LABORATORIO DE BIOQUMICA 502504

GUIA 2.2-DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASEINA.

I.

EL PROBLEMA

Determinar el punto isoelctrico de la casena.

II.

FUNDAMENTO TEORICO:

La casena representa el 80% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en composicin de

la leche lquida, hay varios tipos de casena que son s1, S2, y ; estas protenas precipitan del
lquido cuando esta toma un pH cido de 4,6.
El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico (pI), ya que se encuentran
en el equilibrio las cargas positivas y negativas presentando una carga neta de 0 y la protena
presenta su mxima posibilidad para ser precipitada ya que la partculas se agregan. Debido a la
composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas
dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos, y as cada protena tendr un pI
diferente.

HOOC

- H+
+

H+

-OOC

- H+
+

Forma isoelctrica
(carga neta cero (0))

Catinico
(carga 1+)

III.

NH2

NH3+

NH3+

H+

-OOC

H
Aninico
(carga -1)

BSQUEDA DE INFORMACIN:
-

Consulte la importancia industrial de la casena

Cul es el pI de la casena?
Consulte el valor del punto isoelctrico de tres protenas de inters.

IV.

MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales por grupo:

Nueve tubos de ensayo
Dos vasos de precipitados de 50ml
Una gradilla para tubos de ensayo
Un erlenemyer de 250ml
Un erlenmeyer de 150ml
probeta de 50ml
Dos pipetas graduadas de 5,0ml
Dos pipeta graduada de 1,0 ml
Dos pipetas graduadas de 10,0ml
Dos vasos de precipitado de 50ml
Agitador de vidrio
Embudo de vidrio mediano
Vidrio de reloj
Papel de filtro flujo rpido
Dos goteros de plstico

Reactivos por grupo: (volmenes por grupo de trabajo)

Agua destilada
cido actico 0,01N
cido actico 0,1N
cido actico 1,0N
NaOH 1N
ter etlico
Etanol al 70%

Materiales y reactivos de uso general:

Soluciones buffer pH 4,0 y 7,0 para calibrar el potencimetro
Potencimetro
Leche entera corriente ( 1 litro)
Papel indicador universal
Rollo de toallas absorbentes

V.

PROCEDIMIENTO:
A. Aislamiento de la casena: (se har previo a la prctica)

Caliente en un vaso de precipitados 150ml de agua destilada a 38oC, aada 50ml de leche y luego
gota a gota y con agitacin, adicione cido actico 2M hasta que observe que se forma un
precipitado (la leche se corta). Deje sedimentar, decante y filtre sobre papel de filtro rpido, luego
lave el precipitado con 20ml de etanol en el mismo filtro y seque el precipitado colocando varias
toallas de papel absorbente.
Coloque el precipitado en un vaso de precipitados pequeo previamente pesado, vuelva a pesar el
vaso con el precipitado y luego adicione 5ml/g de ter etlico, filtre nuevamente. Deseche el
sobrenadante y queda un precipitado blanco de fcil manipulacin.

B. Preparacin de la casena:
Coloque 250 mg de casena en un erlenmeyer de 150ml, agregue 20ml de agua destilada y 5 ml de
NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin total de la casena. Una vez disuelta la casena, adicione
5 ml de cido actico 1N y diluya con agua destilada hasta 50ml y mezcle bien. La solucin debe
ser clara y limpia y si no es as, debe volver a filtrar.
C. pI de la casena:
En nueve tubos de ensayo limpios y secos adicione exactamente los volmenes de los reactivos
segn la siguiente tabla:

Reactivos
Agua
destilada
cido
actico
0,01N (ml)
cido
actico
0,1N (ml)
cido
actico
1,0N (ml)
pH
resultante

1
8,38

2
7,75

3
8,75

4
8,5

5
8,0

6
7,0

7
5,0

8
1,0

9
7,4

0,60

1,25

0,25

0,5

1,0

2,0

4,0

8,0

1,6

5,9

5,6

5,3

5,0

4,7

4,4

4,1

3,8

3,5

Confirme el valor de pH resultante de cada tubo con un potencimetro o con papel indicador
universal.
Luego agregue a cada tubo 1ml de la solucin de casena, agite inmediatamente el contenido del
tubo y djelo reposar durante 20 minutos.
Usando una escala cualitativa de cruces (0 a 5 cruces), registre el grado de turbidez de cada tubo,
el mayor grado de turbidez, significa que hay un mayor contenido de precipitado y ser el valor de
pH ms cercano al punto isoelctrico de la protena.
VI.
Tubo
pH
Cruces

TABLA DE DATOS
1

VII.
-

PARA EL DESARROLLO DEL INFORME

Discuta los datos obtenidos e indique cual es el pI de la casena
Representa las formas inicas y calcule el valor del pI para algunos aminocidos y algunos
pptidos que le indique el profesor.

VIII.

BIBLIOGRAFA:

- Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico.