INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
LABORATORIO DE BIOQUMICA MICROBIANA
PRCTICA 3: Determinacin de actividad de succinato deshidrogenasa de
Escherichia Coli

ALUMNOS
Hernndez Basilio Jos Ral
Oliva Nava Martha Alejandra
Santiago Flores Uriel Mauricio

Grupo 5IV1
Seccin: 2
Equipo: 8

PROFESORES
Carlos Martnez Canseco
Elisa Rivera Prez
Alma Mara Rodrguez Olvera
Erika Angeles Morales
ASPECTO
Hiptesis
Objetivo
Resultados finales (tabla o grafica)
Discusin de resultados
Conclusiones
Bibliografa
Total

Fecha de entrega: 7gOctubre-2014

________________

CALIFICACIN
MIN-MAX
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.2 PUNTOS
0.0-0.5 PUNTOS
0.0-0.3PUNTOS
0.0-0.1PUNTOS
0.0-1.5 PUNTOS

Firma

CALIFICACIN

del

profesor:

Hiptesis
Si la enzima succinato deshidrogenasa se induce en presencia de
succinato, entonces la succinato deshidrogenasa en clulas de Escherichia

coli tendr una mayor actividad enzimtica que aquellas clulas crecidas en
glucosa.
A mayor concentracin de glucosa, ya sea en el medio de inoculacin o
adicionada posteriormente, menor actividad enzimtica presentar la
Succinato Deshidrogenasa

Objetivo
Analizar el papel fisiolgico de la enzima Succinato deshidrogenasa en
Escherichia coli comparando la actividad de la enzima y el crecimiento
bacteriano obtenidos bajo diferentes condiciones de cultivo.

Determinar el efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de

Escherichia coli.

Determinar la actividad de la enzima Succinato Deshidrogenasa por el

mtodo de Ells.

Determinar si la enzima succinato deshidrogenasa es inducible.

Determinar si la enzima succinato deshidrogenasa est implicada en el

proceso de respiracin.

Registro de datos
Efecto de la fuente de carbono sobre el crecimiento de Escherichia coli.
Para observar el efecto que ocasiona al inocular al medio de cultivo Succinato y
Glucosa, con fuentes de Carbono de Succinato y Glucosa, se elaboraron los
medios y se midieron absorbancias a 600 nm al inicio y final de incubarlos 5h a
37C, leidas como crecimiento. Obteniendo los siguientes datos, que mediante
una grfica denotamos dicho efecto:

Cultivos
previos en
Succinato
Glucosa

Matraz

Medio base

1
2
3
4

Succinato
Glucosa
Succinato
Glucosa

Crecimiento (Abs 600 nm)

Inicial
Final
0.450
0.845
0.452
0.962
0.639
0.903
0.602
0.903

Tabla 1. Valores de absorbancias a 600nm del efecto del crecimiento de Escherichia coli.

Grfica 1. Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E. coli

Efecto de la fuente de carbon en el crecimiento de E. coli

6
5
4

A 600nm

Final
Inicial

2
1
0

S-S

Efecto de la fuente
deshidrogenasa.

de

carbono

en

la

actividad

de

succinato

Se evidencia el efecto de la fuente de Carbono sobre la actividad de la Succinato

deshidrogenasa nicamente adicionando DCFIF, MSF, KCN, Regulador de
fosfatos, Succinato de Na y suspensin celular, se leyeron %T a 600 nm de las 4
celdas cada una con un inculo de clulas y una fuente de carbono adicionada, y
se obtuvieron las siguientes lecturas
%T a 600 nm de suspensiones celulares crecidas en las fuentes
Tiempo
de carbono
(s)
S-S
S-G
G-S
G-G
0
6.2
4.4
5.3
6.7
30
10.9
7.2
8.7
8.7
60
12.7
8.4
10.5
9.5
90
14.6
10.4
12.4
10.6
120
17.2
11.0
14.9
11.3
150
19.3
12.2
17.0
11.4
180
22.4
13.6
19.7
12.5
210
25.6
14.6
22.5
13.1
240
28.7
15.9
26.0
13.8
270
32.2
17.6
29.4
14.5
300
35.9
18.8
33.9
15.0
Tabla 2. Valores de transmitancias de las diferentes fuentes de carbono en la actividad de la enzima
Succinato deshidrogenasa.

