MICROBIOLOGA

TEMA 1: INTRODUCCIN
La microbiologa es la ciencia que estudia los microorganismos. Un
microorganismo no tiene significado taxonmico o evolutivo, no es un grupo
concreto de seres, sino que abarca una gran variedad de seres vivos que lo
nico que tienen en comn es su pequeo tamao ya que a simple visto no
se pueden ver, es necesario el uso de instrumentos: los microscopios.
La microbiologa estudia el microorganismo desde todos los puntos de visto,
su morfologa, composicin, gentica, etc. Es una ciencia reciente y tiene
relaciones con otras ciencias. Un ejemplo de esto pueden ser los protozoos
ya que tambin se estudian en parasitologa o las algas en botnica.
Adems, la inmunologa apareci como una rama dentro de la microbiologa,
muchos estudios de otras ciencias se realizan en microorganismos.
Tiene dos aspectos, uno como ciencia bsica: aquello que el hombre quiere
saber por placer, y otro como ciencia aplicada: tiene repercusin social, nos
podemos beneficiar de ella. Esta ciencia deriva del aspecto bsico.
Los microorganismos tienen efectos importantes tanto positivos (obtencin
de alimentos fermentados), como perjudiciales (enfermedades infecciosas).
RESUMEN HISTRICO
Ciencia reciente. Aparece en la segunda mitad del S. XIX (150 aos).
Surge tan tarde debido a que se tuvieron que desarrollar buenos
microscopios para poder observar los microorganismos. Aparecen
millones de aos antes que el hombre.
La primera persona que descubri la existencia de microorganismos
fue Antonie Van Leeuwenhoek (1632-1723). Tena un hobbie, hacer
lentes muy perfeccionadas. Describi la morfologa de los
microorganismos. Esto sirvi para reabrir una polmica que ya estaba
olvidada: la teora de la Generacin espontnea de la vida.
Finalmente qued demostrado que esta teora era falsa.
Louis Pasteur (1822-1895) hizo varias aportaciones. Demostr
mediante experimentos sencillos que la generacin espontnea era
falsa y que todo est contaminado de microorganismos. Adems
demostr que los cambios qumicos que ocurren en la materia
orgnica en las fermentaciones se producen por la actividad de los
microorganismos. Esta fue una de las repercusiones que hizo que se
desarrollara la microbiologa industrial. A partir de que descubri que
sin materia viva se producan cambios qumicos (gracias a las
enzimas) se desarroll la bioqumica.
En esta poca tambin se descubri que las enfermedades
infecciosas estn producidas por microorganismos (J. Lister). Pens
1

MICROBIOLOGA
que las enfermedades postparto eran producidas por los
microorganismos y propuso la asepsia: procedimientos para esterilizar
los instrumentos en el quirfano, comprobando as que las
enfermedades infecciosas disminuan.
R. Koch (1843-1910) demostr que los microorganismos son
responsables de las enfermedades infecciosas. Estableci unos
criterios para relacionar un microorganismo con una enfermedad.
- 1 postulado: El microorganismo tiene que estar presente en todos
los casos de enfermedad.
- 2 postulado: Se tiene que aislar/cultivar en el laboratorio
-3 postulado: Recomprobar. Inocular artificialmente a un animal sano
y si es el microorganismo es el responsable se tiene que reproducir la
enfermedad.
- 4 postulado: Aislar en el laboratorio para ver si ha sido ese
microorganismo el que ha producido la enfermedad.
A partir de ah fueron identificando bateras y relacionndolas
con enfermedades. En cuanto a la prevencin, Louis Pasteur puso en
marcha la vacunacin. Conforme se cultivan los microorganismos, se
atenan y si se inyectan no producen enfermedad y desencadenan
respuesta inmunitaria.
Durante las primeras dcadas del S. XX observaron que existan
sustancias que podan repercutir negativamente en microorganismos,
como es el caso de la sulfanilamina, que es de origen sinttico.
Tambin se encontraron sustancias de origen natural (antibiticos)
como es el caso de la penicilina, primera sustancia microbiana
descubierta por Flemming. La primera aplicacin prctica fue
durante la Segunda Guerra Mundial donde se utilizaron para
desinfectar las heridas de los soldados. Esta fue la segunda
repercusin industrial en la microbiologa.
En 1950 se puso a punto el microscopio electrnico que aumenta el
tamao y la resolucin y observar, por ejemplo, virus que no
presentan estructura celular. A partir de todo esto se lleg a la
conclusin de que los seres vivos tienen dos tipos de estructuras:
eucariota y procariota.
o

TIPOS DE MICROORGANISMOS
- Celulares
Procariotas: bacterias, archaea
Eucariotas:
hongos
(con
pared,
no
fotosintticos), algas (con pared, fotosintticos),
protozoos (sin pared, fotosintticos o no)
- No celulares
2

MICROBIOLOGA

Virus: material gentico ADN/ARN, cpsida

proteica, no pueden multiplicarse por s mismos,
les hace falta otra clula.
Viroide: ARN, sin cpsida, fitopatgenos
Priones: Agentes infecciosos de naturaleza
proteica.

TEORA ENDOSIMBITICA
- La mitocondria actual es el residuo de una bacteria
ancestral que fue fagocitada. (Tambin cloroplasto)
- Inicialmente era una relacin de parsito-husped, pero
con el paso del tiempo, la bacteria realizaba funciones
necesarias para la vida de la clula y viceversa.
- Se convirti en una relacin de comensalismo.

TEMA 2: TCNICAS MICROBIOLGICAS BSICAS

Los microorganismos presentan un tamao menor de 0.1 micrmetros. La
microscopia electrnica usa un nmero mayor de electrones y mediante
campos magnticos origina la ampliacin.
El poder de resolucin es la capacidad para distinguir como diferentes o
separadas dos puntos que estn adyacentes. Cuanto menor sea la distancia
mayor poder de resolucin. Para calcular la distancia:
d =/nsen
Existen diversos tipos de microscopio:
-

Microscopio de campo claro: cuando miramos el campo

aparece todo iluminado, pero si hay algn microbio o partcula se
ve oscuro.
Microscopio de campo oscuro: si no hay nada que observar lo
vemos todo negro y los microorganismos los veramos iluminados.

MICROBIOLOGA
o

Microscopio de contraste de fases: permite transformar las

diferentes desviaciones de la luz en diferentes giros de intensidad.
Nos permite distinguir detalles intracelulares.

Microscopio de luz UV: Inconvenientes No atraviesa el vidrio

por lo tanto las lentes han de ser de cuarzo. No podemos mirar
directamente, hace falta hacer la imagen ms grande.
Microscopio de fluorescencia: Absorbe la luz UV, pero no se la
queda. Emite parte de la luz que recibe. Absorbe luz UV pero
emite luz visible (con menos energa).

Anillo de campo oscuro: cilindro opaco que impide el paso

de la luz, porque los haces de luz salen oblicuamente desde
abajo y si no hay nada para que pase la luz a travs no
vemos nada.

TIPOS DE OBSERVACIN MICROORGANISMOS

Existen dos tipos de observaciones de los microorganismos:
-

Observacin directa de microorganismos: consiste en hacer

una suspensin del microorganismo en agua en portaobjetos y
mirarlo al microscopio, si est un poco slido se pone una gota en
el porta. El ndice de refraccin es el del aire. Los microorganismos
son agua y hay poco contraste entre el microorganismo y el medio
que lo rodea, por lo que hay que hacerlo con poca luz porque si es
muy intensa atraviesa el microorganismo y no se ver nada
debido a la falta de contraste. Con este tipo observamos
microorganismos vivos y caractersticas que solo se observan
cuando estn vivos, como la movilidad. Hay bacterias que tienen
una morfologa sensible a las tinciones (espiroquetas, bacterias
largas en espiral que alteran la morfologa si se tien).

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Observacin de preparaciones teidas:tiene por objeto

aumentar el contraste, Dos ventajas: ms fciles de ver. Podemos
hacer tinciones especiales TINCIONES DIFERENCIALES O
SELECTIVAS que permiten ver diferencias entre microorganismos o
diferencias entre distintas partes dentro de un microorganismo. El
inconveniente es que matamos el microorganismo. El proceso de
tincin es coger un porta y colocar agua si esta slido. Se seca a
temperatura ambiente; la tercera etapa es la de fijacin que
consiste en la desnaturalizacin de todas las macromolculas del
organismo fijando la estructura para que no se altere durante la
tincin, as se adhiere al cristal. Y despus se coloca un colorante
y se deja actuar el tiempo adecuado para cada colorante. Se lava
con agua despus del tiempo de tincin, se seca y se coloca una
gota de aceite de inmersin. Hay que poner mucha luz.

