TRANSPOSONES DE ESTE LO ESTUDI TODO

Transposones
Descubrimiento de los transposones
Transposones en el maz
Transposones en procariotas
El opern gal
Tipos de transposones en procariotas
Las secuencias de insercin IS
Transposones simples
Transposones compuestos
Mecanismos de transposicin
Transposicin replicativa
Transposicin conservativa
Tipos de transposones en eucariotas
Retrotransposones
Tipos de retrotransposones
Retrotransposones virales
Demostracin del paso intermedio por RNA
Mecanismo molecular de la retrotransposicin
Retroposones: LINE y SINE
Transposones de ADN en eucariotas
Transposones de ADN en el maz
Disgnesis hbrida
El elemento P en Drosophila
Uso del elemento P para insertar genes
Anomalas cromosmicas producidas por recombinacin entre los ET
Mantenimiento de los transposones en los genomas: hiptesis
Refugio de los ET en los genomas: ej. D. melanogaster y humanos
Elementos transponibles en gramneas
Ciclos de vida de los ET en los genomas
Se denominan tambin elementos genticos transponibles, elementos
transponibles, elementos mviles o genes saltarines o genes saltadores
Son elementos, trozos o segmentos de ADN que pueden moverse o transponerse por
todo el genoma
Pueden insertarse en diversas localizaciones dentro de un mismo cromosoma o en
distintos cromosomas
Hay transposones en todos los organismos desde bacterias hasta humanos
No slo son ubicuos sino que, en algunos organismos eucariticos, comprenden
grandes porciones de sus genomas siendo, en otros, cuantitativamente, el
componente principal
Por ejemplo, la secuenciacin genmica reciente ha revelado que al menos el 45% del
genoma humano procede de elementos transponibles
En maz el 80%, en humanos el 45%, en Drosophila el 22%, en levaduras el 5%
Algunos organismos con genomas anormalmente grandes como las salamandras y la
cebada, contienen cientos de miles de copias de diversos tipos de elementos
transponibles: el ADN repetitivo

Se desconoce la funcin de estos elementos pero sera impensable que los genomas
eucariticos tolerasen tal cantidad de ADN si fuera intil o inservible
Los datos de la secuenciacin del genoma humano sugieren que algunos genes
pueden haber evolucionado de los transposones y que la actividad de los
transposones ayuda a modificar y reestructurar el genoma
Entonces, desde el punto de vista evolutivo, tendra una explicacin la presencia de
esta gran cantidad de ADN aparentemente inservible
Fueron descubiertos por Brbara McClintock en el maz, en los aos 40 del siglo XX
Sin embargo, el hallazgo no fue reconocido de inmediato por la comunidad cientfica
ya que, la idea de que la informacin gentica pudiera no tener una posicin fija en el
genoma, pareca insostenible
Esta idea de genes mviles no encajaba con la idea de los genes como loci discretos
inamovibles y de la herencia casi inalterable (salvo las mutaciones)
En realidad, no se acept su existencia hasta que fueron descubiertos en otros
organismos (sobre todo en bacterias, en los aos 70) y se descubri su base
molecular
A Brbara McClintock le concedieron el Premio Nbel de Medicina en 1983 por estos
descubrimientos de la existencia de transposones en el maz
TRANSPOSONES EN MAZ
El maz tiene 10 cromosomas numerados de mayor (1) a menor (10)
McClintock observ que en una lnea de maz, el cromosoma 9 se rompa con mucha
frecuencia y en un locus determinado
La rotura del cromosoma se deba a dos factores genticos, un elemento disociador
(Ds) situado en el punto de la rotura y otro elemento activador (Ac) no situado en ese
punto
La rotura provocada por Ds no se produca si no estaba presente en el genoma el
elemento Ac

