MICROBIOLOGA: BD PHOENIX
TM M. Soledad Prat M.
Seccin Bacteriologa
TEMARIO
Tecnologa y propsito del Sistema
Ventajas y desventajas de Sistemas
automatizados.
Descripcin del Equipo
Identificacin y AST en Bacilos Gram-negativos
Identificacin y AST en Cocceas Gram-positivas
Experiencia local (ISP)
Encuesta a usuarios
Conclusiones
VENTAJAS
SISTEMAS AUTOMATIZADOS
DESVENTAJAS
SISTEMAS AUTOMATIZADOS
Costo alto de paneles/ muestra
Excesiva confianza en el sistema pudiendo no
detectar errores.
Errores pueden llevar a fallas en tratamiento,
(Ej. cultivos mixtos, identificacin equivocada).
Requiere igualmente analizar pruebas bsicas.
Requiere anlisis a cargo de profesional
competente.
Puede requerir uso agregado de pruebas
complementarias (> costo).
USO PREVISTO
El Sistema Automatizado para Microbiologa BD
Phoenix est diseado para la identificacin (ID)
rpida y la prueba de sensibilidad a antibiticos
(AST) en bacterias de importancia clnica
El sistema Phoenix proporciona resultados rpidos
para la mayora de las bacterias aerbicas grampositivas as como para la mayora de las bacterias
aerbicas y anaerbicas facultativas gramnegativas de origen humano.
FUNDAMENTOS TECNICOS
ID
En ID , muchas de las pruebas empleadas en los
paneles del Sistema Phoenix son modificaciones
de
los
mtodos
clsicos,
bioqumicos
convencionales.
Incluyen pruebas para la fermentacin,
oxidacin, degradacin e hidrlisis de diversos
sustratos.
Adems, el Sistema Phoenix utiliza sustratos
cromognicos y fluorognicos, as como
sustratos con fuentes de carbono nicas para la
identificacin de los organismos.
IDENTIFICACION BACTERIANA
(ID)
La produccin de cido se indica por un
cambio en el indicador rojo fenol, si la bacteria
utiliza carbohidratos como sustrato.
Los sustratos cromognicos producen un color
amarillo por la hidrlisis enzimtica.
Los organismos que utilizan una fuente
especfica de carbono reducen el indicador
basado en resazurina.
Existen otros tests que detectan la capacidad
del organismo para hidrolizar, degradar,
reducir o utilizar de otro modo un sustrato.
FUNDAMENTOS TECNICOS
AST
El mtodo AST del Sistema Phoenix es una versin
miniaturizada modificada de la tcnica de dilucin
doble de microdilucin en caldo.
Los test de sensibilidad en el Sistema Phoenix se
realizan mediante la determinacin del
crecimiento bacteriano en presencia de diversas
concentraciones de antibitico, analizado con la
ayuda del indicador AST .
El mtodo AST del sistema Phoenix es un test de
microdilucin que utiliza caldo de cultivo.
SUSCEPTIBILIDAD AST
Utiliza un indicador redox para detectar el
crecimiento del organismo en presencia de un
antibitico.
Se realizan mediciones continuas de los
cambios del indicador, as como la turbidez
bacteriana.
Cada configuracin del panel para AST
contiene diversos antibiticos con un amplio
rango de concentraciones de doble dilucin 1:2.
Se utiliza la identificacin del organismo para
interpretar los valores CIM de cada antibitico.
BD Phoenix PANELES
Cuenta con paneles para identificacin y paneles
combinados para ID y Susceptibilidad.
Velocidad proporcionando Exactitud y Precisin:
ID en promedio de 2-3 hrs, lectura hasta 12 hrs.
Se pueden configurar:
Alertas para resultados de pacientes crticos.
Alertas para deteccin de mecanismos de resistencia.
EQUIPO / PANELES
Realiza un mximo de 100 tests de ID y AST , al mismo tiempo, en
paneles combinados .
El panel es una bandeja de poliestireno moldeada sellada y
autoinoculante, con 136 micropocillos con reactivos liofilizados.
El panel combinado incluye un lado para ID (51 pocillos) con
sustratos liofilizados para la ID de bacterias y un lado para AST (85
pocillos) con concentraciones variables de antibiticos.
