Anda di halaman 1dari 61

LAPORAN RESMI

PRATIKUM DASAR TEKNIK KIMIA 1


Materi :
SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
Oleh :
Kelompok

6 / Jumat

Anggota

MOHAMMAD AFANDI

21030114120043

NAUFARREL KAVIANDHIKA 21030114120036


SEKAR AYU SEPTIANIS

21030114120025

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA 1


JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2014

LAPORAN RESMI
PRATIKUM DASAR TEKNIK KIMIA 1
Materi :
SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
Oleh :
Kelompok

6 / Jumat

Anggota

MOHAMMAD AFANDI

21030114120043

NAUFARREL KAVIANDHIKA 21030114120036


SEKAR AYU SEPTIANIS

21030114120025

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA 1


JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2014

HALAMAN PENGESAHAN
1.

Materi Pratikum

: Spektrofotometri Organik

2.

Kelompok

: 6/Jumat

3.

Anggota

1. Nama Lengkap

: Mohammad Afandi

NIM

: 21030114120043

Jurusan

: S1 Teknik Kimia

Universitas/Institut/Politeknik

: Universitas Diponegoro

2. Nama Lengkap

: Naufarrel Kaviandhika

NIM

: 21030114120036

Jurusan

: S1Teknik Kimia

Universitas/Institut/Politeknik

: Universitas Diponegoro

3. Nama Lengkap

: Sekar Ayu Septianis

NIM

: 21030114120025

Jurusan

: S1 Teknik Kimia

Universitas/Institut/Politeknik

: Universitas Diponegoro

Telah disahkan pada


Hari

Tanggal

Semarang,

Desember 2014

Disahkan oleh
Asisten Pembimbing

Bagus Muliajaya Luthfi


NIM: 2103011212001

PRAKATA
Puji Syukur kami panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala
limpahan Rahmat, Inayah, Taufik, dan Hidayahnya sehingga kami dapat
menyelesaikan laporan resmi Pratikum Dasar Teknik Kimia 1 dengan lancar dan
sesuai dengan harapan kami.
Penyusunan Laporan Resmi Pratikum Dasar Teknik Kimia 1 ditujukan
sebagai syarat untuk menyelesaikan tugas Pratikum Dasar Teknik Kimia 1 yang
sedang kami lakukan pada semester ini.
Ucapan terima kasih saya ucapkan kepada Bapak Widayat selaku penanggung
jawab Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1, Asisten Rizki Angga Anggita sebagai
Koordinator asisten LDTK 1, Asisten M.Rahadian Hidayat sebagai asisten laporan
pratikum spektrofotometri organik kami, Asisten Bagus Muliajaya Lutfi selaku
asisten pembimbing dan segenap asisten Laboratorium Dasar Teknik Kimia 1 yang
telah membantu dan membimbing kami dalam setiap pratikum serta teman-teman
rekan kerja yang telah membantu, baik dalam segi waktu maupun motivasi.
Laporan resmi ini merupakan laporan resmi terbaik yang saat ini bisa kami
ajukan, namun kami menyadari pasti ada kekurangan yang perlu kami perbaiki.
Maka dari itu kritik dan saran yang sifatnya membangun sangat kami harapkan.

Semarang,

Desember 2014

Penyusun

DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL..................................................................................................i
HALAMAN PENGESAHAN.................................................................................. ii
PRAKATA............................................................................................................... iii
DAFTAR ISI............................................................................................................ iv
DAFTAR TABEL.................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR.............................................................................................. vii
INTISARI.................................................................................................................. 1
SUMMARY............................................................................................................... 2
BAB I PENDAHULUAN......................................................................................... 3
I.1 Latar Belakang.............................................................................................3
I.2 Tujuan Percobaan........................................................................................ 3
I.3 Manfaat Percobaan...................................................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.............................................................................. 5
II.1 Pengertian................................................................................................... 5
II.2 Teori Spektrum Sinar Tampak Dan Warna Komplementer....................... 6
II.3 Hukum Lambert-Beer.................................................................................7
II.4 Metode Analisis Spektrofotometri............................................................. 8
II.5 Pengertian dan Aplikasi Antosianin dalam Industri................................... 8
BAB III METODOLOGI PERCOBAAN............................................................ 10
III.1 Bahan Dan Alat Yang Digunakan........................................................... 10
III.2 Gambar Alat............................................................................................ 10
III.3 Keterangan Alat...................................................................................... 12
III.4 Cara Kerja............................................................................................... 13
BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN..................................... 15
IV.1 Hasil Percobaan...................................................................................... 15
IV.2 Pembahasan............................................................................................ 17
IV.2.1 Perbandingan Optimum Rosella saat Percobaan Terhadap
Literatur.......................................................................................... 17
IV.2.2 Absorbansi Rosella pada Panjang Gelombang Optimum............... 18
IV.2.3 Metode pH Diferensial.................................................................... 18
IV.2.4 Fenomena Antosianin pada pH 1 dan pH 4.5................................. 19
IV.2.5 Pigmen Antosianin.......................................................................... 19

BAB V PENUTUP.................................................................................................. 22
V.1 Kesimpulan.............................................................................................. 22
V.2 Saran........................................................................................................ 22
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................. 23
LAMPIRAN
A. Lembar Perhitungan.............................................................................

A-1

B. Laporan Sementara...............................................................................

B-1

C. Lembar Kuantitas Reagen....................................................................

C-1

D. Referensi..............................................................................................

D-1

LEMBAR ASISTENSI

DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Jenis Spektrofotometer............................................................................... 5
Tabel 2.2 Spektrum Sinar Tampak dan Warna Komplementer................................. 6
Tabel 4.1 Tabel Panjang Gelombang vs Absorbansi................................................ 15
Tabel 4.2.Tabel Absorbansi Rosella pada Panjang Gelombang Optimum.............. 15
Tabel 4.3 Tabel Faktor Pengenceran........................................................................ 16
Tabel 4.4.Tabel Konsentrasi Antosianin Metode Diferensial pH............................ 16
Tabel 4.5 Tabel Konsentrasi Antosianin pada Panjang Gelombang
Optimum.................................................................................................. 16

DAFTAR GAMBAR
Gambar 3.1 Spektrofotometri Optima SP-300............................................................10
Gambar 3.2 Pipet Ukur............................................................................................... 11
Gambar 3.3 Tabung Reaksi dan Raknya..................................................................... 11
Gambar 3.4 Beaker Glass 250cc................................................................................. 11
Gambar 3.5 Cuvet....................................................................................................... 11
Gambar 3.6 Beaker Glass 50cc.................................................................................. 12
Gambar 3.7 pH Meter................................................................................................. 12
Gambar 4.1 Grafik Panjang Gelombang vs Absorbansi............................................. 17
Gambar 4.2 Grafik Absorbansi vs Konsentrasi pada Optimum.............................. 18
Gambar 4.3.Gambar Molekul atau Rumus Bangun Antosianin................................. 20

