UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA

INGENIERIA EN INDUSTRIAS AGROPECUARIAS

ANLISIS INSTRUMENTAL
ARTCULO
MTODO ANALTICO POR CROMATOGRAFA LQUIDA DE
ALTA RESOLUCIN PARA EL ESTUDIO DE ESTABILIDAD DEL
JARABE DE LORATADINA 0,1 %

NOMBRE:
GABRIELA A. ARCINIEGA A.
PROFESOR:
ING. GEOVANNY FIGUEROA

LOJA ECUADOR
2007

Rev Cubana Farm 2007; 41(1)

Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos
Mtodo analtico por cromatografa lquida de alta resolucin para el
estudio de estabilidad del jarabe de loratadina 0,1 %
Leonid Torres Amaro, 1 Caridad M. Garca Pea2 y Zenia Pardo Ruiz2

RESUMEN
Se valid un mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin para el estudio
de estabilidad del jarabe de loratadina 0,1 %. La curva de calibracin en el
rango de 13,6 a 3,36 g/mL fue lineal, con un coeficiente de correlacin igual a
0,99975; la prueba estadstica para el intercepto y la pendiente, no significativa.
El recobrado obtenido result de 100,2 % en el rango de concentracin
estudiado, y las pruebas de Cochran y Student (t), no significativas. El
coeficiente de variacin en el estudio de repetibilidad fue igual a 0,41 % para 10
rplicas ensayadas, mientras que en la reproducibilidad las pruebas de Fischer
y Student, no significativas. El mtodo result especfico, lineal, preciso y
exacto.
Palabras clave: Loratadina, cromatografa lquida de alta resolucin,
validacin.
Loratadina es un derivado piperidnico de la azatadina, de accin
antihistamnica con actividad central sedativa o antimuscarina. Es indicado para
aliviar los sntomas de las reacciones de hipersensibilidad, incluyendo la rinitis
alrgica y la urticaria crnica.1,2
Existen reportes de mtodos analticos por espectrofotometra ultravioleta para
formulaciones de loratadina tabletas debido a que es un producto que absorbe
intensamente en la regin del ultravioleta. 3 Para el jarabe de loratadina
aparecen reportes de mtodos analticos por cromatografa lquida de alta
resolucin.4
La cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR) ha dado la posibilidad al
analista de usar esta herramienta para solucionar los inconvenientes de los
mtodos espectrofotomtricos en los estudios de estabilidad, pues adems de
presentar una alta sensibilidad y exactitud, es en esencia un mtodo
separativo; lo que permite medir con gran selectividad el compuesto deseado,
siempre y cuando se encuentre un sistema cromatogrfico que asegure una
adecuada separacin.4

La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas

documentadas de que el mtodo es lo suficientemente fiable para producir el
resultado.5-8
En el presente trabajo se describe y valida un mtodo analtico por CLAR a fin
de cuantificar el principio activo para los estudios de estabilidad del jarabe de
loratadina 0,1 %.

