y al cabo de este tiempo marca el nivel final
alcanzado por la miel.
7. Con el extremo que se le cort a la papa en el paso 1, realizar cortes en
forma de tiras y mantener cubiertos con una toalla de papel hmedo.
8. Los cortes deben ser uniformes y deben pesarse.
9. Colocar por partes iguales en los vasos con las soluciones de almidn y
glucosa. Anotar la hora en la cual se comenz e incubar durante 2
horas.
10. Retirar las rodajas y quitar el exceso de agua con una toalla absorbente,
anotar los cambios en textura y peso, realizando una tabla.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1. Por qu subi la miel a travs del tubo?
56
2.
3.
4.
5.
Qu es la presin osmtica?
Qu es un osmmetro? Dibuja uno.
Qu cambios fsicos se observaron en las rodajas de papa?
Qu variacin hubo con respecto al peso?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Jimnez, L. 2003. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Pearson
Educacin. Segunda edicin. Editorial Prentice Hall. Pgs. 82-86
2. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 110-112
3. Oram, R. 2002. Biologa. Sistemas vivientes. Mxico D.F. Primera
edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 94-95
4. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 68-70
5. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pg. 38
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PRCTICA No. 12
PLASMOLISIS EN PLANTAS
OBJETIVO:
Observar el fenmeno de plasmlisis en clulas vegetales y comparar la
morfologa de una clula turgente normal con la de una clula plasmolizada.
FUNDAMENTO:
57
58
El agua pasa a las clulas por smosis, con lo que llena las vacuolas
centrales y distiende las clulas. Estas se hinchan, con lo que se acumula la
llamada presin de turgencia, contra la pared celular rgida de celulosa. Esta
ltima puede estirarse muy poco, de modo que se alcanza un estado de
equilibrio dinmico en que la resistencia de la pared celular al estiramiento
impide cualquier incremento adicional en el tamao celular y no ocurre
movimiento neto de molculas de agua hacia el interior de las clulas.(2)
La presin de turgencia en las clulas es un factor de sostn importante
para el cuerpo de plantas no leosas. La presin de turgencia es aquella que
es ejercida por el contenido de la clula contra la pared celular. Ahora si el
lquido fuera de la clula es de ms concentracin de sales que la savia celular,
como al colocar la hoja de lechuga en solucin salina concentrada
(hipertnica), sale de la clula el agua de la savia. Finalmente, el contenido
celular ya no ejerce presin contra la pared celular. La presin de turgencia es
nula y la clula vegetal se ha marchitado. Cuando el volumen de la savia
celular disminuye por prdida de agua, la clula ya no es comprimida contra la
pared de celulosa, se retrae alejndose de dicha pared, a esto es, lo que se
conoce como fenmeno de plasmlisis (Ver Fig. 12.2).(3)
a) Antes
b) Despus
Figura 12.2 Plasmolisis 40x
MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Vaso de precipitado de 500 ml.
Cajas petri.
Gotero.
Navaja de un solo filo o de doble filo.
Pinzas de diseccin.
MATERIAL BIOLGICO:
Hojas de lechuga recin cortadas.
REACTIVOS:
Solucin saturada de sal.
TCNICA:
1. Cortar un fragmento de tejido vegetal, en este caso la hoja de lechuga
que trajiste y obsrvalo al microscopio haciendo una preparacin fresca.
Es conveniente de que realices un esquema de las clulas que ests
59
60
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PRCTICA No. 13
OBSERVACIN DE PLASTOS Y ESTOMAS
OBJETIVO:
Observar los diferentes plstidos que integran a las clulas vegetales,
as como tambin identificar los estomas presentes en las clulas de origen
vegetal.
FUNDAMENTO:
Las superficies de hojas y otros vegetales expuestas estn cubiertas con
una capa impermeable que ayuda a impedir la prdida excesiva de vapor de
agua. De este modo, la entrada y salida de gases se limita a poros diminutos,
denominados estomas, que suelen contraerse en las caras inferiores de las
hojas.
61
62
63
64
65
CUESTIONARIO:
1) Qu color toman los cloroplastos con el lugol y porqu?
2) Cmo regulan las clulas protectoras las aberturas y los cierres de los
estomas?
3) Existe alguna relacin entre la apertura y cierre de los estomas con la
fotosntesis?
4) Realiza un dibujo de un estoma poniendo en evidencia la circulacin de
agua y dixido de carbono.
5) Qu es un ostiolo?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera
edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 67-68, 364, 372-373
2. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pg. 54
3. Young, G. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 74-75
66
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PRCTICA No. 14
FOTOSNTESIS
OBJETIVO:
Observar el fenmeno de fotosntesis a travs del montaje de un
dispositivo artificial.
FUNDAMENTO:
La fotosntesis es el proceso que permite a los vegetales obtener la
materia y la energa que necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se
lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jvenes de
pigmentos capaces de captar la energa qumica.
Esta transforman en sus hojas a las sales minerales y el agua por
intervencin del bixido de carbono (CO2) en sustancias orgnicas sencillas
que despus pasan a formar la glucosa y finalmente el almidn desprendiendo
oxgeno (O2) El aporte de energa en los tejidos vivos procede de la conversin
de glucosa en bixido de carbono y agua para formar ATP (Ver Fig. 14.1).(2)
GENERALIDADES:
Los pigmentos que pueden ser encontrados en las hojas, los cuales
captan la energa qumica son:
67
MATERIAL:
1 Popote.
2 matraces de 125 ml con su respectivo tapn de hule no horadado.
68
MATERIAL BIOLOGICO:
Elodea (Elodea canadensis; planta acutica).
REACTIVOS:
Agua mineral de cualquier marca.
Azul de bromotimol.
TCNICA:
1.
Colocar una gota de azul de bromotimol en un matraz de 125 ml
(matraz 1).
2.
Diluir con agua carbonatada el azul de bromotimol y observar la
coloracin. Anotando en el cuadro de resultados (Nota: Tapar el matraz
hermticamente con el tapn de hule para evitar fugas de dixido de
carbono).(Observar esquema en el catalogo de imgenes)
3.
Colocar en otro matraz (matraz 2), una gota de azul de
bromotimol y diluir con agua (Nota: el pH del agua con que se trabaja debe
tomarse en cuenta ya que modificar los resultados, en este caso debe ser
neutra o ligeramente alcalina).
4.
Soplar con un popote dentro del agua hasta cambio de
coloracin. Tapar el matraz. Anotar observaciones.
5.
Colocar dentro de ambos matraces una ramita de Elodea,
taparlos nuevamente y esperar de 30 a 60 minutos.