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
INTISARI
Spektrofotometri dapat digunakan untuk menganalisa konsentrasi suatu zat di
dalam larutan berdasarkan absorbansi terhadap warna dari larutan pada panjang
gelombang tertentu. Metode spektrofotometri memerlukan larutan standar yang
telah diketahui konsentrasinya. Larutan standar terdiri dari beberapa tingkat rendah
sampai konsentrasi tinggi. Keuntungan utama dalam pemilihan metode ini adalah
metode ini merupakan metode analisa untuk menentukan identitas suatu komponen /
konsentrasi dalam larutan yang didasarkan pada pengukuran serapan sinar
monokromatis di suatu larutan berwarna. Persen Transmitan adalah pembanding
antara intensitas cahaya yang keluar dari sampel terhadap intensitas cahaya yang
masuk: %T = I/I0 . 100%. Sedangkan absorbansi dinyatakan sebagai A= log 1/T =
-log I/I0 = 2-log%T. Banyaknya cahaya/sinar yang diabsorbsi tergantung pada jenis
larutannya, panjang kuvet, konsentrasi larutan. Parameter tersebut dinyatakan
secara matematis, hukum Beer : A= log I/I0 = a.b.c. Dari hukum Beer dapat
dinyatakan bahwa hubungan absorbansi Vs konsentrasi memberikan garis lurus.
Pada percobaan ini, langkah kerja yang kami lakukan adalah kalibirasi alat,
menentukan panjang gelombang optimum, membuat kurva kalibrasi antara
absorbansi Vs konsentrasi, dan menentukan kadar antosianin dalam larutan.
Kalibrasi alat dilakukan dengan memasukkan kuvet berisi air demin, kemudian atur
T=100. Setelah itu memasukkan kuvet sampel yang akan diamati. Untuk menentukan
panjang gelombang optimum lakukan kalibrasi alat kemudian ukur pada panjang
gelombang yang berbeda, cari yang menghasilkan absorbansi maksimum. Kemudian
mengukur transmitan sampel pada panjang gelombang optimum dengan komposisi
yang berbeda-beda. Kemudian sampel dibuat pH=1 dan pH=4.5 dan diukur pada
520 nm dan 700 nm guna mengetahui kadar antosianin.
Pada percobaan ini didapat optimum sama dengan 520 nm. Dengan basis
10 ml campuran antara rosella dan aquadest di dapatkan konsentrasi rosella pada
520-700 nm, adalah 0,0731 ; 0,1417 ; 0,2778 ; 0,3402. Pada percobaan ditemukan
trendline sama dengan y=2,379 x + 0,0128 salah satu cara untuk menentukan
konsentrasi pigmen antosianin dalam sampel digunakan metode pH diferensial.
Pada suasana asam antosianin pada pH 1 dan tidak stabil pada pH 4.5. Antosianin
merupakan antioksidan yang terdapat pada tumbuhan.
Sebaiknya saat pratikum rebus antosianin sampai suhu 60C-80C agar tidak
merusak pigmen. Bersihkan alat-alat sebelum digunakan. Atur pH dengan cermat
dan teliti. Pembacaan transmitan dengan teliti.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
SUMMARY
Spectrophotometry can be used to analyze the concentration of a substance in
a solution based on the absorbance of the color of the solution at a specific
wavelength. Spectrophotometric method requires a standard solution of known
concentration. Standard solution consists of several low level to high concentrations.
The main advantage in the selection of this method is that this method is a method of
analysis to determine the identity of a component / concentration in a solution that is
based on the measurement of monochromatic light absorption in a colored solution.
Percent transmittance is a comparison between the intensity of light emitted from the
sample to the intensity of incoming light:% T = I / I 0. 100%. While absorbance
expressed as A = log 1 / T = -log I / I 0 = 2-log% T. The amount of light / light
absorbed depends on the type of solution, the length cuvette, the concentration of the
solution. The parameters expressed mathematically, Beer's law: A = log I / I 0 = abc
From Beer's law can be stated that the relationship of absorbance vs. concentration
gives a straight line.
In this experiment, move the work we do is calibrations tool, determine the
optimum wavelength, making calibration curve of absorbance vs. concentration, and
determine the levels of anthocyanins in solution. Calibration is done by inserting a
cuvette containing demin water, and set T = 100. After that enter the sample cuvette
to be observed. To determine the optimum wavelength calibrate the instrument and
then measuring at different wavelengths, search which generates maximum
absorbance. Then measure the sample transmittance at a wavelength of optimum
with different compositions. Then the sample was made pH = 1 and pH = 4.5 and
measured at 520 nm and 700 nm in order to determine levels of anthocyanin.
In this experiment obtained optimum equal to 520 nm. With a base of 10 ml
of a mixture of distilled water in Roselle and Roselle concentration get at 520-700
nm, is 0.0731; 0.1417; 0.2778; 0.3402. In the experiment found the same trend line
with y = 2.379 x + 0.0128 one way to determine the concentration of anthocyanin
pigments used in the sample pH differential method. In acidic conditions
anthocyanins at pH 1 and unstable at pH 4.5. Anthocyanins are antioxidants found
in plants.
Preferably when boiled pratikum anthocyanin 60C-80C until the
temperature so as not to damage the pigment. Clean tools before use. Adjust the pH
to carefully and thoroughly. Transmittance readings carefully.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

10

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
BAB I
PENDAHULUAN
I.1. Latar Belakang
Spektrofotometri dapat digunakan untuk menganalisa konsentrasi suatu
zat di dalam larutan bcrdasarkan absorbansi terhadap warna dari larutan pada
panjang gelombang tertentu. Metode spektrofotometri memerlukan absorbansi
larutan standar pada berbagai konsentrasi. Larutan standar terdiri dari beberapa
tingkat rendah sampai konsentrasi tinggi. Keuntungan utama daiam pemilihan
metode ini adalah metode ini merupakan metode yang sangat sederhana untuk
menetapkan kuantitas yang sangat kecil.
Aplikasi spektrofotometri salah salah satunya adalah menentukan
panjang gelombang optimum antosianin, menentukan kurva hubungan
konsentrasi antosianin vs absorbansi pada panjang gelombang optimum, dan
menentukan konsentrasi antosianin pada sampel metode spektrofotometri
dengan spektrofotometer.
I.2. Tujuan Percobaan
1.

Menentukan

panjang

gelombang

optimum

antosianin

metode

spektrofotometrei dengan spektrofotometer.


2.

Menentukan kurva hubungan konsentrasi antosianin vs absorbansi pada


panjang

gelombang

optimumnya

metode

spektrofotometri

dengan

spektrofotometer.
3.

Menentukan konsentrasi antosianin pada sampel metode spektrofotometri


dengan spektrofotometer.

I.3. Manfaat Percobaan


1.

Mampu menentukan panjang gelombang optimum antosianin metode


spektrofotometri dengan spektrofotometer.

2.

Mampu menentukan kurva hubungan konsentrasi antosianin vs absorbansi


pada

panjang gelombang optimumnya metode spektrofotometri dengan

spektrofotometer.
3.

Mampu

menentukan

konsentrasi

antosianin

pada

sampel

metode

spektrofotometri dengan spektrofotometer.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

11

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

12

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
II.1. Pengertian
Spektrofotometri adalah kata yang digunakan untuk ilmu yang mengacu
pada absorbsi, emisi, scatering, dan cahaya, dari molekul, ion, atom.
Spektrofotometri (teknik spektroscopy) merupakan metode analisa untuk
menentukan identitas suatu komponen/konsentrasi dalam larutan yang
didasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis di suatu larutan
berwarna ataupun tidak berwarna. Jenis spektrofotometer diklasifikasikan
sesuai pada tabel 2.1:
Tabel 2.1. Jenis Spektrofotometer
Jenis Sinar

Panjang Gelombang

Transisi

Panjang
UV
Visibel

10-180-350 nm
350 - 770 nm

Elektronik (ev)
Elektronik (ev)

IR

770 - 2500 nm

Vibrasi molekul

2.5 - 50 m

Vibrasi molekul

50 - 1000 m

Rotasi molekul

Persen transmitan adalah pembanding antara intensitas cahaya yang keluar dari
sampel_terhadap intensitas yang masuk, dinyatakan dengan rumus :
%T = I/lox100% . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (1)
Sedang absorbansi merupakan besaran yang menyatakan banyaknya
intensitas cahaya yang diserap oleh suatu benda dan dinyatakan dengan rumus :
A = log 1/T
= log(I/I0)
= 2- log (%T) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(2)
II.2. Teori Spektrum Sinar Tampak Dan Warna Komplementer
Sebuah benda memiliki sifat untuk mengabsorbsi dan memantulkan
warna tertentu. Warna yang dipantulkan oleh benda ke mata disebut warna
kmplementer, sedangkan warna yang diserap oleh suatu benda disebut warna

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

13

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
terabsorbsi. Berikut hubungan antara warna komplementer dan warna
terbasorbsi dapat dilihat pada table 2.2 :
Tabel 2.2. Spektrum Sinar tampak dan Warna komplementer (Vogel 1989)
Panjang

Warna (terabsorbsi)

Gelombang(nm)

Warna komplementer
(terlihat)

