Interacciones Beneficiosas
Microorganismos-Planta
DORIS ZIGA DVILA
LEMYB-UNALM
dzuniga@lamolina.edu.pe
Universidad San Antonio de Abad del Cusco
Setiembre 12, 2014
Nitrosomonas
Cianobacterias
Cianobacterias
Rhizobium
Rhizobium
Azotobacter
Azotobacter
Beijerinckia
Beijerinckia
Pseudomonas
Pseudomonas
Bacillusyyotros
otros
aerobios
Bacillus
aerobios
facultativos
facultativos
Clostridiumpasteurianum
pasteurianum
Clostridium
rbol filogentico
circular
Lineal
Fijacin simbitica
Sym
OH
O
Nod
OH O
L
A
I J
Rhizobium
Flavonoides
HO
E F D AB C
CO
Fotosintato
O2
CITOSOL
O2
FLOEMA
CO2
LbO2
Lb
Bacteroide
aspartato
MDH
PHB
AOA malato AOA ATC
PEPC
Glucosa
PEP
RF
XILEMA
Mitocondria
ATC
ATC
Bacteroides
ATP
eNH4
N2
ATP
N2
cetocidosNH
aminocidos
Leghemoglobina
P. vulgaris 24 - 65 Kg N/ha
v. soya
54 -248 KgN/ha
N qumico 20
100
Haba FN 75%
65%
Ibewiro et al (2000)
Mucuna pruriens cultivado con Zea mays
Garbanzo 30%
15%
Frijol holantao
Vicia faba
var. amarilla
CEPAS
Altura
(cm)
Le 1
Le 2
Le 3
Le 4
Le 5
Le 6
Le 7
Le 8
Le 9
Le 10
Le 11
Le 12
Le 13
Le 14
Le 15
Le 16
Le 17
Le 18
Le 19
Control
35.00 A
36.00 A
37.66 A
34.00 A
32.33 AB
34.00 A
32.00 AB
33.66 A
36.00 A
31.66 AB
34.00 A
35.00 A
29.66 AB
30.00 AB
32.33 AB
35.00 A
35.00 A
35.33 A
35.00 A
24.66 B
Peso Verde
Parte Area
(gr)
Peso Seco
Parte Area
(gr)
3.13 AB
3.57 AB
3.27 AB
3.10 AB
3.36 AB
3.10 AB
3.90 A
3.23 AB
3.63 AB
3.20 AB
3.70 AB
3.97 A
3.23 AB
3.03 AB
3.63 AB
3.83 A
3.17 AB
3.53 AB
4.00 A
2.53 B
0.30 BCD
0.33 ABCD
0.34 ABCD
0.28 BCD
0.35 ABCD
0.33 ABCD
0.39 AB
0.35 ABC
0.17 E
0.30 BCD
0.38ABC
0.38 A B
0.33 ABCD
0.26 CDE
0.32 ABCD
0.44 A
0.33 ABCD
0.32ABCD
0.38 AB
0.23 DE
Peso Seco
Raz
(gr)
Nmero
Ndulos
0.12 CDE
0.12 CDE
0.16 ABCD
0.21 A
0.21 A
0.11 DE
0.18 ABC
0.14 BCDE
0.09 EF
0.14 BCDE
0.18 AB
0.11 DE
0.13 BCDE
0.12 DE
0.17 ABCD
0.13 BCDE
0.14 BCDE
0.13 BCDE
0.16 ABCD
0.05 F
1.33
1.67
1
1
1.33
1.33
2.33
2.33
1.33
2
2.33
0
0
0
1.33
0
0
1
1.67
0
Lugar
Acobamba
Pachacayo
Altura
(msm)
2500
3600
T minima
(C0)
8
-3.47
T mxima
(C0)
22
19.97
pp (mm/mes)
0 - 500
0 - 550.4
Anlisis mecnico
Lugar
Acobamba 0.41
Pachacayo
Cambiables
50
30
120
pH
Franco 5.8
Franco 7.3
CaCO3 MO P
K
Al+3+H+
%
% ppm ppm ClC Ca2+ Mg2+ K+ Na+ me/100g
cmol(+)kg
0.0
1.76 13
0.11
Bacterias mesfilas
Hongos totales
120
1200
100
80
800
60
400
40
20
0
Ene
Mar
May
Jul
Set
Rhizobium
300
Ene
Nov
400
100
200
0
Ene
Mar
Con fsforo
May
Sin fsforo
Jul
Set
Nov
May
Jul
Set
Nov
Azotobacter
600
200
Mar
Ene
Mart
May
Jul
Set
Nov
Cultivo de P. lunatus
Tarwi
Frijol
Habas
Arvejas
Pallar
Garbanzo
PRUEBA DE AUTENTICACION
DE LAS CEPAS DE
BRADY(RHIZOBIUM)
CRECIMIENTO A pH
8.8
C.E.
