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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERIA
CAMPUS GUANAJUATO

INGENIERIA DE BIORREACTORES
DISEO DE UN BIORREACTOR AIRLIFT PARA LA PRODUCCION DE
ACIDO GIBERLICO

6FM1

BARRIENTOS GARCIA ENRIQUE

ORTIZ HERNANDEZ VICTOR HUGO
GRANADOS GONZALEZ JOSE GUADALUPE
MARTNEZ LIZAMA OSCAR ADRIAN

PROFESORA
DIANA RAMIREZ SAENZ
28 de noviembre de 2014

INDICE

Fundamento
Antecedentes
Objetivos
Definicin, justificacin y seleccin del microorganismo
Parmetros cinticos y volumen de operacin
Simulacin (modelo de Monod)
Factores de forma
Descripcin del biorreactor tipo Arilift
Simulacin de Cultivo Continuo
Dimensionamiento del Biorreactor
Descripcin del sistema de agitacin, condiciones de operacin, reologa
y potencia del motor
Descripcin del mecanismo de transferencia de masa en el reactor
Criterios de escalamiento
Instrumentacin
Esterilizacin del biorreactor y del medio de cultivo.
Conclusin

FUNDAMENTO
PRODUCCIN DE CIDO GIBERLICO

La produccin de cido giberlico tiene gran importancia en la industria

agrcola, para el anlisis fsico y biolgico de semillas, como el estudio
de la Avena sativa, Hordeum Vulgare, Secale Cereale y Triticum
Aestivum. Este cido es adems un regulador de crecimiento que se usa
para estimular y regular el desarrollo de las plantas, en fenmenos como
reforzar la dominancia apical, estimulacin de la floracin, aumento del
fructificacin, rompiendo la dormicin de las semillas, suprimiendo el
estrs causado por algunos virus y actividad antibacteriana, (E.P. Yfera,
1995).
El hongo Gibberella Fujikuroi, produce cido giberlico, este hongo
generalmente tiende a infectar plantas y provoca que estas tengan un
desarrollo anormal, por ejemplo, cuando infecta a la planta de arroz
produce el desarrollo de tallos muy largos. El producto aislado se
comporta como una hormona de crecimiento vegetal, estimulando el
crecimiento de los tallos y el desarrollo de los brotes. Las plantas
tambin producen cido giberlico, como una hormona natural de
crecimiento en los vegetales, (E. P. Yfera, 1995).
El costo de la produccin de cido giberlico mediante fermentacin
sumergida es muy alto, principalmente por su rendimiento
extremadamente bajo y al extenso procesamiento en el downstream, se
han llevado a cabo estudios para disminuir el costo de produccin de
cido giberlico usando varios enfoques, (S. Bandelier y col. 1997). Por
ejemplo:
a) La optimizacin de nutrientes y de las condiciones del cultivo.
b) Desarrollo de nuevas tcnicas (clulas inmovilizadas, cultivos por lote
alimentado).
c) Tcnicas de bajo costo para la extraccin del componente.
Otra alternativa es la fermentacin en estado slido, la cual tiene
ventajas econmicas en la produccin de biomasa y metabolitos en la
produccin agrcola industrial.
CRECIMIENTO DE GIBBERELLA FUJIKUROI EN UN REACTOR
AIRLIFT
Los parmetros ms importantes para el desarrollo de Gibberella
Fujikuroi en el reactor Airlift son la retencin de gas, la velocidad del
fluido en los tubos ascendente y descendente, la determinacin del

tiempo de mezclado, la velocidad determinada del gas que fluye hacia la

superficie. La transferencia de masa, es determinada con el coeficiente
volumtrico de transferencia de masa, el cual es determinado en funcin
de la velocidad del gas en el tubo ascendente y como una funcin del
tiempo de fermentacin, (M. C. Chavez y Col., 2007).
BIORREACTOR AIR-LIFT
Es un reactor para fermentacin, en el cual el uso de una corriente de
aire es esencial, ungiendo como la fase dispersante en la recirculacin
de componentes, como las clulas y el medio dentro del reactor. Es
funcional en procesos de carcter aerobio. La forma tpica de un Airlift
contiene un tubo inyector de aire en el fondo del reactor, por el cual el
aire entra a alta velocidad, impulsando el contenido dentro del reactor,
generando burbujas en el caldo las cuales suben a la superficie
generando una corriente de arrastre en el fluido cercano, provocando un
flujo hacia arriba, al llegar el fluido a la superficie pierde la velocidad de
arrastre por la liberacin de la burbuja, aumentando su densidad, y por
gravedad fluye ahora hacia abajo con una mnima concentracin de aire
disuelto, generando recirculacin, (D. G. Rao, 2010).

ANTECEDENTES
La produccin de cido giberlico es un proceso que actualmente es
relevante en la industria alimentaria debido a la necesidad de generar
investigacin relacionada con los sistemas de plantacin como es el uso
de sustratos y/o cultivos sin suelo en contenedores, al igual que otras
prcticas hortcolas adecuadas que permitan el incremento de la
produccin. Por lo tanto, determinar cules seran algunos sustratos que
puedan ser utilizados por los productores, constituye una nueva fuente
de investigacin, cmo hechos destacados podemos mencionar a los
procesos elaborados en Venezuela que evalan los efectos de diferentes
sustratos y cido giberlico sobre el crecimiento, produccin y calidad de
la fresa, debido a la fuente de trabajo que representa para las zonas
altas de ese pas. La introduccin de semillas modificadas
genticamente para su reproducibilidad da lugar a una produccin
tarda. La aplicacin de cido giberlico, puede mejorar el crecimiento
celular, dando lugar a la recoleccin temprana de cultivos. Un ejemplo
claro es lo que sucede en el estado de Chihuahua en Mxico donde a se
evala la accin del cido giberlico sobre la produccin hidropnica del
tomate.

En la industria agrcola se desarrollan tcnicas para aumentar la

produccin mediante el uso y promocin de promotores de crecimiento
para los vegetales, el uso de Gibberella Fujikuroi para producir cido
giberlico mediante lotes de fermentacin sumergida es una
herramienta de alta eficacia para promover la produccin en este sector.
En esta investigacin su utilizo un modelo ortogonal para investigar los
efectos de la tempera, pH, la relacin entre fuente de carbono y
nitrgeno y concentraciones de harina de arroz sobre la produccin de
cido giberlico por Gibberella Fujikuroi en biorreactores fluidizados. En
biorreactores fluidizados la produccin de este cido puede ser en
promedio 3.90 g L-1, ms de tres veces ms grande que los reportados
por fermentaciones slidas y sumergidas, donde los parmetros antes
mencionados son los que ms impactaron en la produccin de dicho
cido, donde el pH fue el que ms afecto la produccin.
Para este experimento los efectos de la temperatura, pH, la
concentracin de fuente de carbono y fuente de nitrgeno y los cambios
en la concentracin de harina de arroz, no tuvieron gran impacto con
respecto a una pobre produccin, lo contrario se mostraron rendimientos
mayores.
Para produccin de cido giberlico se ha implementado tcnicas de
inmovilizacin celular, que permiten concentrar la biomasa en espacios
reducidos, la reutilizacin de biocatalizador y la separacin facilitada de
la biomasa. La utilizacin de sistemas de produccin que utilizan clulas
inmovilizadas representa una alternativa viable para la produccin de
metabolitos secundarios de inters biotecnolgico, sin embargo la
utilizacin de un biorreactor air-lift produce una mayor concentracin de
oxgeno, proporcionando un mayor rendimiento en los procesos
metablicos. (Molina y colaboradores)
El biorreactor air-lift proporciona aireacin, siendo un factor clave para la
remocin del calor metablico, CO2 y metabolitos voltiles ocluidos entre
las partculas, junto con su efecto regulador de la humedad del
biorreactor. Adems por su configuracin geomtrica, induce la
recirculacin del medio de cultivo, lo que hace ms atractiva e indicada
su aplicacin para el desarrollo eficiente de cualquier tipo de
fermentacin sumergida. (Cruz, 2007)

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Determinar los parmetros cinticos, dimensionales y escalares para el
diseo de un biorreactor tipo Airlift empleado para la produccin de
cido giberlico con una cepa de Gibberella Fujikuroi.
OBJETIVOS ESPECIFICOS

Definir las condiciones especficas de crecimiento de Gibberella

Fujikuroi en un reactor de tipo Airlift necesarias para la produccin
de cido giberlico.
Definir una ecuacin balanceada que describa a la cintica de
crecimiento por balanceo de electrones.
Realizar una cintica de crecimiento terica de acuerdo a las
condiciones de crecimiento adecuado para el hongo.
Realizara una simulacin de la cintica con los parmetros
obtenidos.
Disear una simulacin para un sistema de lote alimentado y continuo.
Establecer las dimensiones apropiadas de un biorreactor tipo Airlift para
un volumen de siete litros.
Determinar las variables de medicin y control.
Especificar el instrumental necesario para el funcionamiento ptimo de
un biorreactor tipo Airlift para determinar los parmetros de produccin
de cido giberlico.