Los colorantes son sustancias que tienen color y absorben parte de la luz
visible refleja en la otra parte. Muestran el color complementario a la
radiacin que absorbe. Tiene que tener afinidad por los microorganismos
para poder teirlos. Existen colorantes catinicos que se combinan con
carga negativa y los colorantes aninicos se combinan con carga positiva.
La tincin simple es aquella en la que se utiliza un solo colorante. Todos los
microorganismos van a quedar teidos con ese colorante. La informacin
que nos da es bastante limitada. Podemos averiguar la forma, la morfologa,
el tamao relativo, y las agrupaciones.
Las tinciones diferenciales dan ms informacin sobre la bacteria que
estudiamos que son aquellas que permiten ver diferencias entre
microorganismos. Unos se tien de un color y otros de un color distinto. Se
utiliza un primer colorante y luego una segunda tincin con un segundo
colorante. Entre los colorantes se intercala una decoloracin.
-

GRAM: es la tincin ms importante en bacteriologa. Se necesita

para clasificar las bacterias. Segn se tian se pueden clasificar
como gram + o gram -. Las bateras gram se decoloran por el
etanol. Y si te pasas con el etanol, se pueden decolorar las gram

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+. Si observamos microorganismos de color violeta son gram + y
si son rojas gram -.
Hay que hacerla con un cultivo joven o reciente porque en los
cultivos viejos la pared celular se puede alterar, y en un gram + el
etanol puede decolorarla.
-

AAR (cido alcohol resistencia). La decoloracin en este caso se

hace con una mezcla de etanol + clorhdrico. Con esta mezcla se
decoloran todas las bacterias excepto unas muy concretas
(mycobacterium).
Tincin negativa: negrosina, no tie los microorganismos. til para
observacin cpsulas.

CULTIVOS PUROS

Es una poblacin inmensa de microorganismos que son todos iguales. Es

una necesidad de la microbiologa. El estado natural de la naturaleza no es
cultivo puro. El cultivo puro es un estado artificial de laboratorio. Hay
excepciones. Hay dos etapas para conseguir cultivos puros. La primera es
separar el microorganismo a estudiar del resto y la segunda etapa es hacer
el cultivo. Los cultivos puros no se pueden contaminar, por lo que hay que
tomar una serie de precauciones, en condiciones de esterilidad o asepsia.
Hay que trabajar bien no solo intentado no contaminar la muestra sino
tambin no contaminndonos nosotros.
El cultivo puro tiene que provenir de una nica clula inicial. El
mtodo ms utilizado es siembra de estra por superficie. Consiste coger
con asa de siembra la muestra donde hay microorganismos y con
movimiento de zigzag pasarlo por la superficie para conseguir cultivos
puros. A continuacin se flamea el asa para matar los microorganismos que
puedan quedar y sembrar el resto de placa que queda en otra direccin con
el fin de aislar las colonias.

MICROBIOLOGA
Mtodo de aislamiento directo de un microorganismo.
Micromanipulador: la muestra (muy diluida) se pone boca abajo sobre el
agar.
Qu caractersticas debemos observar en un cultivo puro?
-

Tamao de la colonia. Cada microorganismo da un tipo de colonia

en los medios de cultivo. Pueden ser lisas o rugosas, mucosas o
secas, planas o convexas.
Caracteres pticos: si es opaco o translcida. Tambin podemos
observar la pigmentacin.

Los microorganismos tienen la capacidad de producir pigmentos, hay

bacterias que producen pigmentos pero se quedan retenidos en la
clula (pigmentos no difusibles).
La bacteria secreta pigmentos difusibles al medio externo quedando
el medio pigmentado. La caracterstica de producir pigmentos solo la
tienen unas determinadas bacterias. La produccin de pigmentos est
regulada por factores ambientales. Aquellas bacterias que producen
pigmentos aparecen con ms frecuencia en medio slido.
Ej. de bacterias que producen pigmentos no difusibles: micrococus
lateus, staphylococus aureus, serratia marcescus (rojo).
En medio lquido no tenemos colonias aisladas. A medida que la
bacteria crece aumenta la turbidez, por lo que podemos observar la
cantidad de bacterias. Crecimiento homogneo o heterogneo,
microorganismos aerobios en superficie.
Otra caracterstica tanto en medio lquido como slido es el olor que
desprenden. Muchas colonias de bacterias desprenden un olor
caracterstico (saccharomyces cerevisiae) (buen olor).

MTODOS DE CONSERVACIN DE CULTIVOS PUROS

El mtodo de conservacin tiene que garantizar la conservacin de las
caractersticas del microorganismo. No hay ningn mtodo que sea el mejor
para todos los microorganismos, cada uno tiene un mtodo especfico que
funciona mejor.
En principio se establecen unos mtodos generales:
-

Resiembra peridica del microorganismo. Sembramos el

microorganismo en una placa Petri, lo metemos en la nevera y
cerramos con parafilm, pero al tiempo el microorganismo deja de
ser viable, por lo que antes de que deje de ser viable hacemos una

MICROBIOLOGA

resiembra peridica, para ello hay que saber cundo el

microorganismo deja de ser viable.
Cubrir el medio slido con aceite mineral estril. Evita que el
cultivo est en contacto con la atmsfera por lo que evitamos
oxidaciones, desecaciones
Liofilizacin: mtodo que en general funciona mejor. Consiste en
quitar todo el medio lquido, el agua pasa de slido a vapor sin
pasar por lquido. A -80C se congela la suspensin bacteriana,
esto se lleva al liofilizador que mantiene la temperatura baja y lo
deseca (hace el vaco). Los microorganismos pueden mantenerse
viables durante 5-10-20 aos, dependiendo del microorganismo.

TEMA 3. ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LA CLULA PROCARIOTA

MORFOLOGA DE LAS BACTERIAS

Cada especie tiene una forma distinta, excepto bacterias
pleomrficas (no tienen forma).
Su forma puede variar en
condiciones adversas o desfavorables del cultivo (existen cocobacilos
que son redondos y alargados).
La morfologa de todas las bacterias suele atender a unas
caractersticas similares: morfologa definida. Existen dos tipos
principales:
-

Cocos: forma redondeada.

Bacilos: cualquier forma que no sea redonda (alargada).

Coccus y bacilus son las formas ms caractersticas que presentan las

bacterias. Segn las condiciones del ambiente la morfologa de las
bacterias puede variar.
-

Spirochete: bacterias finas y muy largas.

Comas
Espiroquetas
Formas filamentosas: menos frecuentes
apndices.

con

extensiones

MICROBIOLOGA
A su vez, todas estas formas pueden agruparse entre s creando
estructuras ms complejas:
ASOCIACIONES DE COCOS
-

Diplococos
Estreptococos
Ttradas
Sarcina (forma de cubo).
Estafilococos (crean agrupaciones sin ningn orden, sin patrn de
divisin).

ASOCIACIONES DE BACILOS
Debido a su forma cuando se dividen lo hacen de forma ecuatorial
ms simple: individuales, parejas, cadenas.

TAMAO DE LA BACTERIA
El tamao es microscpico pero podemos encontrar dentro de esto
diferentes tamaos. La mayor parte de las bacterias las podemos
clasificar entre 0.5-2 m. Existen ms pequeos (mycoplasmas) y
ms grandes.
Los virus son muy simples, no tienen estructura celular por lo que son
mucho ms pequeos que las bacterias, por eso muchos virus
infectan bacterias.
El tamao de la mitocondria suele ser el tamao de una bacteria.
Estructuras que podemos encontrar en una bacteria:
-

Cuerpos de inclusin: no son orgnulos, son esferas de

agrupaciones.
Pared celular: estructura rgida responsable de la morfologa de la
clula.
Membrana plasmtica
Cpsula: solo la presentan algunas bacterias.

MICROBIOLOGA
-

Estructura de filamentos y alargadas: pueden presentarlas o no.

Estructuras alargadas: pelo, fimbrias, flagelos.
Peso seco: masa de la clula cuando le hemos quitado el agua.

El ARN es lo que ms puede variar. Depende del ciclo vital de las

bacterias y su capacidad de reproduccin.

PARED CELULAR
Pueden ser bacterias con pared celular gram + o gram -.
Las arqueas tambin son clulas procariotas pero no son bacterias
por lo que tienen pared celular diferente a gram + y gram -. No tienen
un modelo unificado, tienen 5 o 6 modelos de pared celular.

Gram +: estructura homognea y bastante gruesa. Pared celular: 400

A y membrana plasmtica: 80 A.
Gram -: Tienen la pared celular ms fina y ms compleja porque tiene
ms capas. Tienen una capa externa (entre la membrana externa y la
membrana interna hay un espacio que se llama periplasto). Tienen
cpsula de murena muy fina llamada periplasma.
-

A parte de la murna, tambin son importantes los cidos

teicoicos, lipoteicoicos algunas protenas.