McClintock empez a sospechar que Ac y Ds eran elementos genticos mviles

cuando vi que era imposible cartografiar Ac
En unas plantas se localizaba en una posicin y en otras, de la misma lnea, se
encontraba en posiciones diferentes
Adems de las roturas frecuentes en el cromosoma 9, aparecan lneas con granos
raros de fenotipos radicalmente diferentes

OPERN GALACTOSA
En los aos 70 comenzaron a aparecer mutaciones en el opern de galactosa (gal -)
que no revierten con agentes mutagnicos
Por tanto, no son cambios de base ni mutaciones de pauta o marco de lectura
Podran ser deleciones, pero revierten espontneamente y, por ello, tambin se
descarta que lo sean

CICLO LTICO DEL FAGO T4

CICLO LISOGNICO DEL FAGO

OPERN GALACTOSA
Estudiando el fago , que se inserta cerca del locus gal, se observ que, al escindirse,
a veces lleva consigo dicho locus
De esta manera, se obtienen fagos (gal -) y fagos (gal+)
Si se centrifugan, se pueden separar y se observa que los fagos (gal -) pesan ms
que los fagos (gal+)
Resulta, entonces, que llevan una insercin. La mutacin a (gal -) es consecuencia de
una insercin en el locus gal

SECUENCIAS DE INSERCIN (IS)

A la secuencia insertada se le denomin secuencia de insercin (IS)

Mediante la tcnica de hibridacin Southern se descubri que haba varias IS en el
genoma de E. coli y en el factor F
Estas secuencias de insercin ocupan diferentes posiciones en las distintas cepas de
E. coli
Se trata, por tanto, de un elemento mvil
Resulta, entonces, que los mutantes llevan una insercin
La mutacin (gal -) se produce a causa de una insercin en el locus gal que inutiliza
dicho locus
Estas secuencias de insercin pueden moverse de un sitio a otro del genoma y,
cuando se insertan en un gen, tanto en su regin codificadora como en su regin
reguladora, pueden causar mutaciones
De hecho, se identificaron por primera vez durante el anlisis de mutaciones en el
opern gal de E. coli como ya vimos
Las secuencias de insercin son elementos de ADN relativamente cortos, no exceden
de 2 Kb
La IS1 tiene 800 pares de bases y las IS2, 3, 4 y 5 tienen entre 1250 y 1400 pares de
bases
En el genoma de una bacteria puede haber hasta unas 20 copias de IS de los diversos
tipos
Las IS presentan varias caractersticas esenciales para su movilidad:
La mayor parte de la secuencia de un elemento IS corresponde a uno o dos genes que
codifican una enzima, la transposasa
La transposasa es capaz de cortar el cromosoma bacteriano en determinados puntos
en los que pueden insertarse los elementos IS
Los extremos de los elementos IS contienen repeticiones terminales invertidas (ITR)
Las ITR son segmentos cortos (entre 9 y 41 pares de bases) de ADN que tienen la
misma secuencia nucleotdica, pero en posicin invertida, en un extremo respecto al
otro

MECANISMO DE TRANSPOSICIN
La transposasa reconoce una secuencia diana en el ADN y hace cortes escalonados
de manera parecida a las roturas producidas por las endonucleasas de restriccin
En el ejemplo, se muestra un corte escalonado con 5 pares de bases de separacin
(pueden ser entre 4 y 13 pares de bases)
El elemento transponible se inserta entre los extremos escalonados

SECUENCIAS DE INSERCIN (IS)

MECANISMO DE TRANSPOSICIN
La maquinaria de reparacin del ADN de la bacteria llena los huecos utilizando como
molde las bases de los extremos que quedaron salientes
Como consecuencia de la insercin del elemento IS en un lugar del ADN y la
reparacin de la rotura, se crea un par de repeticiones directas, una a cada lado de la
insercin
Estas secuencias se denominan duplicaciones del sitio de insercin
Prcticamente todos los transposones estn flanqueados por una duplicacin del sitio
de insercin, lo que indica que todos utilizan un mecanismo de integracin similar
Lo que vara es la longitud de la duplicacin