DEFINICIN, JUSTIFICACIN Y SELECCIN DEL

MICROORGANISMO (GIBERELLA FUJIKUROI)
Las giberelinas son un grupo de hormonas encargadas de regular el
crecimiento de las plantas, en su estructura qumica lo constituyen de
diterpenos, los cuales estn compuestos por cuatro estructuras de
isopreno que forman como ligadura tres anillos, adems de formar un
puente de lactona.
Existen alrededor de 79 tipos de giberelinas que han sido documentadas
e identificadas en bacterias y plantas. A esta gran variedad de
giberelinas se les designa como GA1, GA2, GA3 hasta llegar a GA79. La
diferencia que existe entre cada una de ellas se debe a la presencia y
localizacin de doble ligadura y al nmero de grupos carboxilo, carbonilo
e hidroxilo dentro de la molcula (Grove 2001). De estos 79 tipos, 25 son
producidas por el hongo gibberella (Jones 1968).

El cido giberelico (GA3) es producido por microorganismos, donde el

hongo ascomiceto Giberella Fujikuroi es el ms empleado para su
produccin (Jefferys 1970). El GA3 es el compuesto ms importante del
grupo de las giberelinas, este acido es slido cristalino blanco soluble en
agua cuando no excede de 5 g/L. es fcilmente soluble en solventes
orgnicos tales como etanol, metanol, acetato de etilo, acetato de butilo
y acetona.
El hongo Giberella Fujikuroi es un hongo cuyo estado imperfecto es
denominado fusarium moniliforme, su aspecto de cultivo es muy
variable y es causante de la enfermedad Bakanae en la planta de
arroz. (Durand 2002)

Figura 1. Vista microscpica de fusarium moniliforme

Pertenece al orden
Maniliales familia Tuberculariaceas. Una
caracterstica que es muy remarcada en este hongo es la formacin de
macroconidios falciformes de varias clulas y frecuentemente presenta
tambin microconidios monocelulares.Es productor de un pigmento color
violeta, perteneciente al grupo de las Bikaverinas que presenta amplias
posibilidades de aplicacin en la industria farmacutica y cosmetologa
(Kumar 1970).Por lo tanto se considera que G. Fujikuroi es el
microorganismo ms adecuado para la produccin de GA3.
FACTORES QUE AFECTAN LA FERMENTACION GIBERELENICA (GA3)
Los rendimientos que se consideran ptimos de una fermentacin
dependen de factores como: cepa utilizada, tipo y preparacin del
inoculo, concentracin y tipo de nutrientes, temperatura, pH y
suministro de oxgeno.
Las caractersticas del medio de fermentacin son fundamentales para
la obtencin de buenos rendimientos de cido giberelico, siendo

primordiales la fuente de carbono, fuente de nitrgeno, sales minerales

y factores de crecimiento(Brucker 2001).El oxgeno tiene un efecto y un
papel muy importante cuando las clulas estn en crecimiento, ya que la
demanda de oxigeno aumenta, y si existen inhibiciones del gas por un
periodo largo de tiempo, decrece la produccin de GA 3, CO2 y
metabolitos voltiles ocluidos entre las partculas, lo que podra generar
un aumento en la humedad. La aireacin del reactor permite que el
crecimiento del microorganismo se realice en condiciones aerbicas y
ricas en nutrientes.
Para el caso de hongos existen diversos tipos de inculos (micelio,
esporas) sin embargo, las esporas fngicas del hongo Gibberella
Fujikuroi presentan caractersticas de tamao, forma y estado fisiolgico
ms uniforme y se manejan ms fcilmente que la masa micelial
(Mandels 1996).
La velocidad de crecimiento y la acumulacin de producto tambin son
afectadas por variaciones de temperatura y pH. La temperatura optima
de crecimiento de G. Fujikuroi se encuentra entre 31 y 32C, mientras
que la mayor produccin de cido giberelico se logra obtener a 29C, a
temperaturas superiores se acumulan otras giberelinas como A 4 y A7.
(Borrow 2001)
BIOSINTESIS DE GA3
La ruta metablica para la sntesis de GA 3 ocurre en cuatro etapas:
(Jones 1968)
1. Formacin de la unidad isopreno o su equivalente biolgico a
partir de acetil CoA o leucina.
2. Deshidratacin y descarboxilacion de mevalonil 5 fosfato para
dar un isopreno activo seguida de la condensacin de unidades
de isopreno para formar terpenos alicclicos.
3. Ciclacin de las estructuras aliciclicas.
4. Posteriores modificaciones de la estructura ciclizada que
conducen a la formacin de las distintas giberelinas.
El anlisis de la biosntesis de GA 3 revela que existe una gran similitud
con el anabolismo de grasas, lo que hace suponer que la presencia de
estas molculas en el medio puede provocar una alteracin de la
produccin de GA3.

FERMENTACION ADECUADA PARA EL CRFECIMIENTO DE

GIBBERELLA FUJIKUROI
En los ltimos aos se ha ido generado un gran inters por las
fermentaciones en estado slido con aireacin directa, esto se debe a
los altos rendimientos que genera. Adems de la excelente
productividad, este tipo de fermentacin ofrece otras ventajas prcticas
y econmicas (Grove 2001).
Las fermentaciones en estado slido son aquellas en las cuales el
crecimiento microbiano y la formacin del producto se llevan a cabo en
la superficie de sustratos slidos. La fase solida puede brindar una
superficie rica y compleja de nutrientes y adems un soporte para el
crecimiento microbiano.
Se pueden obtener condiciones selectivas para el crecimiento fngico
humedeciendo los slidos con medio a bajo pH y con alta densidad de
inoculo de esporas (Durand 2002). Unas de las ventajas que ofrece la
aireacin en reactor tipo Airlift, es que la aireacin se facilita por
espacios entre las partculas de sustratos y partculas de la mezcla, por
lo que el rendimiento del producto puede ser mucho ms alto que en un
tratamiento con medio lquido.
INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES DE FERMENTACION EN LA
PRODUCCION DE GIBERELINAS
Cada hongo tiene un desarrollo en sus propiedades anatmicas,
morfolgicas y sobretodo fisiolgicas.
Se ha demostrado que las
condiciones ptimas para la produccin del cidoliberalice se d en
cultivos en donde la fuente de nitrgeno se restringe parcialmente a la
par que se desarrolla el micelio al metabolizar la fuente de carbono
(Kumar 1970)
Como fuente de nitrgeno se ha utilizado preferentemente nitrgeno
amoniacal y tambin como fuentes alternativas se pueden emplear
semillas de cereales o plantas.
En lo referente a la fuente de carbono es ideal un proceso de liberacin
gradual o lenta para evitar un fenmeno de represin catablica. Se ha
demostrado que la sacarosa es mejor que la glucosa como fuente de
carbono pero tambin se pueden utilizar aceites de semillas de cereales,
maz o ajonjol.

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La produccin de cido giberlico depende mucho del pH, este intervalo

ahonda entre los 3 y 5.5, si no se respeta este parmetro la velocidad de
produccin y de velocidad tienden a decrecer (Brucker 2001)
El medio ambiente gaseoso o de aireacin contribuye de manera
considerable en la velocidad de formacin de biomasa y de biosntesis
del cidoliberalice en el estado slido. Tiene la propiedad de establecer
un monitoreo de la actividad biolgica por determinaciones de
parmetros como humedad, temperatura, cantidad de oxgeno y de CO2.

PARMETROS CINTICOS Y VOLUMEN DE

OPERACIN
Para produccin de cido giberlico, se parte de la siguiente ecuacin:
C6 H 12 O6 +0.026 NH 4 Cl+O2 C H 1.79 O0.50 N 0.20+C 19 H 22 O6+ CO2 + H 2 O
Dnde:
C6 H 12 O6 Dextrosa=Fuente de Carbono
NH 4 Cl Cloruro de Amonio=Fuente de Nitrogeno
O2 Oxigeno=Fuente de Oxigeno
C H 1.79 O0.50 N 0.20 Gibberella fujikuroi=Biomasa
C19 H 22 O6 Acido giberelico= producto

Se determinan los coeficientes estequiomtricos para determinar el

balance general de la ecuacin anterior (ver Anexo 1), quedando de la
siguiente manera:

C6 H 12 O6 +0.026 NH 4 Cl+1.741 O2 2.99C H 1.79 O0.50 N 0.20 +0.001118C 19 H 22 O6 +CO 2 + H 2 O

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DETERMINACION DE LOS PARAMETROS CINETICOS

Se utiliz la cepa H-984 del hongo Gibberella Fujikuroi utilizando como
fuente de nitrgeno NH4Cl y como fuente de carbono Dextrosa. Las
variables independientes involucradas en este proceso fueron el pH,
cantidad de carbono y cantidad de nitrgeno y la variable dependiente
fue la produccin de cido Giberlico (GA 3).El proceso se llev a cabo en
un reactor tipo Airlift con un volumen de capacidad de 4 litros. Se
monitoreo la evolucin de biomasa, glucosa, consumo de nitrgeno y
produccin de cido giberlico en un periodo de 50 Horas.
Se registraron los siguientes datos a partir de la cintica de crecimiento
Tabla 1. Datos obtenidos para la produccin de cido giberlico, as
como los respectivos rendimientos de sustrato, biomasa y producto.
Tiemp
o
h

Produc
to g/L

Sustrato
(residual
) g/L

Biomasa
g/L

LAN(X/x0
)

50
45.78
43.45

Sustrato
(consumi
do)
g/L
0
4.22
6.55

0
25
50

0
0
0.03

75

2.15
8.67
10.31

0
1.3944
1.5676

0
0
0.00368

0
2.0545
1.574

0
0.48673
0.63530

0.045

34.33

15.67

10.52

1.5878

0.00538

0.6713

1.48954

100

0.055

32.56

17.44

12.33

1.7465

0.0054

0.7069

1.41443

125

0.0886
5
0.102

30.01

19.99

10.89

1.6223

0.01014

0.5448

1.83562

25.89

24.11

8.5

1.3745

0.01606

0.35255

2.83647

145

Ypx

Yxs

1/Yxs

Los datos proporcionados en la Tabla No. 1 fueron colocados en una hoja

Excel para aplicar su regresin y obtener as los parmetros como la
velocidad de crecimiento (), generacin de producto en la fase
estacionaria (mp), coeficiente de mantenimiento celular (ms),
generacin del producto en etapa estacionaria (qp) y (qs).
Grfico 1. Variacin en la concentracin de sustrato consumido,
sustrato residual y biomasa.

