TESIS
QUE PARA ACREDITAR LA EXPERIENCIA RECEPCIONAL DE LA CARRERA DE
PRESENTA:
YAMILETH VARGAS LVAREZ
CO-DIRECTORA:
DRA. ZAIRA JULIETA DOMINGUEZ ESQUIVEL
XALAPA, VERACRUZ
SEPTIEMBRE 2013
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
SINODAL
DR. ERNESTO JUREZ LOERA
XALAPA, VERACRUZ
SINODAL
DR. RICARDO TOVAR MIRANDA
Dedicatorias
A Dios
Por permitirme alcanzar este peldao de mi vida, por acompaarme en
mis angustias y alegras, por guardar mi camino.
A mis padres
Daniel Vargas Corts, Patricia lvarez Morales, por su amor,
paciencia y apoyo en cada decisin de mi vida, los amo.
A mis hermanas
Liliana y Evelyn, por su gran ejemplo, amistad y cario.
A mis amigos y compaeros
Por los momentos que compartimos, porque siempre hubo algo que
aprender de cada uno.
AGRADECIMIENTOS
A la Dra. Magali, por su gran apoyo, confianza y paciencia. Por guiarme durante el
desarrollo de este proyecto y ensearme que siempre hay algo ms que aprender.
A la Dra. Zaira, por sus valiosas aportaciones durante la elaboracin de este trabajo.
A los miembros del jurado: Dr. Ricardo Tovar Miranda y Ernesto Jurez Loera, por sus
acertadas observaciones a este trabajo.
Al Dr. Felipe Gonzlez (Departamento de Qumica del CINVESTAV) por las facilidades
prestadas para la obtencin de la espectrometra de masas y los espectros de Resonancia
Magntica Nuclear del equipo JEOL GSX270.
Al I. Q. Geiser Cuellar Rivera por su asistencia en la obtencin de la espectrometra de
masas.
A la Dra. Rosa Blanca Daz Snchez por su asistencia en la obtencin de los espectros de
RMN del equipo JEOL GSX270.
Al Dr. Javier por su apoyo e instruccin durante mi estancia en el laboratorio, as como por
la beca otorgada. A la Dra. Mirna, por su cordialidad y sus comentarios durante la
elaboracin de ste trabajo.
A la Dra. Yolanda Cocotle Ronzn y el Dr. Jess Garca Guzmn, por brindarme su apoyo
y confianza, por su trato siempre amable, por impulsarme a seguir adelante.
A mis compaeros y amigos del laboratorio, Daniel, Omar, Erick, Roberto, Ivn, Anita y
Evelin, por darme nimos, por acompaarme en esta ardua tarea, por hacer ms amena la
elaboracin de esta tesis.
A Pablo Cisneros, por su cario, comprensin y apoyo durante la elaboracin de este
proyecto, por ser algo ms que un amigo y motivarme a lograr mis sueos y metas.
A mis amigos que me han acompaado durante mi formacin universitaria, Dora,
Benjamin, Tamara, Ulises, Karen, Carol, Nelly, Daphne, Rafa, L, Jacob, Luis, Brianda,
Karla, entre otros, por los momentos compartidos, por las experiencias que siempre nos
dejaron algo ms que un recuerdo, porque su amistad que ha sido una bendicin.
A mis amigos y compaeros de la facultad de QFB, por la grata experiencia de convivir
durante esta inolvidable etapa, por hacer juntos ciencia.
CONTENIDO
ANTECEDENTES ...........................................................................................3
1.1.
1.2.
Antioxidantes .......................................................................................4
1.3.
1.3.1.
1.3.2.
1.4.
1.4.1.
1.5.
1.5.1.
1.6.
1.6.1.
1.7.
2.
JUSTIFICACIN. ......................................................................................... 16
3.
HIPTESIS ................................................................................................. 17
4.
5.
6.
6.1.1.
6.1.2.
1,5-bis-feruloilpentanodiol .............................................................. 22
6.1.3.
1,8-bis-feruloiloctanodiol ................................................................ 27
6.2.
CONCLUSIONES ......................................................................................... 48
8.
METODOLOGA ......................................................................................... 50
8.1.
8.1.1.
8.2.
8.2.1.
9.
REFERENCIAS ............................................................................................ 56
10.
APENDICE ................................................................................................. 60
ii
RESUMEN
El cido ferlico (AF) es un constituyente fenlico ubicuo en los tejidos de plantas,
originado a partir del metabolismo de la fenilalanina y tirosina. Posee una amplia gama de
efectos teraputicos, en su mayora atribuidos a su capacidad antioxidante. Se ha
demostrado que la esterificacin del AF ha dado como resultado un aumento de la
capacidad antioxidante. Por otro lado, la voltamperometra cclica es una tcnica utilizada
para estudiar los mecanismos de oxidacin, que permite establecer la habilidad para donar
electrones en torno al potencial de pico andico, as como el nmero de electrones
transferidos durante la oxidacin, por lo que se considera una valiosa herramienta en la
investigacin de sistemas antioxidantes. Por lo anterior, en el presente trabajo se presenta la
sntesis del ster benclico del AF (EBAF) y dos nuevos sistemas bisster derivados del
cido ferlico: 1,5-bis-feruloilpentanodiol (BEPAF)
y 1,8-bis-feruloiloctanodiol
ABREVIATURAS
ACN: Acetonitrilo
EA: Electrodo auxiliar
AF: cido ferlico
APPH: 2,2-azo-bis-(2-amidino-propano)-dihidrocloruro
BEPAF: 1,5-bis-feruloilpentanodiol
BEOAF: 1,8-bis-feruloiloctanodiol
DPPH: 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo
EBAF: ster benclico del cido ferlico
ECE: Electroqumico-Qumico-Electroqumico.