Contiene controles interno de crecimiento y controles presencia
indicador redox (AST).
Utiliza un indicador redox colorimtrico optimizado para AST.
Utiliza indicadores colorimtricos y fluorimtricos para ID.
Utiliza caldo AST con ajuste de cationes (ej.: Ca++ y Mg++) para
optimizar el rendimiento de los anlisis de sensibilidad.
CALDO ID,
CALDO AST
INDICADOR
PHOENIX
SPEC
NEFELOMETRO
PANELES ID, AST, ID/AST
INOCULACION PANELES
Los paneles Phoenix se inoculan con una densidad
equivalente al patrn 0,5 de McFarland (0,5 y 0,6 es
aceptable).
Las suspensiones deben prepararse slo con el nefelmetro
BBL CrystalSpec o BD PhoenixSpec.
Inoculados, los paneles se colocan en el instrumento y se
incuban a una temperatura constante de 35 C.
El instrumento analiza los paneles cada 20 minutos hasta un
mximo de 16 horas en caso necesario.
No es posible realizar una lectura manual.
BD PHOENIX TAXA
48
152
300
GP
GN
Strepto
Gram Negativos
Enterobacterias
No-Fermentadores
Otros Bacilos Gram-
Gram Positivos
Staphylococcus
Enterococcus
Bacilos Gram +
Streptococcus (48)
PRUEBAS SUPLEMENTARIAS
ID
BD Phoenix AST
F. Quinolonas: 10 clases
Aminoglicsidos: 10 clases
Rifamicina: 1
B Lact/Inh B lact: 7 clases
B Lactamicos Pen: 7 clases
Carbapenemes: 3 clases
Cephem: 24 clases
Peptido ciclico: 1
Folatos: 3 clases
Glicopeptidos 2 clases
Ketolidos: 1
Lincosamida: 1
Macrolido: 3 clases
Monobactam: 1
Phenicol: 1
Lincosamida: 1
Fusidane: 1
Nitrofurano: 1
Oxazolidinona: 1
Ac. Pseudomnico: 2 clases
Quinolonas: 1
Streptogramina: 2 clases
Tetraciclina: 2
Otros: 4
0,5
1,0
2,0
4,0
MIC
8,0
16,0
32,0
DETECCION MECANISMOS
RESISTENCIA
Confiabilidad y velocidad para pacientes crticos
Deteccin de mecanismos de resistencia basados en test especficos o
antimicrobianos probados en el panel.
Phoenix
MARCADORES RESISTENCIA
-Lactamasa en Staphylococcus (Nitrocephin test)
Meticilina Resistencia Staphylococcus
MRS basada en Interpretacin a Oxacilina.
mecA predice basado en Cefoxitin
Vancomicina Resistencia Enterococcus y Staphylococcus
(basado en CIM a Vancomicina).
Resistencia Enterococcus a alto nivel de Aminoglicosidos
(Gentamicina 500 mcg/ml and Streptomicina 1000 mcg/ml
MLSb resistencia en Staphylococcus and Streptococcus
Automtica si Clindamicina y Eritromicina = R
Clasificada manualmente (ind. MLSB or efflux) basada en
D test
-Lactamasa de Espectro Extendido en Enterobacterias.
ALARMAS EN RESULTADOS DE
PACIENTES CRITICOS
Informe selectivo:
- alertas en resultados de pacientes crticos
- alertas ante deteccin de mecanismos de
resistencia.
- rpido informe de resultados de ID & AST
- rapido informe depende del crecimiento
-Valor verdadero del CIM
N
cepas
Desempeo
507
89,9% T: 2-12
hrs
89,1% T: 4 hrs
84,2% T: 5 hrs
138
57
AST
Observ.
Referencia
No se
alcanzan
valores
> 90%
OHara et al.
JCM 2006
Enterobacte 231
rias
(31
esp.)
ID y AST
ID: 94,4%
EA: 98,7%
CA: 97,7%
VME: 0,38%, ME
0,3%
mE 1,8%
100%
Deteccin
BLEE
Carrol et al.
JCM 2006
Enterobacte 494
rias
BNF
110
ID y AST
98,4%
EA: 94,2%
CA: 97,3%
VME: 1,6%, ME 0,6%
mE 1,9%
98,5%
Deteccin
BLEE
Menozzi et al.