SECUENCIAS DE INSERCIN (IS)

TRANSPOSONES COMPUESTOS
Son transposones formados por un par de elementos IS flanqueando un segmento de
ADN que contiene uno o ms genes que, en general, codifican para resistencia a
antibiticos
Por ejemplo, el elemento Tn10 lleva un gen para la resistencia a tetraciclina y los Tn5 y
Tn903 llevan un gen para la resistencia a kanamicina
En este segmento central no llevan el gen de la transposasa porque ya va en una o las
dos IS
Algunos Tn llevan IS idnticas en cada extremo y otros, IS diferentes
En algunos casos las IS estn orientadas en posicin directa y en otros en posicin
invertida
Ambas IS pueden tener el gen de la transposasa, funcional o no
Estas variaciones no parecen afectar al mecanismo de transposicin que es
conservativo y catalizado por la transposasa de uno o ambos elementos IS

TRANSPOSONES SIMPLES O DEL TIPO Tn3

Son transposones que no llevan elementos IS flanqueando su secuencia sino que
llevan repeticiones invertidas (IR)
Las IR son ms cortas (<50 pb) que las IS y no llevan el gen para la transposasa
Por ello, estos transposones simples tienen que llevar su propia transposasa
Tambin llevan uno o ms genes que, en general, codifican para resistencia a
antibiticos
Por ejemplo, el Tn3 lleva un gen que codifica para resistencia a la ampicilina
Los elementos Tn3 se transponen replicativamente

TIPOS DE TRANSPOSONES DE ADN EN PROCARIOTAS

MOVILIDAD DE LOS TRANSPOSONES

Un transposn puede saltar de un cromosoma bacteriano a un plsmido o de un
plsmido al cromosoma bacteriano o de un plsmido a otro plsmido
Pero, adems, puede transportar genes o, en general, segmentos de ADN
comprendidos en l
De esta manera, se generan multitud de plsmidos resistentes distintos a frmacos
Incluso, se pueden generar plsmidos que contienen genes de resistencia a mltiples
frmacos, integrados en diferentes transposones que van en el plsmido

La mayor parte de los elementos transponibles, tanto en procariotas como en

eucariotas, emplean uno de dos mecanismos principales de transposicin: replicativo o
conservativo (no replicativo)
El mecanismo conservativo implica la escisin de una secuencia de su posicin
original y la reinsercin en otro lugar del genoma. No incrementa el nmero de copias
La transposicin replicativa aumenta el nmero de copias ya que el elemento original
permanece en su lugar y es una copia del mismo la que se inserta en una nueva
posicin
Este proceso replicativo puede conducir a una proliferacin de ese transposn y su
insercin en mltiples posiciones por todo el genoma

TRANSPOSICIN REPLICATIVA
En el transposn Tn3 aparecan dos clases de mutaciones, unas recesivas en trans y
otras dominantes en cis
El descubrimiento de estas mutaciones dio lugar a que apareciesen los intermediarios
y a entender as cmo se produca la transposicin replicativa
En condiciones normales, cuando no estn presentes estas mutaciones ni en cis ni en
trans, se forma el cointegrado, pero no se observa, porque se resuelve y aparece el
resultado final de dos plsmidos, ambos con el transposn

MECANISMOS DE TRANSPOSICIN: T. REPLICATIVA

TRANSPOSICIN REPLICATIVA
Las mutaciones recesivas en trans, producen una mutacin en el gen de la
transposasa que impide la transposicin y no se forma el intermediario
El intermediario es un plsmido doble formado por la fusin de los plsmidos donante
y receptor, llamado cointegrado
Cuando la transposasa es normal y slo estn presentes las mutaciones dominantes
en cis, se produce la formacin del cointegrado, que se puede observar porque no se
resuelve
En condiciones normales (sin mutaciones), se forma y se resuelve el cointegrado
apareciendo dos plsmidos ms pequeos
Cada uno de ellos lleva una copia del transposn
La resolucin del cointegrado se produce por recombinacin
Para que esto se produzca es necesaria la presencia de una regin denominada sitio
interno de resolucin, IRS (internal resolution site)
Esas mutaciones dominantes en cis lo que producen es una delecin en el IRS que
impide la recombinacin y resolucin del cointegrado