ECV: Electrodo de carbn vtreo
ECS: Electrodo de Calomel saturado.
FMLP/CB: Formil-L-metionil-L-leucil-L-fenilalanina/Citocalasina B
FNT-: Factor de necrosis tumoral alfa
ITO: xido de Indio y Estao
ER: Electrodo de referencia
RMN: Resonancia Magntica Nuclear.
VC: Voltamperometra cclica
ET: Electrodo de trabajo.
5NFAA: cido-3-(5-nitro-2-furil)-acrlico
iv
INTRODUCCIN
En la actualidad ha surgido un gran inters por el uso de antioxidantes naturales en diversas
aplicaciones teraputicas e industriales. Particularmente, los compuestos fenlicos son
considerados como potentes agentes teraputicos contra una amplia variedad de
enfermedades, adems de su aplicacin en la industria alimentaria, como conservadores y
aditivos [1, 2].
Los cidos fenlicos y particularmente los cidos hidroxicinmicos, como el cido cafeico,
ferlico y sinpico, han sido considerados como atractivos potenciales antioxidantes,
debido a su origen natural [3]. Estudios recientes han demostrado que estos compuestos
poseen efectos teraputicos en numerosas enfermedades como la arterioesclerosis, lesiones
inflamatorias, cncer y diabetes, entre otras [4, 5, 6]. Sin embargo, por su naturaleza
hidroflica, los cidos hidroxicinmicos no pueden ser usados apropiadamente en productos
de base oleosa, lo cual es un factor determinante para las aplicaciones
industriales,
Por otro lado, la voltamperometra cclica es una tcnica muy empleada en electroqumica
analtica, de gran utilidad cuando se inicia el estudio electroqumico de un sistema
desconocido [11]. sta permite determinar propiedades redox de molculas en disolucin, y
la habilidad de un compuesto para donar electrones mediante el potencial de pico andico,
por lo que puede ser una valiosa herramienta en el estudio de sistemas antioxidantes [12].
Por lo anterior, en este trabajo se realiz la sntesis de nuevos derivados del cido ferlico y
el estudio de su comportamiento electroqumico mediante la tcnica de voltamperometra
cclica, utilizando acetonitrilo como disolvente. Consiguiendo as un punto de partida
necesario para el diseo de nuevos sistemas antioxidantes que presenten aplicaciones
teraputicas e industriales.
1. ANTECEDENTES
1.1. Acidos hidroxicinmicos
Los cidos hidroxicinmicos son una clase de compuestos fenlicos de estructura C6-C3
(compuestos bencnicos unidos a una cadena de 3 tomos de carbono), derivados del
cido-(E)-3-fenilprop-2-enico, con uno o ms grupos hidroxilos unidos al anillo
aromtico, algunos de los cuales pueden ser metilados. Los principales cidos
hidroxicinmicos presentes en los alimentos son el cido p-cumrico, cafeico, ferlico y
sinpico (figura 1). Generalmente se encuentran como glucsidos o steres del cido
qunico, shikmico o tartrico, as como teres o steres de polisacridos, formando la pared
celular de diversas plantas. Estos cidos se encuentran raramente en su forma libre, excepto
en los alimentos procesados que han sido objeto de congelacin, esterilizacin, o
fermentacin [13, 14].
La presencia del doble enlace en su estructura da lugar a dos ismeros, cis y trans. Los
cidos cinmicos naturales estn en forma trans, que es la ms estable, aunque pueden
pasar a forma cis por efecto de la luz o cuando estn presentes en solucin [15].
Los cidos cinmicos pueden formar:
- Glucsidos con los azcares. Los carbohidratos que participan en stos son la glucosa,
galactosa y la ramnosa.
- Hetersidos con los compuestos fenlicos como las antocianinas y flavonoides [15].
1.2.Antioxidantes
Los antioxidantes son sustancias presentes en los alimentos o el organismo en bajas
concentraciones, que retrasan o previenen la oxidacin de alguna otra molcula o sustrato.
Debido a esto, los antioxidantes han despertado el inters de bioqumicos y mdicos por su
utilidad como protectores contra el dao celular, especies reactivas de oxgeno y
enfermedades degenerativas. Por otra parte, la industria alimentaria ha usado antioxidantes
para prevenir el deterioro de la calidad y mantener el valor nutricional de los alimentos.
Entre los antioxidantes naturales que se obtienen de los alimentos se encuentran
compuestos fenlicos y polifenlicos, quelatos, vitaminas y enzimas, as como carotenoides
y carnosina [16].
Los antioxidantes son conocidos por actuar a diferentes niveles en la secuencia oxidativa
que involucra a molculas lipdicas. Pueden actuar disminuyendo la concentracin de
oxgeno, interceptando oxgeno singulete, previniendo las reacciones radicalarias al
eliminar los radicales iniciales, catalizando la unin de iones metlicos, etctera. La medida
en que se produce la oxidacin de los lpidos tambin depende de la estructura qumica de
los cidos grasos que intervienen, as como otros factores relacionados con el
almacenamiento de alimentos y condiciones de reaccin [16].
