Centro educativo: instituto tecnolgico de Villahermosa.

Materia: Bioqumica del Nitrgeno y Regulacin Gentica.

Nombre: Cristian Jess Aguirre sosa.
Profesora: Martha Concepcin Rodrguez Cepeda
Practica 2: Metabolismo de microrganismos.
Introduccin
Los cidos nuclicos son polmeros de alto peso molecular,
sus monmeros son nucletidos que se polimerizan al
formar enlaces fosfodister 3'- 5'
Los cidos nuclicos presentes en las clulas son el cido
Desoxirribonucleico (DNA) y el cido Ribonuclico (RNA)
que desempean diferentes funciones, el DNA es el
asiento de la informacin gentica; del RNA existen tres
tipos: RNA mensajero (RNAm) que lleva la informacin del
DNA a los ribosomas, RNA ribosomal (RNAr)que forma
junto con las protenas a los ribosomas y RNA de
transferencia (RNAt)responsable de trasladar a los
aminocidos del citoplasma a los ribosomas.

ter
1 cuchillo
50 g de hgado de res
Hielo en cubos
1 guantes de hule
1 mechero
Reactivos de fiske-subarow
H2SO4 13 N
H2SO4 10 N
Reactivos de bial

Procedimiento
1

Se suspendi 10g de tejido en 40ml de agua a 37 o

C y se espero 15 minutos.

Se agreg 50ml de solucin concentrada de fenol.

Se agito mecnicamente la suspensin durante 30

minutos a temperatura ambiente.

Luego se centrifugo en frio a 3000g durante 15

minutos.

La extraccin de RNA total puede realizarse de dos formas

diferentes, la primera usando NaCl, tcnica sencilla donde
el RNA obtenido esta contaminado con DNA y por lo tanto
no puede utilizarse para estudios que requieran precisin.

Con una pipeta se removi cuidadosamente la capa

superior acuosa y se centrifugo a 10.000g por 5
minutos para separar la protena desnaturalizada.

La segunda tcnica es utilizando fenol, en donde el RNA

que se obtiene es ms puro aunque a veces puede
presentar una ligera contaminacin con polisacridos.

Se agreg acetato de potasio al sobrenadante

hasta obtener una concentracin y precipito el ARN
aadiendo 2 veces el volumen de etanol y
dejndolo enfriar en hielo por una hora.

Se recogi el precipitado por centrifugacion a 2000g

por 5 minutos.

colocarlo en un tubo de ensayo y aadirle 2 ml. De

H2SO4 13 N.

hervir
a la flama del mechero (suavemente),
agitando, durante 10 min.

Cuando se trata de aislar RNA debe decidirse primero si

se va a extraer RNA total o un tipo especial de RNA
(RNAm, RNAr, RNAt), de esta decisin depender la
tcnica a seguir.

Metodologa.
Instrumentos:
2 pipetas
8 tubos de ensaye
1 vaso de precipitado de 250 ml
Centrfuga
1 matraz Erlen Meyer de 125 ml
Reactivos
Fenol al 90%
Etanol: agua (3:1)
Acetato de potasio 20%
Etanol absoluto
Hielo

10 retire con una pipeta pasteur una pequea porcin

del hidrolizado
11 coloque 6 gotas del hidrolizado
ensayo pequeo

en un tubo de

12 aadir 0.5 ml de reactivo de bial y agite.

Resultados
Una vez aislado el RNA del resto de los componentes
presentes en las clulas hepticas. Se procede a
comprobar la presencia de algunos de los elementos
presentes en los cidos nucleicos.

un nmero de razones entre ellas , para reducir el tiempo

de trabajo , reducir la manos de obra , costos , aumento de
seguridad de los trabajadores y al mismo tiempo
proporciona oportunidad en la reproducibilidad y la calidad
de aumentar los resultados

La presencia de azcar pentosa (ribosa), que contiene el

RNA, se manifiesta por la aparicin de un color verde
azuloso, debido a la reaccin del furfural (producido al usar
HCL sobre el carbohidratos), mas el orcinol que contiene el
reactivo de bial.
Se debe desarrollar un color azul, debido a la reaccin del
naftol-sulfonato sodio con el fosfato presente en el RNA. (el
naftol-sulfonatol es el principal componente del reactivo de
fiske-subarow)

Bibliografa
Clements, J. F. 2007. The Clements Checklist of Birds of
the World. 6th Edition. Cornell
University Press.
Downloadable from Cornell Lab of Ornithology.
Enciclopedia de la Vida. (2002). Milenium. Crculo de
lectores.

Conclusiones
Las tcnicas generales de purificacin y extraccin de
cidos nucleico y arn permiten a los investigadores y
cientficos a adquirir mejores resultados y es esencial en
una gran cantidad de aplicaciones bioqumicas como son:
relaciones de parentesco, para detectar enfermedades
hereditarias, para conocer los genes de una persona,
clonacin, etc. Automatizacin de cido nucleico , este
proceso de extraccin es potencialmente beneficioso para

Harris, D. (2004). Anlisis qumico cuantitativo. Segunda

edicin. Editorial Reverte. Barcelona, Espaa.
Mahan, S y Escott, K. (1996). Nutricin y Dietoterapia de
Krause.
Mathews, C y Van Holde, K (2004). BIOQUMICA. Editorial
Person. 2da edicin.
Madrid1330 p.p.
Murray, R; Mayes, P; Granner, D y Rodwell, V. (2001).
Bioqumica de Harper. 15a edicin.