AMINOCIDOS Y PROTENAS

REACCIONES DE LOS AMINOACIDOS

1. Reaccin de la ninhidrina
ALBMINA:
Al agregarle 5 gotas de solucin de ninhidrina calentado a ebullicin durante 2-3
minutos se obtuvo un color prpura, el cual significa prueba positiva para cualquier
aminocido.
Lisina + NaOH
El color fue mas intenso en la segunda experiencia ya que en la primera la estructura no
se rompe y por lo tanto no se alcanza a percibir la coloracin.
2. Reaccin de milln
ALBMINA:
Al agregarle 5 gotas de reactivo de milln la solucin obtuvo un precipitado con una
coloracin de amarillo claro.
Al calentar la solucin no se obtuvo un cambio a simple vista, solo se observo que el
reactivo de milln no actu sobre la albmina esto demuestra que es prueba negativa
La Albmina, es un tipo de protena simple, compuesta de carbono, hidrgeno, oxgeno,
nitrgeno y un pequeo porcentaje de azufre.
La albmina es coagulable por el calor, los cidos minerales, el alcohol y el ter, y es
soluble en agua y en disoluciones diluidas de sal. Es parte importante de la
alimentacin, y est presente en la clara de huevo, la leche, el msculo y el plasma
sanguneo; tambin se produce en las plantas, especialmente en las semillas. Puesto que
la albmina se coagula cuando se calienta a 71 C, es til para separar precipitados que
enturbian disoluciones; as se aclaran disoluciones en el refinado del azcar y otros
procesos. La albmina forma compuestos insolubles con muchas sales metlicas, como
el cloruro de mercurio, el sulfato de cobre y el nitrato de plata.
TIROSINA:
Al agregarle 5 gotas de reactivo de milln la solucin obtuvo un precipitado con una
coloracin de rojo ladrillo.
Al calentar la solucin se no obtuvo un cambio en la coloracin rojo ladrillo ya que las
2 sustancias se disolvieron dejando como resultado prueba positiva para reaccin de
aminocidos.

La tirosina pertenece al grupo de aminocidos con grupos polares sin carga. Participa
como promedio en un 3,5% (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin
de las protenas. Los mamferos pueden sintetizar la tirosina, un aminocido no esencial,
a partir de la fenilalanina, un aminocido esencial que debe obtenerse a travs de la
alimentacin.
FENILANINA:
Al agregarle 5 gotas de reactivo de milln la solucin no presento un cambio notable en
la coloracin.
Al calentar la solucin no se obtuvo un cambio a simple vista, solo se observo que el
reactivo de milln no actu sobre la fenilanina esto demuestra que es prueba negativa
para reaccin de aminocidos.
La fenilanina forma parte del grupo de aminocidos con grupos no polares (hidrfobos).
Este aminocido participa como promedio en un 3,5% (en relacin con todos los
aminocidos) de la composicin de las protenas. El precursor para su biosntesis es el
corismato, una molcula en forma de anillo que se obtiene, entre otros, a partir de
productos intermedios de la gliclisis. No puede ser sintetizado por los mamferos, por
lo que constituye uno de los aminocidos esenciales. La ausencia de una enzima, la
fenilalanina hidroxilasa, que cataliza la degradacin de fenilalanina a tirosina, provoca
una enfermedad denominada fenilcetonuria.
3. Reaccin xantoproteica
ALBMINA:
Al agregarle 1ml de cido ntrico concentrado
TIROSINA:
GLICINA:
4. Reaccin sakaguchi
ALBMINA:
Al agregarle 1ml de NaOH y de 2 a 5 gotas de alfa-naftol la solucin obtuvo un color
blanco.
Al agregarle 4 a 5 gotas de agua de bromo, tomo una coloracin roja en la parte superior
y en la parte inferior un color blanco.
GLICINA:

Al agregarle 1ml de NaOH y de 2 a 5 gotas de alfa-naftol la solucin obtuvo un color

blanco.
Al agregarle 4 a 5 gotas de agua de bromo, tomo una coloracin verde en la parte
superior y en la parte inferior un color blanco.
ARGININA:
Al agregarle 1ml de NaOH y de 2 a 5 gotas de alfa-naftol la solucin obtuvo un color
blanco.
Al agregarle 4 a 5 gotas de agua de bromo, tomo una coloracin roja en la parte superior
y en la parte inferior un color blanco.
CREATINA:
Al agregarle 1ml de NaOH y de 2 a 5 gotas de alfa-naftol la solucin obtuvo un color
blanco.
Al agregarle 4 a 5 gotas de agua de bromo, tomo una coloracin roja en la parte superior
y en la parte inferior un color blanco.
REACCIONES GENERALES DE LAS PROTENAS
1. Prueba del biuret para enlaces peptdicos
UREA:
A medida que fuimos calentando la urea hasta que se solidifico el papel tornasol
presento un cambio de coloracin de roja a azul, esto se debe a que la urea es bsica y
pasa a ser del grupo acido.
Al agregarle 2ml de NaOH lo que observamos fue los siguientes cambios:
Tubo 1. La solucion presento un cambio de incoloro a un color moradito.
Tubo 2. La solucion presento un cambio en la parte de arriba rojo y abajo incoloro.
Tubo 3. La solucion presento un cambio ya que quedo todo de color naranja
Al agregarle las 5 gotas de CUSO4
Tubo 1. La solucion presento un cambio a morado oscuro.
Tubo 2. La solucion presento un cambio a un morado mas oscuro.