As mismo, estudios sobre la cepa Salmonella typhimurium TA 100 han demostrado que el
cido ferlico disminuye aproximadamente 50% el efecto mutagnico inducido por 5NFAA
[cido-3-(5-nitro-2-furil)-acrlico] y azida de sodio [22].
Por otra parte, considerando que el AF genera radicales fenoxilo estables cuando ste es
irradiado por luz UV, y que stos tienen la capacidad de interrumpir la cadena de
reacciones de radicales libres, el AF se ha considerado como un agente importante para la
proteccin de la piel, pudiendo utilizarse como un bloqueador solar [1, 19, 23].
1.4. steres derivados del cido ferlico.
El AF, que est ampliamente distribuido en la naturaleza, se encuentra esterificado con
esteroles, polisacridos y otros metabolitos, recibiendo stos el nombre de ferulatos [23].
As mismo, diversos monosteres del AF, con cadenas alqulicas de 1 a 12 tomos carbonos
[4, 17], se han aislado de plantas y propleos [9, 24, 25]. Del mismo modo, sistemas tipo
bisster se encuentran presentes en plantas como Pachycentria formosana [26], Ficus
foveolata [27], Stereospermum acuminatissimum [28].
Numerosos ferulatos se han sintetizado con el fin de encontrar molculas con mayor
actividad teraputica que el cido ferlico, como por ejemplo: steres aromticos [10],
derivados de polisacridos [30, 31], ferulatos de esterol [19], steres derivados de
triterpenos [26] y sistemas bis como el 1,4 bis-feruloilbutanodiol [29].
1.4.1. Propiedades biolgicas y actividad antioxidante.
Existen diversos estudios y valoraciones teraputicas de algunos steres del cido ferlico,
entre ellos podemos mencionar la evaluacin de la actividad fungicida, estudio en el que se
observ un porcentaje de inhibicin superior al 98% de la cepa S. cerevisiae con metil, etil
y propil ferulatos, lo que revela una posible preferencia del sitio receptor de la bioactividad
por compuestos hidrfobos, pero con limitaciones del espacio disponible en la longitud de
la cadena del ster [4].
As mismo, se han aislado diferentes steres derivados de cidos cinmicos en propleos
[9,25], por ejemplo, Serkedjiev y colaboradores aislaron 6 steres derivados de cidos
cinmicos de un extracto etreo de propleos de Bulgaria, a los que realizaron ensayos de
actividad antiviral contra diversas cepas del virus de la influenza. En ellos encontraron que
Taiwn, en el que se encontraron 4 ferulatos, dos bissteres separados por una cadena
aliftica de 24 carbonos, que slo diferan en la configuracin del doble enlace (E y Z,
respectivamente), un monoster de 28 carbonos y un ferulato unido a un triterpeno (cido
ursnico). De estos, slo el ltimo present efectos importantes en la inhibicin de la
liberacin de elastasa (inducida por fMLP/CB), relacionada con los procesos inflamatorios
[26].
As mismo, estudios recientes de steres aromticos derivados del cido ferlico, algunos
acetilados en el grupo hidroxilo del anillo guayacol y otros con este grupo hidroxilo libre,
han demostrado que poseen una importante capacidad atrapadora de radicales superxido,
incluso dos veces ms activa que la presentada por el -tocoferol. Del mismo modo se
evalu su actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas, tales como
Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, y algunos hongos del gnero Candida,
encontrando que algunos de ellos y, especialmente, el (4-cloro-3-metil)fenil-3-(4-hidroxi-3metoxifenil)-2-propenoato, posee una potente inhibicin contra S. aureus, incluso 64 veces
ms potente que Ofloxacina y 128 ms que Vancomicina, respectivamente [10].
1.5. Conceptos fundamentales sobre electroqumica
La electroqumica es la rama de la qumica concerniente a la interrelacin de electricidad y
sus efectos qumicos. De manera general, en electroqumica se llevan a cabo estudios
relacionados con la generacin de energa elctrica a travs de una reaccin qumica o la
promocin de una reaccin qumica por el paso de corriente en una interfase lquida slida.
En consecuencia, el campo de la electroqumica abarca una enorme gama de fenmenos
(por ejemplo, electroforesis y corrosin), dispositivos (pantallas electrnicas, sensores
electroanalticos, bateras y pilas de combustible) y tecnologas (electrodeposicin de
metales, produccin a gran escala de aluminio y cloro, etctera). Los cientficos tambin
hacen mediciones electroqumicas para obtener datos termodinmicos acerca de una
reaccin, generar intermediarios inestables como radicales inicos, as como analizar
pequeas cantidades (trazas) de iones metlicos o especies orgnicas en un sistema qumico
[11, 33].
El estudio de sistemas electroqumicos, se concentra en los procesos y factores que afectan
el transporte de carga a travs de la interface entre fases qumicas, por ejemplo, entre un
los
mtodos
electroqumicos,
tales
como
la
voltamperometra
cclca,
10
11
A+ + e- A
12
13
siguen una oxidacin andica bielectrnica de un solo paso, dando como resultado el
correspondiente catin fenoxilo, el cual puede llevar a la formacin de dmeros y
heterociclos [42].