6.
Matraz 2
Con aire exhalado
Azul de bromotimol
Planta acutica
OBSERVACIONES CON DIBUJOS
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Qu indica el color de la solucin del matraz 1 del experimento?
2) Anotar la reaccin qumica que se lleva a cabo en el matraz 2 debido a
la cual se da el cambio de coloracin. Debajo de la reaccin anotar el
nombre de cada una de las sustancias.
3) Qu compuesto est presente en la solucin del matraz 2 el cual es
responsable del cambio de coloracin?
4) Qu sucede en las soluciones de ambos matraces con la presencia
de la planta acutica?
69
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 97-102
2. Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.
131-136
3. Nason, A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Primera edicin.
Editorial Limusa. Pgs. 185-187, 371-377
4. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 79-86
70
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LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 15
ELABORACIN DE ALMIDN EN LAS PLANTAS VERDES
OBJETIVO:
Verificar si la energa que la hoja de geranio recibe se distribuye
uniformemente y permite que haya fotosntesis en toda la hoja cuando solo una
parte de ella es iluminada por la luz solar.
FUNDAMENTO:
Las hojas contienen pigmentos que estn asociados con la produccin
de almidn, sustancia de reserva insoluble producto de la fotosntesis. Para su
elaboracin se necesita energa, y la fuente de sta es el sol. El almidn es la
sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en races, tubrculos,
frutas y semillas. Pero, no slo es una importante reserva para las plantas,
tambin para los seres humanos tiene una alta importancia energtica,
proporciona gran parte de la energa que consumimos los humanos por va de
los alimentos.
El almidn se diferencia de los dems hidratos de carbono presentes en
la naturaleza en que se presenta como un conjunto de grnulos o partculas.
Estos grnulos son relativamente densos e insolubles en agua fra, aunque
pueden dar lugar a suspensiones cuando se dispersan en el agua.
Suspensiones que pueden variar en sus propiedades en funcin de su origen.
(3)
GENERALIDADES:
Los azcares, almidones y celulosa son carbohidratos. Los azcares y
los almidones sirven como fuentes de energa para las clulas, en tanto que la
celulosa es el componente estructural principal de las paredes que rodean a las
clulas vegetales. Los carbohidratos se componen de tomos de carbono,
hidrogeno y oxgeno en proporcin aproximada de un tomo de carbono por
dos de hidrogeno y uno de oxgeno.
El almidn, que es la forma habitual de carbohidrato empleado para
almacenamiento de energa en las plantas, es un polmero consistente en
subunidades de -glucosa. Los monmeros estn unidos por enlaces 1-4 , lo
cual significa que el carbono 1 de una glucosa est unido al carbono 4 de la
siguiente glucosa en la cadena. El almidn tiene dos formas, amilasa y
amilopectina. La primera, ms sencilla, no est ramificada, en tanto que la
amilopectina, que es ms frecuente, suele consistir en alrededor de 1000
unidades en una cadena ramificada (Ver Fig. 15.1).(4)
71
72
2.
Transcurrido este tiempo, saca la planta, qutale el papel
peridico y exponla a la luz solar durante un par de horas.
3.
4.
Extraer la clorofila hirvindolas a bao mara en el alcohol etlico
hasta total decoloracin
5.
6.
Transcurrido el tiempo, retira las hojas y colcalas sobre papel
absorbente, procurando extenderlas perfectamente, coloca otro papel
encima de ellas, adems algo pesado para evitar que se deformen.
7.
Una vez seca la hoja, observa los pequeos puntos negros
distribuidos en la superficie de la hoja. Basndose en las evidencias
obtenidas en este experimento, establece un enunciado sobre el efecto de
la luz en el proceso de fotosntesis.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cul es la estructura qumica del almidn?
2) Cul es la funcin del almidn en las plantas?
3) Qu funcin tiene el lugol en esta practica?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Campbell, N. 2005. Biology. Mxico D.F. Sptima edicin. Editorial
Pearson-Benjamin Cummings. Pgs. 103-104
2. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 77-79
3. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc Graw
Hill. Pgs. 92-93
4. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial Nueva
Imagen. Pgs. 89-91
5. El rincn de la ciencia. Abril 2003. M.A. Gmez.
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Curiosid/Rc-58.htm
73
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PRCTICA No. 16
PRESENCIA DE GLUCOSA EN LAS HOJAS DE LAS PLANTAS VERDES
OBJETIVO:
Demostrar la presencia de glucosa en las hojas de las plantas verdes
utilizando el reactivo de Fehling para identificacin de azcares reductores.
FUNDAMENTO:
Cada hoja es un rgano de nutricin especializado, cuyo papel es la
fotosntesis. A la luz solar una planta puede producir 20 veces ms alimento del
que gasta por unidad de tiempo. En otros momentos, durante la noche o el
invierno consumen ms alimento del que producen. Cada planta acumula
reservas de alimentos para resistir los periodos en los cuales no hay
fotosntesis (Ver Fig. 16.1). (3)
74
distinta, la glucosa tiene depsitos en hojas, tallos o races. Las hojas son
depsitos momentneos de los alimentos, poco adecuados para los periodos
prolongados, pues se pierden rpidamente.(5)
Gran parte de la glucosa producida en un da es convertida en almidn y
almacenada en las hojas. El almidn es hidrolizado subsecuentemente de
nuevo a glucosa, la cual es translocada en el floema al tallo y races. El
movimiento de sustancias alimenticias en el floema depende de la actividad
metablica de las clulas del floema. Una variedad de pruebas que penetran en
forma de solutos que se mueven en soluciones, que a su vez se movilizan
debido a diferencias en el potencial hdrico, causado por gradientes de
concentracin de azcar y otros productos de fotosntesis y agua. Esto
aumenta la presin dentro de las clulas del floema y tiende a empujar lquido
de una clula a la adyacente, a esta hiptesis se le conoce como de presin de
flujo.(2)
MATERIAL:
Mortero.
Bao mara
Pinzas para tubo de ensayo.
Mechero
Tubos de ensayo de 15 x 125 mm.
Embudo mediano.
Vaso de precipitado de 500 ml.
Vaso de precipitado de 250 ml.
Agitador de vidrio.
Gasa.
Pipeta de 5 ml.
MATERIAL BIOLGICO:
6 7 hojas verdes de espinacas.
REACTIVOS:
Solucin de Fehling A
Solucin de Fehling B.
TCNICA:
1. Triturar perfectamente las hojas de espinacas en el mortero,
posteriormente del triturado, colocarlas en un vaso de precipitado de 500
ml.
