PRCTICA 1

MICROORGANISMOS EN EL MEDIO AMBIENTE

1. Introduccin
Los microorganismos (bacteria, virus, hongos, protozoarios, y algunas
algas) se pueden encontrar virtualmente en todo el medio ambiente. Se
encuentran en el aire, agua, suelo, alimentos, petrleo, en la materia orgnica en
descomposicin y en las superficies del cuerpo. Estos organismos son
extremadamente importantes para la salud humana y el medio ambiente adems
en los avances en inmunologa, virologa, gentica y biologa molecular.
En microbiologa, la esterilizacin se define como la destruccin o remocin
de cualquier forma de vida. Un objeto que est libre de cualquier organismo viviente,
se dice que est estril. La esterilizacin es uno de los mecanismos utilizados para
el control de los microorganismos, existen otros mtodos de control que slo matan
o inhiben una parte de la poblacin microbiana como son: desinfeccin,
pasteurizacin, quimioterapia y asepsis. Estos mtodos permiten prevenir la
contaminacin de los materiales de laboratorio y de cultivos puros, evitan las
infecciones y facilitan el tratamiento de enfermedades.
La esterilizacin es muy importante en los laboratorios de microbiologa
porque la mayora de los experimentos son realizados con cultivos puros o axnicos
(cultivos que solamente tienen un tipo de microorganismo) o con cultivos mixtos o
consorcios (cultivos constituidos por ms de un tipo de microorganismo) por lo que
es necesario primero esterilizar los materiales y medios de cultivo.
Los mtodos de esterilizacin, principalmente los que destruyen a los
organismos, fueron diseados para eliminar an a los organismos ms resistentes, las
endosporas. Bacterianas de los gneros de Bacillus y Clostridium, por lo que stas son
utilizadas como indicadores biolgicos de esterilizacin durante el proceso.
Existen varios mtodos de esterilizacin para la gran variedad de materiales, medios
de cultivo y sustancias que pueden ser esterilizados. Los mtodos ms empleados en los
laboratorios son los que utilizan calor. La velocidad con la cual los microorganismos mueren
cuando son expuestos a temperatura elevadas es funcin de la naturaleza del medio en el
cual ocurre el calentamiento (pH, concentracin de sales y tipo de nutrientes), la longitud del
tiempo de exposicin y la temperatura de calentamiento.

Por otro lado, el crecimiento microbiano slo es posible si las condiciones

fsicas (temperatura de incubacin, y la cantidad de oxgeno presente) y
qumicas (constituyentes del medio de cultivo, pH, etc.) son apropiadas.
Se utilizan varios tipos de medios de cultivo, los cuales pueden
clasificarse de la siguiente forma:

1. En base a su composicin qumica pueden ser: sintticos o

definidos (cuando se conoce la composicin qumica cualitativa
y cuantitativa exacta de todos los componentes) y complejos
(cuando no se conoce la composicin qumica cualitativa y
cuantitativa exacta de alguno de los componentes).
2. En base a la presencia de factores de crecimiento pueden ser:
enriquecidos (si contienen) y mnimos (si no contienen).
3. Por su funcin pueden ser: selectivos (para el desarrollo de un
grupo o tipo de microorganismos) y diferenciales (para
distinguir tipos de microorganismos)
4. Por su consistencia pueden ser lquidos (llamados caldos) con los
nutrientes disueltos en agua; slidos, a los cuales se les adiciona
un agente solidificante como el agar a una concentracin de 1.5%
p/v (otro agente solidificante es la slica gel); y semislidos, a los
cuales se les adiciona agar en una menor concentracin.
Antes de utilizar los materiales de laboratorio y los medios de cultivo
preparados a partir de ingredientes o de preparados comerciales, deben ser
envasados, esterilizados y protegidos adecuadamente para conservar la
esterilidad durante su uso y almacenamiento, lo cual va a asegurarnos que se
trabajar exclusivamente con los microorganismos deseados.
2. Objetivos.
Aprender a preparar adecuadamente el material de laboratorio para su
esterilizacin y almacenamiento.
Aprender a preparar, envasar y esterilizar medios de cultivo.
Investigar los tipos de microorganismos que puedan estar presentes en el
aire, cuerpo y superficies.
3. Equipos, Reactivos y Materiales.
10 tubos de 16 x 150 mm con solucin salina
0.85% Vasos de precipitado de 250 y 500 ml
Matraces de 250 y 500 mL
Probetas 10, 100 y 500 mL

10 cajas Petri de vidrio

estriles Cotonetes estriles
Autoclave
Balanza Analtica
Gradilla

Agar Nutritivo y Agar nutritivo con 5%

sucrosa Agar Czapeck y Agar para hongos
y levaduras Agar sangre
Agua destilada
esteril Yogurt natural

Papel para esterilizar (Kraft)

