Campylobacter 2004 Handout

Gnero
Campylobacter
Microbiologia e Parasitologia
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Grupo Campylobacter -
Helicobacter
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ETIOPATOGENIA
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caractersticas do microrganismo
Famlia: Campylobacteracea
Gnero: Campylobacter
18 espcies e subespcies
Gnero: Arcobacter
Quatro espcies
Bergeys Manual of Systematic Bacteriology,1984:

oito espcies dentro do Gnero Campylobacter
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Caractersticas
Bacilos de Gram negativo
Curvos, em forma de s, ou em espiral
0.2 to 0.9 m por 0.5 to 5 m

No formadores de esporos
Esfricos ou cocides em culturas velhas ou expostas
ao ar
Mveis
Um flagelo polar no embainhado
Numa ou em ambas as extremidades
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Caractersticas
Microaeroflicos, com metabolismo respiratrio
complexo
Algumas estirpes requerem H2
Algumas espcies so aerbias e anaerbias
Tamanho do genoma:
C. jejuni e C. coli : 1.7 Mb (PFGE)
1/3 do genoma de E. coli
C. jejuni NCTC 11168: 1,641, 481 bp (30% G+C)
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Susceptibilidade ambiental
No crescem 30C
Microaeroflicos
Sensveis secagem
Sensveis a altas concentraes de O2
Sensveis a baixos pH
Sensveis ao calor
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Susceptveis radiao gama (1 kGy)
kGy)
A taxa de morte depende da temperatura e da fase de
crescimento
Carne TA> refrigerada > congelada
Fase pr-log > fase log ou estacionria
Mais sensveis s radiaes que outros agentes de

infeco alimentar (Salmonellae
(Salmonellae,, Listeria
monocytogenes)
monocytogenes)
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Susceptveis a:
Hipoclorito de sdio (Clorox)

O-fenilfenol(Amphyl)
Iodo-polivinilpirrolidina (Betadine)
Dimetilamnio e derivados (Zephiran)
Glutaraldedo (Cidex)
Formaldedo
Etanol
cido as crbico
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Susceptveis a pH baixos
Morrem rapidamente a pH 2.3
MantmMantm-se viveis em sais biliares a 37oC

Sobrevivem melhor em fezes, leite e urina conservados
a 4C, quando comparado com 2C
Viabilidade mxima a 4C
3 semanas nas fezes
4 semanas na gua
5 semanas na urina
Susceptveis congelao: populao celular

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Sazonalidade:
Isolamento de patognicos fecais
Grande variao
68% de Vibrio, 47%
de E. coli O157, 40%
de Campylobacter,
and 36% de
Salmonella isolados
entre Junho e Agosto
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Reservatrios e surtos de
infeco alimentar
Zoonticos
Reservatrios:
Animais
Coelhos, roedores, aves selvagens, carneiros, cavalos, vacas, porcos,
aves de capoeira e animais domsticos
Vegetais contaminados
Bivalves contaminados
gua contaminada
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Infeco por Campylobacter spp

Diarreia aguda do tipo toxina alimentar
Doena Inflamatria intestinal
mecanismo invasivo profundo
Diarreia com sangue e muco
linfadenite mesentrica --> Bacterimia
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CARACTERSTICAS DA DOENA
Na maior parte das espcies de Campylobacter:
Infeco do tracto GI baixo
C. fetus subsp.
subsp. fetus:
fetus:
Infeces extraintestinais
C. jejuni e C. coli:
Doena diarreica
Clinicamente indistinguveis
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Enterite
C. jejuni (90 %), C. coli (10 %). Dose infectante baixa.
Tracto intestinal de animais de produo alimentar
Aves so reservatrios preferenciais (1/2 dos casos de
enterite)
Campylobacter > Salmonella
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Enterite
Clnica semelhante a SS, excepto:
dor abdominal mais intensa e duradoura
Trade caracterstica
Diarreia severa (2 a 5 dias) - Enterocolite
Febre
Dor abdominal
Complicaes
Sind.. Guillain-Barr
Artrite Reactiva
Sind.. De Reiter
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Espectro:
Assintomtico Doena severa
Sinais e sintomas:
Febre
Dores abdominais
Diarreia
Com ou sem sangue e/ou leuccitos nas fezes
Alguns dias Mais de uma semana

