EFECTO ECOTOXICOLGICO DE TRES METALES PESADOS SOBRE EL

CRECIMIENTO RADICULAR DE CUATRO PLANTAS VASCULARES

ECOTOXICOLOGICAL EFFECTS OF THREE HEAVY METALS OVER THE
ROOT GROWTH OF FOUR VASCULAR PLANTS
Iannacone, Jos & Lorena Alvario
Universidad Nacional Federico Villarreal
joseiannacone@hotmail.com

Resumen
Para la evaluacin del riesgo ambiental (ERA) de los ambientes terrestres
contaminados por relaves mineros en el Per se requiere del empleo de
organismos biolgicos estandarizados que sean sencillos, prcticos, sensibles
y repetibles como las semillas de plantas superiores empleadas en bioensayos
como herramientas ecotoxicolgicas. Por lo que el objetivo de este trabajo fue
evaluar el efecto fitotxico del Cr+6, Hg2+ y Pb2+ en forma de dicromato de
potasio (K2Cr207), cloruro de mercurio (Cl2Hg) y acetato de plomo
((CH3C00)2Pb), respectivamente, sobre el crecimiento radicular de cuatro
especies de plantas superiores terrestres: Allium cepa L. (Liliaceae) Cebolla,
Beta vulgaris L. (Chenopodiaceae) Beterraga, Oriza sativa L. (Poaceae)
Arroz y Raphanus sativus L. (Brassicaceae) Rabanito a 192 h (8 das) de
exposicin. Se realizaron bioensayos de toxicidad subagudas estticas para
cada metal y para cada especie de planta, siguindose un diseo experimental
en bloques completamente randomizados (DBCR): ocho repeticiones con seis
concentraciones emplendose 240 semillas por bioensayo. La secuencia en
orden ascendente para la Concentracin de Inhibicin media del crecimiento
radicular de las semillas (CI50 en mg L-1) a 192 h fue en la mayora de los casos:
Hg2+ > Cr+6> Pb2+. Se analizan las perspectivas de uso para la evaluacin y
para biorremediacin de suelos contaminados por metales pesados en el Per.
Palabras clave: metales pesados, Per, plantas vasculares, semillas, relave
minero.
Abstract
For environmental risk assessment (ERA) of polluted terrestrial environment by
waste mining in Peru is needed to employ standardized biological organism,
simple, practical, sensitive and repeatable as seed of higher plants used in
bioassays as ecotoxicological tools. The aim of this research is to evaluate the
phytotoxic effects of Cr+6, Hg2+ and Pb2+ in form of potassium dichromate
(K2Cr207), mercury chloride (Cl2Hg) and lead acetate ((CH3C00)2Pb),
respectively, over root growing of four species of higher terrestrial plants: Allium
cepa L. (Liliaceae) Onion bulb, Beta vulgaris L. (Chenopodiaceae) Sugar
beet, Oriza sativa L. (Poaceae) Rice and Raphanus sativus L. (Brassicaceae)
Radish at 192 h (8 days) exposure. Bioassays of static sublethal toxicity for
each metals and for each species of plant were employed, following a
experimental design in block completely randomized (DBCR): eight repetitions
with six concentrations using 240 seeds by bioassays. The sequence in
ascending order for Inhibition Concentration medium for root seed growing (IC 50

