GRADO EN QUMICAS
BIOLOGIA
BIOLOGA
GRADO
EN
QUMICA
2014-15
PRACTICA 2
INGENIERA GENTICA. LABORATORIO VIRTUAL: IDENTIFICACIN DE
TRANSGNICOS
PRCTICA 2
GRADO EN QUMICAS
BIOLOGIA
En esta prctica se proponen una serie de actividades correspondientes a los temas estudiados en
la segunda parte del temario relacionados con el DNA e ingeniera gentica. Usted debe visualizar el
Laboratorio virtual de ingeniera gentica.
nombre
Como ha estudiado, las enzimas de restriccin son una herramienta habitual en los laboratorios que se dedican a la
investigacin en biologa molecular as como en el diagnstico de numerosas patologas. A menudo, se combinan con
otras herramientas, como los plsmidos, dando lugar a potentes mtodos que, hoy en da, hacen que sean
imprescindibles para el anlisis del DNA. Gracias a estas enzimas, podemos conocer la localizacin y orientacin de un
fragmento dado dentro del genoma y realizar posteriormente la clonacin del mismo en plsmidos, que se emplean para
secuenciar el DNA, realizar estudios funcionales de ese DNA y expresar la protena que codifica.
Al final de este documento tiene un cuadro que recoge las secuencias diana de
las enzimas de restriccin que necesitar para responder a estas cuestiones.
PRCTICA 2
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Ejemplo resuelto. Un DNA, del cual se muestra la secuencia de una de sus hebras, se digiere con la
enzima de restriccin BamHI.
5 CGCCAGGTTATGGATCCCATA 3
Deduzca los fragmentos producidos (escriba en las casillas la secuencia de cada una de las hebras de DNA
producido, mostrando la complementariedad de las bases).
Fragmento 1
1 Hebra
2 Hebra
5
3
3
5
Fragmento 2
1 Hebra
2 Hebra
5
3
3
5
CGCCAGGTTATG
GCGGTCCAATACCTAG
Fragmento 2
1 Hebra 5
2 Hebra 3
GATCCCATA
GGTAT
3
5
3
5
BamHI crea extremos cohesivos no romos por lo que hay que tener cuidado al escribir los nucletidos de
cada una de las hebras para que las bases guarden su complementariedad. (use el tipo de letra Courier
New)
Responda ahora a las cuestiones propuestas.
Cuestin 1. A una muestra de DNA, cuya secuencia de una de sus hebras es:
Estrella Corts y Mara Jess Rueda
PRCTICA 2
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5 ATGCCTTCTGCAGCGCGCAGCTGTCTTCGA3
se aaden las enzimas de restriccin PstI y PvuII. Indique cules sern los fragmentos resultantes de la
digestin completa (escriba las secuencias en las casillas procurando que las bases complementarias
queden enfrentadas como en el ejemplo resuelto).
Fragmento 1
1 Hebra
2 Hebra
5
3
3
5
Fragmento 2
1 Hebra
2 Hebra
5
3
3
5
Fragmento 3
1 Hebra
2 Hebra
5
3
3
5
Cuestin 2. Indique qu productos se generarn al actuar sobre este fragmento de DNA bicatenario las
siguientes enzimas de restriccin: EcoRI; HaeIII; BamH1.
(5') AAGAATTGCGGAATTCGAGCTTAAGGGCCGCGCCGAAGCTTTAAA (3')
(3') TTCTTAACGCCTTAAGCTCGAATTCCCGGCGCGGCTTCGAAATTT (5')
Eco RI
HaeIII
Bam H1
Con las
tres
Fragmento 1
Fragmento 2
5...........
5...........
3...........
Fragmento 1
3...........
Fragmento 2
5...........
5...........
3...........
Fragmento 1
3...........
Fragmento 2
5...........
5...........
3...........
Fragmento 1
5...........
3...........
Fragmento 2
5...........
3...........
Fragmento 3
5...........
3...........
Fragmento 4
5...........
3...........
3...........