MORFOLOGIA
Tamao crecim.
viraje texturaaparie. goma
PPC5N3
Pampa de los Castillos
La Venta
PCEBL2N2Cerro Blanco Ocucaje
PLV4N2 Las vias Ocucaje
PLV4N3 Las vias Ocucaje
7.71
7.59
7.51
7.51
1.26
1.90
1.17
1.17
2.5 mm.
4 mm.
4 mm.
3 mm.
7.52
7.59
7.59
7.59
7.49
7.49
7.52
1.26
1.90
1.90
1.90
0.86
1.01
1.26
1 mm.
1 mm.
1 mm.
1 mm.
0.2 mm.
1 mm.
1 mm.
Lento
Lento
Lento
Lento
Lento
Lento
Lento
7.42
7.49
7.49
7.32
7.49
7.49
7.42
1.26
1 mm. Extralen
1.01 0.1 mm. Extralen
1.01 0.1 - 0.2 mm.
Extralen
0.39 0.1 mm. Extralen
1.01 0.5 mm. Extralen
1.01 0.2 mm. Extralen
1.26 0.2 mm. Extralen
Codigos
Muestreo
Lugar
1%
3
3
3
3
Reg
Reg
Reg
Reg
PRUEBAS BIOQUIMICAS
NaCl
Temp.
ph
2% 3% 4% 8 37 40 4 5 8
3 2 0 1 0 1 1 1 2
3 1 0 1 0 1 0 0 0
3 2 2 1 2 1 0 0 3
2 2 1 1 2 1 0 1 3
9
2
0
2
2
Azul te
Lig Opa Reg
Azul te
Lig Opa Reg
Azul te
Lig Opa Reg
Azul te
Lig Opa Reg
Azul te Crem Opa L. Abu
Azul te
Lig Opa Esc
Azul te
Lig Opa Reg
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
0
1
1
1
3
2
2
1
2
2
1
0
0
1
0
1
1
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
1
2
2
2
2
0
2
1
2
3
2
3
0
2
2
Azul in
Azul in
Azul in
Azul in
Azul in
Azul in
Azul in
2
0
1
1
2
1
1
2
0
1
0
2
1
1
2
0
0
0
2
0
1
1
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
1
1
1
2
1
1
1
1
0
1
1
1
0
0
1
0
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
2
2
2
2
2
2
0
2
2
2
2
2
2
2
Crem
Lig
Crem
Lig
Lig
Lig
Lig
Opa
Opa
Brill
Opa
Opa
Opa
Brill
Reg
Esc
Esc
Esc
Esc
Esc
Esc
o, no crecimiento 2, bueno
1, poco
3, abundante
Codigo
LMA
Solub.Fosf
Tam
Color
Text
Halo
E1
BMP1Nod1
48h
1mm
rosadas
elstica
E5
BMP1Nod4-2 48h
3mm
rosadas
mucosa
E8
BMP2Nod4
48h
1mm
rosadas
mucosa
E10
FCCP1Nod2
48h
2mm
rosadas
mucosa
E13
FCCP2Nod2
48h
1mm
rosadas
mucosa
E14
FCCP2Nod3
48h
2mm
rosadas
mucosa
E15
FCCP2Nod4
48h
1y 2 d
rosadas
mucosa
E16
FCCP2Nod5-
48h
1y 2 d
rosadas
elstica
E17
FCCP3Nod1
48h
2mm
rosadas
mucosa
E18
FCCP3Nod2- 48h
2.5mm
rosadas
elstica
4+
4+
E21
FCCP3Nod4
48h
2mm
rosadas
elstica
4+
4+
E22
FCCP3Nod5
48h
0.5mm
rosadas
mucosa
3+
3+
E26
AAP3Nod4-2
48h
2mm
rosadas
mucosa
3+
3+
CIAT 899
R.tropici
48h
2mm
rosadas
mucosa
3+
CFN42
R.ettli
48h
2mm
rosadas
elstica
3+
2+
E2
BMP1Nod2
24h
2mm
Atorz/ros
acuosas
2+
5+
E3
BMP1Nod5
24h
3mm
rosadas
acuosas
2+
4+
E4
BMP1Nod4-1
24h
3mm
rosadas
mucosa
2+
2+
E6
BMP2Nod1
4mm
rosadas
acuosas
4+
2+
E7
BMP2Nod3
24h
4mm
rosadas
acuosas
4+
E9
FCCP1Nod1
24h
4mm
rosadas
acuosas
4+
E11
FCCP1Nod5
24h
2mm
rosadas
acuosas
4+
E20
FCCP3Nod3
24h
3mm
rosadas
acuosas
2+
E27
AAP3Nod1-1
24h
3mm
rosadas
acuosas
3+
3+
E28
AAP3Nod4
24h
3mm
rosadas
acuosas
3+
24h
1Kb
Bacterias PGPR?