Yps

0
0
0.004
58
0.002
87
0.003
15
0.004
43
0.004
23

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Sustrato (residual) g/L

Linear (Sustrato (residual) g/L)
Sustrato (Consumo)
Linear (Sustrato (Consumo))
Biomasa g/L
Linear (Biomasa g/L)
60
40
Concentracin, g/L 20
0
0

20

40

60

80 100 120 140 160

Tiempo, h

En el grfico No. 1 podemos notar las variaciones de consumo de

sustrato por el hongo, observamos que a un tiempo de 148 horas el
sustrato se ha consumido totalmente, pero a un tiempo de 100 horas la
biomasa comienza sus mecanismos de defensa (fase de senescencia)
reducindose la concentracin de biomasa.
Grfico 2. Velocidad de produccin de cido giberlico.
0.12
0.1
0.08
cido giberlico, g/L 0.06
0.04
0.02
0
0

50

100

150

200

Tiempo, h

La cantidad de cido giberlico producido es menor debido a que el

hongo emplea la mayor parte del sustrato para su mantenimiento
celular, as como para su reproduccin, esto se ve atenuado debido a la
presencia de nitrgeno en forma de NH4Cl en el medio.
En la seccin de anexos se incluyen los grficos para la determinacin
del coeficiente especfico de crecimiento global del rendimiento Ypx con

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respecto al tiempo para obtener coeficiente de mantenimiento celular en

fase estacionaria (mp) y el coeficiente de mantenimiento celular (ms).

SIMULACIN (MODELO DE MONOD)

Tabla 2. Datos obtenidos de la simulacin al utilizar MathCad.

Se observa en la tabla 2 los datos arrojados en la simulacin realizada a

travs de MathCad utilizando el modelo de Monod debido a que el
proceso de produccin de cido giberlico se ajusta a las variables y
condiciones del Modelo de Monod, as teniendo en cuenta los
parmetros cinticos que dependen de la concentracin de sustrato
consumido y producto producido, ya que la proporcin de produccin es
pequea a comparacin de la proporcin de consumo. Al analizar los
datos se obtiene que la concentracin de sustrato es consumida casi en
su totalidad a un tiempo de 141.176 horas, tiempo en la cual existe una
concentracin de cido giberlico de 0.535g/L, con una concentracin
final de biomasa de 5.816g/L, esto infiere que la clula utiliza la mayor

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parte del sustrato (mayor porcentaje) a su mantenimiento celular que a

la produccin de cido giberlico.
Grfica 3. Cintica de produccin del cido giberlico dependiente de la
dextrosa y la biomasa.

Se observa en la grfica No. 6 que la concentracin de productos es

proporcional a la biomasa generada, sin embargo los requerimientos de
sustrato son muchos, infiriendo que un mayor porcentaje de sustrato
consumido es utilizado para el mantenimiento celular y no a la
produccin de cido giberlico.

FACTORES DE FORMA
Existen diferentes caractersticas fsicas e importantes, en cuanto a la seleccin
y diseo del reactor adecuado se refiere, las cuales son conocidas como

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factores de forma. Estos factores se desarrollan de acuerdo al mtodo de

fermentacin o tipo de produccin que se desea realizar, pues describen las
dimensiones del reactor basado en las caractersticas que el proceso requiere
cumplir para proveer las condiciones ptimas para el cultivo. Para el caso de la
produccin del cido giberlico (

GA 3 ), a travs del hongo Gibberella

Fujikuroi se requiere utilizar un reactor cuyos factores de forma faciliten la

generacin del producto, mediante la fermentacin sumergida, como es el caso
del reactor Airlift.
Los factores de forma del biorreactor son diseados en base a una relacin
patrn del tipo de reactor que se desea disear (Airlift 1:3 o 1:6) entre el
dimetro y la altura de este, partiendo de un volumen de operacin establecido
para el tanque modelado, que permita determinar el dimetro adecuado. Con
lo cual a partir del dimetro y del esquema del reactor se calcularan los dems
factores que darn estructura al tanque piloto (L. T. Harry, 2006).

SISTEMA DE AIREACIN
El sistema de aireacin en este tipo de reactor es una de sus principales
caractersticas, debido a que tanto su sistema de aireacin como el de
agitacin son generados mediante el suministro de gas en un difusor o
distribuidor el cual ocasiona la formacin de burbujas en el fluido o medio de
cultivo generando un esfuerzo cortante mucho menor al de un impulsor, lo que
lo convierte en un proceso que requiere menos energa que la agitacin
mecnica. Adems de que al reducir el esfuerzo cortante se evita el dao
celular por cizallamiento, sin embargo se deber tener en cuenta que, la
agitacin deber ser tan eficiente como para no daar la clula y al mismo
tiempo para proveer un mezclado y transferencia de masa adecuados
(Martnez, 2007).
La inyeccin de gas en este tanque, permite se realice la aireacin del medio y
facilita la fluidizacin de los slidos presentes en el mismo, debido al constante
movimiento del fluido inducido por la burbujas, por lo tanto cuando se
presentan valores altos para el coeficiente de transferencia de oxigenacin, la
demanda alta de oxigeno se satisface eficientemente en este reactor, por el
sistema de aireacin. Otro factor a considerar es que, el diseo del equipo y el
flujo del lquido, ocasionan que el calor sea distribuido rpida y uniformemente
ya que como se mencion anteriormente la relacin altura dimetro es de 1:3
lo que lo convierte en un reactor angosto en donde, la turbulencia del lquido
ser mayor y como consecuencia la transferencia de calor y de masa sern por
ende mayores (Martnez, 2007)
Al igual que el proceso de aireacin y agitacin el mezclado forma parte
importante de este sistema, para el caso del reactor Airlift esta operacin se

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lleva de manera adecuada debido a que los nutrientes, clulas y productos se

distribuyen uniformemente en el fluido. Ocasiona tambin efectos sobre la
forma y funcionalidad de las clulas provocando cambios en la transferencia de
masa (nutrientes, metabolitos), tomando en cuenta nuevamente que la fuerza
de mezclado deber ser ptima para evitar el daos en las clulas involucradas
y que el metabolito de inters se produzca (Gurrola, 2007)

TRANSFERENCIA DE MASA
La transferencia de masa en el reactor es de vital importancia debido a que de
esta depende la alimentacin de oxgeno, CO2 y partculas slidas del medio
hacia el interior de la clula a travs de una ruta o etapas de transferencia
masa. Para esto cabe resaltar que durante a nivel industria los reactores
trabajan a niveles altos de turbulencia en el fluido por lo que el transporte
conectivo es predominante en el seno del lquido ignorando as la resistencia
asociada. Aunado a esto se debe tener en cuenta que para que las burbujas
suministradas permanezcan siempre retenidas en el seno del lquido y se
efectu la transferencia de masa adecuada, el oxgeno que se bombea al
interior del tanque deber ser suministrado de manera continua debido a que
mientras mayor sea el tiempo de retencin de las burbujas en el seno del
lquido mayor ser la transferencia de masa (Chisti, 2005)

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE MASA

1.- Transferencia del sustrato de acuerdo a la fase gaseosa, liquida, o solida a la
interface liquida acuosa (por difusin).
2.- Transporte mediante una capa delgada de la fase acuosa, la cual rodea a la
burbuja de gas, lquido o partcula solida (difusin y conveccin).
3.- Transporte a travs del seno del lquido por conveccin (turbulencia) hacia
una capa delgada que cubre al microorganismo a alguna partcula donde se
encuentre el microorganismo (pueden ser pellets, aglomerados o soportes
inmovilizacin).
4.- Transporte por difusin a travs de la capa de fase acuosa hacia la
superficie celular
5.- Transporte del exterior de la membrana celular hacia el interior de la clula
donde se efecta la reaccin (Nielsen, 2003)

17

Figura 2. Etapas de transporte de masa hacia el interior de la clula

Los fenmenos de transferencia de masa que ocurren durante el

crecimiento de microorganismos en medio lquido, implican disolucin
de nutrientes, transferencia de productos y uno de los ms importantes
corresponde a la transferencia de oxgeno. La transferencia de masa en
los reactores Airlift con amplia variacin y contradiccin debido a que los
reactores y los procedimientos experimentales son diferentes.
Tradicionalmente el mtodo para mejorar la transferencia de oxgeno se
basa en el incremento de la velocidad de aireacin, con el fin de producir
un rgimen de turbulencia que adems de mejorar el mezclado,
incremente la velocidad de transferencia de masa gas-lquido,
disminuyendo la viscosidad que afecta los efectos de coalescencia en la
fase gaseosa que reducen el rea de contacto.