TRANSPOSICIN CONSERVATIVA
Algunos transposones, como el Tn10, se escinden del lugar donde estn y se integran
en otro lugar del genoma
En estos casos, no se produce la replicacin del transposn sino que abandona el
lugar donde estaba insertado
Es la replicacin conservativa, en el sentido en que se conserva el nmero de copias
Esto se demostr mediante la construccin de heterodplices derivados del fago que
contenan el Tn10 con el opern lac Z de E. coli
Emplearon los derivados de Tn10-lacZ+ y Tn10-lacZ- que se diferencian en tres bases
Los heterodplices, por tanto, contienen una cadena con la regin lacZ+ y la otra con
la regin mutada lacZ-

Con los heterodplices se transforman bacterias que carecen del opern lac y se
seleccionan las clulas que incorporan el Tn10 (con el heterodplice) porque les
confiere resistencia a la tetraciclina
Una vez producida la transposicin se originar una disposicin distinta de colonias
azules y blancas segn que la transposicin sea replicativa o conservativa
Para ello, y utilizando el compuesto X-gal en el sustrato, se pueden distinguir colonias
azules o blancas
Si la transposicin es conservativa, el heterodplice se integrar completo en el
cromosoma bacteriano
Despus de la primera divisin de la clula original, se formarn dos clulas, una de la
cuales ser LacZ+ y la otra LacZPor tanto, la colonia que se forma a partir de la clula LacZ+ aparecer teida de azul
mientras que la colonia formada a partir de la clula LacZ- aparecer blanca
Si la transposicin es replicativa, en el cromosoma bacteriano se integrar o bien la
cadena con LacZ+ o bien la cadena con LacZLas clulas derivadas de la original que sufri dicha transposicin replicativa sern, por
tanto, LacZ+ LacZUtilizando el compuesto X-gal en el sustrato, se podran distinguir las colonias como
totalmente azules o totalmente blancas

TRANSPOSICIN CONSERVATIVA O REPLICATIVA?

TRANSPOSICIN CONSERVATIVA

Los resultados obtenidos presentan las placas como mitad azules y mitad blancas
Por tanto, la mitad azul revela la presencia del opern LacZ+ y la mitad blanca la
presencia del opern LacZ- en las colonias bacterianas
Estos resultados indican que la transposicin de Tn10 es conservativa

TRANSPOSICIN CONSERVATIVA O REPLICATIVA

TIPOS DE TRANSPOSONES

RETROTRANSPOSONES
Hay un tipo de transposicin replicativa que implica un RNA intermediario, es la
retrotransposicin
Este proceso comienza con la transcripcin normal de un RNA que se copia del ADN
del transposn
A partir de este RNA se genera un ADN de doble cadena mediante un proceso de
transcripcin inversa mediado por una transcriptasa inversa o retrotranscriptasa
Esta molcula de ADN permanece, en principio, fuera del genoma pero despus se
integra en l constituyendo as un transposn
Puede integrarse en el mismo cromosoma del transposn original o en uno distinto

Hay dos tipos de retrotransposones, los retrotransposones que tienen LTRs

(repeticiones terminales largas) y los que no las tienen (retroposones)
Los retrotransposones LTR tienen propiedades similares a las de los retrovirus. Por
ejemplo:
El mecanismo de retrotransposicin de estos transposones es muy similar al de
replicacin de los retrovirus
Presentan repeticiones terminales largas LTR como los retrovirus
Los elementos Ty de levaduras y los elementos copia de Drosophila son dos ejemplos
de retrotransposones LTR

