Equipo 1-B
P g i n a 1 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 2 | 73
Equipo 1-B
Equipo 1-B
Equipo 1-B
P g i n a 5 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 6 | 73
Equipo 1-B
Equipo 1-B
FUNDAMENTO:
Gram, bacterilogo dinamarqus, descubri en 1884, que algunos grmenes
(Gram positivos) contienen ciertos elementos qumicos en gran cantidad,
peptidoglicano, en su membrana dispuestos estructuralmente en forma muy
diferente a la de otros (Gram negativos) y forman con los colorantes derivados de
la rosanilina (violeta de genciana, cristal violeta) ms el yodo, un compuesto que
resiste la accin de decolorantes (alcohol absoluto, alcohol acetona).
Est tincin utiliza cuatro reactivos que son: Cristal Violeta, lugol o yodo de
Gram, etanol acetona al 95% y safranina. El cristal violeta que es el colorante
inicial tie a todos los microorganismos, a que es un colorante bsico, en segundo
lugar est el yodo que acta como mordiente para aumentar la afinidad entre el
P g i n a 8 | 73
Equipo 1-B
Portaobjetos.
Asa bacteriolgica.
Mechero Bunsen.
Microscopio.
Puente de tincin.
Aceite de inmersin.
Desinfectante.
Solucin salina.
Cristal violeta.
Lugol de Gram.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Cepa:
Staphylococcus
aureus, muestra de exudado
farngeo.
P g i n a 9 | 73
Equipo 1-B
INTERPRETACIN
Microorganismos color azul-violeta: Gram positivos.
Microorganismos color rosado: Gram negativos.
TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN
Portaobjetos.
Asa bacteriolgica.
Mechero Bunsen o lmpara de
alcohol.
Microscopio.
Aceite de inmersin.
Puente de tincin.
Desinfectante.
Solucin salina.
Fucsina fenicada.
Alcohol-cido.
Azul de metileno.
Muestra: Esputo de paciente.
INTERPRETACIN
Microorganismos color rosa son conocidos como BAAR (Bacilos cido Alcohol
Resistentes). Esta tincin es utilizada principalmente para identificar el agente
causal de la tuberculosis.
La tincin Ziehl-Neelsen requiere cuatro colorantes:
1.
2.
3.
4.
P g i n a 10 | 73
Equipo 1-B
1. Se toma
una asada de
la colonia, o
una pequea
alcuota del
cultivo lquido.
3. Dejar secar
el frotis. Y
fijarlo por calor.
5. Enjuagar al
chorro de agua.
2. Se realiza
una extensin
en un
portaobjetos
limpio y
desengrasado.
4. Colocar en
una varilla de
tincin; y
agregar Cristal
Violeta y dejar
actuar por 1 a 2
minutos.
6. Agregar la
solucin de
Yodo-Lugol. Y
dejar actuar por
30 segundos.
P g i n a 11 | 73
7. Enjuagar al
chorro de agua.
Decolorar con
alcohol-cetona
durante 30
segundos.
9. Enjuagar al
chorro de agua.
11. Agregar
una gota de
aceite de
inmersin.
Equipo 1-B
8. Agregar
safranina y
dejar por 30
segundos.
12. Observar
al
microscopio
en objetivo de
100x.
RESULTADOS.
Tincin de Gram.
Cepa: Staphylococcus aureus (paciente desconocido) = Gram positivos.
Muestra: exudado farngeo (paciente Rafael Snchez Barradas) = Sin
presencia de bacterias de inters.
Tincin de Ziehl-Neelsen.
Muestra: Esputo de paciente = No BAAR.
P g i n a 12 | 73
Equipo 1-B
OBSERVACIONES.
Paciente: Desconocido.
Muestra: Del Lab. De Microbiologa de la
UV, Facultad de QFB Xalapa.
Tincin: Gram.
Visto a: 100 X.
Bacteria: Staphylococcus aureus.
Observaciones: micrococos gram positivos,
agrupados y dispersos.
P g i n a 13 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN:
Despus de observar macroscpicamente la morfologa colonial es muy
importante realizar las tinciones como tcnica de identificacin y clasificacin de
las bacterias cuando no sabemos qu clase de microorganismo es el que estamos
observando, esto en base a su morfologa y a su diferenciacin con otros agentes
al momento de tomar un color especfico, para luego comparar nuestras
observaciones y la teora para dar un diagnstico acertado.
BIBLIOGRAFA:
Ingraham John, Ingraham Catherine. (1998). Introduccin a la microbiologa.
Editorial Revert.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
P g i n a 14 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 3
CLASIFICACIN Y PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVO:
FUNDAMENTO:
Un medio de cultivo es una solucin equilibrada de todos los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios para el desarrollo y la multiplicacin de los
microorganismos en el laboratorio. Para promover el desarrollo microbiano, los
medios de cultivo deben reunir ciertos requisitos: contener nutrientes adecuados,
poseer humedad suficiente, tener un pH ajustado y estar estril inicialmente.
Los medios de cultivo se pueden clasificar en cuatro grupos generales:
Equipo 1-B
Medios de cultivo
(ejemplos)
Agar sangre
Agar chocolate
No selectivos
Agar de Mueller-Hinton
Tioglicolato
Agar dextrosaSabouraud
Agar MacConkey
Selectivos,
diferenciales
Agar xilosa-lisinadesoxicolato
Medio de LowensteinJensen
Agar Middlebrook
CHROMagar
Especializados
Agar de levaduras
inhibidor
Agar extracto de
levadura con carbn
tamponado (BCYE)
Agar cistina-telurita
Objetivo
Recuperacin de
bacterias y hongos.
Recuperacin de
bacterias, incluidas
Neisseria gonorrhoeae y
Haemophilus.
Medio de estudio para la
susceptibilidad
bacteriana.
Medio de
enriquecimiento para las
bacterias anaerobias.
Recuperacin de
hongos.
Selectivo para las
bacterias gramnegativas;
diferencial para las
especies que fermentan
la lactosa.
Selectiva para los
estafilococos; diferencial
para S. aureus.
Agar diferencial selectivo
para Salmonella y
Shigella en cultivos
entricos.
Selectivo de
micobacterias.