MURENA
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MICROBIOLOGA
El mayor componente de la pared celular es el pptido glucano, forma
un entramado que define la morfologa de la pared celular, un bacilo
tiene forma de cilindro porque lo define la murena (pptido glucano).
El pptido glucano est formado por una parte polisacardica que son
cadenas muy largas formadas por la repeticin de dos azcares que
son la N-acetyglucosamine (NAG) y el N-acetilmurmico cido (NAM)
unido por enlaces -1,4. Estos dos azcares se alternan formando
cadenas largas; y por una parte polipeptdica que est formada por 4
aminocidos (tetrapptidica). El cuarto aminocido tiene el grupo
carboxilo libre y el tercero tiene en la cadena lateral un grupo amino
extra. Las mltiples cadenas polisacardicas se enlazan entre s por
enlaces covalentes.
Un puente peptdico une el cuarto aminocido de un tetrapptido de
una cadena con el tercer aminocido de un tetrapptido de otra
cadena.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

La murena envuelve toda la clula. El enlace entre cadenas distintas
se realiza por un puente peptdico formado por unos 4 o 5
aminocidos, que unen el cuarto aminocido de un tetrapptido de
una cadena, con el tercer aminocido de otra cadena. Estos enlaces
no se formas entre todos los tetrapptidos.
o

cidos teicoicos: son polmeros cidos (tienen carga

negativa) de polialcoholes. Son derivados de dos alcoholes
(ribitol (5 tomos de C) y glicerol (3 tomos), polialcoholes
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MICROBIOLOGA
derivados de azcar). El enlace es fosfodister y se forma
entre un cido y un alcohol. Los puentes diester se forma
porque los fosfatos unen los hidroxilos de una con la otra. Son
molculas antignicas (antgenos ms importante) y especfica
de especies. Se diferencian en que el resto de hidroxilos
pueden estar unidos a azcares, etc.
o

cidos lipoteicoicos: igual que los teicoicos pero unidos a un

lpido. Tienen carga negativa porque el fosfato tiene carga
negativa, son polmeros cidos y suelen estar combinados con
cationes. La funcin de los ac. lipoteicoicos es que actan
regulando o controlando la biosntesis de la mureina.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Pared mucho ms fina pero ms compleja, formado por menos capas de

polisacridos.
La estructura de murena de gram negativas es muy parecida a la de
gram positivas. La diferencia ms notable es que el tercer aminocido en
gram positivos suele ser la L-lisina mientras que en gram negativos es un
aminocido (mesodiaminopimelico) pero que es muy parecido a la lisina.
Este aminocido tiene un grupo amino. La diferencia ms importante es
como se unen las cadenas entre s. Las gram negativas la unin entre el
cuarto aminocido de un tetrapptido de una cadena y el tercero de otra
cadena distinta es directa, no mediante un enlace peptdico. La funcin
de la murena en gram negativas y gram positivas es la misma a pesar
de estas diferencias.

Por fuera de la murena existe una estructura que es la membrana

externa que es una estructura tpica de una bacteria gram negativa. Est
formada por una bicapa lipdica. Unos componentes que le dan una
estructura
especial
son:
protenas
(porinas),
lipoprotenas
y
lipopolisacridos (LPS). Estn situadas entre la murena y la membrana
externa por lo que son las que unen estos dos componentes. La parte
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MICROBIOLOGA
proteica se una a la murena y la lipdica se une a la membrana externa.
Las protenas mas importantes son las porinas. Estn en grupos de 3 y
hacen poros en la bicapa lipdica, permitir que haya agujeros de manera
que a travs de estos poros pueden pasar molculas de pequeo tamao
muy hidroflicas. Este tipo de transporte es transporte pasivo y tienen
carcter especfico o semiespecfico.
Se pueden distinguir tres partes: la parte lipdica y la otra polisacardica.
La polisacardica se divide en dos, la parte externa es la parte del
antgeno y la parte ms interna.
ENDOTOXINA, molcula toxica para nuestro organismo, responsable que
nos suba la fiebre y el responsable de desencadenar una respuesta
inflamatoria. Cuanto mayor es la secrecin de endotoxina es cuando la
bacteria muere.
A pate de las funciones concretas de cada componente, la presencia de
la membrana externa le proporciona unas caractersticas a las gram
negativas que las positivas no tienen. Toda la superficie de la bacteria
est formada por el antgeno A, de manera que la superficie de la
bacteria que interacciona con el medio externo, es azcar (hidrfilo), y
hace la membrana externa sea impermeable a sustancias hidrfobas, lo
que le confiere resistencia.

FUNCIN DE LA PARED CELULAR

Responsable la murena.
La murena es una estructura rgida o semirgida que le confiere
proteccin a la bacteria, sobre todo de la lisis en medios hipotnicos y
funcin morfolgica, la bacteria tiene la forma que tiene la murena.
La murena se puede destruir de dos maneras:
- Enzimticamente: lisozima rompe las cadenas
- Antibiticos (penicilinas) inhiben la sntesis de murena.

BIOSNTESIS DE LA MURENA

La mureina es como una super molcula que rodea la clula por

encima de la membrana plasmtica, pero su sntesis comienza en el
citoplasma se forman cadenas polisacardicas unidas a aminocidos, en
el interior de la clula de manera que tiene que salir fuera de la clula
atravesando la bicapalipdica, para ello se une un lpido de la membrana,
la ltima etapa la formacin del enlace covalente con a murena ya
formada, este enlace se llama transpeptidacin.
Cuando una bacteria est creciendo y posteriormente se divide con lo
cual en este proceso de crecimiento hay biosntesis de murena porque
tiene que crecer.
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MICROBIOLOGA
Hay unas bacterias que degradan la murena por sitios especficos:
autolisinas. Por estos sitios donde se degrada la murena se van
incorporando cadenas nuevas que hace que aumenten de tamao.
La pared celular bacteriana en concreto la murena es una diana ideal
para la actuacin de quimioterpicos antibacterianos. Se utilizan para
curar las infecciones. Se pueden administrar por va interna porque son
txicos para las bacterias pero no para nosotros. (Toxicidad selectiva).
Dependen de como acten. Ese sitio de actuacin es la diana. Si en una
bacteria hay dianas especficas para quimioterpicos y no estn en
nuestras clulas son ideales porque les afecta a ellas, por eso la murena
es una diana ideal.
B-lactmicos inhiben la ltima etapa de la biosntesis de la murena
(transpeptidacin).
Para que la penicilina tenga efecto, la bacteria tenga que estar en
crecimiento. Las autolisinas degradan la murena y deja de proteger a la
bacteria.

CPSULA BACTERIANA

Son unas estructuras que tienen algunas bacterias, no todas, y que se

localizan por fuera de la pared celular, estn formadas por materiales
que secretan las clulas al exterior y que se acumulan formando la
capsula, segn su grado de compactacin o definicin:
-

Cuando la cpsula no est bien definida se llama mucosa

Est formado por polmeros de azcares aunque tambin pueden tener

sustancias polipeptidicas.
Homopolisacardicas: repeticin o polimerizacin de un solo tipo de azcar
y Heteropolisacardicas: composicin heterognea, estn formado por
distintos azcares que son los que forman el polmero.
FUNCIONES:
-

Proteccin: protege de la desecacin, de la infeccin por fagos (virus

bacteriano),
Acta como factor de adhesin a las mucosas o a las clulas del
hospedador, cuando la bacteria infecta tiene que poder adherirse a
una superficie primeramente antes de realizar la infeccin. Las
bacterias tienen mecanismos para adherirse, esto hace que la
capsula sea un factor de virulencia.
Factor de virulencia importante porque es un factor de adhesin y
porque protege.
Una bacteria no necesita la capsula para poder vivir.

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MICROBIOLOGA

ESTRUCTURAS FILAMENTOSAS

Fimbrias: estructuras filamentosas cortas y numerosas. Naturaleza

proteica, su funcin es ser un factor de adhesin y por lo tanto se
considera un factor de virulencia, el gonococo produce la gonorrea,
las cepas del gonococo que producen las fimbrias son patgenas y se
adhieren a la superficie del tero
Pelos: estructuras filamentosas ms gruesos y ms largos que las
fimbrias y menos numerosos. No son responsables de la movilidad de
las bacterias. El pelo sexual es importante porque permite un proceso
de intercambio de informacin que se llama conjugacin bacteriana
(proceso mediante el cual dos bacterias distintas contactan
fsicamente y se hace una unin del citoplasma e intercambian
informacin gentica).
Flagelos: s que son la estructura responsable del movimiento de la
bacteria. Las que no tienen flagelos son inmviles pero hay
excepciones como las espiroquetas (enrolladas en espiral). La
disposicin de los flagelos tiene valor taxonmico, cada bacteria tiene
una distribucin de flagelos que es caracterstica. Distribucin atrica:
sin flagelos, monotrica: un solo flagelo, politrica: ms de un flagelo.
Filamentos muy finos.