Hay varios elementos Ty en los genomas de levadura

El ms abundante es Ty1 similar al elemento copia de Drosophila y, por ello, estos
elementos se denominan en la actualidad familia Ty1/copia
Cada elemento Ty1/copia contiene dos genes, llamados TyA y TyB en levadura, que
son similares a los genes gag y pol de los retrovirus
El gen TyB codifica una poliprotena que incluye la transcriptasa inversa fundamental
para la transposicin

Sin embargo, el elemento Ty1/copia carece del equivalente del gen env viral que
codifica las protenas de la cubierta viral
Por tanto, estos elementos Ty1/copia no pueden formar partcula virales infecciosas y,
debido a ello, no pueden escapar de la clula husped
En cambio, los miembros de la familia de retroelementos Ty3/gypsy s tienen un
equivalente del gen env y, al menos algunos de ellos, s pueden formar virus
infectantes
Aunque las versiones infecciosas no deben considerarse propiamente
retrotransposones sino retroelementos virales

Se puede demostrar que la transposicin es a travs de un intermediario de RNA

Disponemos de un elemento Ty de levadura al que se le marca una LTR, se le pone un
promotor sensible a la galactosa y tambin le insertamos un intrn de otro gen
Se introduce en una clula de levadura y, aadiendo galactosa, se activa la
transcripcin
Como consecuencia, se forma el transcrito primario que lleva el intrn
Sin embargo, cuando se transpone el ADN copia del retrotransposn, ste lleva la LTR
marcada pero no lleva el intrn
Es decir, ese transcrito primario fue procesado y se elimin el intrn y, a partir de l, se
copi el ADN que despus se insert en otra posicin, pero ya sin intrn
Si no hubiera habido el paso intermedio por RNA, el transposn se hubiera insertado
en otro lugar pero llevando el intrn

MECANISMO MOLECULAR DE LA RETROTRANSPOSICIN

El primer paso de la retrotransposicin es la sntesis de una copia de RNA a partir del
retroelemento insertado
La repeticin terminal larga (LTR) del extremo 5 del elemento, contiene una secuencia
TATA que acta como promotor de la transcripcin, mediada por la RNA polimerasa II
El transcrito acta como molde para la sntesis de ADN dependiente de RNA,
catalizada por una transcriptasa inversa codificada por una parte del gen pol
La sntesis del ADN requiere un cebador y aqu, curiosamente, se utiliza una molcula
de tRNA

RETROPOSONES
Hay retrotransposones que no tienen elementos LTR, son los retroposones
Los retroposones ms importantes en mamferos son los elementos nucleares largos
dispersos, LINE (large interspersed nuclear elements) y elementos nucleares cortos
dispersos, SINE (small interspersed nuclear elements)
Los SINE presentan ms de 1,7 millones de copias en el genoma humano que llegan a
ser el 14% del mismo, la mxima cantidad de copias para cualquier tipo de ADN
repetitivo disperso
Los LINE son menos frecuentes, con apenas ms de un milln de copias, pero al ser
ms largos, representan una mayor fraccin del genoma: ms del 20%
RETROPOSONES: LINE
El genoma humano contiene tres familias de LINE
El grupo de LINE-1 es el ms frecuente y el nico con capacidad de transposicin
Las familias de LINE-2 y LINE-3 estn formadas por vestigios inactivos
Un elemento LINE-1 de longitud completa tiene 6,1 kb y dos genes, uno de los cuales
codifica una poliprotena similar al producto del gen viral pol
No hay LTR, pero el extremo 3 del LINE est marcado por una serie de pares de
bases A-T que forman lo que se suele llamar secuencia de poli (A)
No todas las copias de LINE-1 son de longitud completa porque la transcriptasa
inversa codificada por LINE no siempre hace una copia completa de ADN a partir del
transcrito de RNA inicial
Esto conduce a que se pueda perder parte del extremo 3 de LINE
La prdida es tan frecuente que slo el 1% de los elementos LINE-1 del genoma
humano son versiones de longitud completa y el tamao promedio de las copias es de
slo 900 pb