400-435

Violet

Kuning-hijau

435-480

Biru

Kuning

480-490

Hijau-Biru

Orange

490-500

Biru-Hijau

Merah

500-560

Hijau

Ungu

560-580

Kuning-Hijau

Violet

580-595

Kuning

Biru

595-610

Orange

Hijau-Biru

610-750

Merah

Biru-Hijau

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

14

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
II.3. Hukum Lambert-Beer
Menurut Hukum Lambert, serapan berbanding lurus terhadap ketebalan
sel (b) yang disinari, dengan bertambahnya sel, maka serapan akan bertambah.
A = k.b . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(3)
Menurut Beer, yang berlaku untuk radiasi monokromatis dalam larutan
yang sangat encer, serapan berbanding lurus dengan konsentrasi.
A = k.c . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(4)
Jika konsentrasi bertambah, jumlah molekul yang dilalui berkas sinar
akan bertambah, sehingga serapan juga bertambah. Kedua persamaan ini
digabungkan dalam Hukum Lambert-Beer pada persamaan (3), maka diperoleh
bahwa serapan berbanding lurus dengan konsentrasi dan ketebalan sel yang
dapat ditulis dengan persamaan :
A = k.c.b . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(5)
Umumnya digunakan dua satuan c (konsentrasi zat yang menyerap) yang
berlainan, yaitu gram per liter atau mol per liter. Nilai tetapan (k) dalam hukum
Lambert-Beer tergantung pada sistem konsentrasi mana yang digunakan. Bila c
dalam gram per liter, tetapan disebut dengan absorptivitas (a) dan bila dalam
mol per liter, tetapan tersebut adalah absorptivitas molar (E). Sehingga, hukum
Lambert-Beer dapat dinyatakan dengan rumus :
A = a.b.c . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(6)
Atau
A = .b.c . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(7)
Dengan:
A= absorbans
a = Absorptivitas

(L/g cm-1)

b = ketebalan sel

(cm)

c = konsentrasi

(g/L)

= absorpti vitas molar

(L/mol cm-1)

Hukum Lambert-Beer menjadi dasar aspek kuantitatif spektrofotometri


yang mana konsentrasi dapat dihitung berdasarkan persamaan (6) di atas.
Absorptivitas (a) merunkan konstanta yang tidak tergantung pada konsentrasi,
tebal kuvet dan intensitas radiasi yang mengenai larutan sampel. Absorptivitas

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

15

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
tergantung pada suhu, pelarut, struktur molekul, dan panjang gelombang
radiasi (Day and Underwood, 1999; Rohman, 2007).
II. 4. Metode Analisis Spektrorotometri
Ada

tiga

teknik

yang

biasa

dipakai

dalam

analisis

secara

spektrofotometri. Ketiga teknik tersebut adalah Metode Standar Tunggal,


Metode Kurva Kalibrasi, Metode Adisi Standar. Pada praktikum ini, metode
yang digunakan adalah Metode Kurva Kalibrasi.
Metode Kurva Kalibrasi
Dalam Metode ini dibuat suatu larutan standar dengan berbagai
konsentrasi dan absorbansi dari larutan tersebut diukur dengan AAS.
Langkah selanjutnya adalah membuat grafik antara konsentrasi (C)
dengan absorbansi (A) yang akan merupakan garis lurus mekewati titik
nol dengan slope = .b atau slope = a.b. Konsentrasi larutan sampel
dapat dicari setelah absorbansi lantan sampel diukur dan diintrapolasi
ke dalam kurva kalibrasi atau dimasukkan ke dalam persamaan garis
lurus yang diperoleh dengan menggunakan program regresi linear pada
kurva kalibrasi.
II.5. Pengertian dan Aplikasi Antosianin datam Industri
Antosianin merupakan zat warna yang berperan memberikan warna
merah berpotensi menjadi pewarna alami untuk pangan dan dapat dijadikan
alternatif pengganti pewarna sintetis yang lebih aman bagi kesehatan.
Antosianin merupakan pigmen berwarna merah, ungu dan biru yang biasa
terdapat pada jenis tanaman. Antosianin dapat menggantikan penggunaan
pewarna sintetik rhodamin B, carmoisin, dan amaranth sebagai pewarna merah
pada produk pangan. Antosianin adalah suatu kelas dari senyawa fl avonoid
yang secara luas terbagi dalam polifenol tumbuhan. Flavonol, fl avon-3-ol, fl
avon, fl avanon, dan fl avanol adalah kelas tambahan fl avonoid yang berada
dalam oksidasi dari antosianin. Antosianin stabil pada pH 3,5 dan suhu 500C,
mempunyai berat molekul 207,08 g/mol dan rumus molekul C15H11O.
Antosianin merupakan pewarna alami yang tersebar luas dalam
tumbuhan (bunga, buah-buahan, dan ubi-ubian). Antosianin sebagai pewarna
alami dapat diaplikasikan pada minuman ringan. dan produk berbasis susu

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

16

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
seperti yogurt, dan keju (Anonymous, 2004). Menurut Maga and Tu (1994)
antosianin cocok untuk mewarnai makanan dengan pH asam, hal ini terkait
dengan kestabilan antosianin dalam kondisi asam. Hasil ekstraksi (antosianin)
sangat cocok untuk diaplikasikan pada bahan pangan yang berlabel food grade
dan untuk industri farmasi.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

17

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
III.1. Bahan dan Alat
III.1.1.Bahan
l. Air demin secukupnya
2. KCI 20 ml
3. Natrium Asetat 20 ml
4. Sampel
III.1.2. Alat
1. Spektrofotometer Optima Sp-300
2. 12 buah beakerglass 250ml
3. 6 tabung reaksi beserta 1 rak tabung reaksi
4. 1 pipet ukur
5. pH meter
6. 4 buah beaker glass 50 cc
III.2. Gambar Alat

a). Gambar 3.1 Spektrofotometer Optima Sp-300

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

18

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

b.) Gambar 3.2 Pipet Ukur

c.) Gambar 3.3 Tabung Reaksi dan Raknya

d.) Gambar 3.4 Beaker Glass 250ml

e.) Gambar 3.5 Cuvet

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

19

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK

f.) Gambar 3.6 Beaker Glass 50ml

g.) Gambar 3.7 pH Meter

III.3. Keterangan Alat


III.3.a. Spektrofotometri Optima SP-300
1. Tempat sampel
2. Pengontrol panjang gelombang
3. Indikator power ON/OFF
4. Pembacaan LCD Digital
5. Tombol pengganti Mode
6. Tombol control 100% T
7. Tombol control 0% T
8. Tombol print
9. Jendela pembacaan panjang gelombang
III. 3.b. Pipet ukur
III. 3.c. Tabung reaksi dan raknya
III. 3.d. Beaker glass 250 cc
III. 3.e. Cuvet
III. 3.f. Beaker glass 50 cc
III. 3.g. pH meter

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

20

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
III.4. Cara Kerja
III.4.1. Kalibrasi alat
1.

OPTIMA SP-300 dihubungkan dengan sumber listrik.

2.

OPTIMA SP-300 dihubungkan dengan tombol ON/OFF dibelakang


mesin dan memanaskannya selama 5 10 menit.

3.

Dengan tombol 5, mode pembacaan transmitansi (T) diatur.

4.

Dengan tombol 7, skala diatur sampai pembacaan absorban tak


berhingga (transmitan = 0)

5.

Penentuan panjang gelombang () pada 480 nm dengan tombol 2.

6.

Pelarut murni aquadest dimasukkan dalam cuvet dan ditempatkan


dalam alat 1.

7.

Tombol 6 diatur sampai skala menunjukkan absorbansi = 0


(transmitan 100%).

8.

OPTIMA SP-300 siap dipakai.

9.

Cuvet diisi dengan larutan sampel , bagian, bagian luar cuvet


dibersihkan, kemudian dimasukkan ke dalam tempat sampel, dan
ditutup kembali, pembacaan skala transmitan dan absorbansinya
dihitung, A =2-log %T.

10. Panjang gelombang dinaikkan 10 nm dengan menggunakan_ tombol


(2), diulangi langkah 6 sampai 9.
11. Dibuat

kurva

hubungan

antara

absorbansi

versus

panjang

gelombang, kemudian ditentukan nilai panjang gelombang optimum


untuk jenis larutan target.
III.4.2. Menentukan kadar antosianin total dalam larutan.
1.

Dibuat larutan KCI 0,025 M sebagai larutan buffer pH 1. Kemudian


diukur pHnya dan diatur pH supaya sama dengan 1 dengan larutan
HCl.

2.

Dibuat larutan Natrium Asetat (CH3C02Na3H20) 0,4 M. Kemudian


diukur pH nya dan diatur pHnya supaya larutan mempunyai pH 4,5
dengan menggunakan larutan HCI.

3.

Diambil 1 buah beaker glass 50cc dan diisi dengan larutan no.2
sebanyak 5ml dengan pipet ukur. pH larutan dibuat sama dengan 1

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

21

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
dengan menambahkan larutan buffer KCI dengan pipet ukur , dan
dihitung berapa jumlah volume yang telah ditambahkan sehingga
pH=1. Hal serupa dilakukan untuk sampel no. 3,4,5, dan 6.
4.