Selectivo de
micobacterias.
Selectivo, diferencial
para las levaduras.
Selectivo para los
hongos.
Recuperacin de
Legionella y Nocardia.
Recuperacin de
P g i n a 16 | 73
Equipo 1-B
Corynebacterium
diphtheriae.
Recuperacin de
Medio de cultivo LIM
Streptococcus
(lisina-indol-movilidad)
agalactiae.
Recuperacin de
Agar sorbitol MacConkey
Escherichia coli O157.
Recuperacin de
Agar Regan Lowe
Bordetella pertussis.
Agar sacarosa sales
Recuperacin de
biliares tiosulfato citrato especies de Vibrio.
(TCBS)
MATERIAL:
TCNICA:
Equipo 1-B
(40 )(400 )
=
1000
(111 )(400 )
= .
1000
(36 )(400 )
= .
1000
P g i n a 18 | 73
Equipo 1-B
AGAR BIGGY
45 g 1000 mL
X 400 mL
(45 )(400 )
=
1000
(30 )(90 )
= .
1000
A nuestra mesa de trabajo nos toc realizar el agar sangre el cual contiene:
Infusin de msculo de corazn
2.0 g
Digerido pancretico de casena 13.0 g
Extracto de levadura
5.0 g
Cloruro de sodio
5.0 g
Agar bacteriolgico
15.0 g
pH final 7.3 0.2
Mtodo de preparacin: suspender 40 g del medio en un litro de agua
purificada. Calentar con agitacin suave hasta completa disolucin del polvo y
hervir durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lb de presin) durante
15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50C y aadir sangre estril y
desfibrinada al 5%. Homogeneizar y vaciar en placas Petri estriles.
OBSERVACIONES:
P g i n a 19 | 73
Equipo 1-B
En lo que se proceda a
esterilizar los medios de cultivo,
se realiz la tcnica de
flebotoma para obtener la
sangre que se agregara al agar
chocolate y al agar sangre. Se
obtuvieron aproximadamente 10
mL para agregar a cada agar.
CONCLUSIN:
La preparacin de medios del cultivo es una herramienta fundamental en el
laboratorio de Bacteriologa porque nos ayuda a identificar, aislar y dar un posible
diagnstico sobre enfermedades producidas por microrganismos como bacterias
principalmente y hongos. Debe mencionarse que se necesita saber de otros
conocimientos adquiridos en otras experiencias educativas, por ejemplo, la
flebotoma, ya que para realizar la preparacin del agar sangre y chocolate se
necesita sangre.
BIBLIOGRAFA:
Murray, P. (2009). Microbiologa Mdica. Captulo 15. Cultivo in vitro: principios y
aplicaciones. 6 edicin. ELSEVIER. Espaa. Pp: 161-164.
Negroni, M. (2009). Microbiologa estomatolgica. Fundamentos y gua prctica. 2
edicin. Editorial Mdica Panamericana. Argentina. Pg. 551.
P g i n a 20 | 73
Equipo 1-B
FUNDAMENTO:
El anlisis del exudado farngeo se basa en la diferenciacin entre las
bacterias patgenas y flora normal del tracto respiratorio superior del paciente,
apoyndose en medios de cultivo selectivos y de enriquecimiento, as como el
anlisis microscpico y macroscpico de las colonias bacterianas. El cultivo
farngeo es el mtodo estndar para documentar la presencia de S. pyogenes en
la faringe, esta prueba alcanza una sensibilidad del 90 a 95%.
Flora habitual y patgenos respiratorios
Posibles patgenos
Flora normal
Patgenos definitivos
respiratorios
Estreptococos betahemolticos
Corynebacterium
Estreptococos del
Haemophilus influenzae
diphtheriae
grupo viridans
Haemophilus
Bordetella pertussis
Estafilococos
parainfluenzae
Micrococos Mycoplasma
coagulasa negativo
Streptococcus
pneumoniae
Corynebacterium sp.
pneumoniae
Streptococcus pyogenes
Neisseria sp. (no
Neiserias patgenas
patgenas)
Estreptococos beta
Moraxella catarrhalis
Lactobacillus sp.
hemolticos grupos
Enterobacterias
Veillonella sp.
B,C,G,
Fusobacterium sp.
Neisseria gonorrhoeae
Espiroquetas
Bacteroides sp.
Actinomyces sp.
MATERIAL:
Hisopos estriles.
Frasco con benzal.
Colorantes para la tincin de
Gram.
Aceite para inmersin.
Microscopio.
Portaobjetos.
Cajas Petri
Agares: chocolate, sangre,
EMB y sal y manitol.
Caldo de Todd-Hewitt
P g i n a 21 | 73
Equipo 1-B
TCNICA:
Obtencin de la muestra: exudado farngeo
Condiciones previas del paciente
El paciente no debe haber recibido antibiticos en los ltimos 8 das,
previos a la obtencin de la muestra.
El paciente debe acudir en ayunas al laboratorio.
Debe cepillarse los dientes y no practicar gargarismo.
1. Ubicar al paciente en una posicin cmoda y con buena iluminacin,
deprimir la lengua con el abate lengua, visualizar la fosa amigdalina y
faringe en busca de exudado posterior, presencia de pseudomembrana o
placas.
2. Indicar al paciente que abra la boca y que pronuncie un largo ah, el cual
sirve para elevar la vula y evitar las nuseas.
3. Introducir el hisopo y frotar enrgicamente ambas amgdalas y la pared
posterior de la faringe con movimientos de barrido.
4. Retirar el hisopo cuidando de no tocar las paredes laterales de orofaringe,
vula, lengua, encas y dientes.
5. Extender la muestra con suaves movimientos sobre la superficie de los
portaobjetos para realizar la tincin de Gram.
6. Estriar sobre los medios de cultivo.
7. Incubar las cajas Petri a 37C
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Equipo 1-B
P g i n a 23 | 73
Equipo 1-B
Tincin de Gram
P g i n a 24 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN:
En base a la observacin de la morfologa macroscpica de los medios de
cultivo, como el viraje, borde y color de las colonias, hubo presencia de
Streptococcus tipo C, ya que hubo crecimiento bacteriano en el agar sangre,
chocolate y sal y manitol. Al realizar el frotis, no se pudo observar los cocos
porque la calidad de la imagen fue psima y no se vea con claridad.