RETROPOSONES: LINE Y SINE

RETROPOSONES: LINE

RETROPOSONES: SINE
Los SINE son mucho ms cortos que los LINE midiendo slo de 100 a 400 pb y no
contienen ningn gen
Debido a ello, no fabrican sus propia transcriptasa inversa y utilizan la que est
codificada por los LINE
El SINE ms comn en los primates es la secuencia Alu que tiene alrededor de 1.2
millones de copias en humanos
Un elemento Alu tiene dos mitades de unos 120 pb cada una y con una similitud de
alrededor del 85%
La mitad derecha lleva una insercin de 31-32 pb y una cola de poli (A) en el extremo
3
SECUENCIAS ALU

TRANSPOSONES DE ADN
Los retrotransposones son ms abundantes en los organismos eucariticos mientras
que los transposones de ADN son ms comunes en los procariotas
An as, el genoma humano contiene unos 350000 transposones de ADN de varios
tipos aunque todos tienen repeticiones terminales invertidas y todos contienen un gen
para la enzima transposasa que cataliza el fenmeno de la transposicin
No obstante, la inmensa mayora de estos elementos son inactivos a causa de que el
gen de la transposasa es no funcional o de que las secuencias de los extremos, que
son esenciales para la transposicin, estn mutadas o tienen deleciones
TRANSPOSONES EN HUMANOS

TRANSPOSONES DE ADN

TRANSPOSONES DE ADN EN PLANTAS

Los transposones de ADN activos son ms comunes en plantas, donde se encuentra,
por ejemplo, el transposn Ac/Ds, el primer transposn descubierto por McClintock y el
elemento Spm, ambos descubiertos en el maz
Una caracterstica interesante de los transposones de esta planta es que funcionan
juntos en grupos familiares
TRANSPOSONES DE ADN EN MAZ
Ahora se sabe que el elemento Ac (activador) codifica una transposasa que reconoce
tanto las secuencias Ac como las Ds (disociador) y las puede transponer
Las secuencias Ds son como las Ac pero llevan deleciones internas que alteran el gen
de la transposasa
Esto significa que los elementos Ds no pueden fabricar su propia transposasa activa y
estn a expensas de la transposasa de Ac para poder transponerse

Estos dos elementos Ac y Ds se expresan en las clulas del endospermo y actan

sobre las capas de aleurona que dan color a las semillas del maz
El elemento Ds introduce una rotura en un punto del cromosoma adyacente a l,
aunque slo cuando est presente en el genoma el elemento Ac
Si esa rotura se produce en las clulas del endospermo, generalmente las clulas
descendientes pierden un trozo del cromosoma, producindose diversos efectos
fenotpicos
En el cromosoma 9 del maz estn situados los loci:
(C,c) (C: semilla coloreada, c: semilla incolora)
(Sh,sh) (Sh: semilla tersa, sh: semilla arrugada)
(Wx,wx) (Wx: semilla brillante, wx: semilla mate)
TRANSPOSONES DE ADN EN MAZ
Ejemplo 1: prdida de un trozo de cromosoma
Tenemos una lnea de maz heterocigota en acoplamiento para estos tres loci
Se introduce el elemento Ds en el cromosoma 9 y provoca una rotura en el homlogo
que lleva los alelos dominantes y stos se pierden
Aparecen clulas descendientes de dos tipos:
Clulas que mantienen los alelos dominantes:
fenotipo de la semilla: pigmentada, tersa y brillante
Clulas que pierden los alelos dominantes:
fenotipo de la semilla: incolora rugosa y mate