Cepa (9)
11
20
P(7)
E1
Gen 16S
CFN42
CIAT 899
rhizobios
27
Gen rpoB
28
Cepa (11)
10
13
14
15
16
17
18
P(5)+3*
D1
C1
21
26
D2
98
64
92
100
99
0.005
AY738130 R lusitanum p1 7
D14501D01257 A rhizogenes IFO1
75
U89832 R tropici CIAT899 USDA9
90
U29386 R leguminosarum USDA237
87
U28916 R etli CFN42 USDA9032
U71078 R hainanense I66
98
AF364068 R indigoferae CCBAU71
60
Y10170 R sullae IS123 USDA4950
80
U89817 R mongolense USDA1844
67
61 U86343 R gallicum R602sp
AF003375 R yanglingense SH2262
AF364069 R loessense CCBAU7190
D11343 R galegae ATCC43677
99
99 AF025852 R huautlense SO2
E4
Y17047 R undicola LMG11875
D14502D01258 A vitis NCPPB3554
U86344 R giardinii H152
AY341343 R daejeonense L61 KCT
D14503D01259 A rubi IFO13261
100
D14500D01256 A tumefaciens NCP
97
E20
75
E27
70
69 E6
83 E3, E11, E9
E28
X67229 M loti LMG6125
Y14158 M plurifarium LMG11892
D13431 M huakuii IFO15243
93
100
0.02
S1,
S4, S5
V. faba
S6
S13
98
S11
S22
98
100
R. leguminosarum USDA 2370
100
R. indigoferae
R. etli CFN42T
89 100 E10, E18,
E13, E15
P. vulgaris
95
E17
54
99 E16, E14, E26
E1
P2N3
93 R yanglingense CCBAU71623
100
100
R. gallicum R602sp
R. mongolense USDA1844
R. loessense CCBAU7190B
A. rhizogenes Kag3
100
55
R. tropici CFN299
A. rhizogenes Chag4
100
R. huautlense SO2
79
E5
R. galegae
100
R. undicola LMG11875
51
A. tumefaciens C58
94
100 R3, R5
P. lunatus
R6
Mesorhizobium loti USDA3471
65
87
99
Rhizobium comparable al
N qumico
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
Muestreo - 2013
Campo -Arequipa
Invernadero-la molina
Control de fitopatgenos
Anlisis
microbiolgico
Bacillus spp.