Geralmente autolimitada
Recadas em 5 a 15% dos casos nono-tratados
ATT: Pode simular apendicite aguda ......cirurgia desnecessria !
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Infeces extra intestinais e
sequelas
Bacterimia
Bursite
ITU
Meningites
Endocardites
Peritonites
Eritema nodoso
Pancreatite
Abortos
Spsis neonatal
Artrite reactiva
GBS (Guillain Barre Syndrome)
Morte
C. jejuni and C. Coli so

susceptveis a:
Macrlidos
Fluoroquinolonas
Aminoglicosidos
Cloranfenicol
Tetraciclina
Eritromicina- droga de escolha
Resistncias:
>5% em C. jejuni
Varia em C. coli (at 80%)
Ciprofloxacina- droga
alternativa
Resistncia Fluoroquinolonas
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Dose infectante e populao

susceptvel
O ambiente gstrico mata a maioria

Dose infectante de C. jejuni : <1000 organismos
Black et al., 1988
Duas estirpes diferentes (A3249 and 81-176)

108 cfu
A3249: 18% dos voluntrios adoeceram
81-176: 46% dos voluntrios adoeceram
Robinson,
Robinson, 1981
500 cfu no leite
Quadro tpico 3 a 4 dias depois
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Dose infectante e populao

susceptvel
Infeco espordica
Crianas e adultos jovens tm maior incidncia
A maioria das infeces sintomtica ocorrem na
infncia e adolescncia
Viajantes para pases em desenvolvimento
Bacterimia
1.5/1,000 infeces intestinais
Mais velhos
Imunocomprometidos
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patogenicidade
Doena enterotoxinognicaenterotoxinognica-like
Diarreia aquosa
Colite inflamatria
Febre
Sangue e leucocitos nas fezes
Bacterimia (ocasional)
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Toxina cleraclera-like (?)

Pros:
Pros:
3 subunidades idnticas 68, 54, and 43 kDa

Aumenta a actividade adenilciclase em clulas HeLa
Protena de 68-kDa com reactividade imunolgica cruzada
protenas de 68-kDa e 54-kDa com putativa actividade ligadora
de ganglisidos.
Estudos no animal
Contras:
No existe evidncia gentica
Pouca imunidade cruzada
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CDT
(Cytolethal distending toxin )
Papel desconhecido
Activa em clulas CHO, Vero, HeLa,
HeLa, e HepHep-2, mas no
em YY-1
41% de 700 estirpes testadas produzem CDT
Resposta hemorrgica em ansas ileais isoladas de rato
Genes codificadores: cdtA,
cdtA, cdtB,
cdtB, e cdtC
Semelhante s protenas CDT de E. coli
Actividade citotxica em filtrados fecais de doentes e
assintomticos infectados
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Outras toxinas
Hepatotoxina
C. Jejuni GIFU 8734
Hpeatite no modelo animal
Shigatoxinas
Hepatotoxinas
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SEQUELAS AUTOIMUNES
GBS: paralisia aguda, imunomediada e afectando o
sistema nervoso perifrico
Infeco por Campylobacter um frequente iniciador de GBS
Incidncia anual (US) de caplibacteriose + GBS
0.17-0.51 casos / 100,000 (425-1,272 casos/ano)
Mecanismo:
Semelhana molecular entre
LPS da parede bacteriana
Alvos epitopos relevantes no tecido do SN perifrico
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C. jejuni :
Factores de Virulncia
Motilidade / Quimiotaxia
Aderncia
Protenas flagelares
LPS / Endotoxina
Protenas da camada S
Enterotoxina (CJT)
Citotoxina
Controlo gentico da
virulncia:
Plasmdios
Resistncia a Tetraciclina e
Kanamicina
Produo de enterotoxina
Cromossomas
Produo de enterotoxina
Variao de fase dos antignios
flagelares
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Imunidade
Imunidade protectora aps infeco
Provavelmente mediada por anticorpos
Infeco endmica:
Imunidade idade-dependente
Provavelmente mediada por anticorpos
Citoquinas
IL-5, IL-6
Anticorpos anti-flagelina
Leite materno
Vacinas em perspectiva
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ISOLAMENTO E IDENTIFICAO
C. Jejuni sensvel ao stress ambiental:
Conservao a temperatura ambiente (20-25C)
Exposio as condies normais de oxignio atmosfrico
Desidratao
As amostras alimentares tm que ser adequadamente

