Ao de la Diversificacin Productiva y del

Fortalecimiento de la Educacin

CARRERA: Nutricion y Dietetica

CURSO: Microbiologia Aplicada a la Nutricion
PRACTICA: N1
Materiales
Bioseguridad en el Laboratorio
Microbiologico
Limpieza y Desinfeccion

2015

INTRODUCCION
Un laboratorio de microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar
microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad
propios de un laboratorio propio de un laboratorio.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos
presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para
evitar contaminaciones que den resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su nivel de
patogenicidad.

MARCO TEORICO
1.- MATERIALES
1.-Mechero Bunsen

Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del

mechero (zona asptica).
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama
Antes de comenzar a trabajar se procurar disponer de todo el material necesario
para el procesamiento de la muestra

2.- Gradillas

Sirve para acumular las muestras que se estudiaran en el laboratorio de

microbiologa.

3.- Estufa de incubacin

Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.
Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura
ptima de crecimiento (generalmente 35-37).

4.- Frigorfico o cmaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como
microorganismos.
Generalmente estn a una temperatura fija de 4C.

5.- Congeladores
Se utilizan para la conservacin de reactivos y microorganismos a temperaturas
inferiores a 0C, llegando a -80C (los ms frecuentes son -20, -40 y -80).

6.- Microscopio ptico

Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticos. Tambin se le
conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de
campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos
de Anton van Leeuwenhoek.

7.- Centrfuga
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrfuga lo que permite la
separacin de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitacin
en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.

8.- Cmaras de seguridad biolgica

Una cabina de bioseguridad, cabina de seguridad biolgica o cabina de seguridad
microbiolgica es un recinto o espacio de trabajo cerrado y ventilado para trabajar
de modo seguro con materiales contaminados (o potencialmente contaminados)
con agentes patgenos (bacterias, virus...) y forma parte del equipamiento de
laboratorio de muchas unidades biomdicas

2.- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Nivel de Bioseguridad
El Nivel de Bioseguridad es adecuado para trabajos que involucran agentes bien
caracterizados que no producen enfermedad en humanos sanos, y que imponen
un riesgo potencial mnimo para el personal del laboratorio y el medio ambiente.
El trabajo se realiza generalmente sobre mesas de trabajo utilizando prcticas
microbiolgicas estndar. No es necesario el uso de equipos de contencin
especiales y en general no se los utiliza. El personal de laboratorio cuenta con una
capacitacin especfica acerca de los procedimientos realizados en el laboratorio y
es supervisado por el profesor con capacitacin general en microbiologa o una
ciencia relacionada.
Las siguientes prcticas estndar y especiales, equipos de seguridad e
instalaciones se aplican a los agentes asignados al Nivel de Bioseguridad:
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de que
ocurran los siguientes accidentes:
Derrame de material biolgico sobre el cuerpo:
Remover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn por un minuto.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin desinfectante antes de
ser lavada.
Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos:
Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con
abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para asegurar
efectivamente el lavado, comenzando por los prpados.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo:
Lavar vigorosamente la herida con agua y jabn por varios minutos.
Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor.

3.- LIMPIEZA Y DESINFECCION DURANTE LA PREPARACION DE

ALIMENTOS
Los alimentos presentan un medio de cultivo ideal para el crecimiento de
ciertos microorganismos, bacterias, esporas, etc. Debido a su presencia en los
alimentos, se pueden dividir en las estructuras internas del alimento o incorporar a
los alimentos debido a su procesado o manipulacin.
En relacin con el consumo de los alimentos para los humanos se puede decir que
los microorganismos pueden ser "patgenos": es decir causantes de
enfermedades o "alterantes" (saprfitos) de sus estructuras, sabores u olores. Los
periodos de incubacin de gran parte de ellos llegan a periodos de
incubacin cortos: entre dos y diez horas. Algunos de los organismos poseen
bajos DMI (dosis mnima infectiva) y la higiene es la nica garanta de que se
mantiene el alimento en buenas condiciones.
Por regla general se debe atender a estas reglas:

A los 5 C los microorganismos estn en periodo de aletargamiento e

inhiben su crecimiento. Para la muerte de algunos microorganismos es
necesario que est a una temperatura menor de 3 C mximo 3 das (esto
elimina anisakis por ejemplo). En el caso de que se descienda a temperaturas
por debajo de -18 C los alimentos no deben estar ms de 4 meses
almacenados.

Entre los 5 C y los 60 C (la temperatura depende del alimento) los

microorganismos activan su desarrollo y se multiplican. Es este caso los
alimentos no deben estar sin consumir ms de 24 horas.

Entre los 65 C y los 100 C mueren en gran parte.