ESTRUCTURA DEL FLAGELO

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MICROBIOLOGA

El flagelo es ms largo que la bacteria. Est anclado a la superficie de

la membrana.
Flagelina: (bolitas) subunidades de protena que forman el principio
del flagelo. Es un antgeno.
Cuerpo basal: sirve para anclar el flagelo a la superficie de la
bacteria.
Gancho: estructura intermedia que sirve de anexo entre el flagelo y el
cuerpo basal.
En la zona central existen anillos (L, P, M y S). Los anillos M y S se
encuentran a nivel de la membrana y estn unidos a protenas que
constituyen el motor del flagelo.
La parte interna del flagelo est en contacto con el citoplasma. El
flagelo est anclado directamente a la clula (en la murena). La
bacteria se desplaza porque el motor del flagelo gira como una hlice,
por eso es importante que exista una unin fsica fuerte). El motor
consume energa (bombeo de protones, diferencia de potencial de
membrana). Acta como un motor a propulsin.
El movimiento de la bacteria es anrquico y rpido. Se mueve mucho
pero no va a ningn sitio y la velocidad absoluta es baja mientras que
la velocidad relativa es muy alta.
Las
bacterias
pueden
responder
a
estmulos
externos
orientativamente
(taxias:
quimiotaxia,
fototaxia,
termotaxia,
aerotaxia) (respuestas orientadas).
Un factor positivo que hace que la bacteria se desplace son los
nutrientes mientras que un factor negativo pueden ser los
desinfectantes.
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MICROBIOLOGA
Las bacterias que tienen varios flagelos tienen que estar coordinados.

MEMBRANA PLASMTICA

Presente en todas las bacterias. Estructura vital para cualquier clula.

Tiene una funcin ms importante que la pared celular.
La funcin ms importante es la permeabilidad selectiva. La
membrana plasmtica es una estructura que delimita el interior del
exterior y permite que hayan concentraciones de soluto diferentes.
Composicin: modelo del mosaico fluido. Bicapa lipdica y protenas.
Hay ms fosfolpidos que protenas.
Existe una gran variedad de protenas (transmembrana, integrales,
perifricas).
Una de las caractersticas ms importantes es que no tienen esteroles
(tipo de lpidos especiales tpicos de las membranas eucariotas).
Tienen molculas parecidas: HOPANOIDES y presentan una funcin
parecida: Controlar la fluidez, se intercalan entre medio de los
fosfolpidos. Restan fluidez.
Una de las protenas que encontramos en la membrana plasmtica es
la ATP-asa. Esta cambia energa de una forma a otra (protena
transmembrana intercambiadora de E). Transforma energa en ATP o
al contrario, creando un gradiente electroqumico.
Otros elementos son los componentes de la cadena de transporte
elctrico. Los componentes de la respiracin estn en la membrana
en las bacterias.
La membrana plasmtica es muy impermeable por lo que necesita
transportadores (permeasas).
Cuando la temperatura cambia, la fluidez tambin.
Modifica la composicin de fosfolpidos con la temperatura para que
la fluidez siempre sea adecuada.
Micoplasma: nicas bacterias que no tienen pared celular y por tanto
tienen membrana plasmtica ms resistentes y por tanto tienen
esteroles.
Las archaeas tienen distinta pared celular y por tanto tambin distinta
membrana, no tienen fosfolpidos sino isoprenoides (pueden estar
formando una monocapa o tambin una bicapa). La funcin es la
misma.
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MICROBIOLOGA

RIBOSOMA
Estructura numerosa. Procariota (70S) y eucariota (80S). S
coeficiente de sedimentacin.
Si las subunidades se estudian por separado (30S y 50S).
La composicin es RNA ribosomal y protenas.
Funcin: sntesis de protenas (traduccin). Traduce secuencia de
nucletidos a secuencia de aminocidos. El mensajero suele ser una
molcula muy fina y larga. El conjunto de mensajeros que estn
siendo traducidos a la vez se llama poliribosoma.
Las protenas que son extracelulares se sintetizan en ribosomas
pegados a la membrana.

INCLUSIONES CITOPLASMTICAS
Son inclusiones que no son membranosas presentes en el citoplasma

Sustancias de reserva: inclusiones citoplasmticas son acmulos de

nutrientes que la clula los almacena cuando tiene un exceso, se
acumulan de forma osmticamente inerte, en forma de polmeros
insolubles de gran tamao, este acumulo es reversible cuando las
condiciones cambian en las que la bacteria no tiene suficientes
nutrientes usa las sustancias de reserva, ejemplos de sustancias de
reserva:
Glucgeno: es un polmero de glucosa que forma unos grnulos muy
numerosos pero de pequeo tamao, para que sirven los grnulos de
glucgeno, sirven pcomo fuente de carbono y de energa cuando una
bacteria est creciendo cada cierto tiempo se duplica, en este
intervalo de tiempo la bacteria ha tenido que sintetizar todos los
constituyentes que forman parte de una bacteria para duplicarse, la
bacteria para hacer esto necesita nutrientes para biosntesis.
Grnulos de poli-beta-hidroxibutirato: tiene cuatro carbonos en el
ltimo tiene un grupo carboxi, el grupo carboxi de una molecula se
une al grupo hidroxi de otra por un enlace ester formando polmeros.
Cuando la bacteria tiene un exceso de acetil-CoA.

Cada bacteria acumula un tipo concreto de sustancias de reserva.

-

Grupos de polifosfato: estn formados por polmeros de fosfatos. Se

acumulan cuando la bacteria tiene un exceso de ATP. Por lo tanto, la
sntesis
Las bacterias que acumulan azufre elemental son unas bacterias
especiales que necesitan azufre para su metabolismo. Algunas que
utilizan el S para ceder electrones en la fotosntesis.
Bacterias que tienen vacuolas

ESPORAS BACTERIANAS

Se generan en la bacteria. Son estructuras de resistencia. Existen los

tipos: Bacillus y Clostridium. Tambin existe otra clasificacin:
18

MICROBIOLOGA
o
o

No-Deformante: la espora es ms
pequea que la bacteria.
Deformante: la espora es ms
grande y deforma la membrana.

La espora por s sola no se multiplica,

necesita
un
medio
adecuado.
Al
multiplicarse en condiciones adecuadas,
crea un bacilo y este se desarrollar si hay nutrientes.
Son estructuras de resistencia porque soportan elevadas T, radiacin,
desecacin

MORFOLOGA DE LA ESPORA
Tiene varias capas:
Exosporio: es una cutcula de protenas con puentes S-S.
Cubierta esporal: Es una cutcula de protenas con puentes S-S. es
parecido a la queratina.
Crtex: cubierta gruesa de murena modificada.

Por debajo del exosporio de la cubierta espora del crtex se encuentra el

ncleo esporal.
-

Ncleo esporal: tiene murena por fuera, despus una membrana y

luego plasma, donde se encuentra el material gentico.

Caractersticas: bajo contenido en agua, todo

muy concentrado, el cido dipicolnico es muy
abundante y se encuentra en forma de sal en
concentraciones muy elevadas, lo que le confiere
termoresistencia y se intercala con el DNA
protegindolo. Otra caracterstica importante de la
espora es que tienen unas protenas en el
citoplasma
de
pequeo
tamao
que
son
caractersticas de las esporas y que se combinan con el DNA, lo protege de
las radiaciones y cuando la espora germina pueden servirle de nutrientes
(las protenas).

ESPORULACIN Y ESPOROGNESIS

Esporulacin: formacin de la espora. Hay 200 genes implicados.

Esporognsis: germinacin de la espora, que nicamente se da
cuando hay condiciones favorables.

Se origina la espora despus de muchas etapas. Las esporas no consumen

energa puesto que no tienen funciones que realizar, hasta que germinan en
condiciones favorables, que comienza la forma vegetativa.

19

MICROBIOLOGA

ASPECTOS RELACIONADOS CON LA ESPORULACIN

Algunas bacterias que esporulan (bacillus) paralelamente sintetizan
antibiticos polipeptdicos como la bactiracina, poimixina, etc. En otras
especies de bacillus (b.thuringiensis, popillias) adems de formarse las
esporas forman el cuerpo paraesporales y son muy variables. Los cuerpos
paraesporales estn formados por protenas muy txicas para algunos
insectos.

Tema 4 Nutricin y metabolismo microbiano

Metabolismo:
-

Anabolismo (biosntesis)
Catabolismo

Los nutrientes son molculas que estn en el medio ambiente y que la

bacteria coge y utiliza en su metabolismo. Algunas molculas las utilizar
para biosntesis o degradacin. Una bacteria tiene que tener todos los
nutrientes que necesita en el cultivo. La bacteria necesita energa (ATP)
para realizar el anabolismo. Esto obliga a la clula a hacer otras reacciones
de degradacin (catabolismo) cuyo objetivo es conseguir energa, que se
emplea en rutas anablicas.