Otras investigaciones han combinado una serie de derivados sintticos de los cidos
hidroxicinmicos para realizar la evaluacin de sus parmetros fisicoqumicos (potenciales
redox y coeficientes de particin), adems de la actividad antioxidante correspondiente. Los
resultados obtenidos permiten concluir que los potenciales redox podran contribuir a la
comprensin de la actividad antioxidante y que la presencia de un grupo aceptor de
electrones de tipo halgeno, en una posicin orto al grupo fenlico no ejerce ninguna
influencia sobre la actividad antioxidante. Por otra parte, despus de la introduccin de este
sustituyente se observ un aumento significativo en la lipoflia de los derivados cinmicos,
la cual es una caracterstica de extrema importancia en el desarrollo de nuevos
antioxidantes lipfilos. En general, los resultados obtenidos revelan la existencia de una
relacin entre los potenciales redox y la actividad antioxidante (la cual se determin
mediante ensayos de capacidad atrapadora de radicales libres), de los cidos
hidroxicinmicos y sus derivados. As, concluye que la eficacia antioxidante, es mayor
cuando el potencial redox de las molculas es menor [3].
Por su parte Salas y colaboradores estudiaron la oxidacin electroqumica de una serie de
sistemas derivados del cido cafeico y ferlico, as como de catecol y guayacol (las cuales
son sus correspondientes unidades electroactivas) en medios aprticos. Los resultados
revelaron que el cido ferlico y el guayacol en ACN, siguen un mecanismo de oxidacin
electroqumico-qumico-electroqumico (ECE), que implica la formacin de una o-quinona.
Tambin se demostr que, en el caso del AF, las reacciones de transferencia de electrn y
protn son consecutivas y ocurren bajo un control cintico mixto. Por su parte, la oxidacin
electroqumica de amidas derivadas del cido ferlico revel que el tomo de nitrgeno
juega un importante rol en la pasivacin de la superficie del electrodo. As mismo se evalu
la capacidad atrapadora de radicales libres, mediante un ensayo de DPPH, el cual mostr
una buena relacin con los potenciales de oxidacin de las molculas, revelando que los
sistemas con un menor potencial de oxidacin muestran una mayor inhibicin del radical
DPPH [40].
14
15
2. JUSTIFICACIN.
El estudio de los derivados tipo ster del AF se ha convertido en un importante campo de
investigacin en los ltimos aos, ya que se ha comprobado que su actividad antioxidante
es mayor con respecto a la del cido ferlico [19, 34]. Sin embargo no se conocen los
mecanismos de oxidacin de los sistemas de tipo bisster derivados del cido ferlico, lo
que resulta importante estudiar ya que dicha caracterstica qumica est relacionada
directamente con la capacidad antioxidante, misma que le confiere al cido ferlico efectos
teraputicos
tales
como
anti-inflamatorios,
antiaterognicos,
anti-envejecimiento,
16
3. HIPTESIS
El estudio electroqumico de sistemas antioxidantes como steres y bissteres derivados del
cido ferlico a travs de la voltamperometra cclica, permite conocer el mecanismo de
oxidacin de los sistemas evaluados y parmetros fisicoqumicos importantes como lo son
el potencial de oxidacin y nmero de electrones involucrados, y dadas las caractersticas
estructurales, particularmente de los sistemas bis, se infiere que deben presentar procesos
de oxidacin de 4 electrones.
17
4. OBJETIVO GENERAL
Realizar la sntesis y estudio de la oxidacin electroqumica mediante voltamperometra
cclica en ACN del ster benclico del cido ferlico (EBAF), y dos nuevos sistemas
bisster derivados del cido ferlico: 1,5-bis-feruloilpentanodiol (BEPAF) y 1,8-bisferulioiloctanodiol (BEOAF).
EBAF
BEPAF
BEOAF
5. OBJETIVOS ESPECFICOS
18
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1 Caracterizacin espectroscpica de las molculas sintetizadas
6.1.1. ster benclico del cido ferlico
En el espectro de 1H RMN (figura 5), se observa una seal simple a 3.92 ppm que integra
para 3 protones, asignada para el grupo metoxilo 10. A campo ms bajo, se encuentra una
seal en 5.25 ppm que integra para dos protones, asignada al grupo metileno 11.
A un desplazamiento de 5.93 ppm se observa una seal ancha que integra para un protn y
que corresponde al grupo hidroxilo sobre el carbono 7. El protn vinlico 2 se observa
como una seal doble a 6.32 ppm (3JHH= 16.0 Hz), a diferencia del protn vinlico 3, que se
encuentra ms desprotegido, observndose una seal doble en 7.64 ppm (3JHH= 16.0 Hz).
En 7.02 ppm, se observa una seal doble perteneciente al protn 5 (4JHH= 2.0 Hz), acoplada
al protn 9, el cual posee un desplazamiento en 7.06 ppm, observndose como una seal
19
doble de dobles (3JHH= 8.0, 4JHH= 2.0 Hz). Por su parte, el protn 8 posee una seal doble
con un desplazamiento a 6.90 ppm y un acoplamiento orto (3JHH= 8.0 Hz). De 7.34 a 7.43
ppm, observamos un conjunto de seales mltiples que integran para 5 hidrgenos y fueron
asignadas a los protones H-13 - H17, respectivamente.
20
Por otro lado, en el espectro 13C RMN (figura 6), el carbonilo 1 posee un desplazamiento a
ppm, para los carbonos 2 y 3 un desplazamiento en 115.2 y 145.3 ppm
respectivamente. La seal en 127.0 ppm fue asignada al carbono 4, mientras que a 109.3
ppm se observa la correspondiente al carbono 5. Por su parte, los carbonos 6, 7, 8 y 9
mostraron los siguientes desplazamientos: 148.1, 146.7, 114.8 y 123.9 ppm.