in mg L-1) at 192 h exposure in the majority of cases was: Hg 2+ > Cr+6> Pb2+. The
perspectives of use for evaluation and for bioremediation of contaminated soils
by heavy metals in Peru were analyzed.
Key words: heavy metals, Per, seeds, vascular plants, waste mining.
INTRODUCCIN
Es importante determinar el nivel de riesgo ambiental de los metales pesados
sobre diversos representantes del ecosistema terrestre utilizando bioensayos
ecotoxicolgicos (Iannacone & Gutierrez, 1999; Arkhipchuk et al., 2000). Entre
ellos, las plantas terrestres presentan especies representativas de los
agroecosistemas hortcolas (Wang, 1991; Arambasic et al., 1995; Iannacone et
al., 2000). Sin embargo, el efecto de los metales pesados sobre estas cuatro
especies de plantas vasculares, no es bien conocido (Lerda, 1992; Rosa et al.,
1999; De Jong & De Haes, 2001).
La determinacin de algunos aspectos de la ecotoxicidad de metales
pesados empleando bioensayos sencillos y prcticos para catalogar
toxicolgicamente muestras ambientales contaminadas por plomo, mercurio y
cadmio contribuir en el Per, a tomar medidas para disminuir la problemtica
de los relaves mineros (Shanker et al., 1996; Iannacone & Alvario, 1999).
Los objetivos especficos planteados en la presente investigacin fueron
determinar la ecotoxicidad del cromo (Cr 6+), mercurio (Hg2+) y plomo (Pb2+)
sobre la inhibicin del crecimiento radicular de cuatro plantas vasculares:
Allium cepa L. (Liliaceae) Cebolla, Beta vulgaris L. (Chenopodiaceae)
Beterraga, Oriza sativa L. (Poaceae) Arroz y Raphanus sativus L.
(Brassicaceae) rabanito a 192 h de exposicin.
MATERIALES Y MTODOS
Semillas y bioensayo
Las semillas de A. cepa, B. vulgaris, O. sativa y R. sativus fueron obtenidas en
sobres de 240 semillas procedentes de supermercados ubicados en el Cercado
de Lima-Per en mayo del 2000. Las semillas de A. cepa pertenecieron a la
variedad Credle. Todas las semillas antes de su empleo en ensayos
ecotoxicolgicos fueron mantenidas en condiciones de oscuridad y a
temperaturas de 6 C para inhibir su germinacin y mantener su fertilidad,
segn el criterio propuesto por Wang (1991). Se descartaron las semillas
daadas y se utilizaron las de un mismo tamao. Para la desinfeccin de las
semillas, se realiz un pretratamiento con una solucin de leja Clorox diluida
al 3,33 g OCl- L-1 (2,5 %), durante 7 a 20 min (APHA, 1995) y posterior
enjuague por cuatro veces en agua destilada. Los frascos empleados en los
bioensayos de 2,8 cm de alto x 3,5 cm de ancho x 3,5 cm de espesor, y de una
onza (= 30 mL) de capacidad fueron desinfectados con la misma solucin de
leja por 30 min, luego se enjuagaron con agua destilada y se procedieron al
secado en una estufa a 30C por 20 min. De igual forma el papel Tissue
previamente cortado en trozos de 3,5 cm 2 fue esterilizado por 15 min en una
estufa a 60C.
Las semillas de las cuatro especies de plantas terrestres se evaluaron
en bioensayos estticos utilizando un total de 5 semillas envase -1, con ocho
repeticiones. En cada envase se coloc dos trozos de papel Tissue,