REQUERIMIENTO

Hay bacterias que requieren pocos nutrientes que se llaman bacterias poco
exigentes y otras que requieren muchos nutrientes y se llaman bacterias
muy exigentes. Esto depende de la propia composicin qumica del
microorganismo y la capacidad de biosntesis del microorganismo. Lo que
marca la diferencia es el segundo factor.
Las bacterias que tienen una elevada capacidad de biosntesis son poco
exigentes nutricionalmente porque a partir de nutrientes simples se
sintetizan la energa, y las bacterias que tienen una mnima capacidad de
biosntesis son muy exigentes.
El agua es la molcula ms importante de la bacteria, es el medio donde
ocurren las reacciones metablicas. Si hay baja concentracin, el plasma se
compacta y la clula.
20

MICROBIOLOGA
El C tambin es muy importante porque constituye la estructura de las
bacterias, pero tambin es de utilidad en su metabolismo.
Fuentes de C:
-

Cinorgnico: CO2
Corgnico: el resto de microorganismos utilizan como fuente de
energa este.

El nitrgeno lo podemos encontrar:

-

Ninorgnico: NO3-, NO2-, NH4+

N orgnico: N2, aminocidos, protenas

El S lo encontramos:
-

Inorgnico: SO42- y S2- (menos frecuente)

Orgnico: aminocidos (metionina y cistena)

El P lo encontramos principalmente como PO 43Todos los nutrientes han de estar en forma de SAL.
FACTOR DE CRECIMIENTO
-

Molcula que necesita la bacteria para crecer y que no puede

sintetizar. Vitaminas.
Prottrofo: solo necesita 1 fuente de C. Capacidad de sntesis
Auxtrofo: necesita ms de una fuente de C. No puede sintetizar
algn factor necesario.

CLASIFICACIN NUTRICIONAL MICROORGS.

Fuente de E:
o Luz: fottrofos
o Qumicos: quimitrofos, que a su vez pueden ser littrofos
(oxidacin de sustancias inorgnicas) o organtrofos (oxidacin
de sustancias orgnicas.
Fuente de C (anabolismo)
o CO2: auttrofos
o Molculas orgnicas: hetertrofos.

A parte de los nutrientes hacen falta otros requerimientos fisicoqumicos

para la vida (O2, T, pH, presin osmtica, luz y CO2).

COMPOSICIN

Medios definidos: sabes su composicin cuantitativa y cualitativa.

Medios complejos: no se conoce exactamente la composicin. Llevan
muchos nutrientes y molculas.

FUNCIONALIDAD

21

MICROBIOLOGA
-

Medio selectivo: permite el crecimiento de unos organismos y de

otros no. Su composicin lleva algn nutriente que inhibe el
crecimiento de algn microorganismo. EMB: inhibe el crecimiento de
Gram +.
Medio diferencial: El agar sangre es el medio de cultivo que se
enriquece de la sangre. Me permite diferenciar bacterias hemolticas
de las no hemolticas. Algunas bacterias secretan sustancias
hemolticas (lisis de glbulos rojos). Diferenciamos las caractersticas
de estos microorganismos.
Medio de enriquecimiento: medio en el que la bacteria minoritaria
crece mucho ms rpidamente que las otras. La bacteria que era
minoritaria, con el tiempo, pasa a ser mayoritaria. Para poder
emplearlo hay que conocer las caractersticas biolgicas del
microorganismo que nos interesa enriquecer.

Hay microorganismos tan exigentes que ni siquiera pueden crecer en

medios complejos. Hay que enriquecer, para ello se aade sangre (agar
sangre). El agar chocolate es una variante que tiene sangre al 5%.

Tema 5 Metabolismo
Catabolismo: Mecanismos por los cuales se obtiene ATP y otras formas de
energa.
-

Quimiohetertrofos: Obtienen E a partir de reacciones redox. Los

mecanismos de sntesis de obtencin de ATP son:
o Fosforilacin oxidativa: produccin de ATP asociada a una
cadena respiratoria o de transporte de e-.
o Fosforilacin oxidativa a nivel de sustrato.
Obtienen energa oxidando molculas orgnicas y pueden hacerlo

por:
o
o

RESPIRACIN: proceso aerobio

FERMENTACIN: Es un proceso anaerobio (no necesita O 2), pero
puede darse en presencia de oxgeno. No hay cadena
respiratoria, por lo que no se obtiene ATP por fosforilacin
oxidativa. El balance de xido-reduccin del proceso es neto
(no se ganan ni se pierden e-). Pero si hay intercambio de ellos.
Etapas de fermentacin:
1: Oxidacin parcial de la fuente de E (glucosa). Se
obtienen dos molculas de pirvico. Se han obtenido 2
molculas de ATP por fosforilacin de sustrato. Se reduce
el cofactor NAD+ a NADH. Solo es en esta etapa donde
se obtiene energa de la fermentacin
2: El pirvico se transforma en los productos finales de
fermentacin. Hay una reduccin del pirvico. El cofactor

22

MICROBIOLOGA
NADH se oxida a NAD+, y le cede e-. no se obtiene
energa. Balance redox es neutro.
Anabolismo, son rutas de biosntesis que gastan energa
Quimiohetertrofos
Los quimioheterotrofos obtienen la energa:
-

C C orgnico
Energa reacciones de oxidacin

Normalmente son organoheterotrofos. Una sustancia que ya est ms

oxidada no se puede utilizar como una fuente de energa.
Por el transporte activo de nutrientes, el movimiento y la produccin de ATP,
se consume energa.
La produccin de ATP, a partir de ADP + P se fosforila a ATP. Se obtiene por
fosforilacin de ADP.
Tienen dos mecanismos de produccin de ATP: la fosforilacin oxidativa, que
se obtiene de ATP asociada a una cadena respiratoria o cadena de
transporte electrnico y la fosforilacin a nivel de sustrato y el ADP, y se
forma como producto del sustrato cambiante y un fosfato que reacciona con
ADP y forma ATP.
Pueden tener dos tipos de rutas:
-

Respiracin:
o Aerobia
o Anaerobia
Fermentacin

RESPIRACIN AEROBIA
Por oxidacin de la glucosa obtienen energa. En el proceso de la glicolisis se
oxida a 2 piruvatos. La glucosa se oxida parcialmente y los electrones van a
parar a un cofactor el NAD+ que pasa a la forma reducida NADH.
Obtendremos tambin CO2. Ciclo oxidativo, en la primera y segunda etapa
se produce una carboxilacin.
En la respiracin la fuente e c se oxida al mximo, en este caso se oxidan
los 6 carnosos de la glucosa, se oxida completamente a CO 2. Con las dos
etapas de gliclisis y el ciclo de Krebs.
Los cofactores en la clula estn en cantidades bajas, tiene que haber un
mecanismo para que el cofactor reducido vuelva a regenerarse la forma
oxidada.
El cofactor se regenera porque deja los electrones en la cadena de
transporte electrnico (cadena respiratoria).
23

MICROBIOLOGA
En las bacterias la cadena respiratoria est en la membrana plasmtica.
Reacciones de oxi-reduccin, siempre en el sentido potencialmente
favorable. En la cadena respiratoria, en NADH le da los electrones al
transportador 1, que se reduce y le pasa al siguiente transportador y as
repetidamente.
Los transportadores cogen electrones pero a la vez sueltan H+. Es decir, hay
un bombeo de H+ hacia fuera de la clula, una carga positiva y se forma un
potencial de membrana.
El NADH y el resultante finalmente da el O 2.
Este potencial de membrana que se genera se puede utilizar directamente
para el transporte activo o en el caso del flagelo se puede utilizar para la
generacin de movimiento.
El ATP se sintetiza a partir de la ATPasa, que es una protena
transmembrana. Esta protena deja entrar H+ del potencial de membrana
dentro y los utiliza para fosforilar el ADP + Pi y formar ATP.
Los que no respiran no tienen esto pero si que necesitan el potencial de
membrana, por tanto han de producirlo de alguna forma. La ATPasa tambin
puede destruir ATP, hidrolizarlo y as expulsar H+ y generar un potencial de
membrana.
La glucosa se transforma completamente a 6CO 2.
El ATP se obtiene, gran parte, por la fosforilacin oxidativa (por la cadena
respiratoria) y una pequea parte para la gliclisis.