BIBLIOGRAFA:
Araque MC, Araujo E, Longa A, Ramrez, AC, Snchez K, Velasco E. (2008).
Manual prctico de bacteriologa clnica. Universidad de Los Andes. 1
edicin. Editorial Venezolana C.A. Venezuela. Pp. 31-46.
Murray P, Rosenthal K, Kobayashi G, Pfaller M. Microbiologa mdica. Texto Atlas
Color. 4 ed. Espaa: Mosby Elsevier Science; 2002.
P g i n a 25 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA No. 5
DETECCIN DIRECTA DE ANTGENOS MICROBIANOS.
ANTIESTREPTOLISINA O
OBJETIVO:
Que el alumno lleve a cabo el mtodo para identificar anticuerpos contra
estreptolisina O, una sustancia producida por las bacterias estreptococos
del grupo A.
FUNDAMENTO:
Las enfermedades infecciosas pueden ser diagnosticadas definitivamente
solo por tres formas:
1) Demostrar la presencia en el paciente de un agente conocido capaz de
provocar la enfermedad, por observacin directa en el material clnico
obtenido del paciente o por cultivo de laboratorio (in vivo o in vitro)
2) Deteccin de un producto especfico del agente infeccioso (que no pueda
formarse sin la presencia del agente) en el material clnico obtenido del
paciente
3) Deteccin en el suero del paciente de una respuesta inmunolgica
especfica dirigida contra el agente infeccioso.
Caractersticas de los Anticuerpos:
Mecanismo determinado genticamente.
Dirigidos contra un antgeno o determinante antignico (eptope).
Los microorganismos pueden contener numerosos determinantes
antignicos.
Habr por lo tanto numerosos anticuerpos para cada antgeno.
Muchos determinantes antignicos requieren ser expuestos.
Reacciones de Aglutinacin.
Cuando el antgeno libre o unido a un soporte se enfrenta al anticuerpo, el
complejo antgeno-anticuerpo resultante se observa como una aglutinacin. El
proceso tiene dos fases: unin reversible y aglutinacin por formacin de puentes
entre los anticuerpos IgG divalentes o IgM multivalentes y los antgenos. Los
anticuerpos IgM son ms eficaces para aglutinar (Anticuerpos completos). Los
anticuerpos IgG a veces producen entrecruzamientos (Anticuerpos incompletos).
P g i n a 26 | 73
Equipo 1-B
Muestra.
Utilizar suero. Los sueros, conservados a 2-8C, mantienen su actividad
durante 2 das.
No utilizar sueros hemolizados. No utilizar sueros altamente lipmicos pues
podran dar una aglutinacin no especfica.
P g i n a 27 | 73
Equipo 1-B
TCNICA:
Mtodo cualitativo
1. Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente.
2. Homogeneizar el reactivo 1 ASO-ltex, con agitacin suave.
3. Comprobar la funcionalidad del reactivo mediante los controles positivo y
negativo (ver procedimiento a continuacin).
4. Dosificar 50 mL (1 gota) de suero muestra a analizar en un crculo del porta,
SIN DILUIR.
5. Aadir, aliado de la anterior, una gota de R1 ASO-ltex
6. Mezclar las dos gotas mediante agitacin y extenderlas por todo el crculo.
7. Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 RPM) Y observar la
aparicin o ausencia de aglutinacin exactamente al cabo de 2 minutos. El
exceso del tiempo de reaccin podra dar lugar a falsos resultados.
Mtodo semicuantitativo
Siguiendo la metdica cualitativa, se proceder con diluciones del suero
muestra con solucin salina (NaCI 9 g/L).
INTERPRETACIN
Valores normales.
Adultos: < 200 UI/mL.
Los valores superiores a 200 UI/mL se encuentran en pacientes con recientes
enfermedades debidas a Streptococcus del grupo A, -hemolticos.
P g i n a 28 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
P g i n a 29 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN.
Los estudios microbiolgicos y/o bacteriolgicos de laboratorio son muy
importantes para llegar a un diagnstico y tratamiento adecuado a una
enfermedad especfica. En este caso el mtodo utilizado de deteccin de
antgenos microbianos, ayuda al mdico a dar un medicamento especfico de
acuerdo al agente patgeno que est causando la enfermedad en el paciente,
puesto que, de alguna manera el anticuerpo ASO (por sus siglas en ingls) se
puede encontrar en la sangre durante semanas o meses despus de que la
infeccin por estreptococos haya desaparecido. Nuestro resultado fue negativo,
siendo as que la paciente no presenta alguna infeccin por estreptococos
reciente.
BIBLIOGRAFA.
Assimeh, S.N., Johnson, P.M. J. (1980). lmmunnol. Methods. EUA: Academic
Press. Pp. 1970-1973.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
P g i n a 30 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 6
CULTIVO DE EXUDADO TICO
OBJETIVO:
FUNDAMENTO:
La mayor parte de las infecciones del odo afectan el conducto auditivo
externo (otitis externa) o la cavidad media (otitis media) que contiene los
huecesillos y est rodeada por otras estructuras seas y la membrana timpnica.
La otitis es una enfermedad del odo caracterizada por inflamacin de la mucosa
del odo externo, medio o interno (mastoides), perforacin de la membrana
timpnica y otorrea.
La microbiota general del odo externo es similar a la de la piel,
predominando Staphylococcus (coagulasa-negativo) y miembros del gnero
Corynebacterium. Con menos frecuencia se observan especies de Bacillus,
Micrococcus y Neisseria. En esta localizacin se han aislado tambin otros
microorganismos que colonizan la piel en forma transitoria como Streptococcus
pneumoniae, P. aeruginosa y especies de la familia Enterobacteriaceae, entre
ellos, los gneros Proteus, Escherichia, Enterobacter y Klebsiella. Estudios
micolgicos demuestran que los siguientes gneros de hongos pertenecen a la
microbiota normal: Aspergillus, Alternaria, Penicillium, Candida y Saccharomyces.
Algunos de los agentes etiolgicos ms frecuentes de infecciones ticas se
muestran en la tabla que se muestra a continuacin:
Agentes etiolgicos ms frecuentes de otitis
Cuadro clnico
Agente etiolgico
Pseudomonas aeruginosa.