processadas e testadas logo que possvel.
Em caso de atraso refrigerar (no congelar!) em condi
condies
de anaeorobiose (100%N2)
Tioglicolato de sdio 0.15% + bisulfito de sdio 0.01%
(scavanger para O2)
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isolamento de Campylobacter
jejuni
Enriquecimento em meios selectivos, contendo sangue

e vrios antibiticos:
Campy BAP
Skirrows agar
Preston blood-free agar
Incubao em microaerofilia
42C ou 37C
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Isolamento e i.d. de
Campylobacter jejuni
Motilidade caracterstica em dardo ou sacasaca-rolhas em
microscopia de contraste de fase
Morfologia em s, gaivota ou espiral
Testes bioqumicos
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Isolamento e i.d. de
Campylobacter jejuni
Testes bioqumicos
Incapacidade de fermentar ou oxidar a glucose

Cresce a 37C ou 42C mas no a 25
Hidroliza o hipurato
No cresce em 3.5% NaCl
Reduz os nitratos
Produz H2S em meio de cistena
Catalase e oxidase +++
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Sistemas de subtipagem
epidemiolgica
teis apenas na investigao de surtos de infeco alimentar
Sistemas de tipagem
Biotipagem
Serotipagem
Sensibilidade a bacteriocinas
Deteco de enzimas prformados
Auxotipagem
Fagotipagem
Multilocus enzyme electrophoresis (MEE)
Mtodos moleculares
PFGE
Ribotyping
RFLP + PCR
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Diagnstico laboratorial
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Campylobacter
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Gnero
Helicobacter
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Histria
ExEx-Campylobacter que partilham caractersticas comuns e
suficientes para poderem ser classificadas como Gnero
separado.
John Warren : presena de bactrias espiraladas na mucosa
gstrica sobretudo nas zonas com reaco inflamatria.
1982, Warren e Barry Marshall conseguiram cultivar estes
microrganismos a partir da mucosa gstrica de 11 pacientes
com gastrite.
Marshall e Warren 1984 demonstraram, por autoinfeco de
Marshall,
Marshall, a relao causal de H. pylori e gastrite do antro e que
esta podia ser curada pelo uso de antibiticos e sais de
bismuto.
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Classificao
Campylobacter pyloridis -> Campylobacter pylori ->
Helicobatcer pylori
Gnero Helicobacter = bacilos espiralados, catalase,
oxidase e urease (+)
H. pylori
bactria gram-negativa, com uma forma encurvada, espiralada
ou em forma de asa de gaivota, com 2.5 a 3.5
um de comprimento e 0.5 a 1 uM de dimetro. Tem
superfcie lisa e plos arredondados, de um dos quais emergem
ente 1 a 6 flagelos.
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Caracterizao
Vrias espcies do Gnero
Helicobacter (8 gstricas, 3
intestinais e 2 hepticas.)
cada uma colonizando um
animal ou conjunto de
mamferos diferente. O
estmago humano
afectado quase s por H.
pylori e muito mais
raramente por
Gastrospirillum hominis.
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Epidemiologia e Transmisso
Nos pases desenvolvidos,
desenvolvidos, 20% das pessoas com menos
de 40 anos e 50% das pessoas com mais de 50 anos
esto infectadas.
Nos pases em desenvolvimento a maioria dos adultos
est infectada. A aquisio da bactria decorre a um
ritmo de 10% das crianas por anos, entre os dois e
oito anos de idade, pelo que a maioria adolescentes
est infectada.
At aos dois anos de idade a imunidade passiva
transmitida pela me e o efeito protector do leite
materno (casena, linfoquinas)
linfoquinas) traduzemtraduzem-se em baixas
taxas de infeco.
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Transmisso
AcreditaAcredita-se que H. pylori transmitido
por via oral ou fecalfecal-oral
H. pylori pode ser cultivado a partir das
fezes de pessoas infectadas (usando
tcnicas especiais).
Adicionalmente a PCR detecta a
bactrias na placa bacteriana dentria de
cerca de 30% das pessoas com infeco
gstrica.
A recente descoberta de que H. pylori
afecta o estmago o gato, levanta a
possibilidade de infeco a partir de
animais domsticos.
domsticos.
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Evidncias
A ingesto voluntria de H. pylori resulta em
gastrite crnica;
A experimentao animal semelhante
infeco humana e gastrite.
O tratamento com antibiticos a que a bactria
sensvel erradica a gastrite
A bactria apenas invade a mucosa gstrica
H. pylori apenas se associa a certo tipo de
inflamao gastroduodenal,
gastroduodenal, sobretudo a gastrite
do tipo B, quase universalmente presente nas
lceras duodenais.
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Evidncias
Existe uma resposta imunolgica sistmica infeco com H.
pylori,
pylori, cujos anticorpos diminuem com o tratamento com
antibioterapia eficaz, incluindo os sais de bismuto
Grande associao entre H. pylori e gastrite e hipocloridria do
tipo epidmico.
O padro de aquisio de H. pylori com a idade idntico ao da
gastrite. Os testes serolgicos para a infeco por H. pylori
(pesquisa de anticorpos circulantes do tipo IgA e IgG)
IgG) mostram
que a infeco baixa nas crianas mas sobe dramaticamente
nas 5 e 6 dcadas de vida, estando mais de 50% da populao
com mais de 50 anos infectada.
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Epidemiologia
Relao entre H. pylori, gastrite e serologia