En 56.0 ppm se observa una seal que fue asignada al carbono 10, mientras que para el
carbono 11 una seal en 66.3 ppm. El carbono 12 mostr un desplazamiento qumico en
136.2 ppm y entre 128.3 y 128.6 ppm observamos un conjunto de seales que fueron
asignadas a los carbonos C13-17, respectivamente.
21
6.1.2. 1,5-bis-feruloilpentanodiol
En el espectro 1H RMN (figura 7), puede observarse una seal mltiple appm que
integra para 2 protones, perteneciente al metileno 13. A 1.75 ppm se observa una seal
mltiple que integra para 4 protones, pertenecientes a los metilenos 12.
La seal en 3.91 ppm, integra para 6 protones, y pertenece a los grupos metoxilo en 10,
respectivamente. Los protones pertenecientes a los metilenos 11 se encuentran a 4.22 ppm,
22
como una seal triple. Para los grupos hidroxilos, corresponde un desplazamiento qumico
a 5.89 ppm. Los protones vinlicos 2 y 3 se observan como seales dobles, observndose
para los primeros un desplazamiento a 6.27 ppm (3JHH= 16.0 Hz) y los segundos a 7.60
ppm (3JHH= 16.0 Hz).
Los protones 5, presentaron una seal doble a 7.02 ppm, con un acoplamiento meta (4JHH=
2.0 Hz), mientras los protones 8 mostraron una seal doble a 6.89 ppm con un
acoplamiento orto (3JHH= 8.0 Hz), por su lado los protones 9 mostraron una seal doble de
dobles en 7.05 ppm, con un acoplamiento orto y meta, respectivamente (3JHH= 8.0 Hz,
4
23
As mismo, en el espectro de
13
qumicos tpicos de los carbonos de la molcula simtrica, as para los carbonilos 1 se tiene
una seal a 167.4 ppm, para los carbonos 2 y 3 un desplazamiento a 115.5 y 144.9 ppm
respectivamente, en 56.0 ppm se observa una seal que fue asignada a los carbonos 10,
mientras que para los carbonos 11 una seal en 64.3 ppm.
24
Para los carbonos 12, se observ un desplazamiento a 28.5 ppm, mientras que para el
carbono 13 una seal a 22.7 ppm, respectivamente. La seal en 127.0 ppm fue asignada
para los carbonos 4, mientras que a 109.3 ppm se observa el carbono 5. Los carbonos 6, 7,
8 y 9 mostraron los siguientes desplazamientos: 148.0, 146.8, 114.7 y 123.1 ppm,
respectivamente.
Estos desplazamientos se pudieron corroborar con el experimento de RMN de dos
dimensiones HETCOR, mostrado en la figura 9.
25
26
6.1.3. 1,8-bis-feruloiloctanodiol
Las seales correspondientes a la unidad del cido ferlico del BEOAF se asignaron de
manera similar a las indicadas para el BEPAF (figura 10). Por otro lado, las seales
correspondientes a los protones alifticos se asignaron de la siguiente forma: a campo alto,
la seal mltiple enppm pertenece a los metilenos 13 y 14 y sus respectivos
anlogos simtricos. A 1.68 ppm se observa una seal mltiple, perteneciente a los
metilenos 12. Los protones pertenecientes a los metilenos 11 se encuentran a 4.17 ppm,
presentando una seal triple, integrando para 4 protones, respectivamente.
27
En el espectro de
13
unidad de cido ferlico se asignaron de manera similar al BEPAF; para el caso de los
carbonos alifticos correspondientes se asignaron los siguientes desplazamientos: Carbonos
11, desplazamiento a 64.6 ppm; Carbonos 14, 25.9 ppm; carbonos 13, 28.8 ppm. Por su
parte, los carbonos 12 mostraron un desplazamiento a 29.2 ppm respectivamente.
28
120
I / A
100
80
60
40
20
-20
E / V vs ECS
-40
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Figura 12. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de AF 2 mM.
29
Esquema 2. Estabilizacin del radical catin generado tras la prdida de un electrn en la oxidacin
del cido ferlico.
30
120
I / A
100
80
60
40
20
-20
E (V vs ECS)
II
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Figura 13. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- del EBAF 2 mM.
31
120
I / A
100
a)
b)
c)
80
60
40
20
-20
E / V vs ECS
II
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Figura 14. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de EBAF, 2 mM, a) Ciclo 1, b) Ciclo 10, c) Ciclo 25.
Esta pasivacin que sufre el electrodo de trabajo puede deberse a una adsorcin fsica
(fisisorcin) o qumica (qumisorcin, la cual implica una unin covalente). Para descartar
que el proceso que se est llevando a cabo sea de tipo fsico, el electrodo fue enjuagado en
un limpiador ultrasnico para posteriormente realizar un ciclo ms de oxidacin y as
confirmar o descartar fisisorcin, el resultado revel que el pico I no se recuper.
Posteriormente, se realiz el pulido de la superficie del electrodo y se volvi a correr el
experimento de VC, comprobando que el pico de oxidacin y el de reduccin se
restablecan completamente (figura 15). Este ltimo experimento confirma la presencia de
un fenmeno de quimisorcin.