Proteus.
E. coli.
Otitis externa
S. aureus.
Aspergillus.
Streptococcus pneumoniae.
Otitis media aguda
Estreptococos del grupo B.
Haemophilus influenzae.
< 3 meses de edad
S. aureus.
P. aeruginosa
P g i n a 31 | 73
Equipo 1-B
Streptococcus pneumoniae.
Haemophilus influenzae.
Streptococcus pyogenes.
Moraxella catarrhalis.
S. aureus.
P. aeruginosa.
Haemophilus influenzae.
S. aureus.
Proteus.
K. pneumoniae.
Moraxella catarrhalis.
Bacterias anaerobias
grampositivas y gramnegativas.
Igual que la otitis media crnica.
MATERIALES:
Hisopos estriles.
Benzal diluido 10%
Solucin salina fisiolgica estril.
Medios de cultivo: agar sangre, agar EMB, agar Vogel-Johnson, agar
CLED.
Gasas.
Colorantes para tincin de Gram.
TCNICA:
1. Limpiar el canal auditivo externo con un hisopo impregnado con solucin de
benzal con una gasa.
2. Humedecer varios hisopos estriles con solucin salina igualmente estril y
tomar la muestra del conducto auditivo externo de cada odo.
3. Introducir el hisopo siguiendo una direccin oblicua de atrs hacia delante y
de abajo hacia arriba.
4. Girar el hisopo con cautela unas cinco veces para obtener la muestra.
5. Realizar un examen directo y colorearlo con la tincin de Gram con muestra
proveniente de cada odo, los hisopos se descartan una vez utilizados.
P g i n a 32 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
P g i n a 33 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 34 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN:
Se realiz la siembra de la muestra del exudado tico y no hubo crecimiento
por lo cual, el paciente se encuentra sano. Se cumpli con el objetivo de realizar la
toma de muestra del exudado tico, aunque no hubo crecimiento bacteriano,
adems es importante conocer la metodologa que se realiza para conocer los
posibles agentes infecciosos en el odo para diagnosticar e iniciar un tratamiento lo
antes posible.
BIBLIOGRAFIA:
Araque MC, Araujo E, Longa A, Ramrez, AC, Snchez K, Velasco E. (2008).
Manual prctico de bacteriologa clnica. Universidad de Los Andes. 1
edicin. Editorial Venezolana C.A. Venezuela. Pp. 65-77.
Murray P, Rosenthal K, Kobayashi G, Pfaller M. Microbiologa mdica. 4 ed.
Espaa: Mosby; 2004.
Prescott L, Harley J, Klein D. Microbiologa. 4 ed. Madrid: McGraw-Hill; 2000.
P g i n a 35 | 73
Equipo 1-B
FUNDAMENTO:
En el saco conjuntival existe una microbiota habitual relativamente escasa.
Entre los microorganismos que se encuentran con mayor frecuencia se citan:
Staphylococcus epidermidis, Lactobacillus sp. y Corynebacterium sp. Entre 0-30%
de las personas son portadores de S. aureus y Haemophilus influenzae no
tipificables en 0,4-25%. En un pequeo porcentaje de individuos se presentan
Moraxella catarrhalis, algunas Enterobacterias, S. pyogenes, S. pneumoniae, otros
alfa y beta-hemolticos.
La conjuntivitis es una de las causas ms frecuentes de enfermedad ocular.
Se define como un estado inflamatorio de la conjuntiva, con hiperemia conjuntival
(dilatacin de los vasos sanguneos) o con hemorragia subconjuntival. La
conjuntivitis aguda es la presentacin clnica ms comn, segn su etiologa se
clasifica en:
P g i n a 36 | 73
Equipo 1-B
MATERIALES:
TCNICA:
Condiciones previas del paciente
No aplicarse tratamientos tpicos.
No estar recibiendo tratamientos antimicrobianos.
No lavarse los ojos para el momento de la obtencin de la muestra.
En el caso de conjuntivitis, la muestra se obtendr del ngulo interno del ojo.
1. Con el asa o hisopo rotar suavemente en el ngulo interno del ojo unas 5
veces.
2. Cultivar el exudado de cada ojo por separado en una misma placa.
3. Incubar a 36 C, por 24 h hasta 72 h.
4. Obtener muestras de cada ojo para realizar los preparados directos en
lminas para teir con Gram y Giemsa.
P g i n a 37 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
P g i n a 38 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN:
Se realiz la siembra de la muestra del exudado conjuntival y no hubo
crecimiento de patgenos, por lo cual, el paciente se encuentra sano. Aunque los
medios se contaminaron de algn microorganismo ajeno a los cultivos, dndonos
colonias amarillas bien definidas. Se cumpli con el objetivo de realizar la toma de
muestra de exudado conjuntival, aunque no hubo crecimiento bacteriano, adems
es importante conocer la metodologa que se realiza para conocer los posibles
agentes infecciosos en la conjuntiva para diagnosticar e iniciar un tratamiento lo
antes posible.
BIBLIOGRAFIA:
Araque MC, Araujo E, Longa A, Ramrez, AC, Snchez K, Velasco E. (2008).
Manual prctico de bacteriologa clnica. Universidad de Los Andes. 1
edicin. Editorial Venezolana C.A. Venezuela. Pp. 79-89.
Murray P, Rosenthal K, Kobayashi G, Pfaller M. Microbiologa mdica. 4 ed.
Espaa: Mosby; 2004.
Prescott L, Harley J, Klein D. Microbiologa. 4 ed. Madrid: McGraw-Hill; 2000.
P g i n a 39 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 8
DETERMINACIN DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS POR INMUNOENSAYO
OBJETIVO:
Que el alumno determine de forma cualitativa Chlamydia trachomatis por el
mtodo de inmunoensayo.
FUNDAMENTO:
El examen est basado en la investigacin de Chlamydia trachomatis como
agente patgeno en el raspado conjuntival por lo que se emplea
inmunofluorescencia directa y tincin de Giemsa.