Ejemplo 2: Insercin y prdida de un elemento Ds en un locus

Tenemos una lnea de maz heterocigota en acoplamiento para estos tres loci
Se introduce el elemento Ds en el locus del alelo C del cromosoma 9 y no se produce
rotura
En algunas clulas, el elemento Ds se transpone de nuevo y abandona el locus del
alelo C
Aparecen clulas descendientes de dos tipos:
Clulas que no expresan el alelo C: incoloras
Clulas que expresan el alelo C: coloreadas
Las clulas en las que se produce la rotura no revierten al fenotipo normal, pero
aqullas en las que se produce la insercin de Ds sin rotura s pueden revertir al
fenotipo normal
Ds se habra movido desde una posicin cercana al centrmero hasta el alelo C
impidiendo la expresin del color: la semilla comienza a desarrollarse con clulas
incoloras
Si el elemento Ds abandona el locus del alelo C y se transpone a otro lugar, las clulas
revierten al fenotipo original y aparecen clulas coloreadas
Las clulas descendientes de ellas formarn zonas coloreadas: las motas coloreadas
de la semilla
Como esto puede suceder varias veces, pueden aparecer diversas motas coloreadas

OTROS TRANSPOSONES DE ADN

DISGENESIS HIBRIDA
La disgnesis hbrida es un fenmeno que se produce cuando hembras de cepas
antiguas de laboratorio de D. melanogaster se cruzan con machos derivados de
poblaciones naturales recientes
Los linajes de laboratorio poseen un citotipo M y los linajes naturales un citotipo P
Cuando se cruza una hembra M con un macho P, la descendencia muestra una gran
variedad de fenotipos sorprendentes
Esta variedad de fenotipos incluye fecundidad reducida, alta tasa de mutacin (10-2) y
una elevada frecuencia de aberraciones y no disyunciones cromosmicas
La baja fecundidad se transforma en esterilidad a altas temperaturas (29 C)

Sin embargo, los cruces recprocos (hembra P x macho M) no producen descendencia

disgnica
Un gran porcentaje de las mutaciones inducidas por la disgnesis hbrida es inestable, es decir,
revierte al tipo salvaje o a otros alelos mutantes, con una frecuencia muy alta
La inestabilidad est restringida a la lnea germinal de una mosca con citotipo M
Se pens que las mutaciones disgnicas eran causadas por la insercin de elementos
transponibles en genes especficos que quedaban inactivados
La reversin se producira por la escisin de estos elementos transponibles
Esto se prob aislando mutaciones disgnicas inestables en el locus white que produce el color
en el ojo
Muchas de estas mutaciones resultaron ser causadas por la insercin de un elemento
transponible dentro de gen w+
Este elemento transponible, llamado elemento P, se encontr con una frecuencia de unas 30 a
50 copias por genoma en las cepas P, pero estaba ausente en las cepas M
El elemento P completo se parece a los transposones simples de bacterias en las repeticiones
invertidas cortas (31 pb) de sus extremos y en que lleva el gen de la transposasa
Sin embargo, el gen de esta transposasa eucaritica contiene tres intrones y cuatro exones
Por qu los elementos P no causan problemas en las cepas P?
Las cepas P contienen elementos P pero tambin un represor que impide la transposicin de
estos elementos dentro del genoma
El represor bloquea la expresin del gen de la transposasa o su actividad
Las cepas de laboratorio, las cepas M, no tienen elementos P ni represor en el citoplasma
Entonces, al cruzar hembras M con machos P, los elementos P del cigoto recin formado
(aportados por el macho), estn en un medio sin represor y pueden transponerse por todo el
genoma
En cambio, los cruces hembra P x macho M no causan disgnesis porque el citoplasma del
cigoto (aportado por la hembra) contiene represor P

El gen de la transposasa que lleva el elemento P contiene tres intrones y cuatro

exones
El procesado de este gen es especfico de tejido
En los tejidos somticos no se procesa el intrn 3, el marco de lectura se acorta
debido a que el intrn posee un codn de terminacin y se produce una protena de 66
kD que es el represor
En la lnea germinal se procesa el intrn 3, el marco de lectura se alarga y se produce
una protena de 87 kD que es la transposasa