2. Agregar agua corriente suficiente para cubrir el triturado y agitar hasta
que obtengas una mezcla uniforme, cuidando que la mezcla no te quede
muy diluida, deber quedar semilquida.
3. Filtrar la mezcla en el segundo vaso de precipitado, esta filtracin la
debers de hacer con la gasa para que sea un poco ms rpido y no
tenga restos de las hojas que trituraste.
75
POSITIVIDAD
+
INTENSIDAD DE COLOR
Color verde, precipitado verde
o amarillo.
50
++
Color amarillo a verde,
precipitado amarillo.
75
+++
Color amarillo anaranjado,
precipitado amarillo a naranja.
100
++++
Color amarillo rojizo,
precipitado rojo ladrillo o rojo
Negativa: Color azul claro (Puede formarse un precipitado amarillo).
Trazas: Color verde azulado.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Para qu utilizan la glucosa los seres vivos?
2) Cmo est integrada la solucin de Fehling y cul es su utilidad?
3) Cul es la funcin del tejido vascular en una planta?
4) Cmo est integrado el tejido vascular en las plantas?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos.
Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 87-91
76
77
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PRCTICA No. 17
CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL DE ORGANELOS CELULARES
OBJETIVO:
Realizar un fraccionamiento celular e identificar en ste los organelos de
clulas animales.
FUNDAMENTO:
Las clulas eucariontes tienen organelos celulares delimitados por una
sola membrana. Todos ellos pueden ser separados utilizando mtodos de
centrifugacin diferencial y por gradientes de densidad. Dado que la mayora
de los organelos tienen diferente peso molecular, viscosidad o densidad.
Existen diversos tipos de purificacin de organelos, uno de ellos es la
ultracentrifugacin, que consiste en separar las clulas u organelos presentes
en una mezcla celular sometindola a una fuerza centrifuga. Mediante una
ultracentrfuga se alcanzan velocidades de ms de 100 000 rpm, para generar
una fuerza centrifuga de 500 000 G; con lo cual se logra separar a la mezcla en
dos porciones.(2)
GENERALIDADES:
Las membranas tienen propiedades nicas que permiten a los organelos
membranosos realizar una amplia variedad de funciones. Las membranas
celulares nunca tiene extremos libres; as, un organelo membranoso siempre
contiene cuando menos un espacio interno cerrado o compartimiento. Estos
compartimientos rodeados por membrana permiten que determinadas
actividades celulares se localicen dentro de regiones cerradas especficas de la
clula.
Los reactivos que se concentran en solo una pequea parte del
volumen celular total tienen mucha mayor probabilidad de entrar en contacto, y
la velocidad de reaccin puede aumentar en grado notable. Los
compartimientos rodeados por membrana tambin mantienen determinados
compuestos reactivos alejados de otras partes de la clula que podran verse
afectadas adversamente por ellos.(1)
Los procedimientos de fraccionamiento celular son mtodos de
purificacin de organelos. En general, se fraccionan las clulas con la mayor
suavidad posible y la mezcla, llamada extracto celular, se somete a fuerza
centrfuga para hacerla girar en un dispositivo llamado centrfuga (Ver Fig.
17.1). Tal fuerza separa el extracto en dos fracciones: un comprimido y un
sobrenadante. El comprimido, que contiene los materiales ms pesados
densamente compactados, se forma en el fondo del tubo. El sobrenadante, o
sea el lquido que queda encima del comprimido, contiene las partculas ms
ligeras, molculas disueltas, e iones.
78
Portaobjetos
Cubreobjetos
MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de pollo fresco.
REACTIVOS:
Buffer de separacin (buffer de fosfatos 10mM y de cloruro de sodio
0.15 M, KCl 3.3 mM y MgCl 2.6 mM a pH 7.4)
Gradiente de sacarosa 25 M
Verde janus
Azul de bromotimol
TCNICA:
Tcnica para centrifugacin celular. Fraccionamiento celular.
1. El hgado se enjuaga con agua de la llave y se coloca en un vaso de
precipitado, que contenga 20 ml del medio de extraccin, se desmenuza
con las tijeras remplazando de 2 a 3 veces el medio.
2. Se vierte el contenido del vaso en una licuadora y se lica. Pasar a los
tubos y centrifugar a 2000 rpm durante 10 minutos, retirar el
sobrenadante y guardarlo.
3. A la fraccin obtenida, se le agrega buffer en proporcin 1:4 (colocar 4
veces el volumen de la fraccin obtenida de buffer) y se guarda para
hacer las observaciones de los organelos.
Observacin de mitocondrias: el sobrenadante que se obtuvo de la
centrifugacin anterior, pngalo a centrifugar a 5000 rpm durante
15 minutos. Quite el sobrenadante y no lo tire, el sedimento
contiene las mitocondrias, resuspenda con buffer en proporcin 1:4.
tome 0.1 ml y se tie con 1 ml de verde janus por 10 minutos y se
observa al microscopio buscando en seco fuerte la estructura
(bastoncillos de color verde) y despus observando con el objetivo
de inmersin.
Observacin de uricosomas: El sobrenadante de la centrifugacin
anterior se vuelve a centrifugar aproximadamente 20 minutos a
7000 rpm. El sedimento presuntamente contiene las uricosomas, el
cual debe resuspenderse suavemente con buffer con la proporcin
1:4. colocar el un portaobjetos con una gota de azul de bromotimol
y observar al microscopio buscando en seco fuerte la estructura
(bastoncillos de color azul) y despus observando con el objetivo
de inmersin.
Observacin de lisosomas: Se centrifuga el sobrenadante anterior a
7000 rpm durante 30 minutos, el sobrenadante de la centrifugacin
ser posible fuente de lisosomas. Colocar en un portaobjetos con
una gota de azul de bromotimol y observar al microscopio
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LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
PRCTICA No. 18
CATALASA: UNA ENZIMA PRESENTE EN TEJIDOS ANIMALES Y
VEGETALES
OBJETIVO:
Identificar la presencia de la catalasa en diversos tejidos de origen
animal y vegetal.
FUNDAMENTO:
La catalasa es una enzima oxidante que se encuentra en organismos
vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno
y agua. Existe prcticamente en todas las clulas excepto en ciertas bacterias
anaerobias. El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de
muchos organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse
rpidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello se usa con frecuencia
esta enzima que cataliza su descomposicin. Adems la catalasa se usa en la
industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en
menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han
esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno.