Diatur panjang gelombang pada 520 nm, kemudian dilakukan


kalibrasi alat Langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian
panjang gelombang). Setelah itu, dimasukkan larutan no.2 dengan
pH = 1 kedalam cuvet hingga % bagian. Catat % transmitan dan
dihitung absorbansinya, begitu juga untuk sampel no.3,4,5,dan 6.

5.

Diatur panjang gelombang pada 700 nm. Kemudian dilakukan


kalibrasi alat Langkah 1-6 (dilakukan untuk setiap pergantian
panjang gelombang). Setelah itu, dimasukkan larutan no.2 pH 1 ke
dalam cuvet hingga , bagian. Catat % transmitan dan dihitung
absorbansinya, begitu juga untuk sampel no. 3,4,5, dan 6.

6.

Diulangi langkah 1-5 dengan membuat pH larutan sama dengan 4,5


dengan menambah larutan buffer Na Asetat.

7.

Dihitung konsentrasi antosianin sesuai dengan rumus :

A MW DF 10
E b
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (8)

Dengan :

8.

= Konsentrai antosianin (mg/l)

= (A520-A700)Ph1 (A520-A700)pH 4,5

MW

= Bobot moiekul = 449,2 gram/mol

DF

= Faktor Pcngenceran

= 26900 L/mol cm

1000

= konversi dari gram ke mgr

= Panjang sel atau cuvet (cm)

Dibuat persamaan Beer untuk konsentrasi antosianin, dengan


persamaan :
A = kc . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(9)

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

22

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN
IV.1. HASIL PERCOBAAN
Tabel 4.1 Panjang Gelombang vs Absorbansi
(nm)

%T

Absorbansi (A)

480
490
500
510
520
530
540
550
560

2,2
1m6
1,4
1,3
1,1
1,1
2,0
2,6
7,5

0,022
0,016
0,014
0,013
0,011
0,011
0,02
0,026
0,075

1,6576
1,7959
1,8539
1,8861
1,9586
1,9586
1,6988
1,5850
1,249

Tabel 4.2 Absorbansi Rosella pada Panjang Gelombang Optimum


Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
0
2
4
6
8

(ml)
10
8
6
4
2

100
63,8
39,9
24
14,7

Absorbasi

Konsentrasi

(A)

(C)

1
0,658
0,399
0.24
0,147

0,1952
0,3999
0,6198
0,8327

0,0731
0,1417
0,2778
0,3402

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

23

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
Tabel 4.3 Faktor Pengenceran
Volume

Volume

pH 1

pH 4.5

Rosella

Demin

Vo

Vt

DF

Vo

Vt

DF

DF

(ml)
0
2
4
6
8

(ml)
10
8
6
4
2

(ml)
5,1
5,1
4,1
4,1

(ml)
7,9
8,2
9,1
10,4

1,5490
1,6078
2,2195
2,5306

(ml)
5,1
5,1
4,1
4,1

(ml)
5,3
7
8,1
9,1

1,0392
1,3725
1,9756
2,2195

1,2941
1,4901
2,0875
2,3780

Tabel 4.4 Konsentrasi Antosianin Metode Diferensial pH


Volume

Volume

= 520 nm

= 700 nm

Rosella

Demin

(ml)

(ml)

(mg/L)

0
2

10
8

pH = 1
%T
A
36,9 0,433

pH = 4,5
pH = 1
%T
A
%T
A
77,1 0,112 98,4 0,0070

pH = 4,5
%T
A
94,5 0,0241

0,0731

19,5

0,709

60,6 0,176 98,2

0,0070

90,3

0,0443

0,1417

11,1

0,954

83,2 0,198 97,5

0,0101

89,5

0,0481

0,2778

8,3

0,080

55,4 0,256 90,4

0,0158

89,5

0,0486

0,3402

Tabel 4.5 Konsentrasi Antosianin Pada Panjang Gelombang Optimum


Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
3
5
7

(ml)
7
5
3

55,7
34,2
22

0,2541
0,4788
0,6571

0,0994
0,1963
0,2740

0,3323
0,3926
0,39

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

24

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
VI.2 PEMBAHASAN
IV.2.1. Perbandingan Optimum Rosella Saat Percobaan Terhadap

Literatur
Panjang gelombang () optimum adalah panjang gelombang yang
menghasilkan nilai absorbansinya terbesar. Dari percobaan didapat
panjang gelombang optimum sebesar 520 nm. Panjang gelombang ini
sesuai dengan referensi yang menyatakan bahwa panjang gelombang
optimum antosianin adalah 520 nm.
(scribd.com/doc/214369778)
Dalam analisa metode spektrofotometri dipergunakan panjang
gelombang optimum. Karena panjang gelombang optimum memiliki
kepekaan maksimal karena terjadi perubahan absorbansi paling besar.
Pada panjang gelombang optimum bentuk kurva absorbansi memenuhi
hukum Lambert-Beer.
(analitik_instrumen.com)
Setelah praktikan melakukan pengujian dengan berbagai panjang
gelombang. Lalu untuk penentuan panjang gelombang optimum dengan
melihat kurva berikut.
2.25
2
1.75

1.8

1.85 1.89

1.96 1.96
1.7

1.66

1.59

1.5
1.12

1.25

Absorbansi

1
0.75
0.5
0.25
0
470

480

490

500

510

520

530

540

550

560

570

Panjang gelombang (nm)

Gambar. 4.1 Grafik Panjang Gelombang vs Absorbansi

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

25

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
Ditinjau dari grafik diatas terlihat titik puncak kurva pada panjang
gelombang optimum yaitu 520 nm. Hal itu juga bersesuaian dengan nilai
absorbansi yang paling besar yaitu 1,9586. Bila dibandingkan dengan
literatur dan referensi yang kami dapatkan, panjang gelombang optimum
rosella dapat dilihat pada penumpahan warna merah, merah seduduk,
ungu, dan biru. Dimana berkisar antara 515-545 nm.
IV.2.2 Absorbansi Rosella pada Panjang Gelombang Optimum
Setelah

menentukan

panjang

gelombang

optimum

rosella

menggunakan kurva standar. Maka akan diperoleh nilai transmitan. Lalu


dengan rumus
A= 2-log%T
Bisa didapat nilai transmisinya sehingga di dapat bentuk kurva
sebagai berikut.
0.9

0.83

0.8

f(x) = 2.33x + 0.02


R = 0.99

0.7

0.62

0.6
0.5

Absorbansi

0.4
0.4
0.3
0.2

0.2
0.1
0
0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

Konsentrasi

Gambar.4.2. Grafik Absorbansi vs Konsentrasi pada Optimum


IV.2.3 Merode pH Diferensial
Salah satu cara untuk menentukan konsentrasi pigmen antosianin
dalam sampel adalah melalui penggunaan spektrofotometri cahaya tampak.
Metode spektrofotometri menentukan konsentrasi pigmen antosianin yang
disebut metode pH diferensial. Metode ini didasarkan pada fakta diketahui
bahwa pigmentasi antosianin unik tercantum pada pH. Pada pH 1

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

26

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
antosianin yang berwarna. Mereka mengirimkan berbagai panjang
gelombang dari orange ke ungu muda, tergantung pada antosianin tertentu.
Pada pH 4,5 namun semua antosianin tidak berwarna. Perubahan
pigmentasi disebabkan perubahan dalam struktur cincin C dari antosianin.
Perubahan tergantug pH yang relatif unik dalam pigmentasi dapat diukur
dengan spektrofotometer.
(cellbiologyolm.stevegallik.org/node/89)
IV.2.4 Fenomena Antosianin Pada pH 1 dan pH 4,5
Salah satu karakteristik utama antosianin adalah perubahan warna
yang merespon adanya perubahan pH lingkungan warna dan stabilitas
antosianin sangat bergantung dari pH antosianin paling stabil pada pH
rendah dan perlahan kehilangan warnanya seiring dengan peningkatan pH
dan menjadi tidak berwarna pada pH 4 sampai 5.
Untuk membuat pH larutan menjadi rendah/pH=1, digunakan
larutan bauffer asam berupa KCl yang diturunkan pH nya dengan HCl
pekat menjadi sama dengan 1. Pada larutan sampel (antosianin pada
rosella) tidak hanya terkandung antosianin saja, namun juga zat-zat lain
yang dalam praktikum ini mengganggu pengamatan (zat kotor), pada
suasana asam, antosianin stabil sehingga warna merah terlihat membuat
zat pengotor tidak stabil sehingga warna merah pudar. Perhitungan selisih
antara absorbansi pada pH=1 dimana antosianin lebih stabil dengan
pH=4,5 sehingga diketahui absorbansiantosianin.
(scribd.com/doc/214369778)
IV.2.5 Pigmen Antosianin
Antosianin adalah zat warna alami yang sedikit sebagai antioksidan
yang terdapat dalam tumbuh-tumbuhan. Lebih dari 300 struktur antosianin
yang ditemukan telah diidentifikasi secara dalam. Antosianin adalah
pigmen dari kelompok flavonoid yang larut dalam air, berwarna merah
sampai biru dan tersebar luas pada tanaman.
Beberapa penelitian di jepang menyatakan bahwa antosianin
memiliki fungsi fisiologi. Misalnya sebagai antioksidan, antikanker, dan
perlindungan terhadap kerusakan hati. Antosianin juga berperan sebagai