INVASIN DEL ELEMENTO P

USO DEL ELEMENTO P PARA INSERTAR GENES

El elemento P puede utilizarse para transferir genes donantes a la lnea germinal de
una mosca receptora
Supongamos que queremos introducir un alelo ry+ en el genoma de una mosca
homocigtica para el alelo rySe recolectan embriones de esta lnea en fase de nueve divisiones nucleares
En esta fase, el embrin es un sincitio multinucleado con los ncleos polares (los que
van a dar lugar a las clulas germinales) situados en el extremo posterior del embrin
En este extremo posterior se van a inyectar dos tipos de plsmidos bacterianos
modificados
El primero, lleva un elemento P defectivo, donde se ha insertado el alelo ry+
Este elemento P no tiene el gen de la transposasa pero tiene los extremos intactos
para poder transponerse con ayuda de otra transposasa
El segundo plsmido lleva un elemento P con el gen de la transposasa intacto
Las moscas que se desarrollan a partir de estos embriones siguen siendo
fenotpicamente mutantes (ry-), pero en su descendencia aparecer una gran
proporcin de moscas ry+
Mediante hibridacin in situ, se comprob que el elemento P con el alelo ry+ se haba
insertado, en algunas clulas germinales, en diversas posiciones cromosmicas,
distintas segn los individuos
Se observ que estos nuevos alelos ry+ se heredan de forma estable y mendeliana

Mouse lines carrying the genetic components of the transposon systems

Transposons are mobile DNA segments that can disrupt gene function by inserting in or
near genes.
Here, we show that insertional mutagenesis by the PiggyBac transposon can be used
for cancer gene discovery in mice.
PiggyBac transposition in genetically engineered transposon-transposase mice
induced cancers whose type (hematopoietic versus solid) and latency were dependent
on the regulatory elements introduced into transposons.
Analysis of 63 hematopoietic tumors revealed that PiggyBac is capable of genomewide mutagenesis.
The PiggyBac screen uncovered many cancer genes not identified in previous
retroviral or Sleeping Beauty transposon screens, including Spic, which encodes a
PU.1-related transcription factor, and Hdac7, a histone deacetylase gene.
PiggyBac and Sleeping Beauty have different integration preferences.
To maximize the utility of the tool, we engineered 21 mouse lines to be compatible with
both transposon systems in constitutive, tissue- or temporal-specific mutagenesis.
Mice with different transposon types, copy numbers, and chromosomal locations
support wide applicability.
Fig. 1 Mouse lines carrying the genetic components of the transposon systems.

ANOMALAS CROMOSMICAS PRODUCIDAS POR RECOMBINACIN ENTRE

LOS ET

Relacin ETs-hospedador
Dos hiptesis no excluyentes explican su amplia distribucin en los genomas de los
organismos
Hiptesis del ADN egosta: parsitos
que se perpetan en el genoma
- Ventaja replicativa respecto al
hospedador
heterocromatina

Contribuyen a la plasticidad gentica del

hospedador
- Papel evolutivo importante (especiacin)
- Componentes estables de

- Habilidad para propagarse

- Domesticacin molecular: seleccin
- Eliminacin por seleccin contra
positiva
efectos deletreos
Hiptesis intermedia: artesanos que van dando forma a los genomas eucariotas a lo
largo del proceso evolutivo
ELEMENTOS TRANSPONIBLES EN HUMANOS

ELEMENTOS TRANSPONIBLES EN EL GEN HUMANO HGO

ELEMENTOS TRANSPONIBLES EN D. melanogaster

ELEMENTOS TRANSPONIBLES EN GRAMNEAS

Origen y ciclo de vida de un ET en el genoma hospedador

ORIGEN Y CICLO VITAL DE UN ET EN EL GENOMA HOSPEDADOR

ELEMENTOS TRANSPONIBLES