RESUMEN

En esta prctica de titulacin de aminocidos se determin el punto isoelctrico de dos aminocidos, donde nos
correspondi la tirosina; se empez por la calibracin de los instrumentos y preparacin de las respectivas
soluciones. La solucin con la que se trabaj fue el aminocido tirosina ms agua, para la titulacin llenamos la
bureta con NaOH con 50 Ml, la cual fue aadida sucesivamente al aminocido hasta que la tirosina alcanzara un
PH de 12. Esto se realiz nuevamente con una nueva muestra de aminocido, pero tomando como volumen
inicial 0.5 Ml de NaOH hasta alcanzar nuevamente un pH de 12 y observamos los cambios ocurridos y se procedi
a hacer la curva de titulacin.

INTRODUCCIN
Las protenas son macromolculas compuestas por unidades ms pequeas conocidas como aminocidos. En las
protenas se encuentra bsicamente veinte aminocidos diferentes, los cuales contienen un grupo carboxilo y
un grupo amino unidos al mismo tomo de carbono (carbono ) estos aminocidos difieren unos de otros solo
por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos R que varan tanto en estructura, como en tamao y carga
elctrica e influyen en la solubilidad en agua. Los grupos carboxilo y amino de los aminocidos funcionan como
cidos y bases dbiles, respectivamente, y como tales, se ionizan cuando estn en solucin. Los aminocidos
tienen al menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a cuatro
formas inicas diferentes. Cuando la forma inica tiene una carga neta de cero se dice que se encuentra en su
punto isoelctrico o PI. Cada aminocido tiene sus propio pK, puesto que presenta diferentes sustituyentes en
sus cadenas laterales. Mediante una titulacin, se puede determinar el pK de un aminocido.
La titulacin es la adicin de sucesivas cantidades de una base o de un cido fuerte, a una solucin de cido o de
base a titular, con la medicin simultnea de su pH, hasta el punto de equivalencia en el cual los equivalentes de
cido y de base se igualan.
La tirosina que fue el aminocido utilizado para hacer la curva de titulacin es uno de los 20 aminocidos que
forman las protenas. Como todos los aminocidos est formado por un carbono central alfa (C) unido a un
tomo de hidrgeno (-H), un grupo carboxilo (-COOH), un grupo amino (-NH2) y una cadena lateral. En la tirosina,
la cadena lateral es un grupo fenlico. De forma general, las propiedades de la tirosina se deben a la naturaleza
de su cadena lateral, su reactividad y la conformacin de las cadenas proteicas que forman. El punto isoelctrico
de este aminocido se encuentra en 5,7. El punto isoelctrico es el pH en el cual la protonizacin tiene la misma
extensin que la desprotonizacin.

DATOS OBTENIDOS Y ANLISIS DE RESULTADOS

El pH de la solucin del aminocido problema y el NaOH al inicio de la titulacin, fue de 6.52 con un
volumen inicial de cero.
De la adicin continua de la solucin de NaOH a la solucin del aminocido problema se obtuvo la
siguiente tabla (tabla 1) y su respectiva grfica (figura 2):
Tabla 1. Titulacin del aminocido problema, tirosina.

volumen NaOH descargado mL Muestra PH Tiroxina

v0
6,52
1
9,14
2,5
9,73
3,3
10,43
4
11,13
4,5
11,52
5
11,80
5,5
11,95
5,8
12,02

La adicin sucesiva de 1 ml de la solucin de NaOH modifica el pH de la solucin del aminocido

problema, tirosina.
Figura 1. Curva de titulacin del aminocido problema

curva de titulacin de la tirosina

volumen de NaOH descargado Vs pH
Pk2
14

PI

12
10
8

Muestra PH Tiroxina

6
4

Pk1

2
0
0

La curva de titulacin del aminocido problema muestra los rangos por donde pueden encontrarse los pK del
aminocido, adems de su punto isoelctrico.
El pk1 es el pH inicial del aminocido, el cual fue de 6.52 y el pk2 como se muestra en la figura 1. Se encuentra en
el rango de 12. Es as que con esto se hall el punto isoelctrico, que es el valor en el que la protena no tiene
carga; se calcul haciendo la media aritmtica de los valores de pKa. Como se muestra a continuacin.
=

pka1+pka2
2

6.52+12.02
2

= 9.27

Despus se realiz un duplicado con una muestra nueva de tirosina y agua. Y se titul igualmente hasta llegar a
un PH de 12. Adicionando en intervalos de 0.5 mL como se muestra en la tabla 2. Y los resultados se observan
en la figura 2. Donde se observa un cambio brusco al aadir 1Ml. Donde se dice que en este rango se encuentra
el punto isoelctrico que como sabemos este se define como el pH en el cual el nmero de cargas positivas se

iguala al nmero de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molcula. En el punto isoelctrico
la carga neta de la molcula es cero (0).
Para el caso de la tirosina que solo tiene dos grupos de disociacin tenemos: (CN= Carga neta.) El primer pk1 (RCOOH) es 5,61 y el segundo pk2(R-NH3+) es 11,99. As que el punto isoelctrico (PI) de la tirosina es:
=

pka1+pka2
2

5,61+11,99
2

= 8.8

Tabla 2. Duplicado de la titulacin del aminocido, tirosina con H2O

volumen de NaOH descargado
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5