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

27

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
pangan fungsioanal, sebagai contoh food ingredient yang sangat berguna
bagi kesehatan mata dan retina yang pertama kali dipublikasikan di Jepang
pada tahun 1997.
Bentuk molekul atau rumus bangun antosianin sebagai berikut :

Gambar 4.3 Gambar Molekul atau Rumus Bangun Antosianin


Zat pewarna alami antosianin tergolong kedalam turunan
benzopiran ditandai dengan adanya dua cincin aromatik benzena (C6H6)
yang di hubungkan dengan tiga atom karbon yang mambentuk cincin.
Senyawa ini berbentuk glikosida dan menjadi penyebab warna merah,
biru, dan violet yang banyak terdapat pada buah dan sayur.
Secara kimia semua antosianin merupakan turunan suatu struktur
aromatik tunggal, yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk dari pigmen
sianidin ini dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil,
metilasi dan glikosilasi. Antosianin adalah senyawa yang bersifat amfoter,
yaitu memiliki kemampuan untuk bereaksi baik dengan asam maupun
dalam basa. Dalam media asam antosianin berwarna merah seperti halnya
saat dalam vakuola sel dan berubah menjadi ungu dan biru jika media
bertambah basa. Perubahan warna karena perubahan kondisi lingkungan
ini tergantung dari gugus yang terikat pada struktur dasar dari posisi
ikatannya.
Sifat fisika dan kimia dari antosianin dilihat dari kelarutan
antosianin larut dalam pelarut polar seperti metanol, aseton, atau

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

28

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
kloroform, terlebih sering dengan air dan diasamkan dengan asam klorida
atau asam format. Antosianin stabil pada pH 3,5 dan suhu 50C
mempunyai berat molekul 207,08 gr/mol dan rumus molekul C15H11O
Atosianin dilihat dari penampakan berwarna merah, merah seduduk, ungu
dan biru mempunyai panjang gelombang maksimum 515-545 nm,
bergerak dengan eluen BAA (nbutanol-asam asetat-air) pada kertas.
(e.journal.vajy.ac.id/370/3/25/2bc01022.pdf)

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

29

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
BAB V
PENUTUP
V.1 KESIMPULAN
1.

Panjang gelombang yang ditemukan sebesar 520 nm sesuai dengan panjang


gelombang literatur.

2.

Hubungan absorbansi Vs konsentrasi antosianin pada panjang gelombang


maksimum, semakin tinggi konsentrasi maka semakin tinggi absorbansi
suatu zat. Dengan demikian, didapatkan hubunngan garis lurus dengan
persamaan y=2,379 x + 0,0218.

3.

Rata-rata konsentrasi antosianin yang terdapat didalam sampel rosella


adalah 0,3332

V.2 SARAN
1.

Saran yang digunakan tidak boleh terlalu kental, jika terlalu kental maka
lakukan pengenceran.

2.

Pengaturan pH pada sampel harus teliti.

3.

Teliti pada saat pembacaan transmitan.

4.

Rebus rosella untuk mendapatkan ekstraknya pada suhu 60-80C agar


antosianin tidak rusak.

5.

Larutan yang digunakan harus jernih agar sesuai dengan hukum LambertBeer.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

30

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
DAFTAR

PUSTAKA

Anonim. 2013. Hukum Lambert Beer" Universitas Sumatera Utara.


Anonim. 2013. Spektrofctometri Serapan Uv-Vis".
Barners,kw,dkk,2005.determination ofotalmorometricantosianin pigmencontent of
Fruit juice, beverage,natural colorants, and louise bythe ph differential
Groggins,pH.1950.

unitprosesinorganiksyntesis.5ed.PP.700

783Mc.Graw

HillBook Company.Inc,New York.


Handayani, Prima Astuti dan Asri Rahmawati. 2012. "Pemanfaatan Kulit Buah Naga
(Dragon Fruit) Sebagai Pewarna Alami Makanan Pengganti Pewarna
Sintetis"Program Studi Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Negeri
Semarang.
J.pharm.2006.solubilizationandquantificationolycopeneinaqueousmediaithe form of
cyclodextrin Binari System. diakses tanggal 4 mei 2013
Kerr,R.W.,1950Chemistryandindustriofstarch,2&d,PP375-403.Academic Press, Inc,
Newyork.
Kusumawati,

Dewi

Ramandhanni.

2010.

"Spektrometri

Serapan

Atom

(SSA)".Laboratorium Teknik Analisis Radiometri dan Spektrometri Serapan


Atom Pusat Teknologi Nuklir Bahan dan Radiometri.
Method Collaborationstudy,JournalofAOACinternational,Vol 85,rb.5.PP1269-1278
Munkramin.Baso.2012,Spektrofotometri-absorbansi dan konsentrasi (hukum Labert
Beer). diakses tanggal 27 April 2013
Penelope,perkins veanic.2002.Composition of orange, yellow, and Red fleshes
watermelon.
Vogel,1989.textbookofquantitatif Chemic alanlysis.longman scientific and technical.
PP645-676 great britain.
Woodman,A.1941. "Food analysis.4 ed.PP 264-261,Mc Graw Hill Book Company
Inc. NewYork.
Yudiono, Kukuk. 2011. "Ekstraksi Antosianin dari Ubijalar Ungu (Ipomoea batatas
cv. Ayamurasaki) dengan Teknik Ekstraksi Subcritical Water" Jurusan
Teknologi Hasil Pertanian Universitas Katolik Widya Karya Malang.
Underwood,A.I.And

Day R.A.1983.Analisa kimia kuantitatif 5th edition.

Diterjemahkan oleh R.Soendoro. Jakarta : Erlangga

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

31

SPEKTROFOTOMETRI ORGANIK
Ciki, Listy. 2013. Diakses dari scribd.com/doc/ 214369778, pada 20 November 2014
Gallik, Stephen. 2011. Diakses dari http://cellbiologyolm.stevegallik.org/node/89,
pada 20 November 2014
Anonim.

Diakses

dari

e_journal.uajy.ac.id/370/3/25/2bc01022.pdf,

pada

20

November 2014
Gia, Prananta. 2013. analitis_instrumen.com, diakses 20 November 2014

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

32

LEMBAR PERHITUNGAN

(nm)
480

%T
2,2

T
0,022

490
500
510
520
530
540
550
560

1m6
1,4
1,3
1,1
1,1
2,0
2,6
7,5

0,016
0,014
0,013
0,011
0,011
0,02
0,026
0,075
(nm)

A = 2 log %T

Absorbansi (A)
1,6576
1,7959
1,8539
1,8861
1,9586
1,9586
1,6988
1,5850
1,249

520nm
A = 2 log 1,1 = 1,9586

480nm

530nm

A = 2 log 2,2 = 1,6756

A = 2 log 1,1 = 1,9586

490nm

540nm

A = 2 log 1,6 = 1,7959

A = 2 log 2,0 = 1,6989

500nm

550nm

A = 2 log 1,4 = 1,8539

A = 2 log 2,6 = 1,5850

510nm

560nm

A = 2 log 1,3 = 1,8861

A = 2 log 7,6 = 1,2490

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

A- 33

Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
0
2
4
6
8

(ml)
10
8
6
4
2

100
63,8
39,9
24
14,7

Absorbasi

Konsentrasi

(A)

(C)