MTODOS
La sustancia de referencia qumica de loratadina fue suministrada por el grupo
de sustancias de referencia del Centro de Investigacin y Desarrollo de
Medicamentos (CIDEM). El producto terminado en forma de jarabe al 0,1 %,
fue elaborado en la Grupo de Formas terminadas, perteneciente al CIDEM.
Todos los reactivos utilizados fueron de grado HPLC.
En el ensayo se emple un cromatgrafo (KNAUER) con detector UV/VIS
(KNAUER) ajustado a 254 nm, un dosificador (loo) de 20 L e integrador
(SHIMADZU CR6A), con una sensibilidad de 0,08 AUFS. La separacin se
realiz isocrticamente sobre una columna Licrospher RP 18, 250 mm x 4 mm,
10 m. La fase mvil utilizada consisti en una mezcla filtrada y desgasificada
de metanol: dihidrogenofosfato de potasio 0,013 mol/L, ajustada a pH 7,6-8,0
con hidrxido de potasio 0,1 mol/L en proporcin 8/2 (v/v), con una velocidad
de flujo de 2,0 L/min. Todos los reactivos utilizados fueron de calidad analtica
(MERCK, Alemania).
Con el objetivo de evaluar la especificidad del mtodo cromatogrfico, se
someti el producto terminado de la formulacin seleccionada a oxidacin con
unas gotas de perxido de hidrgeno al 33 %, a hidrlisis con hidrxido de
sodio 1 mol/L y cido clorhdrico 1 mol/L (1:1), colocndose las muestras
durante 30 min. en un bao de agua destilada a 100 C. Previamente se
analiz la sustancia de referencia y el placebo sin degradar y posteriormente
fueron evaluadas por cromatografa lquida de alta resolucin. 9 Las muestras
fueron diluidas con la fase mvil de manera que se obtuviera una concentracin
similar a 20 g/mL.
Se comprob la linealidad del sistema, preparando muestras a diferentes
niveles de loratadina que representan el 68,100,128,148, 168 % de la
concentracin terica del principio activo en el jarabe, evalundose el
coeficiente de correlacin, la ecuacin de la recta, la prueba de linealidad y la
prueba de proporcionalidad.10
La repetibilidad se realiz con una muestra homognea y comn del lote 46
que representa el 100 % de la cantidad terica declarada. La precisin
intermedia se realiz con la misma muestra homognea de concentracin
nica, efectundose las valoraciones en 2 equipos diferentes, 2 das diferentes;
para su evaluacin se realiz un anlisis de varianza, a travs de la

determinacin del coeficiente de variacin, prueba de Fischer y de la t de

Student.11
El estudio de exactitud se desarroll por el mtodo de recuperacin, mediante
la preparacin de muestras con diferentes niveles de loratadina que
representan el 80, 90, 110 y 120 % respectivamente de la concentracin terica
del principio activo en el producto terminado, evalundose los parmetros de la
prueba de la t de Student, de Cochran, ecuacin de la recta y coeficiente de
correlacin.10
Todos los resultados obtenidos fueron evaluados estadsticamente con la
ayuda del programa Microcal Origin 5.0 para Windows.

RESULTADOS
La figura muestra los resultados obtenidos en el estudio de especificidad del
mtodo. Como se observa en el cromatograma correspondiente a la muestra
placebo no se obtuvo ninguna seal en la zona de inters, al ser comparado
con la seal obtenida para la solucin estndar de referencia y de la muestra,
lo cual indica que los excipientes o sustancias auxiliares de la solucin no
interfieren en la determinacin del principio activo. En cuanto a las muestras
sometidas a condiciones drsticas de: hidrlisis bsica, hidrlisis cida y H 2O2.

Fig. Estudio de especificidad. Cromatogramas: A) sustancia de referencia

qumica;
B) placebo; C) muestra; D) muestra en medio cido; E) muestra en medio
bsico.

Simultneamente se realiz un scanning al pico correspondiente al principio

activo en un rango de 200 a 500 nm, obtenindose una pureza del 99,6 %.
La ecuacin de la recta de la curva de calibracin en el rango de
concentraciones entre 13,6 a 33,6 g/mL, se expresa segn y = 0,9815 X +
0,0136, con un coeficiente de correlacin lineal de 0,99854. Al aplicar la prueba
de significacin del intercepto se obtuvo una t cal = 3,91 para una ttab = 4,30.
Cuando se aplic la prueba de linealidad mediante los coeficientes de variacin
de los factores de respuesta CV f se obtuvo como resultado un coeficiente de
variacin CV= 2,1 %.
Los resultados del estudio de la precisin, realizado 2 das diferentes por 2
analistas diferentes, aparecen en la tabla 1.
Tabla 1. Resultados del estudio de la precisin
Repetibilidad
Muestras
%
1
98,0
2
98,1
3
98,5
4
97,9
5
98,3
6
98,2
7
98,5
8
99,0
9
98,3
10