JCM 2006
Enterobacte 163
rias
BNF
53
ID y AST
98%
T: 2-12 hrs
P.aer. 100%
Otros 37,5%
CA: 99,5%
VME: 0,3%
ME : 0,2%
mE: 3,2%
Referencia
Estndar
CLSI.
Resultados
comparables
Snyder et al.
ASM 2006
(compara con
MSCan)
99,1%
95,5%
0,7%
1,3%
4,5%
DETECCION DE BLEE
N cepas Resultado
E. coli BLEE+ 174
K.pn. BLEE + 19
Resultado
Observ.
Referencia
Phoenix
E.coli 96%
K.p 89,4%
T: 95,3%
Vitek 2
E.coli 99,4%
K.p 100%
T: 99,5%
Compara Vitek 2 y
Phoenix. Referencia: ETest y Difusin CLSI
Trevio et al.
Enfermed.
Infecciosas y
MC. 2009.
E.coli
K.pn y K.
oxytoca
102
Phoenix
S: 96%
(99%)*
E: 81%
(58%)*
Vitek 2
S: 91%
(89%)*
E: 85%
Compara Vitek 2 y
Phoenix. Referencia:
Caracterizacin
enzimtica molecular
*regla adicion. experto
S.Thomson et
al. JCM.2007
Distintas
especies
510
BLEE +
:288
Secuenc.
Phoenix
319 + ms 2
K.oxytoca
Referencia: Mtodos
fenotpicos y
secuenciacin
Sanguinetti et
al. JCM.2003
Enterobact.
Met.
Fenotpico
319 +
Compara Vitek1 y 2 y
Phoenix. Referencia: ETest cepas clin. y
Genotipificac. cepas Ref.
Leverstein et
al. JCM 2002
BLEE + y -
E.coli
Klebsiella
spp
cepas:
74 cepas
clnicas
17 cepas
referen.
Hiperpro.K1
S: 100% E:
98,9%
Vitek1:
83%
Vitek 2
78%
Phoenix: 89%
E-Test: 94%*
Desempeo
AST
Observ.
Referencia
ID y AST*
B
lactmicos
amplio
espectro
136
95,6%
EA: 94,2%
CA: 93,1%
VME: 0%
ME: 5,2%*
mE: 5,1%*
Dificultad de medir
CIM en B.lact
(cefepime) por
complej. mecanismos
resistencia
Endimiani et
al.
Microbiolgi
ca. 2002
ID
65
clnicas
122
referencia
Phoenix
75% 67%
Vitek 2
61% 42%
MicroScan
75% 57%
No se obtienen
Turnbull et
resultados aceptables al.
ASM.2002
153
Phoenix
50%
Vitek 2
53%
P: 0,624
No se obtienen
Brisse et al.
resultados aceptables JCM.2002
(Compara
ID
B. cepacia
(Compara
varios
Mtodos)
varios
Mtodos)
BNF
1
CAPACIDAD DE DETECCION
OTRAS RESISTENCIAS
Deteccin Resistencia a Imipenem en Acinetobacter baumannii. Se
compara Phoenix, Vitek y Microscan . Solamente Microscan no obtuvo
resultados aceptables, los otros sistemas aceptables y comparables. (BMC
Infecctions Diseases 2009).
Susceptibilidad de P.aeruginosa ante Beta lactmicos se compara Phoenix,
Microscan y Vitek 1 y 2. Se obtuvo en todos los sistemas inaceptables niveles
de error con falsa susceptibilidad con TZP e IMI y falsa resistencia con ATM,
FEP, CAZ. Comparados como referencia CLSI por difusin y CIM. Se
recomienda mtodos alternativos en estos casos.(JCM. 2007).
Inconsistentes resultados con TZP?. Se estudia la capacidad de detectar
Resistencia a TZP en cepas de E. coli por Phoenix, Microscan, Vitek . Se
compara con mtodo referencia Microdilucin en caldo. Estudio de
reproducibilidad en 20 das.
Cepas resistentes presentaron variabilidad de resultados en el mtodo de
referencia y , en mtodos automatizados siendo el Phoenix el que obtuvo
resultados ms cercanos al de referencia, CA 74%. (ICAAC, 2005).