Cinta indicadora de esterilizacin
Indicador de esterilizacin de esporas
Bote de aluminio para esterilizar pipetas
Mechero
Esptula
Succionador para pipetas
Microscopio, Portaobjetos y cubreobjetos
4. Procedimiento
Preparacin de material de vidrio para esterilizar.
a) Tubos de ensaye de 16 x 150.
1. Colocar en 10 tubos 9 mL con solucin salina 0.85%, tapar cada
tubo con un tapn de algodn ayudado de unas pinzas (pueden ser
de diseccin de punta roma).
2. Colocar los tubos en una gradilla y cubrirlos con papel Kraft.
Esterilizar en autoclave a 121 C por 15 minutos.
Preparacin de medios de cultivo.
1. Pesar los gramos necesarios de acuerdo a las instrucciones del
fabricante para preparar 500 mL de medio Agar Nutritivo, Agar
nutritivo con 5% sucrosa, Agar Czapeck y Agar para hongos y
levaduras Adicionar el agua destilada y calentar a ebullicin para
disolver con agitacin.. Medir y ajustar el pH si es necesario.
2. Esterilizar en autoclave a 121 C por 15 min.
3. Distribuir 20 mL de medio a cada caja de Petri , dejar solidificar y
someter a prueba de esterilizacin a 37 C
4. Procedimiento
1. Remover la tapa de la caja petri que contiene el agar nutritivo, el agar
hongos y levaduras y Czapeck. Djelo por espacio de 1 hora abierto, una
vez concluido el tiempo tpelo, invirtalo y mrquelo. Incbelo a
temperatura ambiente de 3 a 4 das. Una vez transcurrido el tiempo
efecte el registro de sus observaciones de las colonias formadas.
2. Humedecer un cotonete con agua estril y frtelo en la piel, estrelo en la caja
petri con agar nutritivo. Tpelo, invirtalo y mrquelo. Incbelo a 37 C por 48 a

72 hrs. Una vez transcurrido el tiempo efecte el registro de sus

observaciones de las colonias formadas..
3. Humedecer un cotonete con agua estril y frtelo dentro de su boca, estrelo
en la caja petri con agar nutritivo con 5% sucrosa. Tpelo, invirtalo y
mrquelo. Incbelo a 37 C por 48 a 72 hrs. Una vez transcurrido el tiempo
efecte el registro de sus observaciones de las colonias formadas.

4. Se introduce la torunda en la boca, evitando el contacto con la lengua y

otras zonas de la boca, y se frota contra la mucosa de la faringe.
a).- Frotar con un hisopo estril sobre un segmento de la placa agar
sangre, hacindolo girar a la vez para descargar toda la muestra.
Extender el inculo inicial con el asa bacteriolgica.
b).- Con el asa flameada y fra extender el inculo sobre otro segmento. Flamear
el asa y repetir dos veces el paso 2, sin llegar a tocar el inculo inicial.

c).- Clavar el asa dos o tres veces en el agar, al principio de la siembra,

para obtener cultivo bajo la superficie. Incubar las placas 18 h a 35-37C.
Una vez transcurrido el tiempo efecte el registro de sus observaciones
de las colonias formadas y de la presencia de hemlisis.
5.- Colocar una gota de agua estril en un portaobjetos. Flamear el asa de siembra

hasta que adopte un color rojo.

a).- Tomar una muestra del lquido del yogurt intentando no tocar con el
asa la parte slida de la materia del yogurt (contiene demasiada grasa y
puede dificultar la observacin.
b).-Hacer un frotis de la muestra en la gota de agua (extenderlo completamente).
Fjela con calor en el mechero hasta que el agua se evapore.

c).- Cubrir el portaobjetos con azul de metileno, deje actuar por un minuto.
Una vez transcurrido el tiempo lavar cuidadosamente la preparacin con
agua para eliminar el exceso de colorante. Deje un par de gotas y cubra
con el portaobjetos intentando no dejar burbujas de aire. Observar en el
microscopio en el mayor aumento posible y registre sus observaciones..
5. Discusin y Conclusiones.
1. Mencione con que esporas bacterianas se realiza el control biolgico
para el mtodo de esterilizacin de:
a) calor hmedo
b) calor seco
c) xido de etileno
2.- Las bacterias del yogurt son auttrofas o hetertrofas? Explique porqu.
3.- Que tipo de hemlisis presentaron las colonias en la placa agar sangre y
explique a que se debe la reaccin hemoltica observada en el medio?

6. Bibliografa.
Claus. G. W. 1988. Understanding Microbes. A Laboratory Textbook for
Microbiology. Ed. W. H. Freeman and Company, Nex York . U.S.A.
Difco Manual. Dehydrated culture Media and Reagentes for Microbiology.
Difco laboratories Detroit Micghigan.Tenth Edition
Merck. Manual de Medios de Cultivo.