Anda di halaman 1dari 3

DETERMINACION DE LA TOXICIDAD DE RESIDUOS INDUSTRIALES

1.- Introduccin
El residuo se somete, en primer lugar, a un proceso de lixiviacin, con objeto de
extraer las sustancias solubles que pudieran ser txicas. En el lixiviado obtenido se realiza
el bioensayo de toxicidad de luminiscencia de la bacteria "Photobacterium phosphoreum".
2.- Fundamento
Las bacterias, durante su proceso metablico, emiten luz y cuando se ponen en
contacto con un material txico, disminuye su emisin.
El instrumento analtico mide la emisin de la luz de las bacterias antes y despus
de su exposicin a la muestra. El grado de reduccin de emisin de luz indica la toxicidad
de la muestra.
3.- Reactivos
- Acido actico 0,5 N.
- ClNa en estado slido.
- Solucin de ClNa al 2%.
- Solucin reactivadora de bacterias.
4.- Mtodo de lixiviacin
- Tomar una muestra representativa del residuo slido (mnimo 100 g).
- Pesar 10 g del residuo y aadirlo a un erlenmeyer.
- Aadir 160 ml de agua destilada.
- Ajustar el pH de la disolucin a 5.0 0.2 utilizando cido actico 0,5 N y
mantener este rango durante 24 horas en agitacin. No se debe aadir ms de 4
ml de cido actico por gramo de muestra.
- Terminada la extraccin, aadir agua destilada en cantidad determinada por la
siguiente ecuacin:
1

V = 20 W - 16 W - A
donde:
V = ml de agua destilada a aadir.
A = ml de cido actico 0,5 N aadidos durante la extraccin.
W = peso en gramos de residuo slido.

- Filtrar el contenido del erlenmeyer.

5.- Bioensayo de toxicidad


El bioensayo se realiza con el lixiviado obtenido y a una temperatura de 15C.

5.1 Puesta en marcha de los instrumentos.


Encender la unidad de incubacin LUMISTHERM y el equipo de medicin
LUMISTOX. Para la temperacin de los equipos (15C) se precisan unos quince minutos,
cuando se enciende el piloto verde del LUMISTHERM, los equipos estn listos para
empezar a trabajar.
5.2 Salado de las muestras (2%).
Tomar 25 ml de muestra y aadir 0,50 g de ClNa en estado slido.
5.3 Elaboracin de series de dilucin.
Colocar cubetas portamuestra en los 5 primeros dispositivos de incubacin de las
hileras A, B y C. Aadir 1.5 ml de muestra en A5 y, aadir 1.5 ml de ClNa al 2% en las
restantes cubetas de la hilera A. Aadir en A4, 1.5 ml de muestra y homogeneizar. Tomar
1.5 ml de A4, aadirlo en A3 y homogeneizar, y as sucesivamente hasta A2 (No aadir
muestra en A1).
5.4 Activacin de las bacterias.
- Sacar del congelador el recipiente que contiene la solucin reactivadora de
bacterias (RB) y deshelarlo a temperatura ambiente en un bao de agua, agitarlo y
colocarlo en el alojamiento de reserva a 15C durante 15 minutos.
2

- Sacar del congelador el vial de bacterias y deshelarlo en un bao de agua durante


2 minutos.
- Tomar 0.5 ml de RB y aadirlos al vial de bacterias, disolver frotando con la palma
de la mano durante 1 minuto y dejarlo 10 minutos en el alojamiento de reserva.
- Verter, con ayuda de una micropipeta, el contenido del vial en el recipiente que
contiene la solucin reactivadora y homogeneizar.
5.5 Elaboracin de las mezclas de ensayo y medicin (doble determinacin).
- Pipetear 0.5 ml de bacterias reactivadas en los dispositivos de incubacin de las
hileras B y C.
- Medir la luminosidad inicial (I0) de las hileras B y C. Inmediatamente despus de
cada medicin, pipetear 0.5 ml de muestra de la hilera A, sobre las hileras B y C de su
columna.
- Medir la luminosidad tras 15 minutos de incubacin (I15). Tras haber medido la
ltima muestra, en la pantalla del ordenador aparecer el valor EC50.
De acuerdo con la Orden de 13 de Octubre de 1989 (B.O.E. de 10 de Noviembre
de 1989), un residuo es txico si los lixiviados presentan un EC50 inferior o igual a 3000
mg/l.