seguidamente se aadi 1 mL de la solucin nutritiva con cada concentracin

de metal pesado (Cr6+, Hg+2 Pb+2) por envase. Luego se coloc cinco semillas
en forma equidistante (cuatro en cada ngulo y otra en el centro) en cada
envase y se cubri con dos trozos ms de papel Tissue. El agua utilizada
para los ensayos biolgicos consisti en una solucin hidropnica con las
caractersticas descritas por Iannacone et al. (2000). La prueba fue realizada
bajo condiciones de oscuridad. La duracin de la prueba fue de 192 h (8 das).
Los indicadores para el bioensayo fueron el crecimiento de la radcula en mm
en comparacin con el control. Los bioensayos se realizaron a una temperatura
de 22 3 C.
Metales pesados
Se emple para la preparacin de las soluciones madres de los tres metales
pesados: dicromato de potasio (K2Cr2O7) y cloruro de mercurio (HgCl2) a 100
mg L-1 y acetato de plomo (Pb(Ch 3COO)2) a 200 mg L-1. En el caso del Cr +6 se
emplearon las siguientes concentraciones 0,625 mg L -1; 1,25 mg L-1; 2,5 mg L-1;
5 mg L-1 y 10 mg L-1, para el Hg2+ se emplearon las siguientes concentraciones
0,625 mg L-1; 1,25 mg L-1; 2,5 mg L-1; 5 mg L-1 y 10 mg L-1, y finalmente para el
Pb2+: 12,5 mg L-1; 25 mg L-1, 50 mg L-1, 100 mg L-1 y 200 mg L-1. Para todos los
casos se emple un factor de dilucin de 0,5.
Diseo experimental y tratamiento estadstico
Las pruebas de toxicidad subaguda para las cuatro especies de plantas
terrestres se evaluaron en cinco concentraciones nominales con ocho rplicas,
ms el control, en un Diseo Factorial en Bloque Completamente Randomizado
(DBCR): 6 concentraciones x 8 rplicas x 5 repeticiones (longitud de radcula
en mm) (Zar, 1996). La eficacia de los tratamientos se evalu a travs de un
Anlisis de Varianza (ANDEVA) de una va, preva transformacin de los datos
a log x+1. En el caso de existir diferencias significativas entre las
concentraciones se realiz una prueba de Tukey (Norman & Streiner, 1996).
Las CI50s para los ensayos fitotxicos con semillas se calcularon usando un
programa computarizado de la Agencia de Proteccin ambiental de los
Estados Unidos (USEPA), emplendose el mtodo de interpolacin lineal para
toxicidad subletal y calculndose la concentracin de inhibicin (CI 50) (versin
2,0, 1993).
RESULTADOS
La Tabla I muestra los valores comparativos de inhibicin de crecimiento
radicular (punto final de lectura) en trminos de CI50 en los ensayos
ecotoxicolgicos con las cuatro plantas vasculares. Ninguna de las cuatro
especies de plantas present la mayor sensibilidad a los tres metales pesados
ensayados. Para el Cr6+ se observa el siguiente orden decreciente de
ecotoxicidad: O. sativa > A. cepa > B. vulgaris > R. sativus. Para el Hg2+ se
encontr la siguiente secuencia: B. vulgaris > R. sativus > O. sativa > A. cepa.
Para el Pb2+ se encontr la siguiente secuencia: B. vulgaris > A. cepa > R.
sativus > O. sativa. La secuencia de sensibilidad promedio en orden
decreciente fue: Hg2+ > Cr6+ > Pb2+.

Las Tablas 2 al 4 nos sealan los porcentajes de inhibicin del crecimiento

radicular de las cuatro plantas vasculares a las cinco concentraciones de cada
uno de los tres metales, indicndose las diferencias en los porcentajes de
inhibicin entre las concentraciones evaluadas. En todos los casos el
porcentaje de inhibicin incrementa con la concentracin del txico.
DISCUSIN
Las pruebas de fitotoxicidad empleando plantas terrestres, no son
frecuentemente usadas en ecotoxicologa (Wang, 1991). Las tres
caractersticas ms importantes de los ensayos con plantas terrestres, es que
se les puede usar con muestras coloreadas o turbias, en ensayos estticos,
semiesttico y de flujo continuo, y con un mnimo costo de mantenimiento en el
laboratorio (Wang, 1991). El empleo de las semillas de plantas terrestres como
herramientas ecotoxicolgicas son ventajosas, por requerirse poco volumen de
muestra (1 mL envase-1), comparado con otros organismos que requieren de 50
a 200 mL envase-1 (Arambasic et al., 1995). Los ensayos de fitotoxicidad con
semillas son simples, verstiles y tiles para evaluar la toxicidad de aguas,
sedimentos y muestras de suelo (Walsh et al., 1991; Rosa et al. 1999). Varias
especies de plantas tienen ventajas sobre otros organismos biolgicos: 1)
como por ejemplo poder almacenarse en forma de semilla por un ao o ms, 2)
costo de mantenimiento mnimos, 3) las muestras no requieren aireacin, 4)
muestras con altas turbiedades no requieren filtracin adicional y 5) pruebas se
pueden llevar a cabo sin ajuste de pH. Las plantas vasculares han sido
recomendadas por la USEPA y por la FDA (Administracin de Drogas y
Alimentos) encontrndose buena sensibilidad, en comparacin con otras
especies de semillas de plantas terrestres (Wang, 1991). El ensayo
ecotoxicolgico con semillas de plantas vasculares presenta algunas ventajas
sobre otras especies terrestres, lo que permite usar cuantitativamente el
crecimiento de raz. Wang (1991) indica que el crecimiento de raz como punto
final de lectura es ms sensible a la toxicidad que la germinacin de semillas, la
cual presenta un alto coeficiente de variacin (Rosa et al., 1999). Calow (1993)
presenta un resumen de los protocolos de bioensayos de germinacin de
semilla y de elongacin de raz con diferentes especies de plantas, siendo
comparables a nuestro protocolo.
La sensibilidad de las especies a los
metales pesados
vara
considerablemente a travs de reinos y filas, siendo las plantas ligeramente
mas tolerantes (Rosa et al., 1999). Las diferentes respuestas de las plantas
vasculares puede ser atribuida a factores tales genticos, fisiolgicos, y rutas
toxicolgicas y de destino ambiental (Crdova et al., 1999).
Lerda (1992) ha encontrado que el plomo reduce el crecimiento radicular y la
frecuencia de clulas mitticas, y el incremento de la frecuencia de clulas
aberrantes en A. cepa. La intensidad del efecto est en funcin de la
concentracin del Plomo.
La comparacin de resultados entre reportes es complicada para diferentes
especies de plantas vasculares por las diferencias en la sensibilidad de
especies, por las diferencias en los tiempos de exposicin, puntos finales de
lectura y de evaluacin (Rosa et al., 1999; Arkhipchuk & Garonko, 2002).
Inclusive la edad de las semillas debe ser tomada en consideracin, pues