Para observar el efecto que generan las fuentes de carbono utilizadas, realizamos
una grfica comparando las fuentes de carbono con respecto del tiempo, para ello

es necesario la diferencia de las transmitancias en todos los tiempos y la

transmitancia inicial (0 segundos) para cada matraz se obtiene:
%T a 600 nm de suspensiones celulares crecidas en las fuentes
Tiempo
de carbono
(s)
S-S
S-G
G-S
G-G
0
0
0
0
0
30
4.7
2.8
3.4
2.0
60
6.5
4.0
5.2
2.8
90
8.4
6.0
7.1
2.9
120
11.0
6.6
9.6
4.6
150
13.1
7.8
11.7
4.7
180
16.2
9.2
14.4
5.8
210
19.4
10.2
17.2
6.4
240
22.5
11.5
20.7
7.1
270
26.0
13.2
24.1
7.8
300
29.7
14.4
28.6
8.3
Tabla 3. Diferencias del %T a 600 nm de los medios de cultivo con diferentes fuentes de carbono

Efecto de la fuente de carbono en la actividad enzimtica

35
30
25
S-S

20

%T

S-G
G-S

15

G-G
10
5
0

50

100

150

200

250

300

350

t (s)
Grfica 2. Efecto de la fuente de Carbono en la actividad enzimtica de la succinato deshidrogenasa de
Escherichia coli.

Discusin

La bacteria Escherichia coli es una enterobacteria que puede llevar a cabo tanto
respiracin aerobia como fermentacin, esto ayuda a que se adapte casi a
cualquier medio en el que se cultive, siendo estos los determinantes para que
exista un mayor o menor crecimiento de la misma. Esta bacteria lleva a cabo la
gliclisis, proporcionando de esta manera coenzimas que se reducirn en el Ciclo
de Krebs quien a su vez proporcionar los electrones a travs del FADH 2 para que
lleve a cabo la cadena transportadora de electrones y as poder vivir. Sin embargo
en el experimento realizamos pruebas con dos fuentes de carbono como medio de
cultivo: glucosa y succinato, combinando tambin la fuente de carbono que se le
adicionaba una vez cultivada.
E. coli siempre preferir a la glucosa como fuente de carbono debido a que las
enzimas que degradan a la glucosa son constitutivas en Escherichia coli [1],
adems de que es un carbohidrato que entra fosforilado por medio del transporte
de traslocacin de grupo [2], esto permite que la glucosa se metabolice
directamente por la va catablica de glicolisis obteniendo as un producto
intermediario que a travs de una descarboxilacin oxidativa sigue la va de los
cidos tricarboxlicos formando as una serie de coenzimas reducidas que entran a
la cadena trasportadora de electrones obteniendo mayor cantidad de energa en
comparacin con el cultivo que contiene como fuente de carbono succinato, el cual
es un carbohidrato que es asimilado de manera ms lenta ya que las enzimas que
lo degradan son inducibles y al ser catabolizado forma un producto intermediario
(fumarato) que entra en el paso 7 del ciclo de los cidos tricarboxlicos [3],
formando una menor cantidad de coenzimas reducidas como el FADH 2 el cual
produce menor cantidad de energa (ATP) por medio de la cadena transportadora
de electrones,
En la grfica uno; se basa en el aumento de la turbidez, es decir a mayor
crecimiento, mayor diferencia entre la turbidez inicial y la turbidez final reflejado en
la absorbancia.
En las grficas podemos observar que la bacteria no tiene un crecimiento grande
en el medio de Glucosa/Glucosa (dnde el primero indica el sustrato adicionado y
el segundo el medio de cultivo) pero sabemos que esto es falso, ya que como ya
se mencion anteriormente, al llevar a cabo gliclisis, la fuente de carbono
principal es la glucosa, ya que la enzima que utiliza es constitutiva, mientras que
en el caso del Succinato como fuente de carbono existe un menor crecimiento ya
que necesita de la succinato deshidrogenasa, la cual es inducible y por lo tanto se
sintetiza con mayor lentitud que las constitutivas ya que estas se puede
metabolizar ms rpido y generar una mayor cantidad de biomasa con la glucosa
como fuente de carbono. Y se observa un mayor crecimiento en SuccinatoGlucosa que en Glucosa-Glucosa, ya que es ms fcil que la succinato
deshidrogenasa se encuentre presente en un medio de Succinato que de Glucosa,
ya que la glucosa reprime la sntesis de la SDH. Aunque el succinato tambin
forma parte de una de las vas que esta bacteria lleva a cabo, claramente no es la
principal y es por ello que el crecimiento no es tan grande que como si lo hiciera
con glucosa.

En la experiencia del efecto de la fuente de carbono sobre la actividad de

succinato deshidrogenasa en Escherichia coli, se conoce que la presencia de
succinato induce a la enzima succinato deshidrogenasa mientras que la glucosa,
lleva a cabo la represin catablica, haciendo que la actividad enzimtica se vea
reprimida[4]. Por lo tanto, tericamente en las suspensiones celulares se debera
de haber visto una mayor actividad enzimtica de la succinato deshidrogenasa,
quedando en el siguiente orden, as como se observa en la grafica 2.
En succinato-succinato, debido a que la cepa al ser crecida previamente en un
medio con succinato y al adicionarle de nuevo succinato en un medio base, se va
a ver favorecida la enzima succinato deshidrogenasa, debido a que el succinato
tomar el papel de un inductor promoviendo la actividad de la misma. En glucosasuccinato, debido a que al inicio, la cepa solamente se vea favorecida para su
crecimiento al usar la glucosa como fuente de carbono, sin embargo, al
adicionarle succinato, se promova la expresin y actividad de la succinato
deshidrogenasa. En succinato-glucosa, al inicio, se vera beneficiada la enzima
succinato deshidrogenasa al contar con el inductor (succinato), sin embargo al
tener la glucosa, la sntesis de la enzima se vera afectada, generando la represin
catablica de la misma, reprimiendo su actividad. En glucosa-glucosa, no se
expresara la enzima succinato deshidrogenasa al no contar con el inductor [5], por
lo tanto, no se esperara que existiera una mayor actividad enzimtica que la
actividad basal de la enzima.
Conclusiones

La enzima Succinato deshidrogenasa es una enzima inducida en el

metabolismo de Escherichia coli.
La actividad y sntesis de la enzima Succinato deshidrogenasa de
Escherichia coli es afectada por las diferentes fuentes de carbono en las
que se puede encontrar, de acuerdo a las necesidades que presente dicha
bacteria
Se determin la actividad enzimtica de la succinato deshidrogenasa por el
mtodo de Ells.
Se determin que la enzima succinato deshidrogenasa es inducible, por la
presencia de succinato en el medio.
Se determin que la enzima succinato deshidrogenasa est implicada en el
proceso de respiracin.

Bibliografa
[1] Ruz- Herrera, J y L. Garca. 1972. Regulation of succinate
deshydrogenase in Escherichia coli. J. Gen. Microbiol. 72:29-35.
[2] Black, J. 2008. Microbiology. Principles and explorations. Editorial Wiley.
7Edicin. EUA. Pg. 166-167.
[3] Hernndez, A. 2003. Microbiologa industrial. Editorial EUNED. Costa
Rica. Pg. 183-184.
[4] Hebing, W. 1985. Tablas qumicas para laboratorio e industria. Editorial
Revert. Espaa. Pg 211.

[5]

Mckee, T., J, Mckee, .2008. Bioqumica. Las bases moleculares de la vida.

Editorial Mc Graw Hill. 4 Edicin. Londres. Pg. 310-311, 340-348.