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Figura 3. Representativa de un Biorreactor Airlift

DESCRIPCION DEL BIORREACTOR AIRLIFT

Este tipo de reactor es tambin identificado como biorreactor de elevacin con
aire o en rizo (Scriban, 1985). Estn comprendidas en 4 zonas distintas, cada
una de ellas tiene su propio patrn de flujo, este a su vez consiste en dos
secciones interconectadas principalmente por bafle o tubo de draft. Una regin
es asperjada con gas y es llamada ascendente o riser, donde la dispersin del
gas en el lquido se da generalmente en dos fases en direccin paralela. Esta
seccin retiene la concentracin de gas ms alta en el reactor y es en esta
seccin donde ocurre la mayor parte del fenmeno de transferencia de
oxgeno.

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Figura 4. Estructura interna de un biorreactor tipo Airlift.

El lquido que ingresa al domo de la columna entra en una zona de liberacin
de oxigeno (zona II), que es un separador gas-liquido donde la gran mayora
del oxgeno dispersado es eliminado. El lquido libre de gas fluye hacia la
segunda seccin que se le conoce como descendente o downcomer y viaja
hacia el fondo de la columna (zona IV) completando as el ciclo y reingresando
a la zona de ascenso (Scragg, 2001).

Figura 5. Zonas de un

biorreactor airlift.

La cantidad de aire necesaria para la reaccin biolgica es suficiente para

actuar como la nica fuente de movimiento del lquido (Scragg, 2001). Las
caractersticas del funcionamiento de los biorreactores Airlift dependen
principalmente de la velocidad de inyeccin del gas y la velocidad de
recirculacin del lquido (Chisti y Moo, 2002).
En este tipo de reactores, se recomienda el uso de bafles para conseguir la
separacin de las dos zonas. Debe quedar completamente sellado a las
paredes del reactor de manera que no haya forma de paso del lquido o del
medio de la seccin riser a la downcomer a excepcin de la recirculacin.
En la siguiente tabla, se mencionan algunas caractersticas generales del
biorreactor tipo Airlift (Gutirrez, 2011).
Tabla 3. Caractersticas del biorreactor Airlift
CARACTERISTICA

B. AIRLIFT

RELACION ALTURA/DIAMETRO

Entre 3 y 7

AGITACION

Neumtica

20

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL

FUNCIONAMIENTO

Velocidades de inyeccin del gas y de

circulacin del lquido.

VENTAJA

Altamente eficiente en energa

DESVENTAJAS

KLa relativamente bajos aunque

superiores a la columna de burbujeo

USOS

Cultivo de clulas bacterianas y

levaduras, fermentaciones con hongos,
cultivo de clulas animales y vegetales,
tratamiento de aguas residuales.

Entre otras propiedades, las ventajas principales de los biorreactores airlift con
respecto a las columnas de burbujas son:

Mayor capacidad de transferencia de masa.

Mayor velocidad superficial de lquido y gas.
Riesgo de contaminacin bajo debido a su sellado hermtico, su
orientacin vertical facilita su limpieza y esterilizacin.
Control en las condiciones de cultivo.

SIMULACIN DE CULTIVO CONTINUO

El cultivo continuo es un sistema abierto con volumen constante, al que
continuamente se aade medio fresco de un reservorio y del que se retira
medio usado que contiene microorganismos y sustancias de desecho a una
velocidad constante, siendo estas el cido giberlico.
Por lo tanto, el medio se renueva y su composicin no cambia a lo largo del
tiempo, lo que permite mantener el crecimiento de la poblacin de forma
indefinida, una vez alcanzado el estado de equilibrio.
Tabla 4 Se observan los datos a
partir de una simulacin de cultivo
continuo.

21

Donde la columna cero es la

variacin de volumen, 1 es la
biomasa, 2 es el producto y 3 es
sustrato.

Grfica 4. Cintica de produccin

de cido giberlico a partir de
dextrosa y biomasa producida para
un cultivo contino.

Podemos observar en el grfico No. 7 como al mantener constante el flujo de

sustrato, compuesto por la fuente de nitrgeno NH 4C y la fuente de carbono
dextrosa, existe una dilucin del producto, es decir una dilucin de cido
giberlico producido por el hongo Gibberella Fujikuroi, el cual se ve

representado en la tabla 4 con valores negativos, estos valores

negativos se producen debido a las cantidades mnimas producidas de
cido giberlico y las grandes cantidades de sustrato suministradas al
cultivo continuo del biorreactor Airlift, as como la dilucin hecha a la
biomasa antes de llegar al equilibrio.

Tabla 5. Datos obtenidos de la simulacin de

cultivo continuo para la produccin de cido
giberlico.

22

Grfico 5. Representacin de las cantidades de

biomasa, producto y sustrato para un cultivo
El grfico No. 8 muestra el volumen de operacin que permanece constante,
continuo en un bioreactor Airlift
sin embargo se observa que existe una disminucin de biomasa producida por
la dilucin de la misma hasta un tiempo aproximado de 25 horas, tiempo en el
cual se llega a un equilibrio entre la biomasa contenida en el biorreactor, la

23

dilucin provocada por el flujo continuo del medio de cultivo, as como la

produccin del cido giberlico.
El cultivo entra en fase de mantencin, perodo en que ocurre gran parte de la
sntesis de cido giberlico. Como factores dependientes de la produccin se
encuentran la humedad, tiempo de auto clavado, pH, perfiles de alimentacin
fed-batch, adems de los sustratos. La biomasa total aumentar aun cuando
no existe urea disponible en el medio. Esto indicar que el hongo Gibberella

Fujikuroi acumulara parte del nitrgeno proveniente de la urea, para

luego, bajo condiciones de limitacin externa, proceder a su consumo.
Esto indicara que producciones ms importantes de cido giberlico se
obtienen con tiempos de cultivo ms largos.

DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR

Gran parte de la informacin que se relaciona con la construccin de
biorreactores tipo Airlift tienen origen emprico de tal manera que se han
recomendado varias relaciones geomtricas que pueden optimizar el tiempo de
mezclado y la transferencia de masa en el fermentador (Gutirrez, 2011).
Especificaciones del equipo.
Para el diseo del biorreactor Airlift se tomaron las siguientes consideraciones:

Para facilitar el armado del equipo se propuso disearlo en tres partes:

tapa, cuerpo y base, siendo un biorreactor tipo Airlift de circuito interno.
El equipo ser construido de vidrio, ya que brinda superficies lisas, no es
txico, su coeficiente de transferencia de calor es poco (1.6 W/C),
adems de su fcil limpieza.
Las dimensiones se determinaron tomando en cuenta que la relacin
altura/dimetro deba ser 1:3, considerando un volumen total del tanque
de 7 litros.
El diseo de la tapa consta de cuatro entradas, dos con tapones de rosca
que puedan servir para colocar electrodos medidores de oxgeno disuelto
y pH, otros dos sin tapa en los que puedan introducirse termmetros o
sirvan como entrada de lquidos.
Se colocarn cuatro llaves de entrada o salida en el cuerpo, para que se
pueda trabajar con volmenes distintos o con cultivos semicontinuos.
La unin entre las partes del biorreactores se llevar acabo empleando
cuatro bridas de acrlico, empaques de neopreno, tornillos y tuercas para
ajustarlas.

Diseo preliminar del equipo. En las siguientes figuras 6, 7 y 8 se muestran los

esquemas de diseo del biorreactor con las dimensiones principales de las
distintas partes y accesorios. El diseo final consta de un dimetro externo de

24

13 cm, dimetro del tubo interno de 7.54 cm, as como una longitud del
biorreactor de 40 cm, con longitud del tubo interno de 30.8 cm.
En la configuracin dimetro (D2/D1) y longitud (L2/L1) se aprecan mayores
ReL en la zona de descenso del biorreactor lo cual es relevante pues esta zona
opera con Re no turbulentos. En el ascenso Re L son mayores. Se seleccion
esta configuracin debido a la presencia de un Re que se mantiene alrededor
de 1000 y es turbulento por definicin para estos sistemas.
Tabla 6. Se observan los valores de los dimetros de ambos cilindros (interno y
externo) para un biorreactor tipo Airlift de circuito interno.
Factores de forma
D1
D2
L1
L2

Dimensin(m)
13
7.54
40
30.8

25

Figura 6. Biorreactor Airlift de circuito interno. Se observan las tres partes

que conforman el biorreactor: tapa, cuerpo y base, as como sus respectivas
dimensiones.

26

Figura 7. Vista frontal y superior de la tapa del biorreactor.