32
120
I (A)
100
a)
b)
c)
80
60
40
20
E/V vs ECS
-20
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Figura 15. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de EBAF, 2 mM, a) Ciclo 1, b) Ciclo 25, c) Ciclo despus de pulir el electrodo de trabajo.
33
120
100
I / A
I'
a)
b)
c)
80
60
40
20
-20
II'
E / V vs ECS
-40
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
Figura 16. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de AF 2 mM, a) Ciclo 1, b) Ciclo 10, c) Ciclo 25.
Como se muestra en la figura 16, existe una disminucin de los picos de oxidacin (I) y
reduccin (II) conforme incrementa el nmero de ciclos de VC, hacindose ms evidente
este comportamiento en el ciclo 25, al igual que en el sistema mono ster. Este resultado
sugiere la existencia, tambin, de un fenmeno de adsorcin de las especies generadas tras
la oxidacin del AF sobre la superficie del electrodo de trabajo, revelando a su vez que la
especie generada tras la oxidacin del AF es un sistema orgnico no conductor, ya que
adems de que no se observan picos adicionales, no permite el paso de corriente de manera
eficiente.
El fenmeno de adsorcin sobre el electrodo de trabajo, al igual que el mono ster, no es
importante durante la experimentacin, ya que se requiere de varios ciclos para poder
observarse.
Estos experimentos nos permiten deducir que el EBAF, al igual que el AF, sufre dos
mecanismos de oxidacin (incisos a y b), los cuales se presentan en el esquema 3:
34
a) Esta ruta de oxidacin considera la secuencia reportada (mecanismo ECE, esquema 1),
que explica la presencia del pico I y que incluye una segunda prdida de un electrn, lo que
genera como producto de la oxidacin una especie quinona catinica 1, que en el proceso
de reduccin llega al sistema o-quinona [44], generando el pico II de reduccin en el
experimento de VC.
b) El radical R, al ser una especie muy reactiva, genera dos productos posibles: el primero
se describe como una forma dimrica del sistema (2), generada tras la reaccin del radical
R consigo mismo [43, 45], mientras el segundo como una especie que se adhiere al
electrodo de forma qumica, mediante un enlace covalente (3), ruta que puede explicar el
proceso de quimisorcin observado.
35
160
140
I / A
120
AF
EBAF
BEPAF
100
80
60
40
20
0
-20
E / V vs ECS
II
-40
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 17. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de AF, EBAF Y BEPAF 2 mM.
Por otro lado, tras la realizacin de 6 ciclos consecutivos de VC, los picos de oxidacin y
reduccin disminuyen de manera importante, desapareciendo casi totalmente (figura 18), lo
que indica una rpida adsorcin de las especies generadas tras la oxidacin sobre el
electrodo de carbn vtreo.
36
140
I / A
120
1 ciclo
2 ciclo
3 ciclo
4 ciclo
5 ciclo
6 ciclo
100
80
60
40
20
0
-20
-40
-0,2
E / V vs ECS
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 18. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEPAF, 2 mM. Se muestran varios ciclos consecutivos de VC a 0.1 Vs-.
37
140
I /A
120
100
a)
b)
c)
80
60
40
20
0
-20
-40
-0,2
E / V vs ECS
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 19. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEPAF, 2 mM a 0.1 Vs-, a) Ciclo 1, b) Ciclo 6, c) VC despus de pulir electrodo.
Es importante mencionar que no se observa algn pico de reduccin tras la pasivacin del
electrodo de trabajo, lo que comprueba que la pelcula formada durante este proceso no es
electroqumicamente activa, en otras palabras se forma una pelcula orgnica no conductora
sin grupos funcionales reducibles en potenciales catdicos (figura 20). Considerando
adems que una vez que se registra el voltamperograma en potenciales catdicos tampoco
se observa una recuperacin del pico I al registrar nuevamente el experimento de oxidacin
(figura 20 d), es posible inferir que el fenmeno de adsorcin sobre la superficie del
electrodo es irreversible (figura 20).
38
140
I / A
120
a)
b)
c)
d)
100
80
60
40
20
0
-20
-40
-2,0
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
E / V vs ECS
Figura 20. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEPAF 2 mM a 0.1 Vs-, a) Ciclo 1, b) Ciclo 6, c) Ciclo 7, hacia valores de reduccin, d) Ciclo 8,
hacia valores de oxidacin, posterior a reduccin.
39
300
I (A)
250
0.050 Vs
0.100
0.200
0.500
200
150
-1
100
50
-50
E / V vs ECS
II
-100
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 21. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEPAF, 2 mM a diferentes velocidades de barrido.
Este comportamiento podra ser asociado a la topologa bis de las molculas y fue
confirmado en estas experimentaciones, ya que el fenmeno se presenta de manera ms
acentuada en el BEOAF (figura 22). De lo anterior se presume que el comportamiento
electroqumico de las dos unidades guayacol, presentes en el par de sistemas bis, no es
equivalente y esta caracterstica llega a ser ms notoria mientras mayor es la longitud de la
cadena que las separa.
40
140
I / A
120
BEPAF
BEOAF
100
80
60
40
20
0
-20
-40
-0,2
E / V vs ECS
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 22. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm
de BEOAF y BEPAF, 2 mM y 0.1 Vs- para ambos compuestos.
41
140
120
I / A
100
80
60
40
20
0
-20
II
-40
-0,2
0,0
0,2
E / V vs ECS
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 23. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEOAF, 2 mM a 0.1 Vs-.