CARBAPENEMASAS EN
ENTEROBACTERIAS
Trabajo sin publicar ( F.Pasteran et al. INEI , C.Malbrn. Argentina).
Capacidad del Phoenix para Deteccin Cabapenemasas Clase A, comparado
con Dilucin en agar y la genotipificacin.
Resultados preliminares:
CA entre Phoenix y Dil. Agar: IMI: 84%, MEM: 71, ERT.73%
75
cepas
Phoenix
Dilucin Agar
IMI
MEM ERT
IMI
MEM ERT
Sens. 90
78
100
79
76
79
Esp.
82
78
91
79
75
91
Staphylococcus y Enterococcus
Objetivo
N
cepas
Capacidad
Phoenix
Staphylococcus
Enterococcus
ID y AST
Comparar
Mtodos ID
Stpahylococcus
Comparar
Mtodos ID y
ASTStpahyloc. y
Enterococcus
40
Resultado
Compara
especi Vitek 2
es
Phoenix
API
Sistemas
automatiz.
Aceptables y
comparables.
API Mejores
resultados
202
102 S. aureus ID (ambos):
cepas 100Enterococ. Staphyloc.
Compara
Phoenix y
Microsacan
100%
Enterococ.
99%
Resultado
Autor
Layer et al.
JCM.
2006
AST (ambos):
Noel et al.
ASM. 2005
Staphyloc.
96,9%
Enterococ.
95,2%
N cepas
Comparar
deteccin
Resist. por
Gen mecA
S.aureus
620
Comparar
deteccin
VISA en 6
sistemas:
Referencia
Mtodo
T: 129
< 1: 60
2 ug/ml:
Microdilucin
CIM a
Cefoxitin
como
predictor
Gen mecA
24
4 ug/ml:
36
8 ug/ml:
9
Resultado
Resultado
Autor
SAMR 448
cepas
SAMS 172
cepas
*uso
cefoxitin
ID Phoenix:
99,8%
AST Phoenix
EVM: 0,2%
EM: 0%
AST Vitek 2:
EVM: 0,2%
EM: 0,6%
Junkins et
al. JCM.
2009
Phoenix, Etest
Vitek 1 y 2
Microscan
Diluc. Agar,
Difusin,
Screening.
EA: 98%
Menos Vitek1.
ID VItek 2:
99,7%
Phoenix:
S: 100%
E: 99,2 %
Votta et
al.
ICAAC
2004
DETECCION RESISTENCIA
ERITRO/CLINDA Streptococcus
Objetivo: Evaluar 4 mtodos su capacidad de deteccin de R
mediada por ermB y mefA/E.
ermB (MLSB): Eritromicina R y Clindamicina R
Inducible: iMLSB o constitutiva cMLSB
Phoenix
Vitek
20,9 +- 1,8
727 +- 162
10,6+- 1,0
506 +- 120
ID BNF
ID Staphyloccus
ID Enterococcus
ID Enterobacteriaceae
100%
97%
100 %
96%
100%
97%
100%
98%
AST
97%
3%
0,3%
0,6%
97%
2,8%
0,2%
1,7%
CA
mE
ME
VME
Sin identif 5
Alcalig. faecalis 3
Sin identif 1
Pseudomonas spp. 1
Sin identif 1
40
S. maltophilia
20
Burkh. cepacia 17
7
6
6
10
Alcal. faecalis 4
P. putida 1
She. putrefaciens 3 P.aeruginosa 1
P. fluorescens 3
P.aeruginosa 2
P. putida 8
P.aeruginosa 1
CDC grupo EF 4b
P. oryzihabitans 2 1
P. pseudoalcalig. 1 P. stutzeri 1
P. oryzihabitans
P.pseudoalcalig.
P. stutzeri
P. monteilii
Chrys.
Indologenes
Eliz.
kinkiamening
4
4
2
Myroides spp.