27

Figura 8. Base del biorreactor con el difusor de placa filtrante

TRANSFERENCIA DE OXIGENO
La transferencia de oxigeno es el fenmeno en el cual este es transportado de
una fase a otra, principalmente de una fase gaseosa a una liquida. (Scriban,
1985). Esta molcula es poco soluble en medio acuoso. El transporte del mismo
de la fase gaseosa hacia las clulas debe permitir el mantenimiento de una
concentracin adecuada de oxgeno disuelto de manera que el crecimiento
microbiano no se vea limitado (Nielsen, 2003). La demanda de oxgeno en un
proceso fermentativo depende en gran parte de la concentracin de biomasa y
la actividad respiratoria que se relaciona con la velocidad de crecimiento. La
transferencia se puede ver afectada por la temperatura, ya que cuando se
tiene una temperatura baja, la solubilidad del oxgeno disminuye, intensidad de
mezclado que puede afectar la viscosidad del medio. La transferencia de
oxigeno de la fase gaseosa hacia el microorganismo a travs de las burbujas
como punto de partida de aire suministrado.
El proceso ocurre en 8 pasos (Bailey, 1986):
1. Difusin desde el seno o ncleo del gas a la interfase gas-liquido.
2. Movimiento a travs de la interfase gas-liquido.

28

3. Difusin del soluto a travs de la regin estancada adyacente a la

burbuja.
4. Transporte del soluto a travs del seno del fluido lquido.
5. Movimiento a travs de la segunda regin estancada asociada con la
clula.
6. Transporte difusivo hacia el interior de la clula.
7. Si las clulas estn en un floculo, agregado o partcula slida, difusin a
travs del solido hasta la clula individual.
8. Transporte a travs del citoplasma hasta el lugar de reaccin.
Figura 9. Esquema del transporte de oxigeno de la fase gaseosa al interior del
microorganismo (Bailey, 1986)

DESCRIPCIN
DEL
SISTEMA
DE
AGITACIN,
CONDICIONES
DE
OPERACIN, REOLOGA Y POTENCIA DEL
MOTOR.
El Airlift tiene un tubo de aspersin dentro del tubo, lo cual mejora la
circulacin de transferencia del oxgeno e iguala la fuerza de corte en el
reactor. Este tipo de biorreactor no tienen ninguna agitacin mecnica, es un
biorreactor neumtico, la turbulencia producida por el flujo del fluido asegura
un mezclado adecuado en el lquido, es ideal para cultivos aerobios ya que el
coeficiente de transferencia de masa de oxigeno es alto en comparacin con
los reactores de tanque agitado (Chisti, 1989).

29

El Airlift se construye usando compartimientos ascendentes y descendentes

separados, esta conectados por conductos horizontales en la parte superior e
inferior el tubo ascendente y descendente se localizan en el mismo recipiente,
estos son separados por un bafle de divisin o un tubo de aspersin
concntricos (Chisti, 1989). Los sistemas externos soportan velocidades
mayores de circulacin de lquido.
La entrada de energa especifica est entre 2 a 3 kW/m3 y los esfuerzos de
corte son bajos de 0.11 kW/m3. Los Airlift no tienen puntos de disparo de
energa, los esfuerzos de corte son homogneos y no provocan estrs en las
clulas (Chisti, 1989).
Los Airlift son ideales para cultivos aerobios refirindose al coeficiente de
transferencia de masa del oxgeno.La ventaja de usar Airlift es tener un menor
riesgo de que exista contaminacin y que hay un control ms cercano en la
estabilidad gentica de los organismos.
La reologa del caldo utilizado cambia usualmente. Gran cantidad de cultivos
empiezan siendo newtoniano pero se transforman en ocasiones en no
newtonianos. Las causas que provocan estos cambios de reologa en los caldos
de fermentacin son debido a variaciones de algunas propiedades como
(Chisti, 1989):

Concentracin celular.
Concentracin del producto.
Concentracin del sustrato.
Flexibilidad y deformabilidad de las clulas.
Morfologa celular.
Velocidad de ciza.

Sin embargo para simplificacin de clculos, se considera la mayora de los

caldos que permanecen constantemente con una viscosidad de tipo
newtoniano.
En los reactores con agitacin neumticos, se puede determinar la potencia ya
sea por expansin isotrmica del gas o por la energa cintica del gas insertado
(Chisti, 1989).
En este caso se determinara la potencia mediante el uso de expansin
isotrmica del gas que se mueve a travs del reactor mediante la frmula:

PG
=L g uG
LV

30

De acuerdo don Chisti, 1989, lo valores que ajustan al modelo pueden ser los
siguientes:
Sabiendo:

PG

Potencia
tiempo

VL=0.054 m3 (Chisti, 1989)

L=887 kg/m3
uG=0.3 m/s
Por lo cual la potencia necesaria para el difusor se determina de la siguiente
manera:

PG=VLLguG
PG=(0.054m3)(887kg/m3)(9.81m/s2)(0.3m/s)
PG=140.9638 Watt = 0.189035 HP
Para determinar el flujo se obtuvo el vvm al que crece de mejor manera para la
produccin de penicilina el cual oscila entre 0.5 y 1 vvm, dependiendo de la
cepa (Chisti, 1989). Para trminos prcticos se utiliz el promedio de 0.75 vvm.
Por lo cual el flujo es de:

F
vvm= V L
60 min
3
3
3
3
F=(0.75 maire /mmediomin ( 0.0056 mmedio )( 1h )=0.252 m /h
Se calcula el area de la seccion transversal del riser
A i= r i

A i=

0.0754 m
=4.4651103 m 2
2

Conociendo el area y el flujo del gas se sustituye en la ecuacion:

31

U GR=

flujo gas
Areatransversal
3

m
0.252
h
m
m
U GR=
=56.437 =0.01567
3 2
h
s
4.465110 m

Ese valor de flujo se utiliz para determinar la simulacin del proyecto, el cual
se realiz de forma de operacin tipo lote alimentado (fed-batch). (revisar
archivo adjunto de Mathcad apndice C).

DESCRIPCIN
DEL
MECANISMO
DE
TRANSFERENCIA DE MASA EN EL REACTOR
El proceso de transferencia de masa en un biorreactor del tipo airlift es de
suma importancia, pues adems de estar introduciendo la cantidad suficiente
de oxigeno para que se lleve a cabo el bioproceso tambin participa en el
mecanismo de mezclado del biorreactor. Debido a esto el tamao de burbuja
introducido por el difusor debe ser el adecuado, pues e debe considerar el
esfuerzo de corte que se genera en la clula debido al aire introducido.
En un airlift la transferencia de masa se genera por una circulacin fluida
de lquido con aire (burbujas) que asciende el compartimiento interno y luego
desciende por el compartimiento externo, favoreciendo tambin el mezclado
perfecto.
Un valor que permite conocer la cantidad de oxigeno disuelta en el medio de
cultivo en el reactor es el K La que es el coeficiente de transferencia de masa
de oxigeno. Los valores de este coeficiente depende principalmente de la
velocidad con la que se est agitando el medio y el tiempo, la velocidad est
siendo introducido el oxigeno, el diseo del biorreactor, as como la reologa
del medio de cultivo. En general, disminuyen el K La: la viscosidad y el volumen
del lquido y aumentan el K La: el rea de transferencia, la agitacin y la
presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas. (Eibl & Eibl,
2009)
Existen diferentes mtodos para estimar el KLa de manera experimental como
los son (Garca, Ochoa, 2009) :

32

Mtodos qumicos.
Mtodo de la oxidacin de sulfito de sodio.
Absorcin de CO2.
Mtodo dinmico.

El uso de correlaciones es un mtodo que estima este valor de manera

emprica, permitiendo as calcular los posibles valores de K La para el reactor a
utilizar y asi realizar los ajustes necesarios en el diseo del proceso.
Para un biorreactor airlift external-loop la correlacin se basa en la velocidad
que tarda en subir y bajar por el brazo externo del biorreactor, ascomo en la

AD
relacin que existe entre los dimetros de ambas secciones ( A G .

Utilizada

es la siguiente (Garca, Ochoa, 2009):

AD c d e
V IR
Ag
k L a=C V as ba

1+

Donde:
C[=] Constante emprica.
Vs[=] Velocidad superficial del gas (m s-1).
VIR[=] Velocidad promedio del liquido en circulacin (m s -1).
a[=] Viscosidad aparente.
AD[=] rea transversal de la seccin down-comer del reactor (m 2).
Ag[=] rea transversal de la columna (m2).
[=] Retencin del gas en el reactor.
Para las clsicas columnas de burbujas y usando agua pura se
determinaron los valores de la contante C y el exponente a de 0.47 y 0.82
respectivamente. En una solucin salina se propusieron los valores para C
entre 0.12 y 9.5 y el exponente a con valores de 0.72-1.28. Para fluidos
no newtonianos se introduce el trmino de la viscosidad aparente en la
ecuacin con el exponente b que puede tomar un valor de -0.8 a -1.
Existen otros parametros establecidos de acuerdo a ciertas literaturas, de
acuerdo con la siguiente figura.