De igual manera para conocer con mayor detalle el comportamiento del pico de oxidacin
del BEOAF se realiz un experimento a diferentes velocidades de barrido, observndose la
formacin de dos picos de oxidacin, que a velocidades ms lentas (0.025 y 0.050 Vs-1) se
observan con mayor claridad (figura 24), y a velocidades de 0.50 Vs-1 se unen. Cabe
mencionar que para llevar a cabo cada barrido se debi pulir el electrodo de trabajo, ya que
la superficie era modificada desde el primer ciclo de VC, lo que confirm una vez ms que
la pasivacin es debida a la unin qumica covalente entre las especies generadas en la
oxidacin electroqumica y el electrodo de trabajo.
42
300
I / A
250
200
-1
0.025 Vs
0.05
0.1
0.5
150
100
50
-50
E / V vs ECS
-100
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 24. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) de
BEOAF, 2 mM a diferentes velocidades de barrido.
43
140
I / A
120
100
1 Ciclo
2 Ciclo
3 Ciclo
4 Ciclo
80
60
40
20
0
-20
E / V vs ECS
-40
-0,2
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
Figura 25. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de BEOAF 2 mM, presentacin de 4 ciclos consecutivos de VC.
140
120
I / A
100
a)
b)
c)
d)
e)
f)
80
60
40
20
0
-20
E / V vs ECS
-40
-2,0
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
Figura 26. Voltamperometra cclica en ACN + 0.1M Bu4NPF6 sobre grafito vidriado (3 mm ) a
0.1 Vs- de BEOAF 2 mM, a) ciclo 1, b) ciclo 2, c) ciclo 3, d) ciclo 4, e) ciclo 5, hacia reduccin, f)
ciclo 6, hacia oxidacin, posterior a reduccin.
44
De acuerdo a estos resultados y dada la aparicin de una pre onda de oxidacin muy
cercana al pico I en la oxidacin electroqumica de los sistemas bisster, es posible inferir
que la manera en la que los radicales generados se acoplan al electrodo, en el caso de estos
dos sistemas, podra ser distinta a la observada para el AF y el EBAF. Es importante
mencionar que estudios tericos sobre sistemas bis y tripodal derivados del cido ferlico
sealan que estos pueden tener ms de un sitio favorable energticamente donde puede
llevarse a cabo una reaccin radicalaria [47], lo que da una idea acerca de los
acoplamientos que se llevan a cabo en estos sistemas. Por otro lado, tambin se ha
reportado la formacin de especies dimricas a travs de la oxidacin de cidos
hidroxicinmicos y sus derivados en la posicin al grupo carbonilo [40, 42, 46, 50].
Por lo anterior, es posible la propuesta del siguiente mecanismo de oxidacin para los
sistemas bisster del cido ferlico:
45
A pesar de que el carbn vtreo (CV) es considerado como un material inerte, enlaces
covalentes sobre la superficie del electrodo, como: CV-C, CV-N, CV-O, CV-Ar, han sido
descritos por diversos grupos de investigacin con anterioridad [48, 49, 50, 51]. Asimismo,
estas modificaciones sobre la superficie del electrodo (CV) han involucrado la formacin
de radicales, quienes se acoplan con los carbonos de la superficie de CV, formando enlaces
covalentes. Adems de la existencia de diferentes formas de unin de los radicales neutros
formados en estos sistemas, otro aspecto relevante a considerar es aquel relacionado con la
inhomogeneidad de sitios reactivos presentes en el CV [52].
En ste estudio resulta importante sealar que al igual que lo encontrado en sistemas
bisamida derivadas de AF por nuestro grupo de investigacin [45], la topologa bisster
muestra una predominancia en el proceso de quimisorcin, que tambin es afectado por la
longitud de la cadena hidrocarbonada que separa a las unidades guayacol.
Por otro lado, en ste estudio se encontr que los steres derivados del cido ferlico
muestran potenciales de oxidacin mayores que su precursor (tabla 1), por tanto, se podra
predecir que estos derivados tengan una actividad antioxidante menor que el AF. Sin
embargo, es importante recordar que adems del potencial de oxidacin, el nmero de
electrones potencialmente donables por parte del antioxidante es otro parmetro
fundamental a considerar. En los sistemas bis steres estudiados, los potenciales de
oxidacin observados y medidos para los mismos son el resultado de dos picos de
oxidacin incluidos en el pico andico I y que son consecuencia de una no equivalencia
qumica de los grupos guayacol, cuyo origen se encuentra actualmente en investigacin, por
otra parte se demostr la existencia de una estequiometra mayor a dos electrones, este
ltimo resultado junto con la baja polaridad en estos sistemas, podra ser una caracterstica
que favorezca su capacidad antioxidante.
Potencial de oxidacin
(V)
1.18
1.21
1.38
1.41
46
47
7. CONCLUSIONES
Se sintetizaron los steres EBAF, BEPAF y BEOAF del cido ferlico con rendimientos
moderados, reportndose por primera vez la sntesis de los sistemas bisster. Las tres
molculas obtenidas se caracterizaron mediante tcnicas de resonancia magntica nuclear,
en el caso de los sistemas bisster, se utiliz adicionalmente la espectrometra de masas.