1
0,658
0,399
0.24
0,147

0,1952
0,3999
0,6198
0,8327

0,0731
0,1417
0,2778
0,3402

A = 2 log %T
(2:8) A = 2 log 63,8 = 0,1952

(6:4) A = 2 log 24,0 = 0,6198

(4:6) A = 2 log 39,9 = 0,3999

(8:2) A = 2 log 14,7 = 0,8327

Volume

Volume

pH 1

Rosella

Demin

Vo

Vt

(ml)
0
2
4
6
8

(ml)
10
8
6
4
2

(ml)
5,1
5,1
4,1
4,1

(ml)
7,9
8,2
9,1
10,4

pH 4.5
DF

Vo

Vt

DF

DF

1,5490
1,6078
2,2195
2,5306

(ml)
5,1
5,1
4,1
4,1

(ml)
5,3
7
8,1
9,1

1,0392
1,3725
1,9756
2,2195

1,2941
1,4901
2,0875
2,3780

DF = Vt / Vo
pH 1
(2:8) DF =

pH 4,5

7,9
5,1

= 1,5490

(2:8) DF =

5,3
5,1

8,2
5,1

= 1,6078

(4:6 ) DF =

7
5,1

9,1
4,1

= 2,2195

(6:4) DF =

8,1
4,1

1,0392
(4:6) DF =
1,3725
(6:4) DF =
1,9756
(8:2) DF =

10,4
4,1

= 2,5306

(8:2) DF =

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

9,1
4,1

= 2,2195
A-34

)
DF Rata Rata ( DF

(2:8)

DF

1,5490+1,0392
2

1,2941
(4:6)

(6:4)

DF

2, 2195+1,9756
2

DF

2, 5306+2,2195
2

2,0875

DF

1, 6078+1,3725
2

1,4901

(8:2)
2,3780

Volume

Volume

= 520 nm

= 700 nm

Rosella

Demin

(ml)

(ml)

(mg/L)

0
2

10
8

pH = 1
pH = 4,5
pH = 1
%T
A
%T
A
%T
A
36,9 0,433 77,1 0,112 98,4 0,0070

pH = 4,5
%T
A
94,5 0,0241

0,0731

19,5

0,709 60,6 0,176 98,2

0,0078

90,3

0,0443

0,1417

11,1

0,954 83,2 0,198 97,5

0,0101

89,5

0,0481

0,2778

8,3

0,080 55,4 0,256 90,4

0,0158

89,4

0,0486

0,3402

A = 2 log %T
= 520 nm
pH = 1

pH = 4,5

(2:8) A = 2 log 36,9= 0,433

(2:8) A = 2 log 77,1= 0,112

(4:6) A = 2 log 19,5= 0,709

(4:6) A = 2 log 60,6= 0,176

(6:4) A = 2 log 11,1= 0,954

(6:4) A = 2 log 83,2= 0,198

(8:2) A = 2 log 8,30 = 0,080

(8:2) A = 2 log 55,4= 0,256

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

A-35

= 700 nm
pH = 1

pH = 4,5

(2:8) A = 2 log 98,4= 0,0070

(2:8) A = 2 log 94,5= 0,0241

(4:6) A = 2 log 98,2= 0,0078

(4:6) A = 2 log 90,3= 0,0443

(6:4) A = 2 log 97,5= 0,0101

(6:4) A = 2 log 89,5=0,0481

(8:2) A = 2 log 90,4= 0,0158

(8:2) A = 2 log 89,4= 0,0486

A x MW x DF x 10
ExB

C=

(2:8) C =
(4:6) C =
(6:4) C =
(8:2) C =

{ ( 0,4330,0070 )( 0,1120,0241 ) } x 449,2 x 1,20 x 10


26900 x 1

{ ( 0,7090,0078 )( 0,1760,0443 ) } x 449,2 x 1,40 x 10


26900 x 1

{ ( 0,9540,0101 )( 0,1980,0481 ) } x 449,2 x 2,09 x 10


26900 x 1

{ ( 0,0800,0158 )( 0,2560,0486 ) } x 449,2 x 2,30 x 10


26900 x 1

Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
3
5
7

(ml)
7
5
3

55,7
34,2
22

0,2541
0,4788
0,6571

0,0994
0,1963
0,2740

0,3323
0,3926
0,3900

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

= 0,0731
= 0,1417
= 0,2778
= 0,3402

A-36

A = 2 log %T
(3:7) A = 2 log 55,7 = 0,2541

(5:5) A = 2 log 34,2 = 0,4788

(7:3) A = 2 log 22 = 0,6571


Trendline :

y = 2,3379x + 0,0218

(3:7) 0,2541 = 2,3379x + 0,0218

C = X . DF
(3:7) C = 0,0994 x 10/3

X = 0,0994
(5:5) 0,4788 = 2,3379x + 0,0218

C = 0,3323
(5:5) C = 0,1963 x 10/5

X = 0,1963
(7:3) 0,6571 = 2,3379x + 0,0218

C = 0,3926
(7:3) C = 0,2740 x 10/7

X = 0,2740

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

C = 0,3900

A-37

LAPORAN SEMENTARA
PRATIKUM DASAR TEKNIK KIMIA 1

Materi
Spektrofotometri Organik
Kelompok

6 / Jumat

Anggota

MOHAMMAD AFANDI

21030114120043

NAUFARREL KAVIANDHIKA 21030114120036


SEKAR AYU SEPTIANIS

21030114120025

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA


TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2014

I.

TUJUAN PERCOBAAN

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-38

a. Menetukan panjang gelombang optimum antosianin metode


spektrofotometri dengan spektrofotometer
b. Menentukan kurva hubungan konsentrasi antosianin vs absorbansi
pada panjang gelombang optimumnya metode spektrofotometri
dengan spektrofotometer
c. Menentukan

konsentrasi

antosianin

pada

sampel

metode

spektrofotometri dengan spektrofotometer.


II.

PERCOBAAN
II.1

Bahan Yang Digunakan

l.

Air

2.

demin

secukupnya

KCI

3.

20

Natrium

ml

Asetat

20

ml

4. Sampel
II.2

Alat Yang Dipakai

1.Spektrofotometer Optima Sp-300


2.
3.
4.

12
6

buah

tabung

reaksi

beakerglass
beserta

rak

pipet

5.

250ml
tabung

reaksi

ukur

pH

meter

6. 4 buah beaker glass 50 cc


II.3

Cara Kerja

II.3.1 Kalibrasi Alat


1. OPTIMA SP-300 dihubungkan dengan sumber listrik.
2. OPTIMA
ON/OFF

SP-300

dihubungkan

dibelakang mesin

dengan

tombol

dan memanaskannya

selama 5 10 menit. 3.
3. Dengan tombol 5, mode pembacaan transmitansi (T)
diatur.4.
4. Dengan tombol 7, skala diatur sampai pembacaan
absorban tak berhingga (transmitan = 0)5.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-39

5. Penentuan panjang gelombang () pada 480 nm dengan


tombol 2.6.
6. Pelarut murni aquadest dimasukkan dalam cuvet dan
ditempatkan dalam alat 1.
7. Tombol 6 diatur sampai skala menunjukkan absorbansi
= 0 (transmitan 100%).
8. OPTIMA SP-300 siap dipakai.
9. Cuvet diisi dengan larutan sampel , bagian, bagian
luar cuvet dibersihkan, kemudian dimasukkan ke dalam
tempat sampel, dan ditutup kembali, pembacaan skala
transmitan dan absorbansinya dihitung, A =2-log %T.
10. Panjang

gelombang

dinaikkan

10

nm

dengan

menggunakan_ tombol (2), diulangi langkah 6 sampai


11. Dibuat kurva hubungan antara absorbansi versus
panjang gelombang, kemudian ditentukan nilai panjang
gelombang optimum untuk jenis larutan target
2.3.2 Menentukan kadar antosianin total dalam larutan.
1.

Dibuat larutan KCI 0,025 M sebagai larutan buffer pH


1. Kemudian diukur pHnya dan diatur pH supaya sama
dengan 1 dengan larutan HCl.

2.

Dibuat larutan Natrium Asetat (CH3C02Na3H20) 0,4 M.


Kemudian diukur pH nya dan diatur pHnya supaya
larutan mempunyai pH 4,5 dengan menggunakan
larutan HCI.

3.