pudiera producir resultados diferentes en semillas de diferentes edades

(Arkhipchuk et al., 2000).
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Tabla 1. Valores comparativos de inhibicin de crecimiento de radcula en

trminos de CI50 (mg L-1) para cuatro ensayos ecotoxicolgicos con semillas de
plantas terrestres para la evaluacin de tres metales pesados.
CI50 (mg L-1) a 192 h
Especie de planta
Cr+6
Hg+2
Pb+2
Allium cepa L. (Liliaceae)
10,30
11,66
263
Beta vulgaris L. (Chenopodiaceae)
> 10
0,51
28,44
Oriza sativa L. (Poaceae)
4,58
5,47
438
Raphanus sativus L. (Brassicaceae)
22,05
5,27
367
Tabla 2. Porcentajes de inhibicin del crecimiento radicular de cuatro plantas
terrestres expuestas al cromo (Cr+6) a 192 h de exposicin.
Concentraciones A. cepa
B. vulgaris O. sativa R. sativus
0,625
12a
30a
0a
2a
1,25
7a
60b
41b
2a
2,5
27b
59b
50b
3a
5
32b
64b
68c
13b
10
49c
75b
73c
32c
Promedios en una misma columna, seguidos por la misma letra, no
difieren significativamente a P = 0,05 (Prueba de Tukey).

Tabla 3. Porcentajes de inhibicin del crecimiento radicular de cuatro plantas

terrestres expuestas al mercurio (Hg+2) a 192 h de exposicin.
Concentraciones A. cepa
B. vulgaris O. sativa R. sativus
0,625
11a
55a
0a
9a
1,25
7a
55a
3a
22b
2,5
27b
65a
18b
32c
5
32b
72ab
46c
33c
10
29b
78b
100d
76d
Promedios en una misma columna, seguidos por la misma letra, no
difieren significativamente a P = 0,05 (Prueba de Tukey).

Tabla 4. Porcentajes de inhibicin del crecimiento radicular de cuatro plantas

terrestres expuestas al Plomo (Pb+2) a 192 h de exposicin.
Concentraciones A. cepa
B. vulgaris O. sativa R. sativus
12,5
6a
30a
0a
8a
25
8a
60b
16b
22b
50
15a
58b
18b
33c
100
32b
64bc
32c
33c
200
37b
75c
34c
38c

Promedios en una misma columna, seguidos por la misma letra, no

difieren significativamente a P = 0,05 (Prueba de Tukey).