33

Figura 10. Valor de los exponentes de la correlacin para K La en un biorreactor

airlift external-loop.
Para introducir el aire al rector se utilizar un difusor de membrana de burbuja
fina, ya que la burbuja generada por estos equipos tiene un dimetro de
aproximadamente 10 mm. Ya que se ha demostrado que las burbujas
pequeas ( <2 mm de dimetro ) generan un mayor dao celular que las
burbujas de mayor tamao ( 10mm de dimetro)(Chisti, 2000).
Escalamiento del reactor a volumen industrial
El proceso de escalamiento involucra el estudio de los problemas relacionados
a transferir la informacin obtenida en un experimento a nivel laboratorio (ml)
a escala de planta piloto (it) y desde escala de planta piloto (it) a escala
industrial (m3). La seleccin para el criterio de escalamiento depender de cul
es la variable ms importante para el crecimiento del microorganismo y para la
produccin del producto deseado.
Sistema de instrumentacin y control. Justificacin de la eleccin de sensores y
sistemas de control. El escalamiento se hace en base de principios de
semejanza entre dos sistemas, o traducido en otras palabras, dos escalas;
dichas similitudes pueden ser:

Similitudes
geomtricas:
las
razones
entre
las
longitudes
correspondientes deben ser iguales en ambos sistemas.
Similitudes dinmicas: las razones entre las fuerzas en puntos
equivalentes deben ser iguales en ambos sistemas. (Rodrguez, 2003)

CRITERIOS DE ESCALAMIENTO
Coeficiente de transferencia de Oxigeno

34

Lo ms importante en este tipo de procesos es mantener el nivel de

transferencia de oxgeno en el cultivo, entonces se debe considerar este
criterio, los pasos para el escalamiento son:
1. Determinar el KLa desde experimentos a nivel piloto.
2. Relacionar (KLa) con las variables de diseo de la escala a la cual se
desea escalar.

( K L a )escala 1=( K L a )escala2

Potencia por unidad de volumen
Resulta un criterio clsico de escalamiento, ya que gracias a l se permite
mantener el nivel establecido de agitacin. Al momento de aplicarlo se debe
considerar no sobrepasar los lmites tanto de esfuerzo de corte mximo y nivel
de transferencia de oxigeno mnima

( PV )
g

escala 1

( PV )
g

escala 2

Se consider un volumen de 500 L; en la bibliografa se reporta que este

volumen se puede tomar como mnimo para realizar un escalamiento.
(Rodrguez, 2003).
En la tabla 7 se muestran los resultados obtenidos del clculo de escalamiento.
Tabla 7. Escalamiento de parmetros de potencia y coeficiente de transferencia
de oxgeno (Vea procedimiento en la seccin de anexos).
Caracterstica
Coef. Transferencia
oxigeno
Potencia

Volumen 7L
0.01567 (m/s)

Volumen 500L
0.0727 (m/s)

140.9638 w

10068.842 w

INSTRUMENTACIN
PH

35

Para el monitoreo del pH se utiliza un electrodo 405DPAS-SC-K8S/325 marca

Mettler Toledo. El rango de medicin de este electrodo es de 0 a 12 unidades
de pH. La manera ms adecuada para la medicin del pH dentro del reactor es
utilizando un medidor de pH con electrodo combinado de vidrio. (MT)

Figura 11. Sensor de pH (MT)

Para obtener con exactitud el pH dentro del reactor, previamente se debe
calibrar pHmetro con soluciones buffer que mantienen casi invariable el pH de
una solucin cuando a esta se le agrega un cido o una base.

TEMPERATURA
Para medir esta magnitud se utiliza un termopar industrial con vaina con
recubrimiento de acero inoxidable modelo RTD Pitters, con longitud de 10cm.
Tiene un intervalo de medicin de -10 a 120C. Su delgadez proporciona mayor
sensibilidad al contacto con la solucin dentro del reactor.

Figura 12. Termopar industrial de vaina corta. (thermonew)

36

Para el registro de la temperatura, se utilizara un equipo de control de

temperatura, de alta precisin, y que aunque las condiciones de temperatura
son de 25C, se necesita de un control de esta variable. Se empleara un equipo
de control de temperatura modelo Peltier-type Air-Thermo HEA marca SMC.
(Recuperado de SMC).

Figura 13. Equipo de control de temperatura Peltier-type Air Thermo HEA

SMC. (SMC)
Tabla 8. Especificaciones del equipo Peltier-tyoe Air Thrermo

Caracters
ticas
Gran
precisin
Equipo de
control de
temperatur
a
con
termopares
y
elementos
compactos.
Accin
inmediata.

Intervalo
de
temperat
uras

0-90C

Capacida
d de
enfriamie
nto

19 W

Estabilida
d de
temperat
ura

Mtodo
de
enfriamie
nto

Circulaci
n del
liquido

+/- 1C

Aire de
enfriamien
to

Vapor
saturado

CONTROL DEL FLUJO DE AIRE

Para el control de flujo de aire del biorreactor airlift, donde se tomaron en
cuenta las condiciones de operacin para el sistema de aireacin, donde el
flujo es de 0.75 VVM, se eligi el sensor de flujo con display que se aprecia en
la figura 14.

37

Figura 14. Sensor de flujo con display SFE3-500 marca FESTO.

Las especificaciones de este equipo se muestran en la siguiente tabla.
Tabla 9. Especificaciones del sensor del caudal SFE3. (Festo, 2011).
Descripcin

Display
integrado.
Conexin
elctrica
utilizando
un cable con
extremo
abierto.

Margen
de
medicin
de caudal

0.01-50
L/min

Fluido

Permite
mezcla
s de
aire
con
otros
gases
como
nitrge
no

Presin de
funcionami
ento

Conexin
neumtic
a

0-7 bar

Rosca
interior
G1/8

Conexin
elctrica

cable

En el diagrama se emplea una notacin tcnica para cada dispositico

conformada por un grupo de letras y nmeros que identifican a los
instrumentos, por lo cual la notacin del diagrama a utilizar es la siguiente:
(Juan, 2005)

FR: registrador de flujo.

FT: transmisor de flujo.
FE: placa orificio de flujo.
PR: registrador de presin.
TR: registrador de temperatura.
TS: interruptor para activar alarma por baja temperatura.
TAL: alarma por baja temperatura.
FO: falla de abre.
FC: falla de abre cierra.

38

SPH: sensor de PH

Figura 15. Diagrama del proceso de instrumentacin, control de flujo,

temperatura y medicin de pH del biorreactor tipo arilift.
Simbologa

En el proceso, un transmisor de flujo FT, enva una seal elctrica al registrador

de flujo FR en el (display), para el caso de temperatura (TR), el elemento de
control es una vlvula (TV), en caso de que la seal de aire falle o el tubo se
llega a romper, (TS) es el interruptor para activar o desactivar la alarma por
baja temperatura (TAL), donde la vlvula FO abre y la FC cierra la salida de aire
el primer elemento para medir el flujo de aire es la placa orificio del sensor FE,
donde los transmisores de flujo y presin (FT y PT) respectivamente,

39

conectados a la salida de la placa orificio, envan las seales neumticas a sus

respectivos registradores (FR y PR), en este caso como se trabajar con fluidos
compresibles como aire, la presin de entrada afectar en gran medida el
volumen calculado y registrado en los respectivos dispositivos. (Juan, 2005).

ESTERILIZACIN DEL BIORREACTOR Y DEL

MEDIO DE CULTIVO
ASPECTOS DE ESTERILIDAD
De acuerdo con Pometto (2008), durante el diseo de un biorreactor se deben
de considerar la condiciones de asepsia para que el reactor pueda ser
funcional, ya que un mal diseo del mismo puede generar problemas durante
la esterilizacin del reactor y de los medios de cultivo que se deseen utilizar;
estas anomalas pueden generar lotes no axnicos, as como, una esterilizacin
no efectiva del volumen muerto en el reactor.
Los residuos orgnicos y microorganismo que se depositan en espacios
muertos del reactor pueden generar contaminacin del sistema, en espacios
muertos llenos de aire la temperatura de esterilizacin puedo no ser alcanzada,
todos estos espacios constituyen el denominado volumen muerto del reactor,
para garantizar una esterilizacin efectiva se opta por la instalacin de
indicadores en lugares muy prximos a estos espacios.
As mismo, Pomito (2008), menciona que una causa de una esterilizacin no
efectiva adems del volumen muerto son las fugas de aire en el reactor, en los
sistemas de entrada y de salida, para lo cual recomienda la aplicacin de la
prueba de presin y la prueba de sellado, en la primera el reactor se debe
mantener a una presin aproximada de 1.5 bar, durante sus operacin la
deteccin de una cada de presin indica la existencia de una fuga, en el
segundo caso el reactor se llena con agua y a 1.5 bar de presin, se lee la
temperatura y presin iniciales, despus de 10 minutos se vuelve hacer lectura
de los parmetros y posterior a una 15 horas. Si la velocidad de fuga es menor
a 0.05gm/h m, el reactor se considera hermtico, en caso de ser menor, el
reactor no es efectivo por lo cual se deben corregir las fugas.

ESTERILIZACIN DEL MEDIO

El medio de cultivo debe de tener las caractersticas nutricias que demanda el
microorganismo; para que el medio pueda ser aprovechado adecuadamente
por el microorganismo debe ser suministrado estril o ser esterilizado en el
biorreactor, de acuerdo con Stanbury (1995), la esterilizacin del medio de
cultivo puede por calor, filtracin, tratamientos qumicos entre otros, pero el
ms utilizado es el calor (vapor de agua saturado), por ser bastante practico.