RESPIRACIN ANAEROBIA
La glucosa se oxida completamente a CO 2, igual que en la aerobia. Se forma
ATP, y el resto por cadena respiratoria. El aceptor final de electrones no es
el oxgeno, unos utilizan sulfato, otros nitrato Cada microorganismo est
especializado o acostumbra a gastar unos tipos concretos. Siempre tienen
que ser molculas oxidadas para poder producirse.
El producto que se forma ser CO2 y otra molcula pero en este caso no ser
agua, oro producto depender de quien es el aceptor. El producto final
siempre es menor que en el oxgeno porque todas estas molculas tienen
menos afinidad por los electrones que el oxgeno.
Segn el potencial redox que tiene la molcula aceptadora de electrones la
cadena respiratoria ser ms o menos larga. Para eso se suele obtener
menos energa porque la cadena respiratoria es ms corta.
En la respiracin aerobia, en la cadena de transporte hemos de tener en
cuenta que todo lo que se produce son reacciones redox en las que siempre
24

MICROBIOLOGA
obtenemos H2O. Las veces que no se obtiene agua en reacciones
minoritarias se forma H2O2 y O-2 (productos de reduccin del oxgeno). Estas
molculas son muy reactivas y muy txicas. Esto es muy negativo para la
clula. Se forma en cantidades muy pequeas pero continuamente, y por
eso se tienen que eliminar ya que si se acumulan pueden matarlos. Tienen
dos encimas que se activan contra estos la catalasa y la superxido
dismutasa.
Los microorganismos que hacen la respiracin anaerobia viven en
ambientes con ausencia de oxgeno. Por eso cuando se cultivan en un medio
con oxigeno, los electrones van al oxgeno y forman agua, H 2O2 y O-2 y los
que no tienen catalasa y superxido dismutasa, se les acumulan estas
molculas y acaban murindose. Por tanto, para poder vivir requieren la
ausencia de oxgeno (bacterias anaerbicas estrictas).
Fermentacin
Caractersticas:
-

No requieren la presencia de oxgeno, es un proceso anaerbico.

En la fermentacin no hay cadena respiratoria. Toda la energa se
obtiene por la fosforilacin a nivel de sustrato.
Se obtiene menos energa.
El balance redox es neutro, ni gana ni pierde electrones. La molcula
que se oxida ni gana ni pierde electrones al final del proceso.

La fermentacin no requiere la presencia de oxgeno, por eso se dice que es

un proceso anaerobio. Pero eso no quiere decir que requiera la ausencia de
oxgeno. En la fermentacin no hay cadena de transporte electrnico,
puesto que eso es sinnimo de respiracin, no se obtiene ATP por
fosfoliracin oxidativa, hay fosfoliracin a nivel de sustrato. El balance redox
es neutro, no se ganan ni se pierden electrones.
La primera etapa de la fermentacin es la oxidacin parcial de la fuente de
energa (glucosa). Lo hacen por la va de la glucolisis ( o algunos
microorganismos por vas semejantes) se forman dos molculas de piruvato.
Esto es igual en la respiracin. Como es una oxidacin parcial, los electrones
van al cofactor y tambin se forma 2 atp que es la nica energa que se
obtiene en la fermentacin. Y el NAD+ NADH.
Se obtiene mucha menos energa que en la respiracin. El cofactor se tiene
que regenerar (NADH). Esto es la segunda etapa. El pirvico se transforma
en los productos finales de la fermentacin. Siempre en esta etapa hay una
etapa de reduccin, el cofactor cede los electrones al pirvico y se oxida.
ESTO ES UNA REDUCCIN.
El balance final es que ni se gana ni se pierden electrones pero si se gana
energa. (2 ATP).
Los productos finales son los que se acumulan.
25

MICROBIOLOGA
Ejemplos concretos de fermentacin:
-

FERMENTACIN HOMOLCTICA: se genera solo cido lctico que es el

producto final. NICO PRODUCTO. El lctico es igual que el pirvico,
solo hay una etapa, de pirvico a acido lctico
FERMENTACIN HETEROLCTICA: al final lo que se obtiene es acido
lctico + etanol + CO2 . ocurre por una vida distinta.
La fermentacin lctica es muy importante industrialmente.
FERMENTACIN ALCOHOLICA: el grupo carboxi del piruvato se pierde
para dar dos Co2 y formar acetaldehdo. Este se reduce
(NADHNAD+) para dar etanol. La producen las levaduras
(Saccharomyces Cerevisiao).
Hay que saber los productos que se pueden generar.

Littrofo: son auttrofos normalmente, utilizan como fuente de C el co2.

Necesitan mucho poder reductor (electrones en forma de cofactor) porque
lo van a consumir en la transformacin del co2 en materia orgnica.
Hay bacterias que pueden oxidar el H y formar agua.
Las reacciones redox se produce con sentido es termodinmicamente
favorable.

AUTTROFOS
(ANABOLISMO) Utilizan el co2 como fuente de carbono. Obtienen sus
molculas a partir del co2 (que no sirve como fuente de energa porque no
se puede oxidar). Pueden obtener la energa de la luz u obtener la energa
de reacciones qumicas. El proceso por el cual el co2 se incorpora a materia
orgnica es el ciclo de Calvin. Este proceso consume energa. Y consume
electrones (muchos) en forma de cofactores. Este proceso es justo lo
contrario de la respiracin.

26

MICROBIOLOGA
Los electrones que pierden las
primeras molculas van directamente
a la cadena de transporte de
electrones. Esta cadena se inicia en el
sitio donde indica el potencial redox de
las molculas que se oxidan. Y por lo
tanto se genera menos energa. Estos
microorganismos
necesitan
gran
cantidad de poder reductor que lo obtienen por un transporte inverso de
electrones.
Los
electrones
son
transportados
en
sentido
termodinmicamente desfavorable, de la que tiene ms afinidad a la de
menos afinidad. Estos microorganismos obtiene muy poca energa porque
su cadena es muy corta y de ese ATP que consiguen que es poco, gastan
mucho en el transporte inverso de electrones. Rendimiento energtico bajo,
pero en las condiciones que ellos viven no tienen competencia.

CRECIMIENTO MICROBIANO

Recuento de microorganismos con unos portas que se unan. Se coloca la

suspensin del microorganismo en el porta y vamos contando cuadraditos.
Se cuentan todos sean viables o no viables.
Se pueden dividir:
-

Escisin simple
Gemacin (levaduras)
Extensin de nifas

Levaduras dimrficas
-

Gemacin
Extensin nifas: Otro mtodo es el recuento de microorganismos
viables, a partir de una muestra o matraz, por cada microorganismo
viable de una muestra voy a obtener una colonia porque el
microorganismo crece. Antes de ello, es necesario realizar una
dilucin de 10 en 10 de la muestra original y despus sembraremos
en placa Petri. Si hay muchos microorganismos, habr muchas
colonias.

CULTIVO SINCRNICO

Todas las clulas estn en la misma fase del ciclo celular, cuando se divida
se dividirn todas a la vez. Lo que pasa es que la sincrona no es perfecta y
con el paso del tiempo, se va perdiendo. Para conseguir estos cultivos de
clulas en el mismo punto del ciclo celular, hay una serie de mtodos:
-

Qumicos: sustancias que inhiben el ciclo celular en un determinado

punto.
Fsicos
27

MICROBIOLOGA
Este cultivo es importante cuando se est estudiando algo relacionado con
el ciclo celular. Por ejemplo: enzimas que controlan el crecimiento del
tabique. La curva de crecimiento es ms o menos corta. A escala industrial
interesa un cultivo que no pare de crecer. Cultivo contnuo.
-

Quimiostato: aparato que sirve para hacer cultivos continuos. Hay un

nutriente que va a limitar el crecimiento. La concentracin de
nutriente limitante, va a determinar la concentracin de
microorganismos.
Microbiota: conjunto de microorganismos que forman parte del
cuerpo humano. Se dice que es el ltimo rgano descubierto. La
microbiota se acumula en el intestino, que crece a medida que se
elimina, es decir, es continuo. La Escherichia Coli crece
continuamente.

Cada microorganismo tiene su margen de temperatura que marca si crecen

o no.
-

TEMP. MX. DE CRECIMIENTO

TEMP. MN. DE CRECIMIENTO

A medida que la temperatura mnima sube, aumenta el crecimiento de la

bacteria. A medida que baja la temperatura, el metabolismo es ms lento y
adems llega un momento que la membrana plasmtica solidifica y pierde
fluidez. Pero tambin cuando aumentas demasiado la temperatura, las
enzimas y protenas pueden llegar a desnaturalizarse.
PREGUNTA EJEMPLO: Explica grficamente
temperatura en microorganismos.

la

variacin

de

Si yo cultivo un microorganismos a una T subtima, alcanzar la fase

exponencial de crecimiento de cultivo?
Temperatura ptima velocidad mx.
Temp. Subptima disminuye la velocidad.

PH
Otro factor importante de crecimiento es el pH del medio de cultivo.
Tenemos bacterias que pueden crecer en pH cidos y otros en pH bsicos,
pero cada microorganismo tiene su rango de pH. Muchos microorganismos
crecen bien a pH neutros. Tienen el ptimo a pH neutros; microorganismos
neutrfilos.
pH cidos: microorg. Acidfilos
pH bsicos: micoorg. Basfilos
El pH tiene importancia a nivel de ionizacin de nutrientes.
28

MICROBIOLOGA
Los cidos y bases muy fuertes tienen accin corrosiva, se utilizan como
desinfectantes. Las temperaturas bajas inhiben el crecimiento pero no mata
a los microorganismos, sin embargo a temperaturas elevadas aparte de
inhibir el crecimiento, matan al microorganismo.

