INTEGRANTES
PRESENTADO A
CLARA INES HURTADO SANCHEZ
RESUMEN
Durante la prctica se realiz la prueba con el Reactivo de Lowry, con el fin de
determinar la concentracin de una protena (albmina bovina), presente en
las distintas muestras problemas. Despus de preparar el reactivo de Lowry se
procede a medir la absorbancia, (tambin la transmitancia porque sus valores
en el espectrofotmetro son ms exactos y posteriormente se hace una
conversin a absorbancia para as evitar un alto porcentaje de error) de cada
una de las muestras en el espectrofotmetro a una determinada longitud de
onda. Se grafica absorbancia vs. Concentracin encontrando la concentracin
para la muestra problema de: MP=0.0156 en g/ml.
DATOS
Tabla N1: datos obtenidos experimentalmente
Muestra
Absorbancia
Transmitancia
Concentracin
( g/ml)
0
Blanco
1
0.03
0.11
92
78
0.14
73
9.23103
0.21
0.30
0.38
0.42
0.253
62
51
42
38
56
0.0138
0.0185
0.0231
0.0277
3
4
5
6
Muestra Problema
CALCULOS Y RESULTADOS
Grafica N1: Absorbancia vs Concentracin
4.6110
Absorvancia vs concentracion
0.5
0.4
0.3
Absorvancia
0.2
Absorvancia
Linear (Absorvancia)
0.1
0
0
Concentracin = X
Y=mx + b
De la grafica tenemos que y = 14,459x + 0,0269 y reemplazando absorbancia
en la ecuacin obtenemos que la concentracin es:
X=
0.2530.0269
=0.0156
14.459
Porcentaje de error
experimental
|valor teoricovalor
|100
valor teorico
|0.01850.0156
|100 =15.67
0.0185
DISCUSION DE RESULTADOS
Las protenas son los compuestos bioqumicos ms abundantes en los seres
vivos. Son verdaderamente especiales por ser las sustancias centrales en casi
todos los procesos biolgicos Presentan numerosas funciones. Por ejemplo, casi
todas las enzimas estn compuestas de estructuras proteicas. Las enzimas son
los catalizadores que permiten que ocurran casi todas las reacciones qumicas
en los seres vivos.
LEY DE LAMBERT-BEER
La ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de luz a
travs de una sustancia y la concentracin de la sustancia, as como tambin
entre la transmisin y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos
Io y Is, la concentracin de la sustancia puede ser deducida a partir de la
cantidad de luz transmitida. Considrese un rayo de energa radiante con una
intensidad inicial Io que se hace pasar a travs de una celda de vidrio cuadrada
contiendo una solucin homognea de una sustancia que absorbe luz de cierta
longitud de onda. La intensidad de la energa radiante transmitida Is es menor
a la intensidad inicial Io. Debido precisamente a que la solucin fue capaz de
absorber cierta cantidad de energa radiante.
Mtodo UV
Las protenas muestran un fuerte grado de absorcin a 280nm en UV,
principalmente por los residuos de triptfano y la tirosina. Ya que las
concentraciones de estos aminocidos en las protenas son francamente
constantes se puede utilizar la absorbancia a 280nm para estimar la
concentracin de protenas.
Una vez determinados los valores de absorbancia para cada concentracin de protena patrn para
los mtodos establecidos de Biuret y Lowry, el desarrollo de los mismos pasa por optimizar una
serie de parmetros, tales como, linealidad, sensibilidad, precisin, exactitud, rango, selectividad y
robustez, mediante el uso de herramientas estadsticas.
La linealidad es la capacidad del mtodo para producir resultados proporcionales, directamente o
mediante una transformacin matemtica, a la concentracin del analito en las muestras, dentro de
un determinado rango. Una curva de calibracin lineal que relacione la absorbancia con la
concentracin tiene la forma: Y= mx+b
Tericamente solo se requiere la medida de absorbancia de un patrn de concentracin conocida,
como calibrado para la cuantificacin. Sin embargo, en la prctica se pueden causar desviaciones
de la Ley de Beer en funcin de parmetros instrumentales y de la muestra, y que pueden resultar
en errores cuantitativos significativos si la curva de calibracin no est caracterizada con exactitud.
0.0156 g/ml
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
Guia de laboratorio de bioqumica general Universidad del Cauca
http://estudiarfarmacia.blogspot.com/2011/04/metodo-de-lowry.html 13/04/13
[PPT] cuantificacion de proteinas.ppt
13/04/13