99,1

X media = 98,4 %
DSR= 0,4 %
CV= 0,41 %

Reproducibilidad
Analista 1
Analista 2
Da 1
Da 2
Da 1
Da 2
100,4 % 100,2 %
97,8 %
97,4 %
97,8 %
97,6 %
98,3 %
98,5 %
98,5 %
98,8 %
99,1 %
99,8 %
97,6 %
97,1 %
98,5 %
99,3 %
98,6 %
98,4 %
98,5 %
98,3 %
98,3 %
98,5 %
98,6 %
98,7 %
98,2 %
98,8 %
98,4%
98,5 %
Xm1 =98,5 Xm2 =98,5 Xm1 =98,5 Xm2 = 98,6
%
%
%
%
CV=0,9 % CV= 0,9 % CV= 0,4 % CV =0,74
%
Fcal =1,6
tcal = 0,253
Ftab (6/6; 0,05) = 4,28 ttab (12; 0,05) = 2,18
Intervalo de confianza: 98,5 0,04 %

En la tabla 2 se muestran los resultados obtenidos en el estudio de la exactitud

del mtodo. En la curva de recuperacin, se reportan los mg tericos contra los
mg prcticos, obtenindose la ecuacin de la recta: y= 1,04885 X - 1,1107, con
un coeficiente de correlacin de 0,99624. Al aplicar la prueba de significacin
para conocer la influencia de la concentracin (G de Cochran), se obtuvo una
Gcal= 0,6923 para una Gtab= 0,8709. Al realizar la prueba de significacin entre
la recuperacin media y el 100 % de recuperacin, se obtuvo una t cal= 0,71
para una ttab= 2,45.
Tabla 2. Resultados del estudio de exactitud
mg adicionados

mg recuperados

Recobrado (%) CV (%)

0,01592
0,01871
0,02206
0,02403

0,01591
0,01825
0,02218
0,02411

0,01579
0,01828
0,02222
0,02419

0,01579
0,01822
0,0222
0,02418

98,6
101,8
100,52
100,32

0,50
1,25
0,023
0,023

DISCUSIN
Los resultados obtenidos del anlisis de la muestra placebo, la solucin de
referencia, la muestra del producto terminado y la muestra degradada por
hidrlisis cida, hidrlisis bsica, oxidacin H 2O2, que se muestran en la figura,
demuestran la especificidad del mtodo al no presentarse interferencias de
picos adicionales en la zona de elucin del producto principal. 6
El scanning realizado con el objetivo de determinar la pureza del pico de
loratadina, en el rango de 200 a 500 nm demostr que no exista solapamiento
de otros productos de degradacin.
La curva de calibracin result ser lineal en un rango de concentraciones entre
13,6 a 33,6 g/mL.
Al aplicar la prueba del intercepto, este result ser no significativo ya que la t cal
fue menor que la ttab para 4 g.l. y una probabilidad de 0,05. En la prueba de
linealidad mediante los coeficientes de variacin de los factores de respuesta
CVf se obtuvo un coeficiente de variacin menor del 5 %, lo que demuestra la
adecuada linealidad de acuerdo con el lmite establecido, por lo que se
demuestra el cumplimiento de la linealidad en el intervalo de concentracin
estudiado.7
En el estudio de la repetibilidad se alcanz un coeficiente de variacin de 0,41
%, adecuado lo que nos demuestra la buena precisin del mtodo, segn el
lmite para los mtodos cromatogrficos CV 2 %.8 Los valores obtenidos para
el estudio de la precisin intermedia demuestran que no existen diferencias
significativas entre las precisiones alcanzadas por los analistas en diferentes
das para una probabilidad de 0,05 % ya que el valor de F cal es menor que la
Ftab. Al realizar la prueba de la t de Student el valor calculado result ser menor
que el tabulado para una probabilidad de 0,05 y 8 g.l., lo cual demuestra que no
existen diferencias significativas entre las medias alcanzadas con un nivel de
significacin del 5 %.8
En el rango seleccionado en el estudio de exactitud, los valores de porcentaje
de recobro estuvieron dentro de los lmites establecidos para los mtodos
cromatogrficos (98-102 %) y los valores del coeficiente de variacin para cada
uno de los niveles de concentracin estudiados resultaron ser menor que el 2
%.11
En la influencia del factor concentracin sobre la variabilidad de los resultados
de la exactitud al aplicar la prueba de Cochran se obtuvo que G exp fue menor