40

Para el reactor en cuestin se utilizar vapor de agua saturado (steaming in

place), la destruccin de microorganismo mediante esta tcnica puede ser
descrita por la siguiente ecuacin:

dN
=kN
dt
Donde N es el nmero de organismos presentes viables, t es el tiempo de
esterilizacin, k es la velocidad especfica de muerte. Sabemos que el mnimo
nmero de microorganismos para contaminar el medio es uno y este nmero
es independiente del volumen del lote.
De la integracin de la ecuacin anterior y aplicando propiedades logartmicas
tenemos que:

ln

( NoNt )=kt

Ec. B
Donde No es el nmero de m.o antes del tratamiento y Nt es el nmero de m.o
despus del tratamiento en el tiempo t.
A partir de la relacin de la temperatura y la constate de reaccin se
demuestra con la siguiente ecuacin de Arrhenius, Stanbury (1995).

d ln k
E
=
dt
RT2
Ec. C
Donde E es la energa de activacin, R la constante de los gases y T es la
temperatura absoluta. Si, k=Ae-E/RT. Donde A es la constante de Arrhenius.
Integrando y aplicndole propiedad de logaritmo tenemos la ecuacin:

ln k =ln A

E
RT

Ec. D
Relacionando las ecuaciones B y C, obtenemos la siguiente ecuacin:

41

ln

No
E / RT
=At e
Nt

Ec. E
Si

No
=
Nt

la ecuacin se ajusta a la siguiente expresin: =A t

E
)
RT

ajustando la ecuacin tenemos:

ln t = E/RT +ln(/A). Ec. F.

DISEO DE ESTERILIZACIN POR LOTE

La esterilizacin por lote o discontinuo toma en cuenta las siguientes etapas.
1. Etapa de calentamiento: tiempo que tarda el medio en alcanzar la
temperatura necesaria para la esterilizacin.
2. Etapa de enfriamiento: Tiempo que tarda el medio en descender su
temperatura de esterilizacin hasta la de fermentacin.
3. Etapa de mantenimiento: tiempo en el que la temperatura del medio
debe mantenerse parara la esterilizacin.
A partir de las etapas anteriores se deduce la siguiente expresin:

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA DE CALOR EN EL BIORREACTOR

Es importante recalcar que la finalidad de este proyecto es disear un reactor
que se adapte a las condiciones del microorganismo a utilizar para poder as
generar el producto deseado. Por lo tanto es necesario tomar en cuenta las
necesidades y propiedades del microorganismo para disear un sistema
adecuado que permita explotar de cierta manera, todas las habilidades del
microorganismo involucrado.
De acuerdo con lo anteriormente mencionado y con la finalidad de obtener la
produccin mxima de la biomasa presente en el medio, es necesario conocer
las condiciones ptimas del cultivo en cuanto a la transferencia de calor que
este necesite para mantenerse a un nivel ptimo de produccin adecuado. Para
el caso del hogo G. Fujikuroi, la temperatura optima de crecimiento se
establece de 31 a 32C sin embargo la mayor tasa de produccin de cido
giberlico se logra a una temperatura de 29 C segn Borrow en 2001.Dichos
valores se encuentran por encima de la temperatura ambiente, lo cual indica
que no es necesario generar una gran cantidad de calor para alcanzar este

42

valor, por lo tanto es necesario proponer un dispositivo externo que permita

alcanzar esta temperatura, como la chaqueta de calentamiento . Pues como se
menciono anteriormente la temperatura mxima tolerada para el crecimiento
del hongo G. Fujikuroi es de 32C y la aplicacin de un dispositivo ms
sofisticado que genere ms calor, podra ocasionar, que el crecimiento se
vuelva lento y como consecuencia que la produccin de cido giberlico
decaiga, ser importante tomar en cuenta la temperatura de operacin optima
de la clula pues un incremento en la temperatura que rebase el rango
mximo tolerado por la clula, podra generar, que el cultivo se mantenga en la
fase estacionaria de crecimiento(Qin 2005)
La chaqueta es un intercambiador de calor externo muy utilizado para el
recubrimiento de un biorreactor, el cual genera la cantidad de calor necesaria
para el sistema manteniendo la temperatura estable en el interior del reactor
(29C para este caso). La eleccin de este intercambiador de calor se
fundamenta en que adems de brindar la temperatura requerida al reactor,
podr ser utilizado para el proceso de esterilizacin del tanque, ya que este
puede proporcionar un coeficiente global de transferencia de calor mejor al de
un serpentn, y puede producir una temperatura mayor a los 121 C necesarios
para alcanzar la esterilizacin del equipo (Cengel, 2007).
Para la esterilizacin se utilizara una chaqueta de calentamiento.
Etapa de calentamiento:

T =(1+t )

Q
= MCpTo
T

donde:

(temperatura absoluta en K)

= 121 C = 394.15 K

T0(temperatura inicial del medio)= 100 C =373.15 K

t(calentamiento)= ?
Q( velocidad de transferencia de calor)= 0.182 kcal/kg K
Cp(calor especfico del medio)= 1.002 kcal/kg K
M(Masa del medio)=10 kg
Por lo tanto el valor para es:

43

=4.868*10-5

t=1158 s( 60

= 19 minutos.

Etapa de enfriamiento:
Para llevar a cabo el clculo del tiempo necesario de enfriamiento se tomo
encuentra que el biorreactor se enfriara a temperatura ambiente si necesidad
de implementar algn dispositivo que disminuya la temperatura.
De esta manera el enfriamiento se dar mediante la conveccin natural. Dicho
clculo se realizara usando el nmero de Nusselt (Nu), considerando la camisa
de calentamiento como un sistema de placas verticales se procede a realizar
los clculos con la siguiente correlacin de Nu para placas:

Correlacin para placas verticales (Cengel, 2006):

Para lo cual Ra=GrPr, donde C=0.59 y M=0.25. Y considerando un Grashof

(coeficiente de expansin trmica)

=2.38*10-3 K-1

Ts= 121 C.
T= 25 C.
Lo=0.16 m
=20.92*10-6
Partiendo de estos valores obtenemos un valor de Gr= 20977502.67. El valor
de Prantl para este sistema es de 0.7.
As obtenemos el Ra=(0.7)(20977502.67)= 14684251.87, ahora sacamos el
valor de Nu.
Nu= (0.59)( 596456*10^3)0.25=36.5228

44

Para posterior con el Nu obtenemos el coeficiente de transferencia de calor h.

Nu=

h Lo
k

donde k= 33.8W/mK, de acuerdo con esto se tiene un valor de h

de:

( 33 . 8 ) (92. 2)
h=
=7715.4415 W/m2K
0. 16
Aplicando la ley de enfriamiento de Newton:

Q= (19477.25W/m2K)(0.19m2)(121 C -25 C)=139988.9706 W

Para alcanzar la temperatura inicial de la chaqueta de calentamiento se aplica
el principio de Richards, desde la temperatura de esterilizacin hasta 100 C.
El Cp = 4.239 kJ/kgK; T= 21 C.

Para calcular el flujo msico m, se obtiene a partir del flujo de aire

considerando una temperatura de 25 C y a 1 atm de presin.
Para calcular la densidad del aire a estas condiciones se utiliza la ley de los
gases ideales donde:

( 101.325 Pa ) 28.84
=

g
1 kg
(
)
mol 1000 g

( 298.15 K ) (8.314 Pa m )
mol K

=1.178 kg /m 3

m=(0.2L/s)(1/100L)(1.78kg/m3)= 1.401*10-4 kg/s

Si,

Q= (1.0401*10-4kg/s) (4.239kJ/kgK) (21) = 175 J/s (W)

45

El tiempo que le toma al reactor para ir de 121 a 100 C, se calcula de la

siguiente manera:
Tiempo de enfriamiento=

139988 . 9706 W
= 799.937 segundos.
175 W

Enfriamiento= 13.5 minutos.

Etapa de calentamiento
Esta etapa de mantenimiento o mejor conocido como tiempo de
mantenimiento se obtiene a partir de las etapas de calentamiento y
enfriamiento esto se debe al proceso de transferecia de calor que se lleva en
ests etapas.
Para lo cual se necesita calcular el tiempo total del ciclo de esterilizacin de la
siguiente manera:

total= calentamiento + mantenimiento+ enfriamiento

N0
N

( )

total=ln

mantenimiento= total calentamiento enfriamiento

mantenimiento=

mantenimiento
K mantenimiento

t
Considerando:

N 0=1010

Ya que no se conoce la cantidad inicial de microorganismos

contaminantes inciales presentes en el medio

N 0=107

esporas en 7 L

N=103 esporas . Esporas. Ya que se supone no existe una esterilidad

absoluta, puesto que 1 de cada 1000 lotes de fermentacin se contamina.
Por lo tanto:

46

total=ln

7
N0
10
=ln
=23.025
3
N
10

( ) ( )

Utilizando mtodo de Richards:

Factor de correccin

calentamiento/ enfriamiento=

t calentamiento /enfriamiento
t Ric hards

Para calentamiento:

121= 12.549
t Ric h ards=21 min
t calentamiento=19 min
calentamiento=12.549

min
( 1921min
)=11.3538

Para enfriamiento:

t enfriamiento=13.5 min
121=12.549
t ric h ards=21 min
enfriamiento=12.549

min
=8.067
( 13.5
21 min )

Para mantenimiento:

t manteni miento=

( total calentamiento enfriamiento )

K mantenimiento

*Considerando el parmetro para esporas de B. Stearothermophilus FS1518

47

k =1.831min

mantenimiento=kt
1

mantenimiento=1.831 min ( 121 C100 C )=38.45

t mantenimiento=

k =A e

C
min

( total calentamiento enfriamiento )

K mantenimiento

EA
)
RT

29 . 93311 . 52719 . 6447

tmantenimiento=

CONCLUSIN
El diseo de un biorreactor involucra una serie de conceptos que son
indispensables para que el del mismo cumpla con los requerimientos
necesarios para lograr obtener algn producto a partir de materia prima
y microorganismo, mismos que deben responder positivamente a los
sistemas implicados en el biorreactor que generan las condiciones para
que el microorganismo crezca, madure y sea capaz de desarrollar la
funcin para la cual fue implantado en el reactor. Pero para que el
resultado de este proceso sea positivo es necesario integrar cada parte
del reactor con un motivo especfico, que implique una pieza clave para
el buen funcionamiento del mismo. La reologa y la definicin de
parmetros de ingeniera son la base slida de este diseo, lo cual nos
permite especular que el mismo sea funcional a nivel laboratorio y a
nivel piloto, de acuerdo con el escalamiento y la congruencia de
nuestros clculos.