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Epidemiologia
Relaes entre
infeco gstrica
por H. pylori e
patologia.
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Epidemiologia
Infeco X Rendimento X Idade

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Epidemiologia
Prevalncia e escalo socioeconmico

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Patogenia
Mobilidade e capacidade de penetrao na mucosa
A secreo de grandes quantidades de urease
extremamente eficaz a pH muito baixo (Constante de
Michaelis para a urease do H. pylori de 0,4 mM.
Cerca de metade das estirpes de H. pylori produzem
citotoxinas , proteases e fosfolipases.
fosfolipases.
A infeco por H. pylori leva a uma diminuio dos
nveis de cido ascrbico no suco gstrico,, sendo
predisponente para a ulcerao e neoplasia gstrica.
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Patogenia
Factores de Patogenicidade de Helicobacter pylori

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Patogenia
Localizao profunda
de H. pylori e
mecanismos de
proteco da aco do
cido gstrico.
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Patogenia
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Patogenia
Helicobacter no apex das clulas mucosas

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Imunologia
Persistncia da infeco apesar da intensa reaco
imunolgica local e sistmica.
Resposta sistmica = marcado aumento de anticorpos IgG que
persistem meses aps a cura da infeco.
A resposta local inclui a produo de IgA + reaco inflamatria
inflamatria
intensa com a presena de alguns PMN e muitas clulas
mononucleadas.
mononucleadas.
A actividade killer natural dos linfocitos do sangue perifrico
pode ser estimulada pela presena de H. pylori, provavelmente
por este induzir a produo de interfero e outras citoquinas.
Assim, a infeco por longos perodos de tempo pode ter a ver
com a capacidade da bactria influenciar a resposta
imunolgica mediada por linfocitos T.
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Reaco imunolgica
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Diagnstico : Cultura
Peas de bipsia endoscpica da mucosa
gastroduodenal,
gastroduodenal,
Cultura em meios especficos em microaerofilia (5% de O2 e 5%
de CO2), sendo os isolados caracterizados pela presena de
enzimas (urease, catalase e oxidase).
O crescimento de colnias com reaco fortemente urease
positivas pode ser observado em 48 a 72 horas sendo a
sementeira feita em meios do tipo Brucella agar com sangue de
carneiro.
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Diagnstico: Cultura
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Diagnstico: Exame Directo