Diambil 1 buah beaker glass 50cc dan diisi dengan


larutan no.2 sebanyak 5ml dengan pipet ukur. pH
larutan dibuat sama dengan 1 dengan menambahkan
larutan buffer KCI dengan pipet ukur , dan dihitung
berapa jumlah volume yang telah ditambahkan
sehingga pH=1. Hal serupa dilakukan untuk sampel no.
3,4,5, dan 6.

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-40

4.

Diatur panjang gelombang pada 520 nm, kemudian


dilakukan kalibrasi alat Langkah 1-6 (dilakukan untuk
setiap pergantian panjang gelombang). Setelah itu,
dimasukkan larutan no.2 dengan pH = 1 kedalam cuvet
hingga % bagian. Catat % transmitan dan dihitung
absorbansinya, begitu juga untuk sampel no.3,4,5,dan
6.

5.

Diatur panjang gelombang pada 700 nm. Kemudian


dilakukan kalibrasi alat Langkah 1-6 (dilakukan untuk
setiap pergantian panjang gelombang). Setelah itu,
dimasukkan larutan no.2 pH 1 ke dalam cuvet hingga
,

bagian.

Catat

transmitan

dan

dihitung

absorbansinya, begitu juga untuk sampel no. 3,4,5, dan


6.
6.

Diulangi langkah 1-5 dengan membuat pH larutan sama


dengan 4,5 dengan menambah larutan buffer Na Asetat.

7.

Dihitung konsentrasi antosianin sesuai dengan rumus :

A MW DF 10
E b
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . (8)

Dengan :

= Konsentrai antosianin

(mg/l)
A

= (A520-A700)Ph1 (A520-A700)pH 4,5

MW

= Bobot moiekul = 449,2 gram/mol

DF

= Faktor Pcngenceran

= 26900 L/mol cm

1000 = konversi dari gram ke mgr


b
8.

= Panjang sel atau cuvet (cm)

Dibuat persamaan Beer untuk konsentrasi antosianin,


dengan persamaan :

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-41

A=
kc . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
.(9)
II.4 Hasil Percobaan
Tabel 2.4.1 Panjang Gelombang vs Absorbansi
(nm)

%T

Absorbansi (A)

480
490
500
510
520
530
540
550
560

2,2
1m6
1,4
1,3
1,1
1,1
2,0
2,6
7,5

0,022
0,016
0,014
0,013
0,011
0,011
0,02
0,026
0,075

1,6576
1,7959
1,8539
1,8861
1,9586
1,9586
1,6988
1,5850
1,249

Tabel 2.4.2 Absorbansi Rosella pada Panjang Gelombang Optimum


Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
0
2
4
6
8

(ml)
10
8
6
4
2

100
63,8
39,9
24
14,7

Absorbasi

Konsentrasi

(A)

(C)

1
0,658
0,399
0.24
0,147

0,1952
0,3999
0,6198
0,8327

0,0731
0,1417
0,2778
0,3402

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-42

Tabel 2.4.3 Faktor Pengenceran


Volume

Volume

Rosella

Demin

pH 1
Vo

Vt

pH 4.5
DF

Vo

Vt

(ml)
(ml)
(ml)
(ml)
(ml)
(ml)
0
10
2
8
5,1
7,9
1,5490
5,1
5,3
4
6
5,1
8,2
1,6078
5,1
7
6
4
4,1
9,1
2,2195
4,1
8,1
8
2
4,1
10,4
2,5306
4,1
9,1
Tabel 2.4.4 Konsentrasi Antosianin Metode Diferensial pH
= 520 nm

DF

DF

1,0392
1,3725
1,9756
2,2195

1,2941
1,4901
2,0875
2,3780

Volume

Volume

= 700 nm

Rosella

Demin

(ml)

(ml)

(mg/L)

0
2

10
8

pH = 1
pH = 4,5
pH = 1
%T
A
%T
A
%T
A
36,9 0,433 77,1 0,112 98,4 0,0070

pH = 4,5
%T
A
94,5 0,0241

0,0731

19,5

0,709 60,6 0,176 98,2

0,0070

90,3

0,0443

0,1417

11,1

0,954 83,2 0,198 97,5

0,0101

89,5

0,0481

0,2778

8,3

0,080 55,4 0,256 90,4

0,0158

89,5

0,0486

0,3402

Tabel 2.4.5 Konsentrasi Antosianin Pada Panjang Gelombang Optimum


Volume

Volume

Rosella

Demin

%T

(ml)
3
5
7

(ml)
7
5
3

55,7
34,2
22

0,2541
0,4788
0,6571

0,0994
0,1963
0,2740

0,3323
0,3926
0,39

PRAKTIKAN

MENGETAHUI
ASISTEN

M. Rahadian Hidayat

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

B-43

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

C-45

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-46

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-47

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-48

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-49

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-50

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-51

1. Penentuan panjang gelombang maksium

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-52

panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal, dilakukan


dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang dari
suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu
Alasan mengapa dipergunakan panjang gelombang maksimum dalam pemeriksaan
spektrofotometri,

sbb

- panjang gelombang max memiliki kepekaan maksimal karena terjadi perubahan


absorbansi

yang

paling

besar

- Pada panjang gelombang max bentuk kurva absorbansi memenuhi hukum LambertBeer
Hal

yang

perlu

diperhatikan

pada

penentuannya:

Absorban yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai


0,8 atau 15% sampai 70% jika dibaca sebagai transmitans. Anjuran ini berdasarkan
anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan T adalah 0,005 atau 0,5% (kesalahan
fotometrik).
2.

Penentuan

Operating

Time

(OT)

TUJUAN : untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil yaitu saat sampel
bereaksi sempurna dengan reagen warna . Waktu kerja ditentukan dengan mengukur
hubungan antara waktu pengukuran dengan absorbansi larutan
3.

Pembuatan

Kurva

Larutan

Baku

Linier

TUJUAN : untuk memperoleh persamaan larutan baku dalam penentuan kadar


sampel
Tahapan

yang

diperlukan

sbb

a. Dibuat seri larutan baku dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai konsentrasi.
b. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi diukur pada ?max
(berdasarkan hasil ?max yang diperoleh dari tahap 1) dan Operating Time
(berdasarkan

waktu

yang

diperoleh

pada

tahap

2)

c. Membuat Kurva Larutan Baku yang merupakan hubungan antara konsentrasi


(sumbu

y)

dan

absorbansi

(sumbu

x).

d. Bila hukum Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku berupa garis lurus.
e. Paling sedikit menggunakan 5 rentang konsentrasi yang meningkat yang dapat
memberikan

serapan

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

linier

D-53

f.

Kemiringan

atau

slope

adalah

nilai

(absorptivitas

molar).

g. Nilai R antara 0,70 1,00 (pertanda terbentuk garis lurus linear pada rentang
konsentrasi yang dibuat)
Apabila persyaratan pembuatan kurva baku di atas tidak terpenuhi maka
penyimpangan dari garis lurus biasanya dapat disebabkan oleh: (i) kekuatan ion yang
tinggi, (ii) perubahan suhu, dan (iii) reaksi ikutan terjadi.
4. Penentuan Kadar Sampel
Penentuan kadar sampel metode regresi linier yaitu metode parametrik
dengan variabel bebas (konsentrasi sampel) dan variabel terikat (absorbansi sampel)
menggunakan persamaan garis regresi Kurva Larutan Baku. Konsentrasi sampel
dapat dihitung berdasarkan persamaan kurava baku tersebut
PENENTUAN KETELITIAN METODE SPEKTROFOTOMETRI
Melalui Perhitungan Standar Deviation (SD) dan Relative Standar Deviation
(RSD)
harga SD < 2 dan harga RSD < 2 % dapat dikatakan mempunyai harga ketelitian
yang baik.
PENENTUAN KETEPATAN METODE SPEKTROFOTOMETRI
Metode Penambahan Baku (standard addition method)
Dilakukan dengan menambahkan analit dengan konsentrasi tertentu pada
sampel yang diperiksa, lalu dianalisis lagi metode tersebut (WHO, 1992). Nilai
rentang recovery dianggap baik 80 120%
Uji
Co
C1
C

Perolehan

Kembali

Recovery

(%)