Las clamydias son bacterias INTRACELULARES OBLIGADAS que se
diferencian de otras bacterias por su morfologa y por presentar un ciclo de
desarrollo nico durante el cual se pueden observar dos formas, una adaptada a
vivir extracelularmente llamada CUERPO ELEMENTAL que mide entre 200 y 400
nm de dimetro, es inefectivo, es antignico, resistente a la tripsina y la otra es
llamada CUERPO RETICULAR o CUERPO DE INFUSIN, que mide entre 600 y
1500 nm de dimetro no es inefectivo, es lisado por la tripsina y no es letal para el
ratn.
El gnero chlamydia est constituido por tres especies: C. trachomatis, C.
Psittaci y C. Pneumoniae que pueden diferenciarse en base a su susceptibilidad a
las sulfonamidas a la morfologa de los cuerpos elementales y de los cuerpos
reticulares, a la presencia de glucgeno en las inclusiones, al husped que
infectan, a la homologa de su DNA y a la presencia de DNA plasmdico.
C. trachomatis es un patgeno exclusivo del hombre, se han descritos tres
biovares con 15 serovares, que estn relacionados como enfermedades en el
humano. El biovar linfogranuloma venereum es el agente de linfogranuloma
venreo que es una enfermedad que se transmite por contacto sexual y se
caracteriza por presentar una inflamacin granulomatosa de los cambios linfticos
en las regiones inguinal y rectal.
MATERIAL:
Materiales provedos.
Dispositivo de prueba empacado en una bolsa sellada.
Reactivo de extraccin A (cido) y B (alcalino).
Manual de instruccin.
P g i n a 40 | 73
Equipo 1-B
Grupo MexLab
Chlamydia Test
Prueba rpida
Procedimiento de extraccin.
1. Agregue 9 gotas de reactivo A en un tubo limpio.
2. Inserte el hisopo que contenga la muestra dentro del tubo y talle el hisopo
10 veces.
3. Espere 2 minutos y talle el hisopo 10 tiempos. Se requiere un tiempo mayor
si las muestras son muy pegajosas.
P g i n a 41 | 73
Equipo 1-B
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Resultado positivo: Si la banda de prueba (marcada con una T) aparece.
Usualmente la banda T aparece son unos minutos si est positiva. Se presentan
dos bandas.
Resultado negativo: Si no hay lnea de color mostrada dentro de 10 minutos en la
zona T. Se presenta una banda.
Resultado invlido: Si el color de la banda no aparece en la zona de control C, el
resultado de la prueba ser invlido. La muestra pudo haber sido aadido en la
ventana equivocada, o el dispositivo de prueba pudo haber deteriorado. El
espcimen debe ser re-analizado usando un dispositivo nuevo.
P g i n a 42 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
P g i n a 43 | 73
Equipo 1-B
BIBLIOGRAFA.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
Grupo MexLab. (2010). Chlamydia Test: Prueba rpida. Mxico: Grupo Industrial
Mexlab S. A. de C. V.
P g i n a 44 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 45 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA No. 9
CULTIVO DE MATERIAL DE VAS REAS INFERIORES, CULTIVO DE
EXPECTORACIN
OBJETIVO:
El alumno realizar cultivos de muestra de vas areas inferiores,
particularmente de expectoracin para la posible identificacin de bacterias
patgenas de acuerdo a los resultados macroscpicos y microscpicos.
FUNDAMENTO:
A pesar de las crticas de su sensibilidad, especificidad y fiabilidad, la tincin
de Gram y el cultivo del esputo son una herramienta importante en la evaluacin
microbiolgica y/o bacteriolgica no invasiva de la neumona. Los mtodos de
recoleccin de esputo y la contaminacin orofarngea son el principal problema a
resolver para aumentar la fiabilidad. Primero, la obtencin del esputo requiere la
cooperacin del paciente y la supervisin por personal calificado para obtener una
muestra adecuada.
Una proporcin importante de los pacientes con neumona son incapaces de
producir una muestra adecuada. Esta dificultad ha hecho desarrollar tcnicas
especficas para inducir el esputo, que son particularmente tiles y coste-efectivas
en pacientes con SIDA y neumona por Pneumocystis carinii. Adems, el esputo
inducido se ha mostrado til en el diagnstico microbiolgico de infecciones
debidas a organismos distintos a P. carinii.
Cualquiera que sea el mtodo de recogida, el esputo es una mezcla de
secreciones del tracto inferior con una cantidad variable de secrecin orofarngea.
Por tanto, una valoracin y procesamiento adecuados representan un paso
obligado antes del cultivo.
MATERIAL:
Cajas Petri (40 por todo el
grupo).
Equipo de tincin de Gram.
Hisopos.
Asa bacteriolgica.
Microscopio.
Portaobjetos.
Agar Sangre.
Agar Gelosa Chocolate.
Agar McConkey.
Agar Sal y Manitol.
Agar Biggy.
P g i n a 46 | 73
Equipo 1-B
TCNICA:
Cultivo.
1. Seleccionar la porcin de la muestra ms purulenta o que contenga sangre.
2. Utilizando un hisopo estril o un aplicador de madera inocular la muestra en
un extremo de la superficie de las placas con los medios de cultivo.
3. Utilizando el asa de siembra y tomando como referencia central el inoculo
de la muestra, realizar la siembra por dispersin agotamiento en cuatro
cuadrantes de la placa, con el propsito de obtener colonias aisladas
4. Incubar las placas con los medios de cultivo a 35 37 C por 24 a 48 horas.
5. Si no hay crecimiento a las 24 horas seguir incubando hasta por 48 horas.
Frotis.
1. Seleccionar la porcin ms purulenta de la muestra que contenga sangre.
2. Suavemente extenderla en la lmina portaobjetos.
3. Dejar secar el frotis al aire, de preferencia dentro de una cabina de flujo
laminar.
4. Fijar con metanol y colorearlo por Gram.
5. Usar bajo aumento (10 X) para examinar el frotis y la determinacin de
polimorfonucleares y clulas escamosas (100 X).
Lectura a las 24 horas.
Si no hubiera crecimiento incubar por 24 horas ms.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Tomar la muestra
Rotar el aza en cada una de las zonas de las placas.
Incubar los cultivos a 37 C durante 24 h.