4.- METODOS DE ESTERILIZACION

Mtodos de Esterilizacin:

Nota: El calor hmedo proporcionado por autoclave a vapor es el mtodo de

esterilizacin ms efectiva, econmica y rpida disponible en la actualidad,
por lo tanto, debe ser la primera opcin si el material lo permite.
Esterilizacin por Medios Fsicos:
1. Vapor saturado a presin: Autoclave
Es el mtodo ms efectivo y de menor costo para esterilizar la mayora de los
objetos de uso hospitalario.
El autoclave tiene la ventaja de producir un elevamiento de la temperatura en
forma rpida, con cortos tiempos de esterilizacin y no dejar residuos txicos en el
material.
La presencia de materia orgnica o suciedad en el material interfiere con la accin
del vapor caliente por lo que, si el material est sucio, despus del proceso, no se
puede garantizar su esterilidad. Los microorganismos son eliminados por
desnaturalizacin de las protenas, proceso que es acelerado por la presencia de

agua como en la mayora de las reacciones qumicas. Se logran temperaturas de

134C.
2. Calor seco: Pupinel
Este sistema elimina microorganismos por coagulacin de las protenas de stos.
Su efectividad depende de la difusin del calor, la cantidad de calor disponible, y
los niveles de prdida de calor. La buena accin microbicida del calor seco
depende de que los elementos a esterilizar estn limpios, en presencia de materia
orgnica, por ejemplo: aceite o grasa, el microorganismo es protegido de la accin
del calor.
Su uso se debe limitar a materiales no esterilizables en autoclave. Penetra
lentamente en los materiales por lo cual se requiere largos perodos de exposicin.
Debido a las altas temperaturas para destruir microorganismos, es inapropiado
para algunos materiales como lquidos, gomas y gneros. Por otra parte daa el
material porque reduce el temple de acero. Se utiliza para aceites, vaselina,
petrleos y polvos.
Controles de Esterilizacin:
En la actualidad no es suficiente someter los materiales al proceso de
esterilizacin, sino que adems se requiere cierto grado de seguridad en la
eficiencia del procedimiento.
Los controles de esterilizacin se pueden clasificar en tres grupos:
1. Monitores fsicos:
Son elementos incorporados al esterilizador como termmetros, manmetros de
presin, sensores de carga, vlvulas y sistemas de registro. Estos monitores
fsicos son de gran utilidad, pero no son suficientes como indicadores de
esterilizacin. Deben ser calibrados peridicamente.
2. Indicadores qumicos:
Son productos comerciales consistentes en sustancias qumicas que cambian de
color si se cumple un elemento clave del proceso de esterilizacin como por
ejemplo la temperatura necesaria. Algunos indicadores requieren ms de un
parmetro como cierto tiempo de exposicin y humedad para cambiar de color.
Pueden ser fabricados de papel especial, cintas autoadhesivas o consistir en
tubos de vidrio con lquidos especiales. Todos estos indicadores tienen la
desventaja que pueden reaccionar cambiando de color an cuando no se han
dado los parmetros necesarios para obtener la esterilizacin. Los indicadores
qumicos son diferentes de acuerdo al proceso utilizado (calor seco, hmedo o
gas).

3. Indicadores biolgicos:
Es el mejor mtodo para determinar la eficiencia de un proceso de esterilizacin.
Estn diseados para confirmar la presencia o ausencia de microorganismos
viables despus de la esterilizacin. Consisten en esporas de microorganismos de
prueba que posee la mayor resistencia comprobada frente al mtodo de
esterilizacin utilizado. Es importante destacar que an cuando se demuestre la
muerte de microorganismos, esto no necesariamente significar estabilidad de los
artculos en esa carga debido a las otras variables del proceso que deben
cumplirse, especialmente la presencia de materia grasa. Por ese motivo el solo
uso de indicadores biolgicos es insuficiente para la monitorizacin de los
procesos de esterilizacin.
Almacenamiento y Duracin del Material Estril
Los artculos deben ser almacenados en forma que se utilicen primero los equipos
que tienen menor tiempo de vigencia de la esterilizacin.
La duracin de la proteccin de los elementos estriles empaquetados depende
de la porosidad del envoltorio y del mtodo de empaquetamiento. Las reas de
almacenamiento deben estar libres de polvo e insectos. Hay algunos factores
como cambios en la temperatura, humedad, corriente de aire y ruptura del envase,
que pueden contribuir a la contaminacin. El artculo permanece estril mientras el
empaque se mantiene cerrado, indemne y seco.

OBJETIVOS
Conocer la importancia de la higiene, limpieza, desinfeccin y esterilizacin
de los instrumentos.
Envolver la pipeta esterilizada para que no se contamine con bacterias u
otros microorganismos.
Envolver la esptula esterilizada para que no se contamine con bacterias u
otros microorganismos.
Envolver la placa Petri esterilizada para que no se contamine con bacterias
u otros microorganismos.

METODO
Preparacin de materiales de laboratorio de uso en microbiologa aplicada a
la nutricin y el proceso de esterilizacin.