Se estudi por primera vez la oxidacin electroqumica en acetonitrilo de los tres sistemas a
travs de la tcnica de voltamperometra cclica, pudindose concluir a partir de los
resultados obtenidos lo siguiente:
El
EBAF posee un
mecanismo de oxidacin
ECE
(Electroqumico-Qumico-
48
49
8. METODOLOGA
8.1.Metodologa Sinttica
Generalidades: La reacciones de sntesis se llevaron a cabo a temperatura ambiente, bajo
atmsfera de Nitrgeno. La Dimetilformamida (DMF) y el acetonitrilo (ACN) utilizados
para la sntesis fueron grado HPLC. El cloruro de metileno y el dietilter utilizado para la
extraccin fue grado reactivo. La purificacin de los compuestos se llev a cabo mediante
cromatografa en columna. Para la columna cromatogrfica se utiliz gel de slice 230-400
marca Natland.
Reactivos: cido ferlico (99%), 2-bromo-etilbenceno, perlas de hidroxido de sodio 98%,
1,5-dibromopentano (97%), 1,8-dibromooctano (98%), Solucin de hidroxido de tetrabutil
amonio 0.1 M en metanol. Todos los reactivos se obtuvieron comercialmente en SigmaAldrich.
Instrumentacin: Los puntos de fusin se determinaron con un aparato Melting-point
modelo SMP10 marca Stuart en capilares abiertos. Los espectros de Resonancia Magntica
Nuclear se obtuvieron en el espectrmetro JEOL GSX-270 NMR 270 MHz, con sonda de
gradiente y habilitado para hacer experimentos a temperatura variable. Los espectros de 1H
se realizaron a 270 MHz y los de 13C a 100.5 MHz. Las constantes de acoplamiento (J), se
reportaron en Hertz (Hz) y para indicar la multiplicidad de las seales se abrevia: simple
(s), doble (d), doble de dobles (dd), triple (t), seal mltiple (m). La espectrometra de
masas se determin con un Espectrmetro Gi969A LC/MSD-TOF Agilent.
8.1.1. Sntesis de steres derivados del cido ferlico.
El sistema EBAF fue sintetizado a partir de AF y bromuro de bencilo, de acuerdo al
procedimiento informado por Son y col [53].
50
JHH= 2.0 Hz), 7.06 (dd, 1H, H-9, 3JHH=8.0 Hz, 4JHH=2.0), 7.34-7.43 (m, 5H). RMN
13
(270 MHz, CDCl3) =167.2 (C=O, C1), 115.2 (CH, C2), 145.3 (CH, C3), 127.0 (C4), 109.3
(C5), 148.1 (C6), 146.8 (C7), 114.8 (C8) y 123.2 (C9), 56 (C10), 63.3 (C11), 136.2 (C12),
128.3-128.7 (C13-17).
51
de
hidroxido
de
13
C1), 115.5 (CH, C2), 144.9 (CH, C3), 127.0 (C4), 109.3 (C5), 148.0 (C6), 146.8 (C7),
114.7 (C8) y 123.1 (C9), 56.0 (C10), 64.3 (C11), 28.5 (C12). 22.7 (C13). Masa exacta
calculada para C25H28O8: 456.49, observada (M+1): 457.185
BEOAF.
solucin
A
de
una
cido
ferlico (1 g) en 80 ml
de ACN, se le agreg
5.2 ml de hidroxido de tetrabutilamonio (5.14 mmol). Se dej en agitacin por 30 minutos,
posteriormente se adicionaron 0.37 ml 1,8-dibromo-octano (2.5 mmol). La mezcla de
reaccin se dej en agitacin a temperatura ambiente durante 52 horas, posteriormente se
agregaron 50 ml de agua helada, y el producto se extrajo con cloruro de metileno. El
extracto fue secado con MgSO4 y evaporado al vaco. La purificacin del compuesto se
realiz en cromatografa en columna, fase estacionaria: silica gel, fase mvil: mezcla
hexano/acetato, polaridad 75:25. Rendimiento de la reaccin 13%. Se obtuvo un slido
52
53
Figura 28. Esquema general del equipo (potenciostato) y computadora utilizado para
controlar la experimentacin en la celda electroqumica.
a)
b)
c)
d)
Figura 28. Celda convencional de tres electrodos provista de a) Electrodo de trabajo (disco
de carbn vtreo 3mm , b) Electrodo auxiliar (malla de Pt), c) Electrodo de referencia
(ECS) y d) burbujeador de Nitrgeno de alta pureza.
54
55
9.
REFERENCIAS
[1] M. Srinivasan, A.R. Sudheer, V.P. Menon. J. Clin. Biochem. Nutr. 40 (2007) 92-100.
[2] R. Keyrouz, M. Abasq,
56
57
[29] W.R. Russell, A.B. Hanley, M.J. Burkitt, A. Chesson. Bioorg. Chem. 27 (1999) 339350.
[30] P. Wrigstedt, P. Kylli, L. itk nen, . Nousiainen, M. Tenkanen, J. Sipil . (2010).
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58(11), 6937-6943.
[31] P. Kylli, P. Nousiainen, P. Biely, J. Sipil, M. Tenkanen, M.J. Heinonen. Agric. Food
Chem. 56 (2008) 4797-4805.
[32]
58
59
10.
APENDICE
Espectrometra de masas del sistema BEPAF. Masa exacta calculada para C25H28O8:
456.49, observada (M+1): 457.185
60
Espectrometra de masas del sistema BEOAF. Masa exacta calculada para C28H34O8:
498.23, observada (M+1): 499.23.
61