Fijar el frote y teirlo con el mtodo de Gram. Hacer la observacin
microscpica con el objetivo de l00X.
Al terminar la incubacin de los medios utilizado, observar la morfologa
colonial: microscpica, identificar la flora aislada y si se encuentran
microorganismos flora patgena realizar sensibilidad a lo antibiticos.
Hacer las observaciones correspondientes, del crecimiento de cada una de
las ajas. Dibujar los campos observados en el microscopio.
Identificar las colonias.
Hacer un reporte del resultado del paciente.
P g i n a 47 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS.
Agar sangre: Sin crecimiento bacteriano o algn tipo de microorganismo
que haya crecido (contaminacin).
Agar gelosa chocolate: Sin crecimiento bacteriano o algn tipo de
microorganismo que haya crecido (contaminacin).
Agar McConkey: Sin crecimiento bacteriano o algn tipo de
microorganismo que haya crecido (contaminacin).
Agar Sal y Manitol: Sin crecimiento bacteriano o algn tipo de
microorganismo que haya crecido (contaminacin).
Agar Biggy: Sin crecimiento bacteriano o algn tipo de microorganismo
que haya crecido (contaminacin).
Nota: Se dejaron incubar 24 horas las cajas y posteriormente, 48 horas ya que no
se presentaba crecimiento alguno.
OBSERVACIONES.
P g i n a 48 | 73
Equipo 1-B
No se observaron clulas
polimorfonucleares ni escamosas.
Esta imagen representa la tincin
de Gram hecha antes del cultivo
de la muestra de expectoracin.
El paciente es desconocido. Visto
a 10 X.
No se observaron clulas
polimorfonucleares. Pero si se
puede observar una clula
escamosa, la cual est sealada.
Esta imagen es de la tincin de
Gram hecha de la muestra a las
48 hrs. Visto a 100 X.
P g i n a 49 | 73
Equipo 1-B
CONCLUSIN:
No se tuvo crecimiento bacteriano alguno, por lo que no se pudo observar la
morfologa colonial. Esperbamos que a lo mejor la muestra estuviese
contaminada, pero tampoco lo que nos indica que el procedimiento llevado a cabo
durante la siembra de la muestra fue correcto y realizado con las medidas de
esterilidad adecuadas. Suponemos que el paciente no est enfermo de algn tipo
de agente causal que propicie a que tenga alguna patologa referente a las vas
inferiores areas. Por lo que se concluye que ahora sabemos la importancia de
hacer este tipo de anlisis bacteriolgico para descartar enfermedades
respiratorias. As como, siempre tomar las medidas adecuadas en la elaboracin
de este tipo de prcticas. Las tinciones realizadas tampoco dieron muestra alguna
de presencia de microorganismos patgenos.
BIBLIOGRAFA.
Torres A, Mensa J, Niederman M. (1999). Infecciones respiratorias en UCI.
Barcelona: Springer-Verlag Ibrica. Pg. 241.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
P g i n a 50 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 10
UROCULTIVO
OBJETIVO:
FUNDAMENTO:
El diagnstico de laboratorio de una ITU se realiza a travs del urocultivo, el
cual consiste en el cultivo bacteriolgico de la orina para determinar la presencia y
cuantificacin de grmenes patgenos. Para la evaluacin de estos grmenes y
de su potencial importancia en un proceso infeccioso de las vas urinarias es
imperativo conocer los siguientes aspectos:
MATERIALES:
Asa bacteriolgica.
Mechero Bunsen.
Medios de cultivo: agar sangre
y agar McConkey.
P g i n a 51 | 73
Equipo 1-B
TCNICA:
Toma de muestra
P g i n a 52 | 73
Equipo 1-B
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
P g i n a 53 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 11
PRUEBAS BIOQUIMICAS
OBJETIVO:
FUNDAMENTO:
El medio TSI (Triple Sugar Iron/Hierro Triple Azcar) es uno de los medios
ms utilizados para observar la fermentacin de carbohidratos en la familia
Enterobacteriaceae. Para su utilizacin el medio debe estar en forma de pico de
flauta. Se han incorporado a estos medios cuatro derivados proteicos: extracto de
carne, extracto de levadura, peptona y proteosa, que hacen que los medios sean
muy ricos nutricionalmente. La ausencia de inhibidores en el medio permite el
crecimiento de todas las especies bacterianas excepto anaerobios obligados y
otras bacterias exigentes. Por su contenido de sulfato ferroso se puede detectar
cido sulfihdrico. El medio se utiliza en forma de pico de flauta.
En el medio LIA (Lysine Iron Agar/Agar Hierro Lisina) se puede detectar la
produccin de la lisina descarboxilasa, ya que se produce una reaccin coloreada
por un cambio en el pH del medio que contiene como indicador prpura de
bromocresol. Un cambio del color original del medio (prpura) hacia amarillo en el
fondo indica una reaccin cida por la fermentacin de una pequea cantidad de
glucosa en el medio, si el microorganismo produce lisina descarboxilasa la accin
de esta sobre la lisina dar lugar a la cadaverina la cual producir un cambio en el
pH que sobrepasa la acidez debida a la glucosa dando un color prpura, as pues
un fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un color
prpura que si es producida. LIA al igual que en TSI o KIA se puede detectar la
produccin de sulfuro de hierro. El medio se utiliza en forma de pico de flauta.
El medio de Citrato de Simmons, se basa en la capacidad de un
microorganismo de utilizar citrato de sodio como nica fuente de carbono para
metabolismo y crecimiento. Una prueba positiva est representada por la aparicin
de un color azul oscuro en 24 o 48 horas, en el medio originalmente de color
verde, que indica que el microorganismo ha sido capaz de utilizar el citrato
contenido en el medio, con la produccin de productos alcalinos. La prueba
tambin es considerada positiva si hay crecimiento en la lnea de inoculacin, si se
incube 24 horas ms aparecer el color azul. El medio se utiliza en forma de pico
de flauta.
P g i n a 54 | 73
Equipo 1-B
TCNICA:
1. Marcar los tubos con sus nombres correspondientes y el de la bacteria en
estudio. Acomodarlos en serie de la siguiente manera: Urea, TSI, LIA,
citrato, SIM.