1
2
4
6
Solubilizacin de fosfato
Azotobacter
Producin de AIA
Control negativo
Control positivo
+
Hall et al., 1996 and Glick et al., 1998
BA
T1
BA
T2
C
C
Variedad Desiree
Variedad Unica
BA
C
T3
BA
C
Variedad Yungay
Variedad Canchan
T4
Variedad Canchan
Variedad Yungay
30
25
25
peso (gr)
15
10
20
15
10
5
7M
8+
tro
on
.A
B
a
7M
cC
IB
Ba
c1
1a
cE
Ba
B.A
ntr
ol
Co
peso (gr)
20
DNA
1Kb
12000
2000
1650
1000
850
500
200
100
Box-PCR
Eric-PCR
Plus 2g 2p 6 8
A A B C
10 12
C C
B C C C
Total de cepas 20
Perfiles Box 8
Perfiles Erick 8
26 27 9
C C C1
21 22 23 24 25 +
C1 C1 C1 C1 C1
14 15 19 20
D E E E
17
F
30
G
C C D
C C C C C
E F F F
Arbol filogentico de
cepas de Bacillus
Con el gen r16S
84
68
88
60
B. mojavensis
100
0.005
++
B. atrophaeus
B. cereus group
*Sol. Fsforo,
Pro. AIA
Resientes estudios
Pseudomonas sp
Cepa
P. I. (%)
IcPS01-17
IcPS01-18
IcPS01-19
IcPS02
IcPS02-27
84.0%
83.3%
88%
82.0%
75.3%
IcBac01-4
78.7%
84.7%
86%
IcBac02-1
IcBac02-9
IcBac0212
IcBac0213
IcBac0214
IcBac0215
Bacillus sp
IcBac0216
IcBac02P.I. Porcentaje de Inhibicin
21
91.3%
93.3%
83.3%
74.0%
85.3%
77.3%
C
Actividad antagnica de (A) cepas de Bacillus sp (IcBac02-1) y (B)
Pseudomonas sp (IcPs02) contra (C) S. sclerotiorum al 3er da de evaluacin
Porcentaje de inhibicin
0
9
12
13
15.5
31
31
33
33
33
35.5
35.5
35.5
36.5
38
39
39
39
40
44
44
a
b
b
b
b
c
c
cd
cd
cd
cd
cd
cd
cde
cde
cde
cde
cde
de
e
e
A
Figura 3. Actividad
antagnica de cepas
obtenidas de la filsfera de
plantas de caf frente a M.
citricolor.
A: M. citricolor (control) y B
y C: Interaccin M. citricolor
cepa.
Peletizacin en Quinua
Donde
C32: Pseudomona
aislada de la
rizsfera de maca;
PS44, AC4, RH27:
Son cepas aisladas
de la rizsfera de
quinua
Produccin de bioinoculantes
Instituciones que producen inoculantes
Universidad Nacional
Pedro Ruiz Gallo
Universidad Nacional
de Cajamarca
Rizocaj
Universidad Nacional
Agraria La Molina Ecorizo
Universidad Nacional
San Cristbal de Huamanga
Rizomack
Universidad Nacional
San Agustn de Arequipa
Universidad Nacional Agraria
de la Selva, Tingo Mara
Amazona
Andes
Azotolam y Rizolam
Costa
Anlisis Moleculares
Plsmidos simbiticos
Control Microbiolgico
Recuento de hetertrofos
Ph
Perfiles Box
Definicin de parmetros
Para lmites permisibles
Mnimos para Rhizobium
108 cel/ml o 108 cel/ g
Mximos para el resto de mo.
Recuento de mohos y
levaduras
CE
Recuento de actinomycetos
Humedad
Metales pesados*
Anaerobios totales
otros
Recuento de Rhizobium,
Azotobacter, segn el caso
NMP de Rhizobium en plantas
37%
35
30
25
20%
20
15
13%
10
9%
12%
9%
PQ, 545
PB, 250
Productos Biolgicos
Productos Biolgicos
Productos BiolgicosBioestimulantes
- Bacterias
- Hongos - extractos vegetales
Feromonas
Otros
Conclusiones
Segn la Dra Hungra , se aproxima una dcada de oro para la microbiologa del
suelo en la industria, agricultores y la sociedad.
Para el 2040, 2 billones de personas necesitan ser alimentadas, pero a su vez el
mapa concetracin demografica coincide con el mapa de degradacin de suelos,
tornandose mas critico la produccin de alimentos en lugares mas vulnerables.
El consumo de fertilizantes es cuantioso, 173 millones de toneladas y sigue
creciendo, y resulta muy costoso para los paises que lo importan.
Hay contribuciones significativas por Arachis, Censtrosema, Desmodium y Lupinus
por ej, entre 200 a 520 kg de N ha. Por ello las bfn son fundamentales en la
agricultura.