(Co-C1)/C

= konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan larutan baku


=

konsentrasi

sampel

sebelum

penambahan

larutan

baku

= Konsentrasi larutan baku yang ditambahkan

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-54

C. Pigmen Antosianin
Antosianin adalah zat warna alami yang bersifat sebagai antioksidan
yang terdapat dalam tumbuh-tumbuhan. Lebih dari 300 struktur antosianin
yang ditemukan telah diidentifikasi secara alami (Wrolstad, 2001). Antosianin
adalah pigmen dari kelompok flavonoid yang larut dalam air, berwarna merah
sampai biru dan tersebar luas pada tanaman. Terutama terdapat pada buah dan
bunga, namun juga terdapat pada daun. Kadar antosianin cukup tinggi terdapat
pada berbagai tumbuh-tumbuhan seperti misalnya: bilberries (vaccinium
myrtillus L), minuman anggur merah (red wine), dan anggur (Jawi dkk.,
2007).
Manusia sejak lama telah mengkonsumsi antosianin bersamaan
dengan buah dan sayuran yang mereka makan. Selama ini tidak pernah terjadi
suatu penyakit atas keracunan yang disebabkan oleh pigmen ini sehingga
antosianin aman untuk dikonsumsi, tidak beracun dan tidak menimbulkan
mutasi gen (Nugrahan ,2007). Beberapa penelitian di Jepang menyatakan
bahwa antosianin memiliki fungsi fisiologi. Misalnya sebagai antioksidan
antikanker, dan perlindungan terhadap kerusakan hati (Tanuwijaya, 2007).
Antosianin berperan pangan sebagai food
ingredient yang sangat berguna bagi kesehatan mata dan retina yang pertama
kali dipublikasikan di Jepang pada tahun 1997 (Imelda, 2002).
C.1 Sifat Fisik Antosianin
Antosianin adalah kelompok pigmen yang berwarna merah sampai
biru yang tersebar dalam tanaman. Pada dasarnya, antosianin terdapat dalam
sel epidermal dari buah, akar, dan daun pada buah tua dan masak. Pada

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-55

beberapa buah-buahan dan sayuran serta bunga memperlihatkan warna-warna


yang menarik yang mereka miliki termasuk komponen warna yang bersifat
larut dalam air dan terdapat dalam cairan sel tumbuhan (Fennema, 1976).
Zat pewarna alami antosianin tergolong ke dalam turunan
benzopiran. Struktur utama turunan benzopiran ditandai dengan adanya dua
cincin aromatik benzena (C6H6) yang dihubungkan dengan tiga atom karbon
yang membentuk cincin (Moss, 2002).
Menurut De Man (1997), pigmen antosianin terdapat dalam cairan
sel tumbuhan, senyawa ini berbentuk glikosida dan menjadi penyebab warna
merah, biru, dan violet yang banyak terdapat pada buah dan sayur. Antosianin
berwarna kuat dan namanya diambil dari nama bunga. Sebagian besar,
antosianin mengalami perubahan selama penyimpanan dan pengolahan.
C.2 Sifat Kimiawi Antosianin
Secara kimia semua antosianin merupakan turunan suatu struktur
aromatik tunggal, yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk dari pigmen sianidin
ini dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil, metilasi dan
glikosilasi (Harborne, 1996). Antosianin adalah senyawa yang bersifat amfoter,
yaitu memiliki kemampuan untuk bereaksi baik dengan asam maupun dalam
basa. Dalam media asam antosianin berwarna merah seperti halnya saat dalam
vakuola sel dan berubah menjadi ungu dan biru jika media bertambah basa.
Perubahan warna karena perubahan kondisi lingkungan ini tergantung dari gugus
yang terikat pada struktur dasar dari posisi ikatannya (Charley, 1970).
Sifat fisika dan kimia dari antosianin dilihat dari kelarutan antosianin
larut dalam pelarut polar seperti metanol, aseton, atau kloroform, terlebih sering

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-56

dengan air dan diasamkan dengan asam klorida atau asam format (Socaciu,
2007). Antosianin stabil pada pH 3,5 dan suhu 50C mempunyai berat molekul
207,08 gram/mol dan rumus molekul C15H11O (Fennema, 1996). Antosianin
dilihat dari penampakan berwarna merah, merah senduduk, ungu dan biru
mempunyai panjang gelombang maksimum 515-545 nm, bergerak dengan eluen
BAA (nbutanol- asam asetat-air) pada kertas (Harborne, 1996).
C.3 Warna dan Stabilitas Antosianin
Warna dan stabilitas pigmen antosianin tergantung pada struktur
molekul secara keseluruhan. Substitusi pada struktur antosianin A dan B akan
berpengaruh pada warna antosianin. Pada kondisi asam warna antosianin
ditentukan oleh banyaknya substitusi pada cincin B. Semakin banyak substitusi
OH akan menyebabkan warna semakin biru, sedangkan metoksilasi
menyebabkan warna semakin merah (Arisandi, 2001)
Degradasi antosianin terjadi tidak hanya selama ekstraksi dari
jaringan tumbuhan tetapi juga selama proses dan penyimpanan jaringan
makanan (Fennema, 1996). Kestabilan antosianin dipengaruhi oleh beberapa
faktor antara lain pH, temperatur, sinar dan oksigen, serta faktor lainnya seperti
ion logam (Niendyah, 2004).
C.3.1 Transformasi Struktur dan pH
Pada umumnya, penambahan hidroksilasi menurunkan stabilitas,
sedangkan penambahan metilasi meningkatkan stabilitas. Warna dalam makanan
mengandung antosianin yang kaya akan pelargonidin, sianidin, atau aglikon
delpinidin kurang stabil dari makanan yang kaya akan petunidin atau aglikon
malvidin (Fennema, 1996).

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-57

Faktor pH ternyata tidak hanya mempengaruhi warna antosianin


ternyata juga mempengaruhi stabilitasnya. Antosianin lebih stabil dalam larutan
asam dibanding dalam larutan alkali (Markakis, 1992). Dalam medium cair
kemungkinan antosianin berada dalam empat bentuk struktur yang tergantung
pada pH. Struktur tersebut adalah basa quinoidal (A), kation flavilium (AH+),
basa karbinol yang tidak berwarna (B), dan khalkon tidak berwarna (C) ( Von
Elbe and Schwartz, 1996 dalam Arthey dan Ashurst, 2001).

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-58

The pH Differential Method


One way of determining the concentration of anthocyanin pigment in samples is through
The
use of visible-light spectrophotometry. The spectrophotometric method of determinis
anthocyanin pigment concentration is called the pH differential method. This method is
based on the known fact that anthocyanin pigmentation is uniquely pH dependent. At a pH
of 1.0, anthocyanins are colored, they transmit various wavelengths from orange to purple
light, depending on the specific anthocyanin. At a pH of 4.5, however, all anthocyanins
arecolorless. This change in pigmentation is due to a change in the ring C Starcture of
anthocynins (see figure below).
This relatively unique pH-dependent change in pigmentation can be Measures
spectrophotometrically and can used to determine anthocyanin concentration in fruits Ana
wines at the exclusion of other sources of similar pigmentation, such as artifical colorants.
PH Metode Diferensial
Salah satu cara untuk menentukan konsentrasi pigmen antosianin dalam sampel adalah
melalui

penggunaan

spektrofotometri

cahaya

tampak.

Metode

spektrofotometri

menentukan
konsentrasi pigmen antosianin yang disebut metode pH diferensial. Metode ini didasarkan
pada fakta diketahui bahwa pigmentasi antosianin unik tergantung pH. Pada pH 1,0,
anthocyanin yang berwarna, mereka mengirimkan berbagai panjang gelombang dari
oranye
ke ungu muda, tergantung pada antosianin tertentu. Pada pH 4,5, namun, semua
anthocyanin
tidak berwarna. Perubahan pigmentasi disebabkan perubahan dalam struktur cincin C dari
anthocynins (lihat gambar di bawah).Perubahan tergantung pH yang relatif unik dalam
pigmentasi dapat diukur dengan spektrofotometer dan dapat digunakan untuk menentukan
konsentrasi antosianin dalam buah-buahan dan anggur pada mengesampingkan sumber
pigmentasi yang sama, seperti pewarna buatan.
http://cellbiologyolm.stevegallik.org/node/89

LABORATORIUM DASAR TEKNIK KIMIA I

D-59

DIPERIKSA
NO
1

KETERANGAN

TANGGAL
17
2014

Desember Perbaiki:
-Cover (tebal, huruf
kapital)
-prakata (tanpa poin)
-intisari
-Halaman Pengesahan
(NIM)
-BAB IV (tabel)
-space dan after space
-Dapus

TANDA TANGAN