Sphin.
paucimobilis
Achromobacter
(distintas
especies)
Delftia, Weksella,
Comamonas,
Moraxella
Otras Especies
incorrecta o sin
identificar
Total cepas BNF
P. stutzeri 1
Ps. putida
Chrys. indolog. 3
Eliz. kingiamen. 3
Myroides spp. 1
Sphin. paucimobilis
2
Achromobacter
(distintas especies)
4
Delftia, Weksella,
Comamonas,
Moraxella 4
10
557 Correlacin 88,9%
Alcalig. faecalis 1
S. maltophilia 1 P.fluorescens 2
Sin Identif 1
B. bronchisep. 2
P. pseudoalcalig. 1
P. putida 1
P. oryzihabitans 1
Kingella
Sin Identif 1
P. putida 1
P.aeruginosa 1
Pseudomonas spp.1
Bergeyella
zoohelcum 3
Sphin.
paucimobilis 1
Eliz. kingiamening
1
Burkholderia
gladioli 1
Sin Ident
K. oxytoca 1
128
69
K. pneumoniae 127
E.coli
E. cloacae
Delftia acidovorans
68 1
36
Citrobacter koseri K. pneumoniae 1 Citrobacter
2
freundii 1
E. cloacae
40
S. marcescnes
28
E. agglomerans
24
S. marcescnes
E. agglomerans 9
E. cloacae
E.aerogenes
E.aerogenes 2
K. pneumoniae 1
241
Salmonella spp.
Salmonella spp.
Shigella spp.
S. odorifera
S. liquefaciens
P. mirabilis
M. morganii
K. oxytoca
K.ozaenae
E. gergoviae
5
1
1
6
1
2
3
1
Shigella spp.
S. odorifera
S. liquefaciens
P. mirabilis
P. stuartii
K. oxytoca
K.ozaenae
Enterobacter spp.
C. freundii
Hafnia alvei
Vibrio parahaemolyticus
2
6
1
C. freundii
Hafnia alvei
Vibrio
parahaemolyticus
Total cepas
562
96,00%
K. pneumoniae 1 Tatumela
physeos 3
TOTAL
128
CORRELACIN
128
Error grave
Error menor
Comentarios
Beta lactamicos
Beta lactamicos
K. pneumoniae
BLEE -
16
16
E. coli BLEE +
46
46
Beta lactamicos
10
5
10
4*
Beta lactamicos
E. cloacae
20
20
Recomendacin
Experto para BLEE 4
2 cepas BLEE + , no
estandarizado
S. marcescens
30
28
E. aglomerans
20
20
Susc. Dism. Cipro
error: 26,2%
Salmonella spp.
229
169
60
A. baumannii
177
171
carbapenemes
error: 3,4%
IMI: 2, MEM:4
P. aeruginosa
154
143
carbapenemes
error: 7,1%
MEM
S. maltophilia
38
26
4*
5**
error: 31,7
* SXT, ** LEV,
CAZ
3*
NA
ENCUESTA
Pregunta
Hosp. 1
Hosp.2
Hosp.3
Hosp.4
Dificultad ID y
AST en
Cocceas
Errores con
ID Staph.
saproph.
Moderada
Dificultad CIM MF 0,5 en
escaso
Strepto y algunos Linezolid en
Enterococcus. desarrollo
Staphy.
Tiempo
demora C+
12 horas
promedio
10 a 12 horas
Dificultad ID y
AST en BGN
No
No
No
Tiempo
demora BGN
10 horas
4 12 horas
No
Uso Tec.
Alternativa
No
En bajos %
confianza y AST:
mecan. Resist.
Si , para
resistencias
especficas
En Cocc.+
da baja
confiabilidad
CONCLUSIONES EXPERIENCIA
PHOENIX
Muy buena correlacin en bacterias ms frecuentes
en clnica.
Buena correlacin de resultados CIM en la mayora
de AB.
Sistema expertos buen aporte.
Es necesario siempre analizar la ID, AST, aspectos
microbiolgicos y de la muestra.
Fcil manipulacin
Menor tiempo para obtener resultados.
Software permite anlisis de datos
CONCLUSIONES EXPERIENCIA
PHOENIX
Desventajas:
Costo paneles
Tamao Equipo
Requiere control adecuado de temperatura
ambiente.
Paneles con corta fecha de vencimiento.
MUCHAS GRACIAS
Gracias por la colaboracin
Dr. Leonardo Chanqueo
TM. Carlos Rodo
TM Dina Concha
TM:, Natacha Garrido, Arturo Briones y Pablo Saavedra
BGN:Publicaciones revisadas
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
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