Tubo 3. La solucin presento un cambio a un morado un poco mas oscuro.

Todas las muestras dieron como resultado positivo
DISCUSION DE RESULTADOS:
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los
aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una
sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

Que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta
caracterstica. Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven
por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret.
2. Desnaturalizacin de protenas
ALBUMINA
Amarillo, al agregar 0.5 ml de HCL se formo una estructura con forma de telaraa.
Al calentarse presento una precipitacin de espuma y se solidifico, al ponerle el papel
tornasol se puso de color rojo.
Al agregarle NaOH fue cambiando hasta llevarlo al PH mas cercano a la neutralidad es
decir hasta que el papel tornasol cambio a azul.
CASEINA

Amarillo, al agregar 0.5 ml de NaOH no presento ningn cambio en la coloracin ni en

su estructura solo se presento un poco de burbujas.
Al calentar no paso nada pero al agregar el papel se puso azul.
Al agregar HCl 10 gotas cambio su PH a la neutralidad es decir el papel tornasol se
puso de color rojo.
GELATINA
Polvito, se volvi una mezcla al agregrsele agua.
DISCUSION DE RESULATADOS:
Se pudo observar que todas las muestras se coagularon, debido al gran tamao de sus
molculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con
soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso
irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados que al actuar
sobre la protena la desordenan por destruccin de sus estructuras secundaria y terciaria.
CONCLUSIONES
*Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo, ya
que cumple muchas funciones.
*Las reacciones se utiliza en trabajos analticos, as como en la visualizacin de las
bandas de los aminocidos despus de su separacin por electroforesis o por
cromatografa.
*Las protenas estn constituidos por aminocidos, por los cuales los mtodos se basan
en el reconocimiento de los amincidos.

Pruebas Cualitativas para Aminocidos y Protenas

Objetivos
Aplicar pruebas cualitativas generales y especficas que
permitan reconocer grupos qumicos de los aminocidos y
protenas.
Someter soluciones de protenas a desnaturalizacin con
agentes fsicos y qumicos.
Resumen
Realizamos

pruebas

especficas

para

cualitativas

reconocer

generales

grupos

qumicos

algunas
de

los

aminocidos y de algunas protenas. Desnaturalizamos

protenas por calor y con pH extremos.
Marco Terico
Reaccin con la ninhidrina: Los grupos amino libres de
los aminocidos, de los pptidos y las protenas reaccionan
con la ninhidrina a un pH entre 4 y 8, para dar un
compuesto de intenso color azul prpura. La prueba
tambin es positiva con aminas primarias y amonaco pero

sin desprendimiento de CO2 . Los aminocidos prolina e

hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del color
prpura con la ninhidrina.
La reaccin es muy sensible y es ideal para la
deteccin de aminocidos en cromatogramas y para su
cuantificacin mediante tcnicas espectrofotomtricas de
las fracciones que se obtienen de columnas
cromatogrficas.
2. Reaccin xantoproteica: Los aa, que contienen un
ncleo aromtico forman nitroderivados de color amarillo
cuando se calientan con cido ntrico concentrado.

Las

sales de estos derivados son de color naranja intenso en

medio alcalino. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado
el Triptfano, as como todas las protenas que los
contienen, dan positiva la prueba.
3. Reaccin del cido glioxlico para triptfano: El
grupo indlico del triptfano reacciona con cido glioxlico
en presencia de cido sulfrico concentrado dando un
complejo de color prpura. El cido actico glacial que ha
sido expuesto a la luz contiene cido glioxlico.
4. Reaccin para el triptfano: Este aminocido se
condensa fcilmente con varios aldehdos en presencia de
cidos fuertes para dar compuestos coloreados. En la
reaccin se utiliza el reactivo de Ehrlich (pdimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCL conc.) que

reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos

tales como indoles, aminas aromticas y compuestos
ureicos para dar complejos coloreados.
5. Reacciones para cistena y cistina: Cuando los aa y
las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en
medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona
para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por
adicin de acetato de plomo.
Los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de
sodio en presencia de un exceso de amonaco para dar un
complejo de color rojo.
6. Prueba para Arginina: El aa. Arginina contiene un
grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona
con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en
medio alcalino para dar un compuesto de color rojo.
Pruebas generales de las protenas:
1. Prueba de Biureth: Los compuestos que tienen dos
grupos carbamidos (-CONH-), ya sea unidos directamente o
a travs de un tomo de carbono o nitrgeno, dan un color
violeta con el sulfato de cobre alcalino (Reactivo de
Biureth). Los tripptidos son las molculas ms pequeas

capaces de dar una prueba de Biureth positiva, mientras

que esto no ocurre con los aminocidos.
La prueba de Biureth es una buena prueba general para las
protenas y la intensidad del color violeta es una medida del
nmero de enlaces peptdicos. Algunas sustancias como la
oxamida pueden dar falsos resultados positivos en ensayos
cualitativos de protenas.
2. Desnaturalizacin por calor y pH extremos: La
desnaturalizacin es cualquier proceso por el cual el arreglo
espacial de una protena cambia de la estructura ordenada
de la molcula nativa a una forma tridimensional
desordenada. Durante la desnaturalizacin se pierden las
estructuras de orden superior de las protenas, con prdida
de la actividad biolgica. Las enzimas por ejemplo, que
realizan trabajos catalticos en las clulas, tienen una
temperatura y un pH ptimo en el cual presentan un
mximo de actividad, pero la actividad disminuye
significativamente hacia valores extremos de pH y a bajas o
elevadas temperaturas.
3. Precipitacin con cationes y aniones pesados y
sales concentradas: Los cationes de metales pesados y
los aniones de elevado peso molecular son muy usados en
la separacin de protenas y en la preparacin de filtrados
libres de protenas. A pH neutro por lo general las
protenas tienen carga neta negativa y se combinan
fcilmente con iones de metales pesados que, al neutralizar

la carga producen la precipitacin. A pH por debajo del

punto isoelctrico en cambio, se combinan con aniones
porque presentan carga neta positiva. Soluciones
concentradas de sales, de sulfato de amonio, por ejemplo,
reducen en gran medida la solubilidad de las protenas,
porque compiten por las molculas de agua de disponibles
para la solvatacin y las interacciones protena-protena se
hacen ms importantes.
Materiales
Tubos de ensayo
Goteros
Gradilla
Bao Mara
Reactivos

Acetato de Plomo II al 2%: puede ser nocivo por

ingestin. Puede ser nocivo si se inhala.

cido Pcrico saturado: combustible, explosivo. Causa

tos, dolor de garganta, enrojecimiento de la piel, diarrea,
vmito, dolor de cabeza, nuseas y vmito.

cido Tricloroactico al 5%: no combustible. Produce

dificultad respiratoria. Tos, dolor de cabeza y sensacin de
quemazn.

Acido Clorhdrico (HCl)

Corrosivo para los ojos, la piel y membranas mucosas.
Por inhalacin puede causar tos, ronquera y lceras.

 Por ingestin puede causar fiebre babeo, fuerte dolor de

garganta, dolor de pecho.
Hidrxido de Sodio (NaOH)
Irritante severo (por inhalacin) de las vas respiratorias.
La ingestin puede causar quemaduras severas de la boca,
garganta y estmago.
Causa irritacin de la piel o severas quemaduras.
Soluciones al 1% de albmina, casena y gelatina.

Reactivo de Biuret: est hecho de hidrxido potsico y

sulfato cprico, junto con tartrato de sodio y potasio. Es de
color azul, cambia a violeta en presencia de protenas y vira
a rosa cuando se combina con polipptido de cadena corta.
El hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero
proporciona el medio alcalino necesario para que tenga
lugar.

HNO3: extremar precauciones. La inhalacin o absorcin

cutnea puede ser fatal. Altamente corrosivo. Irritante.
Esquema Experimental

Laboratorio #3 Pruebas de Aminoacidos y Proteinas

Experimento #3
Pruebas cualitativas para aminocidos y protenas
Objetivos.
Aplicar pruebas cualitativas y especficas que permitan reconocer grupos
qumicos de los aminocidos y protenas.

Someter soluciones de protenas a desnaturalizacin con agentes fsicos y

qumicos.

Introduccin.
Las protenas son las biomoleculas ms abundantes despus del agua y
desempean un gran de funciones, que las caracterizan como componentes
esenciales e indispensables para la vida.
Sus propiedades qumicas y fisiolgicas dependen no solo de su tamao,
formas y propiedades de los aminocidos que las componen. Por la estructura
peptdica y la presencia de determinados grupos las protenas pueden

reaccionar con una variedad de agentes originndose productos coloreados.