que la Gtab para una probabilidad de 005, k= 3 y n= 3; por tanto, las varianzas
de las concentraciones empleadas son equivalentes y nos indican que la
concentracin no influye en la variabilidad de estos.
No existen diferencias significativas entre la recuperacin media (100,2 %) y el
100 % de recuperacin al aplicar la prueba de la t de Student, ya que la t cal fue
menor que la ttab para 6 g.l. y una probabilidad de 0,05, por lo que el mtodo es
exacto.
La curva de recuperacin reportada de mg tericos contra los mg prcticos
demostr un comportamiento lineal, ya que la ecuacin de la recta y el
coeficiente de correlacin se encontraron dentro de los lmites establecidos
para este ensayo. La prueba de significacin del intercepto result no
significativa y el valor de la pendiente no difiere significativamente de la unidad.
Los valores alcanzados de la pendiente, el intercepto y el coeficiente de
correlacin demostraron la exactitud y linealidad del mtodo. 9
En conclusin, el mtodo analtico desarrollado por CLAR para el estudio de
estabilidad del jarabe de loratadina result ser especfico, lineal, preciso y
exacto en el intervalo de concentraciones de 13,6 y 33,6 g/mL

SUMMARY
ANALYTICAL
METHOD
BY
HIGH
RESOLUTION
LIQUID
CHROMATOGRAPHY FOR THE STABILITY STUDY OF LORATIDINE SYRUP
0.1 %
A high resolution liquid chromatography method was validated to study the
stability of loratidine syrup 0.1 %. The calibration curve in the range from 13.6 to
3.36 g/mL was lineal, with a coefficient of correlation equal to 0.99975. The
intercept and slope statistical test was not significant. The recovery obtained
was 100.2 % in the concentration range studied, and the Cochran and Student
(t) tests results were not important. The variation coefficient in the repeatability
study was equal to 0.41 % for 10 replications assayed, whereas in the
reproducibility Fischer and Student tests were not remarkable. The method
proved to be specific, lineal, accurate, and exact.
Key words: Loratidine, high resolution liquid chromatography, validation.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Goodman, Gilman, A. Las bases farmacolgicas de la teraputica. 3ra ed.
Tomo II. La Habana: Edicin Revolucionaria; 1994. p. 791.
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Buenos Aires: Ed. Artes Grficas Farro SA; 1992. p. 106-122, 284, 302-28.
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Sept, 1989. p. 1-94.
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7. International Conference on Harmonization (ICH) of Technical Requirements
for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use, Validation of
analytical procedures, ICH-Q2A, Geneva, 1995.
8. International Conference on Harmonization (ICH) of Technical Requirements
for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use, Validation of
analytical procedures: Methodology, ICH-Q2B, Geneva, 1996. ICH
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Chemistry, Manufacturing, and Controls Documentation. FDA/Center for
Drug Evaluation and Research. 2001.
11. Guidance for Industry. Analytical Procedure and Methods Validation. Draft
Guidance. August, 2000.
Recibido: 11 de octubre de 2006. Aprobado: 17 de noviembre de 2006.
Lic. Leonid Torres Amaro Centro de Investigacin y Desarrollo de
Medicamentos (CIDEM). Ave. 26 No. 1605 entre Boyeros y Puentes Grandes,
municipio Plaza de La Revolucin. La Habana, CP 10 600, Cuba. Correo
electrnico:E-mail: mailto:leonid@cidem.quimefa.cu
1
2

Licenciado
en
Ciencias
Master en Ciencias. Investigadora Agregada.

Farmacuticas.

Investigador

Agregado.

BIBLIOGRAFA
Cromatografa
(on
line).
Disponible
en
Internet
http://bvs.sld.cu/revistas/far/vol41_1_07/far03107.htm. Acceso el 02 de junio
de 2007