La catalasa es una proteina tetrmero formada por cuatro subunidades
idnticas (350,000 kD). Cada monmero contiene un grupo prosttico Hemo en
el centro activo. En algunas especies tambin contiene una molcula de NADP
por subunidad cuya funcin es proteger a la enzima de la oxidacin por su
sustrato H2O2.(1)
GENERALIDADES:
Las enzimas son protenas catalizadoras producidas por las clulas
vivas; regulan la rapidez y especificidad de las miles de reacciones qumicas
intracelulares. Aunque las enzimas son sintetizadas dentro de las clulas, no
tienen que estar en el interior de la clula para actuar como catalizador;
muchas se han extrado de las clulas y as conservan su actividad completa.
Pueden purificarse o cristalizarse para estudiar sus propiedades catalticas.
Las reacciones reguladas por enzimas son fundamentales para todos
los fenmenos vitales: respiracin, crecimiento, fotosntesis, contraccin
muscular, conduccin nerviosa, fijacin de nitrgeno, desaminacin, digestin
etctera.(2)
Las enzimas suelen ser incoloras, pero las hay amarillas, verdes, azules,
pardas o rojas. Casi todas ellas son solubles en agua o soluciones salinas
diluidas, aunque algunas, por ejemplo, las de las mitocondrias, estn unidas
por una lipoprotena y resultan insolubles en agua.
El poder cataltico de algunas enzimas es en verdad extraordinario. Una
molcula de catalasa, que contiene hierro, obtenida de hgado de res, logra el
desdoblamiento de unos cinco millones de molculas de perxido de hidrogeno
83
(H2O2) por minuto a 0C. La sustancia sobre la cual acta la enzima se llama
sustrato; en este caso, el perxido de hidrogeno es el sustrato de la enzima
catalasa. (Ver Fig. 18.1).
6.
Tomar otro par de tubos y agrgales 5 ml de perxido de
hidrgeno al 3% en cada uno.
7.
Repite la operacin anterior con un par de porciones de otro
tejido. Contina de esta manera hasta que se haya investigado todas las
muestras de tejido.
8.
Realiza otros cortes y tritralos en un mortero por separado.
Enjuaga el mortero cada vez que se vaya a triturar un tejido distinto.
9.
Colcalos en 5 ml de solucin de perxido de hidrgeno al 3% en
tubos de ensayo limpios y agrega una porcin de tejido. Observa y anota los
resultados. Contina de esta manera hasta que se hayan investigado todas
las muestras de tejido.
85
10.
Se recomienda que los tubos se sujeten con las pinzas para tubo
de ensayo, para evitar la transferencia de calor y por lo tanto la activacion
del peroxido de hidrogeno.
11.
Armar el calorimetro como lo muestra la figura 18.2 y colocar en
el 10 ml de perxido de hidrgeno al 3% en la cmara de reaccin, moja el
bulbo del termmetro y psalo a travs del tapn horadado, el bulbo del
termmetro debe tocar el lquido.
12.
Anota la temperatura inicial. Una vez que se ha determinado la
temperatura inicial del perxido de hidrgeno, en el calormetro, introduce
dos gotas de extracto de hgado. Inserta el tapn en su lugar sin que quede
apretado, para permitir el escape de cualquier gas que se genere.
13.
Anota los cambios de temperatura de la cmara de reaccin cada
30 segundos, hasta un periodo de 5 minutos y repite este procedimiento dos
veces ms con perxido de hidrgeno fresco y ms extracto de hgado.
Calcula el promedio de las mediciones de temperatura para cada intervalo
de 30 segundos anotando los resultados. Posteriormente realiza una grfica
con los resultados, en el eje de las x tiempo en segundos y en el eje de las
Y temperatura en C.
ANOTA LOS RESULTADOS EN LAS SIGUIENTES TABLAS:
TEJIDO
TEJIDO TRITURADO
HERVIDO
SIN HERVIR
RESULTADOS
86
60
seg
30
seg
60
seg
30
seg
60
seg
30
seg
60
seg
30
seg
60
seg
Temperatura
s iniciales
Temperatura
s iniciales
Temperatura
s iniciales
Promedio
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cul es el cambio total de temperatura que tuvo lugar en la cmara de
reaccin?
2) Cul es la fuente del calor determinado en este experimento?
3) Si la catalasa es una enzima que rompe el perxido de hidrgeno
formando oxgeno y agua, De qu manera se muestra en nuestro
experimento la presencia o ausencia de catalasa en los tejidos?
4) De los tejidos experimentados, Cul de ellos es el ms activo?, Cul
es el menos activo?
5) Qu se puede inferir de los resultados obtenidos, sobre la actividad de
la catalasa en los tejidos hervidos y sin hervir?
6) Frecuentemente se utiliza perxido de hidrgeno como antisptico y se
observa que al aplicarlo a una herida se produce burbujeo, Qu es lo
que indica este hecho?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 119-122
2. Maillet M. 2002. Biologa celular: manual. Barcelona. Segunda edicin.
Editorial Masson. Pgs. 157-158
3. Plattner, H. 2001. Manual de biologa celular. Barcelona. Primera
edicin. Editorial Omega. Pgs. 137-139
4. M Beln Garrido Garrido 2002.
http://w3.cnice.mec.es/eos/MaterialesEducativos/mem2002/proteinas/pr
ctica/catalasaboton.html
http://br.geocities.com/saladefisica5/leituras/calorimetro20.gif
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PRCTICA No. 19
IDENTIFICACIN DE FOSFATASA ACIDA EN LISOSOMAS
OBJETIVO:
Identificar la presencia de fosfatasa cida como marcador de los
lisosomas.
FUNDAMENTO:
En el citoplasma de la mayor parte de las clulas eucariticas hay
dispersos pequeos sacos de enzimas digestivas, llamados lisosomas. Las
enzimas de stos organelos desdoblan molculas complejas cuyo origen es
tanto intracelular como extracelular. Se han identificado 40 enzimas digestivas
distintas en los lisosomas; la mayor parte son activas en condiciones bastante
cidas (pH 5). La potencia de las enzimas y el bajo pH mantenido por el
lisosoma son buenos ejemplos de la importancia de la separacin de funciones
en distintos compartimientos. (4)
En la mayor parte de las condiciones normales, las enzimas lisosmicas
y sus acciones estn limitadas por la membrana de dicho organelo. Algunas
formas de dao tisular se han atribuido a la fuga del contenido de los
lisosomas. Los lisosomas primarios se forman por gemacin en el complejo de
Golgi. Sus enzimas hidrolticas se sintetizan en el retculo endoplsmico
rugoso. A medida que estas enzimas pasan por la luz del retculo
endoplsmico, se agregan azcares a cada molcula, a manera de seales de
identificacin. Esta seal permite al complejo de Golgi enviar de manera
apropiada la enzima a los lisosomas en lugar de exportarla de la clula.(5)
GENERALIDADES:
Los lisosomas degradan bacterias o desechos que han sido ingeridos
por clulas fagocticas. El material ingerido es rodeado por una vescula que se
forma con parte de la membrana plasmtica. Uno o ms lisosomas primarios se
fusionan con la vescula que contiene la materia extraa y se forma una
vescula mayor, llamada lisosoma secundario. Las potentes enzimas digestivas
del lisosoma entran en contacto con las molculas ingeridas y las degradan en
sus componentes.