Estas reacciones reacciones son las bases para la determinacin cuantitativa y
cualitativa de las protenas.
Todos los aminocidos que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo
libre, reaccionan con las diferentes pruebas de caracterizacin.
Tipos de reacciones que nos permiten identificar una protena:
1. Reaccin con la ninhidrina: Los grupos amino libres de los aminocidos,
de los pptidos y las protenas reaccionan con la ninhidrina a un pH entre 4 y 8,
para dar un compuesto de intenso color azul prpura. La prueba tambin es
positiva con aminas primarias y amonaco pero sin desprendimiento de CO 2 .
Los aminocidos prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo en lugar del color
prpura con la ninhidrina.
La reaccin es muy sensible y es ideal para la deteccin de
aminocidos en cromatogramas y para su cuantificacin mediante tcnicas
espectrofotomtricas de las fracciones que se obtienen de
columnas
cromatogrficas.

2. Reaccin xantoproteica: Los aa, que contienen un ncleo aromtico

forman nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con cido ntrico
concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en
medio alcalino. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptfano, as
como todas las protenas que los contienen, dan positiva la prueba.

3. Reaccin del cido glioxlico para triptfano: El grupo indlico del

triptfano reacciona con cido glioxlico en presencia de cido sulfrico
concentrado dando un complejo de color prpura. El cido actico glacial que
ha sido expuesto a la luz contiene cido glioxlico.

4. Reaccin para el triptfano: Este aminocido se condensa fcilmente con

varios aldehdos en presencia de cidos fuertes para dar compuestos
coloreados.
En la reaccin se utiliza el reactivo de Ehrlich (pdimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCL conc.) que reacciona con un buen
nmero de compuestos orgnicos tales como indoles, aminas aromticas y
compuestos ureicos para dar complejos coloreados.

5. Reacciones para cistena y cistina: Cuando los aa y las protenas que

contienen grupos tilicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre
presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la

formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato

de plomo.

Los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia

de un exceso de amonaco para dar un complejo de color rojo.

6. Prueba para Arginina: El aa. Arginina contiene un grupo guanidino en la

cadena lateral, este grupo reacciona con el reactivo de Sakaguchi (anaftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto de color rojo.

Pruebas generales de las protenas:

1. Prueba de Biureth: Los compuestos que tienen dos grupos carbamidos (CONH-), ya sea unidos directamente o a travs de un tomo de carbono o
nitrgeno, dan un color violeta con el sulfato de cobre alcalino (Reactivo de
Biureth). Los tripptidos son las molculas ms pequeas capaces de dar una
prueba de Biureth positiva, mientras que esto no ocurre con los aminocidos.
La prueba de Biureth es una buena prueba general para las protenas y la
intensidad del color violeta es una medida del nmero de enlaces peptdicos.
Algunas sustancias como la oxamida pueden dar falsos resultados positivos en
ensayos cualitativos de protenas.

2. Desnaturalizacin por calor y pH extremos: La desnaturalizacin es

cualquier proceso por el cual el arreglo espacial de una protena cambia de la
estructura ordenada de la molcula nativa a una forma tridimensional
desordenada. Durante la desnaturalizacin se pierden las estructuras de orden
superior de las protenas, con prdida de la actividad biolgica. Las enzimas
por ejemplo, que realizan trabajos catalticos en las clulas, tienen una
temperatura y un pH ptimo en el cual presentan un mximo de actividad, pero
la actividad disminuye significativamente hacia valores extremos de pH y a
bajas o elevadas temperaturas.

3. Precipitacin con cationes y aniones pesados y sales concentradas:

Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son
muy usados en la separacin de protenas y en la preparacin de filtrados
libres de protenas. A pH neutro por lo general las protenas tienen carga neta
negativa y se combinan fcilmente con iones de metales pesados que, al

neutralizar la carga producen la precipitacin. A pH por debajo del punto

isoelctrico en cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta
positiva. Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio, por ejemplo,
reducen en gran medida la solubilidad de las protenas, porque compiten por
las molculas de agua de disponibles para la solvatacin y las interacciones
protena-protena se hacen ms importantes.
Materiales y reactivos.

1. Gotero

2. Probeta de 10 ML

3. Plancha

4.Vaso Quinico

5. Tubos de Ensayo

6. Gradilla

Propiedades fsicas y qumicas

<> <>
Masa

Punto de
fusin

Punto de
ebullicin

Apariencia

Toxicidad

Ac ntrico

63

-420C

830C

liquido

Corrosivo

Ac actico

60,0

16,850C

118.050C

Liquido

Corrosivo

Glicina

75,0

235,850C

Triptfano

204.2

227,850C

Cistena

221,16

2400C

Reactivo

solido
563.60C

Esquema experimental.
Nihidrina

Solido
solido

Reaccin xantoproteica.

cido Glioxilico.

Prueba de Ehrlich para triptfano:

Reacciones para cistena

Reaccin para la arginina

Desnaturalizacin por calor y pH extremos