2. Inocular cada tubo de acuerdo como sigue:
- TSI: Picar en el medio sin tocar el fondo del tubo ni las paredes y estriar
la superficie.
- MIO: Picar en el medio sin tocar las paredes ni el fondo del tubo.
- LIA: Picar el fondo del tubo dos veces y estriar la superficie.
- CITRATO: Inocular solo la superficie del medio.
P g i n a 55 | 73
Equipo 1-B
3. Tapar los tubos verificando que la rosca de los tapones no estn totalmente
cerrados. Incubar a 37 C por 24 horas.
4. Despus de incubarlos, agregar 2 gotas del reactivo de Kovacs al medio
MIO para observar si cambia de color. Si cambia a color rojo es positivo a
indol.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
Equipo 1-B
Cepas
Citrobacter
Movilidad
+
Indol
Ornitina
Glucosa, lactosa y/o sacarosa
fermentada
-
Enterobacter
Movilidad
+
Indol
Ornitina
Glucosa, lactosa y/o sacarosa
fermentada
+
+ descarboxilacin
P g i n a 57 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 58 | 73
Equipo 1-B
(80 )(59.4 )
= .
1000
CONCLUSIN:
Al realizar las pruebas bioqumicas a 2 cepas diferentes de bacterias, se
llega a la conclusin que un gnero y especie corresponde a Enterobacter
aerogenes y la otra cepa no se puede llegar a una identificacin exacta ya que en
la prueba de citrato dio un resultado negativo y es la nica prueba que evita que el
resultado sea Citrobacter freundii. Para obtener mejores resultados, deben
repetirse stas pruebas y agregar ms para obtener resultados ms confiables,
adems de que debe trabajarse en un ambiente estril y que al momento de
incubar, la estufa no est contaminada.
BIBLIOGRAFIA:
Araque MC, Araujo E, Longa A, Ramrez, AC, Snchez K, Velasco E. (2008).
Manual prctico de bacteriologa clnica. Universidad de Los Andes. 1
edicin. Editorial Venezolana C.A. Venezuela.
Medio MIO. Britania Lab. [En lnea] Recuperado el da 21 de mayo de 2014 de:
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/miomedio.htm
Medio TSI. Britania Lab. [En lnea] Recuperado el da 21 de mayo de 2014 de:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tsiagar.htm
Medio Citrato. Britania Lab. [En lnea] Recuperado el da 21 de mayo de 2014 en:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/simmonscitagar.htm
Medio LIA. Britania Lab. [En lnea] Recuperado el da 21 de mayo de 2014 de:
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lisinahierroagar.htm
P g i n a 59 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA NO. 12
COPROCULTIVO
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO:
El coprocultivo es el estudio de la materia fecal para el aislamiento e
identificacin de bacterias productoras de diarrea. Al realizar un coprocultivo es
importante tener presente la flora bacteriana intestinal. En el intestino delgado, el
duodeno es estril, en el yeyuno aparecen enterococos, lactobacilos y difteroides,
en el leon se suman algunos miembros de la familia Enterobacteriaceae y
anaerobios gramnegativos.En el intestino grueso, la flora habitual constituye el
50% del peso seco de las heces.
Las bacterias anaerobias que se encuentran en mayor proporcin son las
siguientes: Bacteroides 100%, Peptococcus, Fusobacterium, Peptostrepotococcus,
Lactobacillus y Clostridium. Las bacterias anaerobias facultativas o aerobias son
las siguientes: E. coli 100%, Klebsiella y Enterobacter 40 80%, Proteus 5-50%,
Citrobacter sp., Pseudomonas sp., Enterococccus sp. 100%, Staphylococcus 3050%. Esta flora se mantiene en equilibrio por diferentes mecanismos tales como:
produccin de bacteriocinas y sustancias txicas como cidos grasos, entre otras.
Los microorganismos patgenos ms comunes son:
P g i n a 60 | 73
Equipo 1-B
Etapas de un coprocultivo
Equipo 1-B
Muestra de heces
Azul de metileno al 1%
Medios de cultivo: Cary Blair, Caldo Selenito, APA, agar MK, XLD, SS,
TCBS, PM, CIN.
Solucin salina fisiolgica (SSF)
Lminas portaobjetos y cubreobjetos
Colorantes para tincin de Gram
Segundo periodo:
Tercer periodo:
Reactivo de oxidasa
Agar Mueller Hinton
Reactivo de Kovacs
Patrn de MacFarland
Papel de filtro y palillos de madera
Hisopos estriles
Discos de antibiticos
TCNICA:
Primer periodo:
P g i n a 62 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 63 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 64 | 73
Equipo 1-B
P g i n a 65 | 73
Equipo 1-B
Equipo 1-B
S.
de
La
un
MATERIAL.
Cajas Petri.
Asa bacteriolgica.
Microscopio.
Portaobjetos.
Mechero bunsen.
Agar chocolate.
Agar EMB.
Agar sangre.
Equipo para tincin de Gram.
Equipo para tincin de ZiehINielsen.
TCNICA.
1. El lquido cefaloraquideo (LCR) debe ser manejado en condiciones de e
sterilidad, enviando la porcin correspondiente al laboratorio clnico para el estudio
citoqumico.
2. Centrifugar el LCR a 2500 rpm durante 15 minutos y descartar el sobrenadante.
Hacer tres frotis: uno teirlo por la tcnica de Gram, el segundo por Ziehl
Neelsen y el ltimo por tincin negativa (para investigar la posible presencia de
Criptococcus neoformans encapsulado, observarlos en objetivo de inmersin. El
resultado se debe informar de inmediato.
Realizar las pruebas de coaglutinacin para H. intluenzae y S. pneumoniae (si
se cuenta con el equipo).
Inocular en agar sangre, en agar chocolate enriquecido con los factores V y X
para Haemophilus, en EMB; si hay sospecha clnica o los frotis indican la
presencia de hongos, usar el medio Sabouraud y medio Lowestein-Jensen en
caso de Mycobacterium tuberculosis. Incubar a 48 a 72 horas en atmsfera
parcial de CO2.
P g i n a 67 | 73
Equipo 1-B
BIBLIOGRAFA.
Vieusseux, M., Memoire sur la maldie qui a regne a Geneva au printemps de 1805.