48

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ANEXOS
Memoria de clculo.

51

1. BALANCES ESTEQUIMETRICOS
ECUACIONES PARA BALANCE DE ELECTRONES
De acuerdo a la siguiente ecuacin general, se determinan los grados de
reduccin molecular de cada componente de la ecuacin:
C a H b Od N e + C f H g On H i + O 2 CO 2+ H 2 0+ K C j H k Oi N m +C H n O p N q
FUENTE DE CARBONO
FC =

4 a+b2 d3 e
a

FUENTE DE NITROGENO
FN =

4 f +g2 h3i
a

FUENTE DE OXIGENO
O=0
DIOXIDO DE CARBONO
CO =0
2

BIOMASA
B=

4+n2 p3 q
1

PRODUCTO
B=

4 j+ k2 i3 m
j

VALENCIAS PARA ELEMENTOS UTILIZADOS

C=4

52

H=1
O=-2
N=-3
Cl =-1
Se determinaron los balances elctricos de la ecuacin de produccin de
cido giberelico
C6 H 12 O6 + NH 4 Cl+O2 C H 1.79 O0.50 N 0.20+C 19 H 22 O6+CO 2 + H 2 O
FUENTE DE CARBONO
4(6)+1(2)2(6)
=4
6

FC =

FUENTE DE NITROGENO
FN =

1(3)+1(4 )1(1)
=0
1

FUENTE DE OXIGENO
O=0
DIOXIDO DE CARBONO

CO =0
2

BIOMASA
BM =

4 (1 )+1 ( 1.79 )2( 0.50)3(0.20)

=4.19
1

PRODUCTO

53

B=

4(19)+1(22)2(6)
=4.52
19

Se determinan los siguientes rendimientos:

Rendimiento de biomasa
g
0.05 0
P P0
Pm P
L
Y PS = f
=
=0.00227=k
S f S 0
g
Pm s
22 0
L
Pm., producto (cido giberelico): 346 g/gmol
Pm., sustrato (Dextrosa):180 g/gmol
Pm, Biomasa (gibberella fujikuroi)= 24.59g/gmol
Entonces:

k=

Y PS ( Pm s)
=
Pm p

0.00227(180

g
)
gmol

g
346
gmol

=0.00118

Rendimiento de biomasa
X X 0
Y XS= f
=
Sf S0

g
Pm X
L
=0.409=BM
g
Pm S
( 220)
L
(112)

Entonces:
Y (Pm s)
BM = XS
=
Pm X

g
)
gmol
=2.9938
g
24.59
gmol

0.409(180

CANTIDAD DE OXIGENO REQUERIDA

54

1=

K P BM BM 4 DO
+
+
a fc
a fc
a fc

Donde DO= Demanda de oxigeno

Despejando demanda de oxigeno queda:

K P BM BM

( a fc )
a fc
a fc

(1
DO=

=D O

0.00118 ( 4.5263 ) 2.9938

)( 6 ( 4 ))
6 (4 )
6 (4 )
=1.74
4

RENDIMIENTOS
Los clculos realizados para la obtencin de los parmetros se muestras
a continuacin tomando como ejemplo los datos en el tiempo de 50
horas.
Ypx=

PfinalPinicial
0.030
=
=0.003676
XfinalXinicial 10.312.15

Yxs=

Xfinal Xinicial 10.312.15

=
=1.574
SfinalSinicial
6.550

Ypx=

PfinalPinicial 0.030
=
=0.00458
SfinalSinicial 6.550

Grfico 6. Valores del Ln(X/X0) con respecto al tiempo para la obtencin

del coeficiente especfico de crecimiento global del rendimiento Ypx con
respecto al tiempo para obtener coeficiente de mantenimiento celular en
fase estacionaria (mp) y el coeficiente de mantenimiento celular

55

2
1.8

f(x) = 0.01x + 0.8

1.6 R = 0.39
1.4
1.2
Logaritmo natural de biomasa, Ln(X/X0)

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

50 100 150 200

Tiempo, h

A travs del grfico 6 encontramos el valor del coeficiente especfico de

crecimiento () realizando una regresin a los valores. Se obtuvo una
ecuacin lineal que puede ser observada en el grfico.
Grfico 7. Valores del rendimiento Ypx con respecto al tiempo.
12
10
8
Ypx

6
4
2
0
0 f(x) =20
R = 0

40

60

80

100

120

140

160

Tiempo, h

Con la regresin de la grfica 7 se determin el valor de mp, coeficiente

de mantenimiento celular en fase estacionaria.

56

Grfico 8. Se observa la varianza de los datos de 1/Yxs respecto al

tiempo para encontrar el valor de qs.
12
10
8
1/Yxs

6
4
2
0
0 f(x) =
20
R = 0

40

60

80

100

120

140

160

Tiempo, h

A travs de la regresin (cmo puede observarse en la grfica 8) se

pudo determinar el valor de ms, que es el coeficiente de mantenimiento
celular, es decir, una estimacin aproximada del uso que la clula le da
al sustrato.
2. ESCALAMIENTO

Para un volumen de 500 L

500 L

1 m3
=0.5 m3
1000 L

V op=0.5 m3
V op=0.7 V T

VT=

V op 0.5 m3
=
=0.71428 m3
0.7
0.7

57

A partir de la siguiente ecuacin:

VT=

D2
L
4

Y considerando el factor de forma:

3 D=L
Se sustituye en el valor de L en la ecuacin que define el volumen total para
calcular el dimetro total:
3

VT=

3 D
4

DT =

4 V T 3 4 ( 0.71428 m3 )
=
=0.6717 m
3
3

Se determina la longitud del tanque

LT =3 DT
LT =3 ( 0.6717 m) =2.015 m
Para obtener el dimetro interno:

Di=0.6 DT
Di=0.6 ( 0.6717 m )=0.4030 m
Para obtener la longitud del cilindro interno:

Li=0.6 ( 2.015 m )=1.209 m

Determinacin del coeficiente de transferencia de oxigeno:
Para un volumen de 500L
rea seccional del Riser:

58

A i= r

A i=

0.4030 m 2
=0.1275 m2
2

Considerando las mismas VVM (0.75VVM) se calcula el flujo de aire:

VVM=

flujo de gas
volumen de liquido

flujo de gas=VVM ( volumen de liquido )

flujo de gas=0.75 VVM ( 0.7418 m3) 60

U GR=

min
m3
=33.38
h
h

flujo de gas
area seccional

m3
h
m
U GR=
=261.811
2
h
0.1275 m
33.38

261.811

m 1h
m
=0.0727
h 3600 s
s

Escalamiento de potencia del difusor

Para un volumen de 500L

P1 P2
=
V1 V2
Despejando la potencia 2

P2=

P1V 2
V1

59

P2=

( 140.9638W )( 500 L )
=10,068.842W
7L

DIMENSIONAMIENTO
DIMENSIONAMIENTO
Se empleo un volumen total de 7 litros, con un volumen de operacin de 5.6
litros (al 80%). Los clculos para determinar los factores de forma fueron los
siguientes.

V op=0.7 V T
V op=0.8 ( 7103 ) m3=5.6103 m3
Se procedi a calcular la longitud del biorreactor (L1) empleando la siguiente
frmula:

VT=

D12 L1
4

Y sabemos que la relacin altura/dimetro a emplear para el diseo del

biorreactor es 1:3, obtendremos:

3 D1=L1
2

VT=

(L 1/ 3) L1
4

Despejando L1 tenemos:

L1=

V T (36) 3 5.6103 (36)m3

=
=0.40 m

Por lo tanto el D1 es:

3 D1=L1

60

D1=

L 1 0.40 m
=
=0.13 m
3
3

Para determinar el dimetro interno (D2) y la longitud del tubo interno (L2):
D2/D1=0.58 y L2/L1=0.77

D 2=0.58D2=0.58 ( 0.13 m )=0.0754 m

L2=0.77L1=0.77 ( 0.4 ) =0.308 m
Para la determinacin de los factores de forma anteriores se empleo un estudio
realizado por Lizardi, Saucedo y Gutirrez, donde concluyen que las relaciones
de dimetro y longitud son adecuadas a 0.58 y 0.77 respectivamente.