Las enzimas lisosmicas tambin son liberadas en la clula en algunos
procesos normales. Las enzimas lisosmicas son recicladas por la propia
estructura de la clula. Un lisosoma puede engullir otro organelo, digerirlo y
regresar sus componentes al citosol para que vuelvan a ser usados. De esta
manera hay un reemplazo contnuo de los organelos viejos. En resumen, las
principales funciones de los lisosomas son: la digestin de los organelos
desechados, digestin de la clula entera, digestin extracelular y fusiona y
digiere el contenido de los endosomas tardos, vesculas pinocitticas y
fagosomas.(3)
88
Buffer
acetatos ml
3
2.7
3
2.7
3
2.7
3
2.7
3
2.7
Sustrato
(p-Nf) ml
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
Fracciones de
hgado ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
89
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PRCTICA No. 20
NCLEO
OBJETIVO:
Observar e identificar el ncleo en clulas origen animal.
FUNDAMENTO:
El ncleo suele ser el organelo ms predominante de la clula. Se
encuentra rodeado por una envoltura nuclear y se encuentra solo en clulas
eucariotas, y es la localizacin de la mayora de los diferentes tipos de cidos
nucleicos. Por lo comn es esfrico u oval y tiene un dimetro promedio de 5
m debido a su tamao y al hecho de que ocupa una posicin relativamente fija
en el centro de las clulas se le denomin el centro de regulacin de la clula.
En su interior encontramos toda la informacin gentica de la clula en forma
de acido desoxirribonucleico (ADN), que presenta diversas organizaciones a lo
largo de la vida celular.(2)
Para esta prctica utilizaremos una sustancia buffer o amortiguador que
sirve como regulador del pH al adicionarse al agua, volvindose este constante.
De esta manera, si se agregan un cido o una base, no tendrn efecto alguno
sobre el agua, ya que sta siempre se estabilizar de inmediato.(4)
GENERALIDADES:
El ncleo est rodeado por un par de membranas concntricas, que
separan el contenido nuclear respecto del citoplasma circundante. Estas dos
membranas guardan entre s una distancia de 40 a 40 nm y se fusionan a
intervalos, en los llamados poros nucleares, que regulan el paso de
determinados materiales hacia el citoplasma desde el interior del ncleo, y a la
inversa.
Dentro de la membrana nuclear se encuentra un medio semifluido en el
cual estn suspendidos los cromosomas. Por lo general se encuentran en
forma de estructuras muy alargadas y no pueden ser observados fcilmente
con el microscopio ptico. Se utiliza el trmino cromatina para referirse a los
cromosomas cuando se hallan bajo esta condicin.
Cuando la clula va a dividirse en dos clulas, se modifica la apariencia
de los cromosomas. Los hilos largos y delgados se enrollan en forma de
cuerpos espesos, densos, los cuales pueden verse en el microscopio ptico
con la ayuda de un colorante apropiado. Durante el proceso de la divisin
celular, los cromosomas se distribuyen en nmeros exactamente iguales entre
ambas clulas hijas.(3)
Qumicamente, los cromosomas estn compuestos de ADN y protenas,
llamadas histonas que son las principales asociadas a los cromosomas. Las
histonas son protenas bsicas, debido a que son ricas en aminocidos tales
91
MATERIAL:
Microscopio.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Mortero con pistilo.
Embudo.
Papel filtro.
Vaso de precipitado.
92
Pipetas graduadas.
Pipeta pasteur.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Centrifuga.
Licuadora.
MATERIAL BIOLGICO:
Hgado de pollo fresco.
REACTIVOS:
Buffer de separacin (buffer de fosfatos 10mM
sodio0.15 M, KCl 3.3 mM y MgCl 2.6 mM a pH 7.4)
Acetorcena.
y cloruro de
93
94
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PRCTICA No. 21
DETERMINACIN DEL SEXO A TRAVS DE LA OBSERVACIN DEL
CORPSCULO DE BARR
OBJETIVO:
Observar el corpsculo de Barr en clulas de epitelio bucal de mujeres y
contrastando con clulas de epitelio bucal de varones.
FUNDAMENTO:
Barr y Bertrn descubrieron en 1949 un diminuto cuerpo cromtico en
las clulas nerviosas de un gato hembra, el cual, no estaba presente en las
clulas de los machos. Dado que la observacin se repiti en otros tejidos y en
otros animales incluyendo el ser humano.
Actualmente la tcnica se utiliza en la determinacin del sexo, (en atletas
que participan en pruebas olmpicas y otras de carcter internacional), en la
investigacin de estados intersexuales y en algunos de aberraciones
cromosmicas.(1)
GENERALIDADES:
El cromosoma X contiene numerosos genes requeridos por ambos
sexos, aunque una hembra normal tiene dos copias de cada locus, en tanto
que un macho normal tiene solo una. La compensacin de dosis es un
mecanismo que hace equivalentes las dosis de la hembra y la dosis nica del
macho. En la mayor parte de los tejidos, el cromosoma X masculino es tan
activo como los dos cromosomas X presentes en la hembra.
En los mamferos, la compensacin de dosis por lo general implica la
desactivacin de uno de los cromosomas X de la hembra. Durante la interfase,
en el borde del ncleo de cada clula femenina de los mamferos es visible una
mancha oscura de cromatina, llamada cuerpo o corpsculo de Barr (Ver Fig.
21.1). Se ha observado que el cuerpo de Barr representa uno de los dos
cromosomas X, que se ha hecho denso.
95
96
Colorante de acetorcena.
cido clorhdrico 0.1 M.
Acetorcena al 2%.
Mezcla de cido actico al 45% y alcohol etlico (3:1).
TCNICA:
1.
Tomar una muestra de la mucosa bucal, raspando suavemente
con abatelenguas.
2.
Colocar la muestra en un portaobjetos y con otro hacer un
extendido.
3.
En seguida colocar dos gotas de colorante en la lmina.
Posteriormente se coloca el cubreobjetos pudindose hacer la lectura en el
momento.