Cuestin 3.
secuencias palindrmicas. El siguiente DNA tiene un solo sitio de restriccin. Indique su localizacin ms
probable. Razone su respuesta.
(5') -GGTATGCTAGCATG- (3')
Estrella Corts y Mara Jess Rueda
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Cuestin 4. Aunque las enzimas de restriccin se emplean en tcnicas de biologa molecular, tienen su
origen en las bacterias. Explique cul es la funcin original de este tipo de enzimas en la clula bacteriana.
b. Los fragmentos de restriccin de un DNA dado migran en funcin de su tamao, migrando los de mayor
tamao de forma ms rpida quedando ms lejos de los pocillos en un gel de agarosa.
En la figura 1 se muestra un plsmido (DNA circular de origen procaritico) con un tamao de 20000
pares de bases (20kb). Contiene varios sitios de restriccin, que corresponden a dos enzimas BamHI y
EcoRI. La presencia de 4 sitios de corte y slo 2 enzimas indica que una o las dos enzimas pueden tener
ms de un sitio de corte.
Figura 1
Estrella Corts y Mara Jess Rueda
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Analice el mapa del plsmido pX representado y deduzca el tamao de los fragmentos esperados si este
plsmido fuese digerido con la endonucleasa Bam HI, con EcoRI o con ambas enzimas a la vez.
Digestin con la endonucleasa
BamHI
EcoRI
BamHI/EcoRI
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Carriles
Carril II
Carril III
Carril IV
Enzimas utilizadas:
Cuestin 8. Los resultados de las digestiones de un plsmido con distintas enzimas de restriccin se
representan en el gel de agarosa de la figura 3. Cul de los mapas de restriccin correspondera al
plsmido analizado?
Figura 3
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b. Plsmido 2
c. Plsmido 3
d. Ninguno de los tres
Cuestin 9. Determinacin del tamao de un plsmido.
Una preparacin de plsmidos bacterianos ntegros, se trata con la enzima EcoRI y cuando el DNA digerido
se separa mediante electroforesis en gel de agarosa se observan bandas de 150, 800 y 2000 pares de
bases (bp). Si esta misma preparacin se trata con HindIII se observan bandas de 1700, 1000 y 250 bp.
Cuando se trata con ambas enzimas simultneamente se observan bandas de 1600, 600, 400, 200, 100 y
50 bp.
Cul es el tamao del plsmido analizado? Marque con una X la respuesta correcta:
a.
b.
c.
d.
2950 pb
2000 pb
1475 pb
No se puede determinar con estos datos
Cuestin 10. Con los datos de la pregunta anterior se intenta conocer el mapa del plsmido. Cul de los
mapas de restriccin siguientes correspondera al plsmido descrito?
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Cuestin 13. Indique con una X la relacin correcta entre los siguientes trminos:
A. PCR
B. Tcnica de didesoxirribonucletidos trifosfato
C. Transferencia Southern
D. Clonacin
a.
b.
c.
d.
A1-B2-B3-D4
A2-B4-C3-D1
A3-B1-C4-D1
A4-B2-C1-D3
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Cuestin 18. Cules de los siguientes compuestos ha empleado para amplificar un fragmento de DNA
mediante la tcnica de PCR? :
a.
b.
c.
d.
Cuestin 19. Seale la correspondencia correcta entre las fases de la PCR empleada en el experimento y
las temperaturas del termociclador utilizado:
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I. 95 C 30
II. 72 C 45
III. 55 C 30
a.
b.
c.
d.
Una vez haya respondido a las preguntas de este cuestionario pase sus respuestas
al documento denominado Hoja de respuestas PR2 que encontrar en el
icono Documentos. Una vez rellenada la hoja de respuestas guarde el archivo con
el siguiente nombre: Su primer apellido-Su nombre-PR2.
(Ejemplo: Cortes-Estrella-PR2)
Enve el documento a travs de la plataforma aLF en Entrega de Trabajos.
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ENZIMAS DE RESTRICCIN
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