Gram: bacilos Gram
negativos pouco corados e
com uma curvatura tpica.
Lminas coradas por
mtodos panpticos
(Hematoxilina-eosina,
Gram, Giemsa) bactrias
encurvadas Gramnegativas na mucosa
gstrica.
Como a colonizao da mucosa

focal, um resultado de bipsia
negativo no deve excluir a
possibilidade de infeco.
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Fluxograma de Diagnstico
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Serologia
A determinao de anticorpos
especficos (IgG e IgA) no plasma
ou saliva por E.L.I.S.A.
importante no diagnstico, estando
ainda em fase de desenvolvimento
comercial.
Sobretudo a pesquisa de IgA
parece ser muito especfica e
sensvel, sendo um mtodo ideal,
porque no invasivo, e reflectindo a
imunidade mucosa e sistmica
induzida pela infeco pelo H.
pylori.
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Deteco da Urease
Prtico
No invasivo
efectuado no ar expirado, a
seguir administrao oral de
ureia marcada com um composto
radioactivo (C14 ou C13).
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CLOtest
CLO (Campylobacter-like
organisms) executado
colocando uma amostra de
mucosa biopsada num meio
contendo ureia e um indicador
de pH, que muda de cor na
presena de ies OH-.
Nenhum dos dois testes especfico para H. pylori j no

distingue a infeco causada por outros organismos
semelhantes, como Flexispira rappini, que podem infectar
ocasionalmente o estmago humano.
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Helicobacter:
rendimento dos testes de diagnstico
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21
Diagnstico
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Profilaxia e tratamento
Embora H. pylori seja sensvel a muitas drogas in vitro
a sua erradicao do estmago muito difcil.
No havendo medidas profilticas especficas nem
vacina eficaz, o tratamento com antibiticos, simples
em associao com outros antibiticos e sais de
bismuto tem resultados com grandes taxas de cura.
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Tratamento
A aquisio de resistncia, por ex.. ao Metronidazol,
Metronidazol, parece ser
frequente.
A ttulo indicativo, um regime que parece ser consensual,
implica a administrao de uma combinao de dois ou trs
antibiticos durante pelo menos uma semana. Amoxicilina (ou
Tetraciclina) mais Metronidazol e subsaliciclato de bismuto,
quatro vezes ao dia durante 2 a 4 semanas uma combinao
frequentemente usada com sucesso.
A juno a estes regimes de tratamento de inibidores da
secreo gstrica cida, quer bloqueadores dos receptores H2,
quer da bomba de protes (antagonistas H+, K+ e ATPase),
ATPase), est
em fase de experimentao clnica.
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22
Helicobacter:
Vantagens da tripla terapia
Recurrence rate of gastric ulcers and duodenal ulcers after successful healing with triple antimicrobial therapy
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PalavrasPalavras-Chave:
Helicobacter pylori
Campylobacter,
Bacilos gramgram-negativos
espiralados e
microaeroflicos
Gastrite, lcera pptica
Bipsia endoscpica,
Anticorpos plasmticos,
Testes no ar expirado,
Tratamento com
combinaes de antibiticos
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Helicobacter
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0.2 to 0.9 m por 0.5 to 5 m

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Mais sensveis s radiaes que outros agentes de

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Hipoclorito de sdio (Clorox)

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MantmMantm-se viveis em sais biliares a 37oC

Susceptveis congelao: populao celular

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Infeco por Campylobacter spp

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Alguns dias Mais de uma semana

C. jejuni and C. Coli so

Dose infectante e populao

O ambiente gstrico mata a maioria

Duas estirpes diferentes (A3249 and 81-176)

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Dose infectante e populao

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Toxina cleraclera-like (?)

3 subunidades idnticas 68, 54, and 43 kDa

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As amostras alimentares tm que ser adequadamente

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Enriquecimento em meios selectivos, contendo sangue

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Incapacidade de fermentar ou oxidar a glucose

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Relao entre H. pylori, gastrite e serologia

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Infeco X Rendimento X Idade