Todos estos estudios nos permite hacer una seleccin integral de las mejores cepas
bacterianas capaces de promover el crecimiento de la planta aun en condiciones
de estres para una aplicacin en el campo.
Se han encontrado respuestas positivas en cultivos de frijol, pallar, papa, maca,
aguaymanto, quinua entre otros, aplicando inoculantes microbianos.
Los parmetros mejorados son, rendimiento, materia seca, contenido de
nutrientes, acido arcorbico, glucosinolatos.
Tambin baja la incidencia de dao causado por agentes fitopatgenos,
Rhizoctonia, Fusarium, nematodes entre otros.
Los microorganismos claves funcionan en condiciones de estres por frio,
deficiencia de humedad, suelos salinos, entre otros.
formulacin de un biofertilizante/controlador biolgico que sea econmico cuyo
uso este orientado hacia la agricultura sustentable y aplicable en diferentes
regiones del pais.
Colaboraciones, Redes
Instituciones Internacionales
CCG, U Nacional Autnoma de Mxico, Cuernavaca-Mxico, Dra. E.
Martnez.
Universidad de Salamanca. Espaa, Dra. E. Velsquez.
CSIC, Granada Espaa, Dr. J. Sanjuan
U Central de Venezuela, Dra. M. Toro
U. Estadual de Londrina-Brasil, Dr. G.Andrade
CNR-Italia, Dra. M. Finetti
CERELA, Tucumn Argentina. Dra. Graciela Vignolo
Instituciones Nacionales
. UNALM Programa de tuberosas, Programa de leguminosas, Ind.
Alimentarias
. INIA-Ministerio de Agricultura, Estacin Experimental Ilpa-Puno. Estacin
Experimental Santa Rita Arequipa
. UNSLGI-Ica
.UNSCH-Ayacucho
Otros: Ecoandino SAC, AA Ica, AA Ocucaje, AA Aymara
Publicaciones en Libros
2012. Manual de Microbiologa Agrcola. Rhizobium, PGPRs, indicadores de
fertilidad e Inocuidad. D. Ziga Dvila. Universidad Nacional Agraria La
Molina.
2011. Microorganisms in Industry and Environment. D. Ziga Dvila, J.
Tolentino Macalup, M. Garca Wong, W. Prez Porras, M. Matsubara Bautista,
L. Ramos Pajuelo & K. Ogata. Characterization of rhizospheric bacteria isolated
from maca (Lepidium meyenii W.) in the highlands of Junin-Peru. From scientific
and industrial research to consumer products. Antonio Mendez Vilas (ed) World
Scientific Pub Co. Chapter: 21-25.
2011. Microorganisms in Industry and Environment. D. Yino Oshiro, L.
Ramos Pajuelo, M. Matsubara Bautista, L. Espinoza Melgar and D. Ziga
Dvila. Effect of different rhizospheric bacterias in the growth of Gossypium
barbadense L. in Per. From scientific and industrial research to consumer
products. Antonio Mendez Vilas (ed) World Scientific Pub Co. Chapter: 41-44.
Proyectos de Investigacin
Proyectos
Procyt-Concytec, Especial-Concytec, Protec-Concytec, Procom-Concytec
Loreal-Unesco-Concytec, Proyecto bilateral CSIC- Concytec, Proyecto
bilateral Mincyt Concytec, Proyecto Fincyt, Proyecto Fidecom, Itunalm.
Profesores
UNALM: Dra. C. Velezmoro, Dr. F. Camarena, Biol. K. Ogatta Ing. R.
Egzquiza, Dr. F. Camarena, Ing. A. Huaringa, A. Mostaceros
Tesis de Biologa
P Calvo, N Kohashikawa, C la Torre, M Garca, W Prez, J Tolentino, L
Ramos, C Arango, P Ortiz, C Ayaipoma, J. Mayo.
Tesis de Maestra y Doctorado
E Ramos, M. Memenza, M Matsubara, K Ogata, R Santos
N Santillana, J Arcos, L Reymundo, L Espinoza,
Bioreactores
cromatgrafo de gases
termociclador en
tiempo real entre otros
.Produccin de bioinoculantes
A bajos costos
.Produccin de metabolitos
.Transcriptmica de la
interacciones Moleculares
entre la bacteria,
fitopatgeno-planta
Muchas Gracias