Ph
5,61
10,33
11,42
11,6
11,85
11,91
11,99

Figura 2. Curva de titulacin del aminocido problema (DUPLICADO)

titulacin tirosina
14
12

PI

10

pk2

PK1

8
6
4
2
0
0

0,5

1,5

2,5

3,5

De acuerdo a los resultados obtenidos en la curva de titulacin del aminocido (tirosina) con respecto al punto
isoelctrico hallado y el punto isoelctrico terico de la tirosina se tiene como error experimental un 38.94% ya
que el punto isoelctrico de la tirosina es de 5.66 pero en este caso el punto isoelctrico que obtuvimos
experimentalmente que fue de 9.27 no fue el mismo que se marca tericamente. Esto pudo ocurrir por el error
que se tuvo al momento de hacer las respectivas mediciones, puesto que al abrir la llave de la bureta el NaOH se
nos pasaba ms de 1 Ml que es como se mostraba en la gua prctica que se deba hacer; o por la estabilizacin
del pH-metro.
% =

|5.66 9.27|
100 = 38.94%
9.27

PREGUNTAS
Cul es la diferencia entre pKa1 y pKa2? A quien corresponde cada uno de los datos obtenidos?
En la curva de titulacin de la tirosina que fue bifsica hubo dos porciones separada o inflexiones en la curva de
titulacin. El punto medio de la primera inflexin (pKa1) es donde el aminocido est mitad en cida y mitad en
forma zwitterion. EL punto de inflexin PI ocurre cuando todo el aminocido original ya est en forma de
zwitterion. El pH al cual esto ocurre se denomina el pH isoelctrico (punto isoelctrico) y se le da el smbolo pI
(asumiendo que el grupo R no tiene carga). En la titulacin de pH de un aminocido con un grupo no ionizable
R, el punto de equivalencia ocurre en el PI del aminocido. En el punto medio la segunda inflexin (pKa2), la
mitad del aminocido est en forma de zwitterion y la otra mitad est en forma bsica.
Qu tipo de aminocido identific en la titulacin?
El aminocido proporcionado por el docente fue la tirosina que tiene un punto isoelctrico terico de 5.7 pero
al realizar el experimento y los debidos clculos para hallarlo, el PI nos dio 9.27 con un volumen inicial de NaOH
de 0 y 8.8 Con descarga de volumen de 0,5 ML. Si no hubiramos sabido cual fue el aminocido proporcionado
diramos que se trata de la lisina o histidina ya que se encuentra en el rango que fue encontrado como se muestra
en la tabla 3.
Tabla 3. PUNTO ISOELTRICO DE LOS 20 AMINOCIDOS ESTNDAR
AMINOCIDO
Glicina

PUNTO ISOELTRICO
5,97

AMINOCIDO
Cistena
Metionina

PUNTO ISOELCTRICO
5,07
5,74

Alanina

6,07

Valina

5,97

cido asprtico

2,77

Leucina

5,98

cido glutmico

3,22

Isoleucina

6,02

histidina

7,59

Fenialanina

5,48

Lisina

9,74

Tirosina

5,7

Arginina

10,76

Triptfano

5,89

asparginina

5,41

Serina

5,68

Glutamina

5,65

prolina
6,48
Treonina
5,87
Qu son soluciones Buffer?
Buffer es una o varias sustancias qumicas que afectan la concentracin de los iones de hidrgeno (o
hidrogeniones) en el agua. Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de hidrogeniones (o peso de
hidrgeno), un "buffer" (o "amortiguador") lo que hace es regular el pH.
Cuando un "buffer" es adicionado al agua, el primer cambio que se produce es que el pH del agua se vuelve
constante. De esta manera, cidos o bases (lcalis = bases) adicionales no podrn tener efecto alguno sobre el
agua, ya que esta siempre se estabilizar de inmediato.
La funcin de una solucin amortiguadora es la de resistir los cambios de pH cuando se le agregan ligeras
cantidades de cido o base. Su funcin es muy importante en los sistemas qumicos y biolgicos y los procesos
que requieran un cierto valor de pH que no sea modificable con facilidad. Ya sea para el funcionamiento
adecuado de las enzimas en el sistema digestivo o los glbulos blancos en el torrente sanguneo.

CONCLUSIONES
Esta prctica, aunque su desarrollo fue tardo, nos deja conocimientos amplios, sobre las curvas de titulacin,
que son herramientas que nos proporcionan gran contenido de informacin, ya que a travs de stas pudimos
determinar, por ejemplo, el pKa1, el pKa2, y por medio de stos, el punto isoelctrico (PI) de un aminocido, que
en este caso fue la tirosina, aunque no nos haya dado los resultados esperados.
Los errores al calcular el PI pudieron ocurrir al momento de hacer las respectivas mediciones, puesto que al abrir
la llave de la bureta el NaOH se nos pasaba ms de 1 Ml que es como se mostraba en la gua prctica que se
deba hacer o por la estabilizacin del pH-metro.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
http://www.saberespractico.com/estudios/universidad/bioquimica-universidad/punto-isoelectrico-de-losaminoacidosnaturales/
http://docencia.izt.uam.mx/sgpe/files/users/uami/jaislocr/BIOQUIMICA_I/PRACTICA_3.pdf
http://uninga.net/verpost/Apuntes/3847/Titulaci--n--Bioqu--mica--Medicina.htm
http://agu.inter.edu/halices/TITULACION_AMINOACIDOS.pdf
http://matragut.files.wordpress.com/2009/10/2-clase20problemas20aminoacidos1.pdf