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OH
H
_
_
H C
OH
_
O
H
_
_
H C
C
H
OH
antranol
R_
_
O
_
C_
H
_
O
OH
OH
__
O
H2 O
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promove sua decomposio a cido levulnico e cido frmico, o que redunda na formao de
produtos de condensao escuros conhecidos como humina.
Outras substncias orgnicas produzem descolorao do reagente e aparecimento de uma cor
marrom, fruto de sua decomposio.
O teste de Antrona muito sensvel e pode ser usado, quando modificado, para
quantificao de glicdios.
2. Reao de Seliwanoff
Teste de diferenciao entre cetoses e aldoses
A reao feita com resorcinol em meio de HCl, quente. As cetohexoses do uma cor vermelha
que se desenvolve rapidamente; as aldohexoses correspondentes reagem mais lentamente. Durante o
tempo em que as cetohexoses so desidratadas e reagem com o resorcinol, fornecendo o produto de
condensao vermelha, as aldohexoses do apenas uma colorao rosa plida.
OH
O
HOH2C
H
H OH
OH H
OH
CH2OH
HO2HC
COH
3 H2O
OH
resorcinol
hidroximetilfurfural
cetohexose
3. Reao de Bial
Teste para identificao de pentoses e certos cidos urnicos (galacturnico, glicurnico,
etc.) que se decompem durante o aquecimento, em presena de H+, formando pentoses.
O reagente consiste de orcinol em meio de HCl concentrado em presena de ons Fe 3+. O furfural
proveniente da desidratao de pentoses, quando aquecido em presena do reagente de Bial, d uma
cor verde. O hidroximetilfurfural (hexoses) reage dando uma cor diferente (que vai de amarelo a
marrom).
HO
CH3
C OH
O
H C H H C C
H
HO
OH
pentose
O
H
O
furfural
+
OH
HO
orcinol
(5 metil 1, 3 dihidroxi benzeno)
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O teste de Bial foi modificado para permitir quantificar pentoses. Respondem tambm ao
teste de Bial trioses e o cido 5-cetoaldnico.
As cetoheptoses do uma cor prpura enquanto que as cetohexoses e metilpentoses
fornecem uma soluo de cor laranja onde, posteriormente, em repouso, forma-se um precipitado de
cor verde escura.
cidos urnicos: produtos de oxidao do grupo lcool primrio dos glicdios.
cidos aldnicos: produtos de oxidao da carbonila aldedica dos glicdios.
Poder Redutor
Os acares contm grupos aldedos e cetonas capazes de reduzir sais de metais pesados; desses os
mais usados so, geralmente, os sais de Cu2+.
O princpio fundamental de todos os procedimentos analticos que utilizam Cu2+ sua
dissoluo em meio alcalino, em presena de cidos orgnicos - como cido ctrico e o cido
tartrico - capazes de formar complexo.
Tambm podem ser empregados outros cidos orgnicos como EDTA, cido lctico e cido
trihidroxiglutrico, ou um cido sacrico. cidos sacricos so o produto da oxidao da carbonila
aldedica e do grupamento lcool primrio dos glicdios sendo, portanto, cidos dicarboxlicos.
A reao de formao do complexo ocorre, em geral, em meio fortemente alcalino e isto
promove profundas modificaes na estrutura do acar.
Os acares, individualmente, apresentam poder redutor diferente sobre o Cu2+; isto
significa que dois tipos de hexoses, numa mesma concentrao fornecem quantidades diferentes de
xido cuproso (produto final da reduo). De qualquer forma, os mtodos podem ser adaptados de
modo a se tornarem reprodutveis e a haver proporcionalidade entre a quantidade de Cu2O
produzido e a concentrao de glicdios presente dentro de certo limite (certa faixa).
A quantidade de ons cobre reduzida pelos diferentes glicdios funo do pH, da
temperatura, da concentrao e tipo de glicdios e do tipo de on orgnico complexante.
H diversos mtodos para determinao do teor de Cu2O, como, por exemplo, gravimetria e
colorimetria. No ltimo caso, o Cu2O formado dissolvido num excesso de reagente como
fosfomolibdato, fosfotungstato ou arsnio-molibdato, formando-se um complexo de cor azul. Este
procedimento muito adequado para verificao de glicdios em materiais biolgicos.
Dentre os testes baseados no poder redutor dos glicdios, podemos destacar os testes de
Benedict e de Barfoed modificado.
1. Teste de Benedict
Teste geral para glicdios redutores
O reagente consiste de uma nica soluo onde esto presentes ons de Cu2+, citrato e carbonato de
sdio. A reao complexa e influenciada por uma srie de fatores; podendo ser esquematizada
por:
Cu2+ + glicdio composto oxidado + Cu2O
(precipitado vermelho)
As transformaes intermedirias sofridas pelo glicdio no so completamente conhecidas,
mas foram identificados produtos como cido metassacarneos e osonas, resultantes de reaes de
oxirreduo intramoleculares e rearranjos.
3
COOH
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COOH
OH
H
CH 2OH
cido metas s acarneo
CH 2OH
os ona
COOH
cido dicarboxlico
(cido s acrico ou s acarneo)
H3PO4.12MoO3
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Reao
Propriedade
Antrona
Reagentes
Aplicao
Antrona + H2SO4
Identificao de
glicdios
Resorcinol + HCl
conc.
Diferenciao entre
cetose e aldose
Bial
Orcinol + HCL +
FeCl3
Identificao de
pentoses e certos
cidos urnicos
Benedict
CuSO4 + citrato de
sdio + carbonato de
sdio
Identificao de
glicdios redutores
1) Acetato cprico +
cido lctico
2) cido
fosfomolbdico
Diferenciao entre
monossacardeo e
dissacardeos
redutores
I2 + KI (Lugol)
Identificao de amido
Seliwanoff
Barfoed
(modificado)
Iodo
Formao de complexo de
incluso com a amilose
Referncias:
Manual de Cursos Prticos em Bioqumica.
Departamento de Bioqumica, Instituto de Qumica, UFRJ.
Fundamentos de Bioqumica Experimental.
Jos Raul Cisternas, Jos Varga, Osmar Monte. 2 ed., Editora Atheneu, So Paulo, 2001.
LEHNINGER - Principles of Biochemistry
David L. Nelson, Michael M. Cox. Fifth Edition. W. H. Freeman and Company, New York, 2008.
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Anexo 1
D - Aldoses com 3 a 6 tomos de carbono
CHO
|
H_ C_ OH
|
CH2OH
Legenda:
CHO
OH
D-gliceraldedo
D-eritrose
D-ribose
D-alose D-altrose
D-arabinose
D-glicose D-manose
D- treose
D-xilose
D-gulose D-idose
D-lixose
D-galactose D-talose
Observaes:
1) As setas indicam as relaes estereoqumicas, no as vias biossintticas.
2) A configurao em torno do C2 distingue os membros de cada par de monossacardeos.
3) As formas L correspondentes a esses 15 acares so suas imagens especulares.
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Anexo 2
D - Cetoses com 3 a 6 tomos de carbono
CH2OH
|
C O
|
CH2OH
Legenda:
C=O
OH
Diidroxiacetona
D-eritrulose
D-ribulose
D-psicose
D-frutose
D-xilulose
D-sorbose
D-tagatose
Observao:
A configurao em torno do C 3 distingue os membros de cada par.
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Anexo 3
Estrutura cclica de oses
Estrutura cclica
de Tollens
H
C
H-C-OH
H2O
HO-C-H
OH
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
H-C- OH
CH2OH
H-C-OH
H2O
CH2OH
D-glicose
forma aldedo livre
CH2OH
O
H 5
H
H
1
4
OH H
HO
OH
6
H-C-OH
HO-C-H
H-C-OH
OH
C1
OH
H-C-OH
H-C5
aps ciclizao: hemiacetal
forma glucopiranose
(ponte osdica 1-5)
Estrutura cclica
de Tollens
C=O
H2O
HO-C-H
H-C-OH
H-C-OH
CH2OH
D-frutose
forma cetona livre
CH2OH
OH
C
OH
HO-C-H
CH2OH
hidrato de cetona
OH
-D-glucopiranose
Configurao
de Haworth
CH2OH
C2 OH
HO-C-H
H-C-OH
H-C- OH
CH2OH
hidrato de aldedo
CH2OH
Configurao
de Haworth
HOH2C
H-C-OH
H2O
H-C5
CH2OH
H HO
H4
OH
OH
CH2OH
aps ciclizao: hemicetal
forma frutofuranose
(ponte osdica 2-5)
-D-frutofuranose
Observao:
Quando um monossacardeo se cicliza, o carbono da carbonila, denominado carbono anomrico, torna-se um
centro quiral com duas configuraes possveis.
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Anexo 4
Dissacardeos
Lactos e
HO
6CH2OH
5
O
H
OH
H
1
6CH2OH
O
5
H
OH H
H
1
OH
OH
OH
D-g alacto s e ()
D-g licos e ()
po nt e o s dica
- 1, 4
M altos e
6CH2OH
H 5 O
H
OH
HO
6CH2OH
O
5
H
OH H
H
1
OH
OH
OH
D-g licos e ()
D-glico s e ()
po n te os d ica
- 1, 4
Sacaros e
6CH2OH
H 5 O
4
HO
H
OH
HOH2C1
2
H
2
H HO
3
OH
OH
6CH2OH
H 5 O
C
H OH
6 2
H
OH
ou
HO
OH
-D-frutos e
D-glico s e ()
p on t e os dica
- 1, 2
O
HOH2C6
5
O
H HO
H4
OH
CH2OH
1
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3. PROCEDIMENTO
a) Teste de Antrona
Em tubo de ensaio colocar 0,2 mL das solues a serem testadas.
Adicionar cuidadosamente 1 mL do reagente de antrona.
Fazer o teste com solues de glicose 0,1M, sacarose 0,1M, cido glutmico 0,1M, amido
0,5% e CMC 0,5 %.
Fazer um branco de reao com 0,2 mL de gua destilada.
A reao praticamente imediata e o teste considerado positivo se apresentar cor verde intensa.
Observar: a) com que glicdio aparece o anel verde
b) em que tubo a colorao verde mais intensa
c) o aquecimento provocado pela diluio de H2SO4 na gua, tocando a base dos
tubos com cuidado.
Anotar os resultados na tabela anexa.
b) Teste de Seliwanoff
Em tubo de ensaio colocar 0,2 mL das solues a serem testadas.
(*)
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12
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Tabela de Resultados
Teste
Substncias Testadas
Observaes
glicose
sacarose
Antrona
amido
CMC
cido glutmico
glicose
frutose
Seliwanoff
sacarose
lactose
glicose
arabinose
Bial
cido poligalacturnico
furfural
glicose
frutose
Benedict
sacarose
lactose
amido
glicose
Barfoed
lactose
(modificado) sacarose
amido
dextrina
Iodo
CMC
agar
13