CARACTERSTICAS Y
DESCIFRAMIENTO
Severo Ochoa
Marshall W.
Nirenberg
Har Gobind
Khorana
Sydney Brenner
Una vez que Crick (1958) propuso la Hiptesis de la Secuencia ("existe una
relacin entre la ordenacin lineal de nucletidos en el ADN y la ordenacin lineal
de aminocidos en los polipptidos"), la comunidad cientfica la admiti y se
plantearon dos preguntas:
Francis Crick
Sydney Brenner
Estructura ARN
transferente
Estructura ARN
transferente
Los ARN-t suelen presentar bases nitrogenadas poco frecuentes como son la
pseudouridina (), metilguanosina (mG), dimetilguanosina (m 2G), metilinosina (mI)
y dihidrouridina (DHU, UH2).
El que realiza el reconocimiento del codn correspondiente del ARN-m es el
anticodn del ARN-t y no el aminocido. Mediante un experimento se demostr
que era posible transformar el cisteinil-ARN-t mediante tratamiento con hidruro de
nquel en alanil-ARN-t. Este tratamiento convierte la cistena en alanina. De esta
manera se consigui un ARN-t especfico de cisteina que en lugar de llevar unida
cisteina llevaba unida alanina. Cuando se empleo este ARN-t hbrido para
sintetizar protenas se pudo comprobar que en el lugar en el que deba aparecer
cisteina en la secuencia del polipptido apareca alanina. Por tanto, el que llevaba
a cabo el reconocimiento del codn del ARN-m era el anticodn del ARN-t y no el
aminocido.
La degeneracin de l cdigo se explica teniendo en cuenta dos motivos:
ARN-t
ARN-tSer1
ARN-tSer2
Anticodn
AGG + tambaleo
AGU + tambaleo
AGU y AGC
ARN-tSer3
UGG + tambaleo
MAS
UNO
SON
DOS
OMA
SUN
OSO
NDO
ASU
NOS
OND
OS
OMS
UNO
SON
DOS
AAA
MAS
UNO
SON
DOS
Severo Ochoa
Marshall W.
Nirenberg
Utilizacin de homopolmeros.
Uso de copolmeros.
UTILIZACIN DE HOMOPOLMEROS
Un homopolmero es un ARN sinttico que solamente contiene un tipo de
ribonucletido. Por ejemplo, el ARN sinttico UUUUUUUUUUUUU.......
Gruberg-Manago y Ochoa (1955) aislaron a partir de timo de ternera un ezima
denominada Polirribonucletido fosforilasa que tena la capacidad de sintetizar
ARN a partir de ribonuclesidos difosfato y sin necesidad de molde. Este enzima
iba tomando al azar los ribonuclkeosidos del medio para originar un ARN.
Matthei y Nirenberg (1961) consiguieron sintetizar polipptidos "in vitro" aadiendo
un ARN sinttico de secuencia conocida a un sistema acelular estable de
traduccin. Usando la Polirribonucletido fosforilasa sintetizaron poli-uridlico (poliU: UUUUUUUUUUUUUU...). Cuando emplearon este ARN sinttico en su sistema
acelular de traduccin daba lugar a la formacin de un polipptido que solamente
contena el aminocido fenilalanina (Poli-fenilalanina: phe-phe-phe-phe-..). Por
tanto, el triplete UUU codificaba para fenilalanina (phe). Tambin comprobaron que
el ARN snttico Poli C (Poli-citidlico: CCCCCCCCCC....) daba lugar a un
polipptido que contena solamente prolina (Poli-prolina: pro-pro-pro-pro-pro-...),
por tanto, el codn CCC significaba prolina (pro).
Poco tiempo despus, Ochoa sintetiz Poli-adenlico (Poli-A: AAAAAAAAA....) y
observ que el polipptido que apareca solamente tena el aminocido lisina (Polilisina: lys-lys-lys-lys-....). Por consiguiente el triplete AAA codificaba para el
aminocido lisina (lys). Tambin corrobor que el Poli-C daba lugar a Poli-prolina.