MATERIALES Y EQUIPO

Guardapolvo
Mascarilla
Gorro cobertor
Guantes descartables
Lentes de proteccin

EQUIPO

Pipeta
Esptula
Placa Petri
Mechero

REACTIVO

Desinfectante

PROCEDIMIENTO ESPERIMENTAL
1.-Cortar el papel kraft por la mitad y de acuerdo a la especificacin del profesor.
2.-Despus de cortar el papel, desarrollamos el envolvimiento de los materiales:

Pipeta
Esptula
Placa Petri

3.-Al finalizar sujetamos los instrumentos envueltos con papel kraft con hilo pabilo
atndolo muy seguro.

RESULTADOS
Pipeta envuelta en papel kraft

Placa Petri
papel kraft

envuelta

en

Esptulas envueltas en papel kraft

CUESTIONARIO
1.- QUE DIFERENCIA HAY ENTRE LAS SIGUIENTES TECNICAS DE
ESTERILIZACION; PASTEURIZACION; TINDALIZACION Y UPERIZACION?
ESTERILIZACION

PASTEURIZACION

TINDALIZACION

UPERIZACION

1.-La esterilizacin por

calor seco produce la
destruccin de los
microorganismos por
oxidacin de sus
componentes celulares.
2.-Para el material
termosensible que no
admite las altas
temperaturas de la
esterilizacin
con vapor.
3.-Permite la
esterilizacin de
productos oleosos y
sustancias en polvo.
4.-No es txico.
5.-La instalacin
requerida no es
compleja.
6.-No se requieren
condiciones especficas
para la colocacin del
material en el interior
de la cmara.
7.-La alta temperatura
puede acelerar el
deterioro del material.

1.-Uno de los
objetivos del
tratamiento trmico
es una
"esterilizacin
parcial" de los
alimentos lquidos,
alterando lo menos
posible su
estructura fsica,
sus componentes
qumicos y
sus propiedades
organolpticas.
2.-el objetivo
primordial no es la
"eliminacin
completa de los
agentes
patgenos" sino la
disminucin
sustancial de sus
poblaciones,
reducindolas a
niveles que no
causen intoxicacion
es alimentarias a
los humanos.

1.-Tcnica de
esterilizacin que
consiste en elevar
la temperatura del
material que se
quiere someter a
tratamiento, entre
60 y 100 C, varias
veces seguidas a
intervalos de 24
horas.

2.-Es para productos

viscosos, los cuales
2.-Esterilizacin de pueden sufrir
productos de baja
problemas de
resistencia trmica, caramelizacin por el
cuando no existe
aumento progresivo
otra opcin.
de la temperatura si
se utiliza el sistema
normal de
calentamiento

3.-Algunos
especialistas
afirman que la
pasteurizacin
podra destruir las
vitaminas de los
alimentos lquidos
y modificar su
sabor.

2.- QUE DIERENCIA HAY ENTRE ESTUFA Y AUTOCLAVE?

ESTUFA

1.-Proceso de
esterilizacin de
sustancias lquidas,
que consiste en
inyectar vapor a
presin durante
menos de un segundo
y a una temperatura
de 150 C.

AUTOCLAVE

1.-La estufa de secado es un equipo

que se utiliza para secar y esterilizar
recipientes de vidrio y metal en el
laboratorio.
2.-Las estufas operan, por lo general,
entre la temperatura ambiente
y los 350 C. Se conocen tambin con
el nombre de Poupinel o pupinel.
3.-La esterilizacin que se efecta en
la estufa se denomina de calor seco y
se realiza a 180C durante 2 horas; la
cristalera, al ser calentada por aire a
alta temperatura, absorbe humedad y
elimina la posibilidad de que se
mantenga cualquier actividad biolgica
debido a las elevadas temperaturas y a
los tiempos utilizados.

1.- Es un sistema cerrado donde se

forma vapor de agua que se somete a
una presin elevada, una atmsfera, lo
que hace que el agua alcance una
temperatura de 121C causando la
desnaturalizacin de enzimas lo que
conlleva a la muerte de los
microorganismos y la destruccin de
las esporas.

2.-Para que la esterilizacin de medios

de cultivo sea eficaz, la temperatura y
el tiempo seleccionados deben
alcanzarse en todo el lquido.
3.-Los recipientes con cierre hermtico
deben ser introducidos en el autoclave
sin cerrar totalmente el tapn, para
facilitar la entrada del vapor durante el
proceso. Al vaciar el autoclave
despus de la esterilizacin
procederemos a cerrar totalmente
estos recipientes.
4.-Los recipientes vacos precisan de
un tiempo de esterilizacin mayor que
los recipientes con lquido en su
interior.

BIBLIOGRAFIA

Manual de prcticas laboratorio de microbiologa general aquiahuatl ramos

mara de los ngeles- primera edicin.
Ensayos microbiolgicos manual de laboratorio

REFERENCIAS INFORMATICAS
http://www.ins.gob.pe/CBS/PDF/bmbl4_spanish.pdf
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10
_normas_de_bioseguridad.pdf
http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/patolquir/patolquir_004.html