PRESIN OSMTICA

La pared celular protege de la lisis. En cambio, la pared no protege de la

elevada concentracin del medio exterior, y el agua sale. El escaso nivel de
agua hace que las clulas pierdan viabilidad y se mueran. Por eso, la
presencia de solutos como sal, hace que se conserven los alimentos y no
sean atacados por microorganismos.
-

Halfilos (sal): microorganismos que crecen medios muy salinos, pero

pueden crecer tambin en medios normales. Tienen mecanismos para
adaptarse a alas elevadas concnetraciones salinas.
o Facultativos: se pueden adaptar a la concentracin cambiante.
Medios normales.
o Estrictos: requieren una cierta concentacin de sal
Osmfilo: lo mismo pero con azcar.

OXGENO

Aerobios estrictos: necesitan O2 para poder crecer.

o Microaerfilos: si no hay oxgeno no crecen, pero necesitan
concentraciones de oxgeno muy bajas.
Anaerobios estrictos: para poder crecer necesitan ausencia total de
oxgeno. En presencia de oxgeno mueren.
Anaerobios facultativos: pueden crecer tanto en ausencia como en
presencia de oxgeno.

METABOLISMO

ANAEROBIOS ESTRICTOS: respiracin anaerbica

AEROBIOS ESTRICTOS: respiracin aerbica.
FACULTATIVOS: se adaptan a las condiciones.
o Sin oxgeno: respiracin anaerobia (fermentacin)
o Con oxgeno: respiracin aerobia

Por qu los anerobios estrictos mueren en presencia de oxgeno?

Porque no tienen catalasa ni superoxidodismutasa para convertir el O 2. Para
los microorganismos que no tengan estas enzimas, el O 2 ser txico. Son
microorganismos que exclusivamente fermentan. No tiene cadena
respiratoria. Estos organismos reciben el nombre de anaerobios
aerotolerantes. Son fermentadores obligados, siempre fermentan.
MTODOS DE CONSERVACIN DE ORGANISMOS ANEROBIOS

29

MICROBIOLOGA
Aadir al ambiente sustancias reductoras que creen un ambiente reductor
con un potencial de reduccin bajo, creando las condiciones similares a la
ausencia de O2, porque este va oxidndose hasta agotarse. Estas sustancias
sirven para proteger a microorganismos temporalmente, porque cuando se
oxidan dejan de proteger.
La sequedad inhibe el crecimiento y mata a los seres vivos. Hay un grupo de
organismos que se llaman xenfilos, que pueden vivir con poca agua, pero
no con ausencia de ella. Una manera de conservar alimentos es la
sequedad.
Luz UV Bajas dosis: mutagnica, altas dosis: letal.

Tema 8 CONTROL DEL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS

El crecimiento de los microorganismos hay que controlarlo para que no se
produzca la transmisin de enfermedades o contaminaciones no deseadas
de microorganismos.
-

Esterilizacin: destruccin de la forma de vida microbiana. Es un

concepto absoluto (o esta estril o no lo est). No hay
microorganismos en una muestra esterilizada.
Desinfeccin: eliminacin de las formas vegetativas de los
microorganismos pero no necesariamente de las esporas (diferencia
con la esterilizacin).

Eso puede hacerse por agentes fsicos o qumicos.

-

AGENTES FSICOS
o Calor o temperatura elevada que segn la presencia o ausencia
de humedad puede ser:
Calor hmedo: ms eficaz y penetrante para destruir
microorganismos. Se debe al mecanismo por el cual los
microorganismos se destruyen. Los microorganismos
coagulan las biomolculas o desnaturalizan protenas.
Para destruir esporas: 20 min. a 120C.
Calor seco: las clulas se secan y pierden agua. Se
oxidan los componentes celulares. Se queman. Para
destruir esporas: 2 h. a 180C.

Parmetros que definen el grado de resistencia en los microorganismos a

temperaturas elevadas:

30

MICROBIOLOGA
-

TMT: tiempo de muerte trmica. Periodo mnimo que hace falta para
destruir completamente a una poblacin microbiana en una
temperatura y condiciones concretas.
TRD: tiempo de reduccin decimal. Tiempo necesario para reducir la
poblacin microbiana a un 10% a una temperatura y condiciones
determinadas.

La cintica de muerte es exponencial, no lineal. La poblacin disminuye

exponencialmente con el tiempo.

Factores que influyen en la destruccin o muerte de microorganismos por

accin del calor:
-

Temperatura: Si la temperatura aumenta, los microorganismos se

destruyen ms rpidamente.
N de microorganismos: A ms nmero de microorganismos, mayor
tiempo se necesitar para destruirlos.
La especie del microorganismo: Unos resisten ms que otros.
Estado fisiolgico del microorganismo: Las bacterias que estn en
fase exponencial de crecimiento son ms sensibles que los que estn
en fase estacionaria.
Esporas: termo resistencia. Muy resistentes al calor. Temperaturas
mayores a 100 C.
Composicin del medio. Influye la viscosidad y la presencia de
materia orgnica ya que protegen al microorganismo del calor y es
ms complicado destruirlos.
Ph: en ph neutro los microorganismos son ms resistentes al calor. A
un ph muy cido se mueren.

MTODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN MEDIANTE CALOR:

-

CALOR SECO:
o Horno Pasteur: 3 horas a 180C. Por debajo de 140C. No se
pueden meter lquidos. Material de vidrio sin lquidos o material
metlico.
o Incineracin o flameado: quemar la muestra a esterilizar.

CALOR HMEDO
o Ebullicin: hervir una muestra. Se desinfecta, no se esteriliza.
o Tindalizacin: esterilizacin fraccionada, discontinua.
1: 100 C 30 min.
Temperatura ambiente varias horas.
2: 100 C 30 min.
Temperatura ambiente varias horas.
31

MICROBIOLOGA
3: 100 C 30 min.
En este proceso las esporas no mueren puesto que es poca
temperatura, pero cuando estn a temperatura ambiente, las
esporas se convierten en formas vegetativas, que en el
siguiente periodo se destruirn.
o

Vapor a presin: (autoclave):

1 atm 100C
2 atm 121C
2.5 atm 126C
3 atm 134C
Solo puede haber vapor de agua. No puede esterilizar nada que
no sea miscible en agua. Solo acuoso.

Calor fluente: Cuando no se puede con autoclave. Consiste en

inyectar vapor a sobrepresin.

Pasteurizacin: Calentar el vino a 80C evita que el vino se

estropee. Consiste en aplicar calor moderado durante un
tiempo moderado (15 min). Mata los microorganismos pero
mantiene las caractersticas de los productos. Destruye
microorganismos en forma vegetativa, no esporas. Variantes de
este proceso puede ser el calentamiento suave que es capaz
de destruir patgenos de la leche (62.8C durante 30 min)
(Coxiella burnetti). Disminuye la carga microbiana de la leche.
Otro variante es la rpida (72C durante 15 segundos) La leche
se altera muy poco pero elimina todos los patgenos e la leche.
En resumen es un calentamiento moderado que elimina
patgenos pero no esteriliza, no elimina esporas.

Uperizacin: Consiste en tratar el producto a una temperatura

muy elevada un tiempo muy corto (segundos). Esteriliza
porque elimina esporas y no altera las caractersticas del
producto ya que es un periodo muy corto.

MTODOS DE CONTROL MICROBIANO A BAJAS TEMPERATURAS

Inhibe el crecimiento excepto el de los micrfilos.
La congelacin o refrigeracin no sirve para eliminar microorganismos. No
desinfecta ni esteriliza. Es un mtodo de conservacin.
Agentes fsicos:
-

Desecacin: Prdida de agua, inhibicin del crecimiento microbiano.

Con este mtodo se inhibe el crecimiento y proliferacin de todos los
microorganismos. Se puede guardar durante mucho tiempo.
Presin osmtica: El agua sale de la clula. Conservacin de
alimentos.
32

MICROBIOLOGA
-

Radiaciones: Longitudes de onda variadas.

A 260 nm es donde existe mayor capacidad para destruir
microorganismos. La UV tiene un efecto letal para microorganismos
porque a esta longitud de onda el DNA y los cidos nucleicos
absorben luz UV, en concreto las bases nitrogenadas. Esto quiere
decir que al absorber UV, las bases nitrogenadas se hacen ms
enegticas y se alteran. Se forman dmeros timina.
SOS Reparacin del DNA. Se producen mutaciones. La UV destruye
clulas porque producen mutaciones a dosis elevadas.
La UV s que es un mtodo para esterilizar pero es poco penetrante
en vidrio o plstico, lo que limita el uso de esta radiacin. No se
puede tratar en materiales con cierto grosor.
Campanas de flujo laminar
Rayos X: muy energticos. Difciles de manipular. Letales para
cualquier clula.
Ondas snicas: Sonidos con frecuencia superior a la que podemos or.
Cuando una atraviesa un lquido con microorganismos puede destruir
parte de la poblacin por cavitacin. La destruccin no es total. No se
emplean como mtodo de desinfeccin o esterilizacin. Pero se utiliza
para extractos celulares.