J med Chir Pharmacol., 1805. 11: Pg. 163.
Peltola, H., Meningococcal disease: still with us. Rev Infect Dis, 1983. 5(1): Pp. 7175.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
P g i n a 68 | 73
Equipo 1-B
PRCTICA No. 14
HEMOCULTIVO
OBJETIVOS:
El alumno llevar a cabo la realizacin de un hemocultivo para as, verificar
si hay bacterias u otros microorganismos en una muestra de sangre.
El hemocultivo o cultivo microbiolgico de la sangre constituye en los casos
de septicemia, el nico examen que permite su confirmacin
En caso de bacteremia permite aislar el agente causal.
FUNDAMENTO:
Las bacterimias y fungemias se diagnostican por hemocultivo, que consiste en
el cultivo de una muestra de sangre en medios adecuados para recuperar las
bacterias y hongos que son capaces de crecer en medios artificiales.
Para realizar un hemocultivo en un adulto se extrae al paciente entre 10 y 20
mL de sangre sin anticoagulante y se inocula en dos frascos con 50 mL de caldo
de cultivo, uno de los cuales tiene atmsfera aerobia y el otro anaerobia para
permitir el crecimiento de los respectivos microorganismos (Figura 1). La
extraccin debe hacerse mediante una tcnica rigurosamente asptica para evitar
contaminaciones.
Tabla 1. Algunos agentes causales de septicemia.
Frecuentes
Sepsis adquirida
en la comunidad
E. coli y otras
enterobacterias
Neumococo
S. aureus
P g i n a 69 | 73
Poco frecuentes
Meningococo
Salmonelas
gastroentricas
Anaerobios
P. aeruginosa
Salmonella entrica
serovar Typhi
Brucella
Equipo 1-B
Cndida
Bacteroides fragilis y otros
Clostridium perfingens y otros
Corinebacterias
P g i n a 70 | 73
Equipo 1-B
ANTIBIOGRAMA.
Subcultivos: una alcuota del caldo con desarrollo se siembra en un medio
slido, con incubacin de 7 hrs ya hay crecimiento suficiente para ser utilizado
como inculo para las pruebas de sensibilidad.
Los organismos aislados de hemocultivos deben guardarse por algunas
semanas en caso que se necesiten mayores estudios diagnsticos.
PRINCIPALES PATGENOS CAUSANTES DE BACTEREMIA
La bacteremia normalmente es causada por: Staphylococcus aureus,
Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli.
La Sepsis se presenta principalmente en pacientes hospitalizados, y
comunmente se desarrolla a partir de un sitio de infeccin primaria.
a) CULTIVOS NEGATIVOS.
Si todos los cultivos, subcultivos y frotis teidos por Gram fueran Negativos, el
cultivo de sangre puede informarse as:
No hubo desarrollo, ni aerobio, ni anaerobio, despus de tres das de incubacin.
Informe Final:
No hubo desarrollo despus de 7 a 14 das de incubacin.
b) CULTIVOS POSITIVOS.
Los patgenos encontrados ms comnmente en cultivos de sangre incluyen
los siguientes:
Especies de Bacteroides, Especies de Brucilla, Bacilos Coniformes, Filarias,
Francisella tularensis, Haemophillus influenzae, Especies de Leptospira, Listeria
monocytogenes,
Paludismo,
Meningococo,
Gonococo,
Rickettsias,
Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus, Streptococcus
pyogenes, Salmonella especies, Tripanosomas, Bacilos Gram negativos: E. coli,
especies de Enterobacter, especies de Klebsiella, etc.
MATERIAL:
Equipo 1-B
Alcohol 70 %.
Placas de selosa Sangre, EMB, agar chocolate, agar sal y manitol.
Material habitual para laboratorio de bacteriologa.
TCNICA:
1. Interrogar al paciente si se encuentra bajo tratamiento con antibiticos.
Consignar esta informacin.
2. Seleccionar la zona que ser puncionada para la extraccin de sangre
(vena palpable).
3. Desinfectar alrededor la zona seleccionada.
4. Lavar cuidadosamente la regin, con agua y jabn (remover el
desinfectante).
5. Aplicar con gasa o algodn, una solucin de yodo sobre el rea
seleccionada en forma concntrica del centro hacia la periferia, y desechar
el algodn o gasa utilizados.
6. Permitir la accin del yodo durante tres a cinco minutos. Remover
completamente la solucin de yodo con gasa o algodn estriles
impregnados en alcohol de 70. Realizar el procedimiento en forma
concntrica descartando siempre la torunda o gasa una vez se llega a la
periferia de la zona de puncin. Repetir este procedimiento cinco veces.
7. No se debe tocar la piel con la mano una vez que el rea ha sido
desinfectada. Antes de hacer la puncin venosa con aguja y jeringa de 10
mL estriles, palpar la vena utilizando guantes desechables y estriles, para
proceder con seguridad.
8. En caso de utilizar recipientes comerciales de hemocultivos, seguir
cuidadosamente las instrucciones de utilizacin del equipo de venoclisis
que usualmente se incluye.
9. Una vez concluida la toma, debe reemplazarse la aguja con la cual se hizo
la puncin, por una aguja nueva estril desechable con la cual se inyectar
la muestra de sangre obtenida en los recipientes. Colocar las cantidades
necesarias de sangre en los recipientes de hemocultivo, previa limpieza y
desinfeccin de la zona de puncin en la tapa de los mismos.
10. Mezclar suavemente los recipientes de hemocultivo. No agitarlos
bruscamente y procurar que la sangre se impregne en todas las superficies
de los medios de cultivo de los frascos.
11. Proceder con actividades propias del estudio (Rotulacin, incubacin 37C,
revisin diaria de cultivos, resiembras, interpretacin de resultados, etc.).
P g i n a 72 | 73
Equipo 1-B
Nota: No se llev a cabo la realizacin de esta prctica, por lo cual slo es terica.
BIBLIOGRAFA:
Prats, G. (2005). Microbiologa clnica. Espaa: Mdica Panamericana. Pp. 291293.
Ramrez Aguilera, Juana. (2012). Manual de laboratorio de Bacteriologa.
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica.
P g i n a 73 | 73