El ARN Poli-guanlico no produca protena alguna, probablemente debido a que
adquira una estructura terciara helicoidal que impeda su traduccin a protena.
Triplete
CCC
UUU
AAA
Aminocido
prolina
fenilalanina
lisina
USO DE COPOLMEROS
El siguiente paso fue la utilizacin de copolmeros, es decir, de ARN sintticos que
contenan ms de un ms de un ribonucletido distinto. Para ello emplearon la
Polirribonucletido fosforilasa y pusieron en el medio dos ribonuclesidos distintos.
Triplete 5 3
Probabilidad
Valor relativo
UUU
100
UUG
20
UGU
20
GUU
20
UGG
GUG
GGU
GGG
0,08
1/6 x 1/6 x 1/6 = 1/216
leucina (leu) que esta codificado por el triplete UUG, tampoco dedujeron que el
aminocido valina estaba codificado por 1U y 2 G (GUG). Uno e los problemas, de
estos experimentos radica en asignar el valor 100 al aminocido ms frecuente y
comparar las proporciones de aminocidos obtenidas de esta manera con las de
los distintos tripletes del mensajero, ya que el aminocido ms frecuente puede
estar codificado por ms de un triplete. Oto inconveniente es que los mensajeros
sintticos producidos no presenten la frecuencia de codones esperada por azar.
Este tipo de experimentos fueron realizados por los grupos de Nirenberg y de
Ochoa y no rindieron grandes resultados.
EMPLEO DE POLMEROS DE SECUENCIA CONOCIDA
La siguiente forma de abordar el desciframiento de la clave gentica fue utilizar
ARN mensajeros sintticos de secuencia conocida obtenidos por mtodos de
sntesis qumica o enzimtica. Estos mtodos fueron empleados por Khorana y
col. (1965).
Utilizando el Poli-UCde 116 residuos de longitud, ARN mensajero sinttico en el
que se repite muchas veces seguidas el dinucletido UC
(UCUCUCUCUCUCUC...) obtuvieron un polipptido que contena los residuos de
serina y leucina en secuencia alternada (ser-leu-ser-leu-ser-leu-ser-leu-....). El
Poli-UC contiene dos tripletes diferentes, UCU y CUC, por consiguiente uno de
ellos codifica serina y el otro leucina, pero no se puede determinar cul a cul.
Tambin se emplearon los mensarejos sintticos Poli-AC, Poli-AG y Poli-UG que
codificacban para los siguientes aminocidos:
ARN sinttico
Poli- AC
(ACACACAC..)
Poli-AG
(AGAGAGAG..)
Poli-UG
(UGUGUGUG..)
Poli-UC
(UCUCUCUC..)
Codones
Polipptido
sintetizado
cys-val-cys-val-cysval-
Aminociods
treonina e
histidina
arginina y
glutmico
cistena y valina
Codones
AAG, AGA y
GAA
Polipptido sintetizado
Poli-lys, Poli-arg, Polyglu
Aminocidos
AAG
lisina
AGA
GAA
Poli-arg: arg-arg-arg
arg-..
Poli-glu: glu-glu-gluglu-..
arginina
glutmico
P
R
I
M
E
R
A
B
A
S
E
T
E
R
C
E
R
A
B
A
S
El cdigo gentico nos indica que aminocido corresponde a cada triplete o codn
del ARN mensajero.
Organismo
Codn
Significado en
Cdigo Nuclear
Significado en
Cdigo
Mitocondrial
Todos
UGA
FIN
Trp
Levadura
CUX
Leu
Thr
Drosophila
AGA
Arg
Ser
Humao, bovino
AGA, AGC
Arg
FIN
Humano,
bovino
AUA
Ile
Met (iniciacin)
Ratn
Ile
Met (iniciacin)