4.
Observar al microscopio con los objetivos seco dbil, seco fuerte
e inmersin.
5.
Asegurarse de barrer todos los campos antes de reportar la
ausencia de corpsculos de Barr. La literatura indica que en muestras de
mucosa bucal la frecuencia puede variar entre el 20% y 50%.
6.
Realizar dibujos de las muestras observadas tanto en hombres
como en mujeres.
TCNICA ALTERNATIVA:
1.
Lavar perfectamente los portaobjetos y cubreobjetos con una
mezcla de alcohol etlico-cido actico al 45%.
2.
Con el abatelenguas raspar nuevamente la parte interna de la
mejilla para tomar la muestra.
3.
4.
Etiquetar el portaobjetos segn sea el origen de la muestra
(hombre y/o mujer).
5.
Agregar una gota de cido clorhdrico y dejarla reposar por 20
minutos.
6.
7.
Agregar una gota de acetorcena al 2% y dejarla reposar por 20
minutos.
8.
Lavar con el cido actico dejndolo gotear sobre el portaobjetos
inclinado. Enjuagar con agua destilada.
97
9.
Colocar el cubreobjetos y sellar sus bordes con el barniz o con
parafina caliente.
10.
Observar al microscopio con el objetivo seco dbil, seco fuerte e
inmersin.
11.
Realizar dibujos de las observaciones, tanto en las muestras
provenientes del varn como de mujer, resaltando en su caso el
corpsculo de Barr.
NOTA: Para obtener mejores resultados es necesario filtrar momentos antes a
la realizacin de la prctica, la solucin de acetorcena al 2% para que el
precipitado no interfiera en la observacin.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Por qu no se observa el Corpsculo de Barr en varones?
2) En que enfermedades puede observarse el Corpsculo de Barr en
hombres y no en mujeres?
3) Cul es la utilidad que se le puede dar a esta prueba y en que reas
puede ser aplicada?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 173-174
2. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 1059-1060
3. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 578-579
98
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PRCTICA No. 22
MITOSIS EN CLULAS VEGETALES
OBJETIVO:
Observar en clulas de origen vegetal las diferentes fases de la divisin
mittica.
FUNDAMENTO:
Se llama ciclo celular al periodo de crecimiento y divisin de una clula.
La mitosis es un proceso mediante el cual las clulas se multiplican. Cada
clula madre dar por resultado dos clulas hijas que tendrn el mismo nmero
de cromosomas que la original (Ver Fig. 22.1).
99
100
101
5.
Agregar al corte 2 3 gotas de solucin de acetorcena. Dejar as
de 18 a 20 minutos. Indispensable cronometrar los tiempos indicados
anteriormente.
102
6.
Lavar el excedente de acetorcena con cido actico al 45%.
Enjuagar con agua destilada.
7.
Con una gota de agua, poner el cubreobjetos sobre el corte.
Presionar firmemente con la goma del lpiz, sobre el cubreobjetos,
movindolo suavemente para extender el tejido.
8.
Sellar los bordes del cubreobjetos con el barniz o con parafina
caliente, usando un pincel.
9.
Buscar al microscopio, a seco fuerte, una zona de clulas
meristemticas, observando despus con el objetivo de inmersin.
10.
Realizar los dibujos correspondientes de las diferentes fases de la
mitosis en la(s) muestra(s) observada(s)
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) Cuantos tipos de reproduccin existen? Descrbalos con sus
caractersticas en un cuadro sinptico.
2) En que fase del ciclo celular ocurre la replicacin del ADN?
3) En que momento principia la citocinesis?
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:
1. Alarcn-Segovia, D. 2003. Fronteras de la biologa en los inicios del
siglo XXI. Mxico, D.F. Segunda edicin. Editorial El Colegio Nacional.
Pgs. 89-95
2. Barthelemy, R. 2003. Tcnicas para el laboratorio de biologa. Mxico
D.F. Primera edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 121-129
3. Curtis, H. 2004. Biologa. Mxico D.F. Sexta edicin. Editorial
panamericana. Pgs. 139-149
4. Nelson, J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F.
Segunda edicin. Editorial Limusa, S.A. Pgs. 166-171
5. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 95-107
6. Lodish, H. 2005. Biologa celular y molecular. Mxico D.F. Quinta
edicin. Editorial panamericana. Pgs. 178-181
7. Tortora, G. 2002. Principios de anatoma y fisiologa. Mxico. Novena
edicin. Editorial Oxford. Pgs. 93-97
8. Villee, C. 2003. Biologa. Mxico D.F. Octava edicin. Editorial Mc
Graw Hill. Pgs. 47-52
9. Young, A. 2001. Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial
Nueva Imagen. Pgs. 115-123
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PRCTICA No. 23
MEIOSIS
OBJETIVO:
Observar en clulas de origen animal las diferentes fases de la divisin
meitica.
FUNDAMENTO:
La meiosis consiste en dos divisiones nucleares y citoplasmticas,
designadas primera y segunda divisiones meiticas, o simplemente meiosis I y
meiosis II. Cada una comprende profase, metafase, anafase y telofase (Ver
Fig. 23.1).
104
GENERALIDADES:
La mitosis produce la formacin de clulas que tiene exactamente el
mismo nmero de cromosomas que la clula madre. Ello implicara dificultades
si stas clulas formadas por mitosis tuvieran que servir de gametos. Si se
uniera un espermatozoo humano provisto de 46 cromosomas con un vulo que
tuviera 46 cromosomas, se producira un cigoto con 92 cromosomas; es decir,
el doble del numero normal de cromosomas de la especie humana. El
desarrollo del cigoto mediante mitosis implicara que todas las clulas
subsiguientes tendran el nuevo nmero de cromosomas. Se comprender
inmediatamente que despus de unas pocas generaciones en la cuales se
repite el proceso, no habra espacio disponible en la clula para nada ms que
cromosomas.
En realidad, esta situacin raras veces ocurre en los seres vivientes. En
determinado momento entre la formacin del cigoto y la de los gametos debe
ocurrir un tipo especial de divisin celular. Este tipo especial de divisin celular
se denomina meiosis. La meiosis consiste en dos divisiones celulares
consecutivas, pero que comprenden una sola duplicacin de los cromosomas.
(5)
Por consiguiente, cuando una clula se divide por meiosis se producen
cuatro clulas. Cada una contiene precisamente la mitad del nmero diploide
normal 2n de cromosomas. Este medio nmero se denomina haploide o n. La
reduccin del nmero de cromosomas no es un proceso al azar. En las clulas
que se han reproducido por meiosis est presente nicamente un solo miembro
de cada uno de los pares de cromosomas homlogos de la clula diploide.
De tal manera que cuando los dos gametos se unen, el cigoto resultante
(2n) obtiene un miembro de cada par de cromosomas homlogos procedente
de cada gameto y por ende de cada progenitor. Cada una de las dos divisiones
meiticas puede subdividirse en fases similares a las que ocurre en la mitosis.
Sin embargo, en la primera de dichas divisiones se observan diferencias
significativas en el comportamiento de los cromosomas.(7)
PROFASE I. la profase de la primera divisin meitica es un proceso
mucho mas lento y ms complejo que en la mitosis. Los citlogos subdividen la
primera profase meitica en cinco estadios. Cuando los cromosomas se hacen
visibles por primera vez (leptoteno de la profase I), cada homlogo aparece
como una estructura individual. Pero en gran parte, sino todo, el ADN de la
clula se ha duplicado durante la fase S que precede de la profase I, de tal
manera que podemos concluir que los cromosomas en realidad ya se han
duplicado.
A medida que contina la profase (cigoteno y paquiteno), cada
cromosoma presente en la clula se aparea longitudinalmente con su
homlogo. Este proceso de apareamiento (llamado sinapsis) es un rasgo
excluido de la meiosis; no ocurre en la mitosis. Los homlogos apareados
reciben el nombre de bivalentes. Luego (estadio diploteno), los dos homlogos
comienzan a separarse. En este momento la estructura doble de cada
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PRCTICA No. 24
EXTRACCIN DE ADN
OBJETIVO:
Observar la hlice del ADN, realizando una extraccin sencilla a partir de
sangre total.
FUNDAMENTO:
Los cidos nuclicos reciben este nombre porque fueron los primeros
que se descubrieron en el ncleo de las clulas; se trata de molculas
orgnicas gigantes que contienen carbono, nitrgeno, hidrgeno, oxgeno y
fsforo. Los cidos nuclicos son de dos tipos: el primero, el cido
desoxirribonuclico (ADN), constituye el material gentico dentro de la clula.
Cada gen es un segmento de una molcula de ADN. Nuestros genes
determinan los rasgos que heredaremos y, que mediante el control de las
sntesis de protenas, regulan las actividades que tienen lugar en nuestras
clulas a lo largo de la vida y, el segundo el acido ribonucleico (ARN). (1)
GENERALIDADES:
La molcula de ADN es lineal sin ramificaciones, forma hebras largas,
est formada por dos cadenas de polinucletidos enrolladas alrededor del
mismo eje, comnmente conocida como doble hlice con giro a la derecha,
cada una de ellas est formada por los fosfatos al exterior en contacto con el
medio acuoso, stos se unen en el C5 y C3 de un azcar de cinco tomos de
carbono llamado desoxirribosa se une a cada base en el ADN.(3)
Las bases pricas y pirimdicas se enlazan en el extremo opuesto del
azcar; las cuatro bases son: Adenina (A), Guanina (G), Tiamina (T) y Citosina
(C). La adenina y la guanina son bases grandes de anillos dobles llamadas
purinas; la timina y la citosina son bases ms pequeas de un solo anillo
denominadas pirimidinas; se sitan en la parte interna de la molcula,
quedando perpendicularmente al eje, se enlaza una base prica con una
pirimdica por medio de puentes de hidrogeno, lo que le da mayor resistencia a
la desnaturalizacin. Las cadenas de ADN son antiparalelas, es decir siguen
direcciones opuestas, una va en sentido 5 a 3 y la opuesta en direccin 3 a 5
(Ver Fig. 24.1).(5)
110
Al
enrollarse
las
cadenas,
se Figura 24.1 Unin de las bases pricas y pirimdicas del ADN
forman
dos
surcos o hendiduras paralelos a los giros de la hlice, uno mayor que el otro.
En estos sitios las protenas interactan con los tomos de los nucletidos y
controlan la expresin de genes especficos. La estructura mencionada se
denomina configuracin B, si las condiciones fisiolgicas se alteran, poca sal o
hidratacin elevada, la doble hlice cambia de forma y adquiere conformacin
A, C, D, E y Z. La configuracin B es la ms estable y contiene por cada vuelta
10 pares de bases, se observa in vivo. La configuracin A es la ms torcida,
tiene 11 pares de bases por cada vuelta, las bases estn inclinadas 20 grados
de la perpendicular al eje de la hlice, fue la primera obtenida in vitro. La
configuracin C es estrechamente espiralaza, compacta, tiene 9 1/3 pares de
bases, la posicin de los nucletidos es diferente. La configuracin Z tiene un
giro a la izquierda, el eje est en zigzag, es poco estable ya que diferentes
partes de la molcula quedan expuestas.(6)
MATERIAL:
Microscopio
Cubreobjetos
Portaobjetos
Pipetas
Probeta.
Varilla de vidrio.
Mortero
Vasos de precipitado
Arena
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112
113
APNDICE A
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR
El laboratorio es un rea de trabajo en la cual hay muchos riesgos en
general, tanto para los alumnos como el personal acadmico y de investigacin
que laboran en el.
Todo trabajo o practica que se realice dentro de dicha rea debe contar
con las precauciones debidas para evitar accidentes. El trabajo individual del
alumno hace ver la importancia que tienen las precauciones de seguridad en el
laboratorio.
El alumno debe asistir con regularidad y puntualidad a las sesiones de
laboratorio programadas.
Dentro del laboratorio debers guardar disciplina, evitando as los
accidentes.
Cuando necesites ayuda o informacin adicional, debes consultar al
maestro del laboratorio.
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
Equipo de proteccin.
Lentes de seguridad
Gafas (goggles)
Lentes de seguridad con careta
Bata de laboratorio
Bata y mandil
Guantes apropiados
Campana de extraccin
Extinguidor de lquidos inflamables
Extinguidor de fuego de metales
Regadera
Extractores
Conexin de agua, aire y gas.
Seguridad y precaucin
114
115
APNDICE B
MANEJO DE RESIDUOS BIOLGICO-INFECCIOSOS EN EL LABORATORIO
Clasificacin de los residuos biolgico-infecciosos.
La sangre.- la sangre y los componentes de esta, solo en su forma liquida, as
como los derivados no comerciales, incluyendo las clulas progenitoras,
hematopoyticas y las funciones celulares de la sangre resultante
(hemoderivados).
Los cultivos y cepas de agentes biolgico-infecciosos.- los cultivos
generados en los procedimientos de diagnostico e investigacin, as como los
generados en la produccin y control de agentes biolgico-infecciosos.
Utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y mezclar
cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
Los patolgicos.- los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven
durante las necropsias, la ciruga o algn tipo de intervencin quirrgica, que
no se encuentren en formol. Las muestras biolgicas para anlisis qumico,
microbiolgico, citolgico e histolgico, excluyendo la orina y excremento. Los
cadveres y partes de animales que fueron inoculados con agentes
enteropatgenos en centros de investigacin y bioterios.
Los residuos no anatmicos son los siguientes:
116
Los objetos punzocortantes.- los que han estado en contacto con humanos o
animales o sus muestras biolgicas durante el diagnstico y tratamiento,
nicamente: tubos capilares, navajas, lancetas, agujas de jeringas
desechables, agujas hipodrmicas, de sutura, de acupuntura y para tatuaje,
bisturs y estiletes de catter, excepto todo material de vidrio roto utilizado en el
laboratorio, el cual deber desinfectar o esterilizar antes de ser dispuesto como
residuo municipal.
Manejo de residuos peligrosos biolgico-infecciosos
Los generadores y prestadores de servicios, adems de cumplir con las
disposiciones legales aplicables, deben cumplir con las disposiciones
correspondientes a las siguientes fases de manejo, segn el caso:
Identificacin y envasado.
Durante el envasado, los residuos peligrosos biolgico-infecciosos no debern
mezclarse con ningn otro tipo de residuos municipales o peligrosos. Se deben
separar y envasar los residuos peligrosos biolgico-infecciosos de acuerdo con
sus caractersticas fsicas y biolgico-infecciosas conforme a la siguiente tabla:
Clasificacin y separacin de los residuos peligrosos biolgicoinfecciosos.
Tipo de residuos Estado fsico
Envasado
Color
Sangre
Lquidos
Recipientes
Rojo
hermticos
Cultivos y cepas Slidos
Bolsas de polietileno rojo
de
agentes
infecciosos
Patolgicos
Slidos /lquidos
Bolsas
de Amarillo
polietileno/recipientes
hermticos
Residuos
no Slidos/lquidos
Bolsas
de Rojo
anatmicos
polietileno/recipientes
hermticos
Objetos
Slidos
Recipientes rgidos rojo
punzocortantes
polipropileno
*tomada de la norma oficial mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002.
Las bolsas debern ser de polietileno de color rojo traslucido de calibre mnimo
200 y de color amarillo traslucido de calibre mnimo 300, impermeables y con
un contenido de metales pesados de no mas de una parte por milln y libres de
cloro, adems debern estar marcadas con el smbolo universal de riesgo
117
biolgico (Ver Fig. 25.1), y la leyenda Residuos peligrosos biolgicoinfecciosos. Las bolsas se llenaran al 80 por ciento de su capacidad,
cerrndose antes de ser transportadas al sitio de almacenamiento temporal y
no podrn ser abiertas o vaciadas (Ver Fig. 25.2).
118
Los recipientes de los residuos peligrosos deben ser rgidos, con tapa
hermtica de polipropileno color rojo o amarillo, con un contenido de metales
pesados de no mas de una parte por milln y libres de cloro, resistente a
fracturas y perdidas de contenido al caerse, destructible por mtodos fsicos,
deber contar con la leyenda que indique residuos peligrosos biolgicoinfecciosos y marcados con el smbolo universal de riesgo biolgico (Ver Fig.
25.5).
Bibliografa:
Norma oficial mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002.
Norma oficial mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005
119
APNDICE C
PREPARACIN DE SOLUCIONES EMPLEADAS EN EL LABORATORIO DE
BIOLOGA CELULAR.
Acetorcena
Orceina 1 g
Acido actico glacial 45 ml
Agua destilada 55 ml
Colocar 1 g de orceina y 45 ml de acido actico glacial en un recipiente
tapndolo bien con lana de algodn, proceder a calentar a casi ebullicin. Una
vez fro aadir 55 ml de agua destilada.
Azul de bromotimol
Mtodo 1: disolver 0.1 g de indicador en 100 ml de alcohol de 60%.
Mtodo 2: disolver 0.1 g de indicador en 88 ml de solucin de hidrxido
de sodio 0.02 N y diluir con agua a 250 ml.
Azul de metileno 1%
Pesar 1g de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada
hasta obtener una solucin uniforme.
Buffer de fosfatos
Solucin I: Pesar 13.8 g de NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de agua
destilada
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Cloruro de sodio al 5%
5 g de cloruro de sodio
100 ml de agua destilada
Cristal violeta
Pesar 3 g de cristal violeta y disolverlo en 20 ml de etanol, agregar
inmediatamente 0.8 g de oxalato de amonio y 20 ml de agua destilada.
Glucosa al 30%
30 g de glucosa
100 ml de agua destilada
Fucsina bsica
Pesar 1 g de fucsina y disolverlo en 100 ml de agua destilada.
Lugol
Pesar 0.5 g de yodo, 1 g de yoduro de potasio, mezclar ambos en un
mortero. Diluir con 150 ml de agua destilada, filtrar la solucin y guardarlo en
frasco mbar.
Reactivo de Benedict
Solucin A: Pesar 173 g de citrato de sodio, adicionarle 100g de Na2CO3
completar a 800 ml de agua destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de agua.
Solucin B: Pesar 17.3g de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua
destilada. Disolver suavemente la solucin b en la a agitando continuamente.
Reactivo de Biuret
Sulfato de cobre pentahidratado 1.5 g
Tartrato de sodio y potasio tetrahidratado 6 g
Hidrxido de sodio al 10 % 300 ml
Disolver el sulfato de cobre pentahidratado y el tartrato de sodio y potasio
tetrahidratado en 500 ml de agua destilada, agregar 300 ml de hidrxido de
sodio al 10% y aforar a 1000 ml de agua destilada.
Reactivo de Fehling
Solucin a: disolver 34.65g de sulfato de cobre en 300 ml de agua
destilada, aforar a 500 ml y conservar en frasco con tapn de hule.
Solucin b: disolver 125g de hidrxido potsico y 173g de tartrato de
sodio y potasio en agua destilada aforando a 500 ml conservar en frasco
revestido de parafina.
Solucin de almidn al 1%
Pesar 1g de almidn y disolverlo en 100 ml de agua caliente.
Solucin de albmina
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Solucin de Locke.
Cloruro sdico 0.9g, cloruro potsico 0.042g, cloruro de calcio 0.048g,
bicarbonato sdico 0.02g, glucosa 0.2g, agua destilada 100 ml.
de
las
esencial
de
las
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123
124
125