MTODOS MECNICOS
-

Filtracin: Mtodo de esterilizacin que se utiliza cuando tenemos en

disolucin alguna molcula con actividad biolgica. (Solucin de
vitaminas).
Sedimentacin: se basa en que la densidad de los microorganismos
es superior a la densidad del agua, para ello hace falta que el lquido
est en reposo. Este proceso es bastante lento pero tiene importancia
en la naturaleza.

MTODOS DE ESTERILIZACIN POR AGENTES QUMICOS

Dentro de los agentes qumicos estn la desinfeccin y la quimioterapia.
-

Desinfectante: Sustancia qumica que desinfecta. Son bastante

txicos, no distinguen entre microorganismos y clulas nuestras. Son
txicos para todo tipo de clulas en general, por eso se suele aplicar
en material inerte e inanimado, excepto algn desinfectante ms
suave que se puede aplicar en la piel (antispticos).
Los antispticos son todos desinfectantes, pero no todos los
desinfectantes son antispticos. Tambin son muy txicos.
Los agentes quimioterpicos no son txicos. Se utilizan para curar
infecciones. Tiene que ser muy txico para el microorganismo y nada
txico para nuestras clulas (toxicidad selectiva).

Palabras que acaban en cida: que mata. Esttico: inhibir crecimiento.

-

Microbicida: mata microorganismos

o Bactericida, fungicida
33

MICROBIOLOGA
-

Microbioestticas

Quimiesterilizante: sustancias qumicas muy concretas que son muy txicas

para todos los microorganismos incluso esporas. Se utilizan en ocasiones
como esterilizantes.
Desinfectantes: Eficaces frente a un amplia variedad de agentes infecciosos.
Actuacin a baja concentracin y presencia de materia orgnica. No txico
para personas ni corrosivo para materiales. Penetrante (baja tensin
superficial, soluble en agua y lpidos). No generan resistencias en los
microorganismos. Activos a temperatura corporal (antispticos).

FACTORES QUE INFLUYEN EN LA ACCIN ANTIMICROBIANA DE LOS

DESINFECTANTES
Relacionados con la sustancia qumica o desinfectante:
-

Caractersticas fsico-qumicas del desinfectante.

Naturaleza del material a desinfectar

Relacionados con el microorganismo:

-

Especie: No todos los desinfectantes son igual para todos los

microorganismos. Es un factor importante cuando queremos
desinfectar una muestra y sabemos lo que hay.
Estado fisiolgico del microorganismo: las bacterias en crecimiento
activo son ms sensibles a los desinfectantes que los que no crecen y
las esporas son formas de resistencia a muchos desinfectantes.
Nmero de microorganismos: no mueren de manera sincrnica, hay
una cintica de muerte exponencial. Cuanto ms hay ms tardan en
ser eliminados.

Relacionados con el medio ambiente en el que se desarrolla la desinfeccin:

-

Tiempo de actuacin del desinfectante: a mayor tiempo, mayor

desinfeccin, mayor eficiacia.
Temperatura de aplicacin del desinfectante: a mayor temperatura
mayor capacidad desinfectante.
pH neutro menos poder desinfectante y hacia los extremos mayor
efectividad.

EVALUACIN O CUANTIFICACIN DEL PODER ANTIMICROBIANO DE UN

DESINFECTANTE
Se puede hacer de varias formas:
1. Determinacin del coeficiente de fenol: Una manera de medir el
poder antimicrobiano es medir el coeficiente de fenol. El coeficiente
34

MICROBIOLOGA
de fenol es el cociente entre la mayor dilucin del desinfectante
problema que mata un microorganismo en 10 min pero no en 5.
Medida relativa del fenol del poder desinfectante.
2. Inhibicin del crecimiento
3. CMI
4. Mtodo de difusin en agar: (halos de inhibicin). Se utiliza para
valorar la resistencia de los microorganismos quimioterpicos.
Consiste en hacer una suspensin de un microorganismo en una
placa Petri en cantidad cubrindola toda. Antes de llevarlo a incubar,
se coloca en el centro un dispositivo simple (papel de filtro
impregnado en una sustancia). El desinfectante comienza a difundir
en todas las direcciones diluyndose en el medio creando un
gradiente de concentraciones, a medida que se aleja del disco hay
una concentracin ms baja (gradiente continuo de concentraciones).
El microorganismo crecer en toda la placa excepto en el centro
puesto que el microorganismo crece hasta que alcanza el punto de la
mnima inhibitoria. El dimetro del halo de inhibicin es una medida
indirecta de la concentracin mnima inhibitoria, es inversamente
proporcional a la mnima inhibitoria. Los halos de inhibicin depende
de la cantidad de antimicrobiano que hay en el disco y sus
caractersticas. La relacin que hay entre la concentracin mnima
inhibitoria y el dimetro del halo de inhibicin (mm) es distinta para
cada agente antimicrobiano, pero en todos, la grfica siempre es del
mismo tipo.
CLASIFICACIN DE LOS AGENTES DESINFECTANTES
Segn su modo de accin:
Los desinfectantes son muy txicos puesto que no diferencian entre unas
clulas y otras.
1. Agentes que alteran la permeabilidad celular (membrana plasmtica)
o Jabones: sal sdica o potsica entre un cido graso de cadena
larga y una base: saponificacin. Posee una parte hidrfoba y
otra hidrfila (cido carboxlico) que le ofrece actividad
detergente, que le permite alterar la membrana plasmtica
puesto que son capaces de crear micelas. Tiene un efecto
desinfectante y limpiador. La actividad detergente reside en el
anin. En aguas duras esto es un problema porque Ca 2+ y Mg2+
precipitan.
o Detergentes sintticos:
o Sales de amonio cuaternario (detergentes sintticos
catinicos). La parte activa es la que tiene el amonio. Se
utilizan como antispticos. Ms efectivos que los jabones.
o cidos y bases fuertes: se utilizan poco porque son muy
corrosivos. Concentrados. No son antispticos. Se usan a nivel
de laboratorio cuando no hay otra alternativa.
2. Agentes que desnaturalizan protenas (inactivan enzimas)
35

MICROBIOLOGA
o

Alcoholes: solo se utilizan como desinfectantes el etanol y el

isopropanol. No se utilizan en molculas ms largas porque
tienen problema de insolubilidad. Son efectivos cuando estn
en
disolucin
acuosa
a
concentraciones
del
70
% o incluso menores. No destruyen a las esporas. Disuelven
lpidos, afectan a las membranas. Algunos virus tambin
pueden ser afectados o inhibidos por el alcohol. Son
antispticos. (PREGUNTA: cita dos o tres desinfectantes
antispticos y su modo de accin).
Fenoles y derivados: importancia histrica, es el desinfectante
de referencia, mide el poder desinfectante. Se utilizan ms los
derivados.
Halgenos y derivados.
Yodo y derivados: actan reaccionando con las cadenas
laterales de los enzimas y los inactiva. Se disuelven en
una mezcla que tiene alcohol (tintura de yodo).
Antispticos ms utilizados.
Cloro y derivados: cloro gas (difcil de manipular),
cloraminas,
hipocloritos
(leja).
Se
usan
como
desinfectantes para tratar el agua potable, tratamiento
de piscinas, uso domstico.
Agentes oxidantes: agua oxigenada, permanganato, dicromato.
Uso como antisptico. El permanganato y el dicromato se usan
diluidos. El agua oxigenada se puede utilizar vaporizada para
tratar distintas instalaciones para higienizarlas con la ventaja
de que se descompone con el cabo del tiempo en agua y
oxgeno.
Metales pesados: mercurio, plata, cobre. (cationes). La parte
activa es el catin y por tanto siempre estn en forma de sal. El
cloruro de mercurio y otros derivados del mercurio son
antispticos. El cobre se utiliza en piscinas para prevenir el
crecimiento de algas y en agricultura para evitar plagas por
hongos. El nitrato de plata se utiliza como antisptico
superficial y para evitar la oftalmia gonoccica neonatal
(infeccin que se puede coger en el momento del parto).
Agentes alquilantes: alquilan grupos reactivos de protenas y
cidos nucleicos (quimoesterilizantes: esporicidas).
Formaldehido: solucin acuosa o alcohlica (poco
penetrante,
accin
lenta
y
txico/irritante).
Vaporizaciones/fumigaciones.
Glutaraldehido: 2% (bactericida, tuberculicida, viricida).
Accin rpia. Tratamiento de material quirrgico,
instrumental mdico..
xido de etileno. Esporicida.

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