Departamento: Operaciones piloto.

SS14131: Validacin de mtodo para determinar la pureza de 1-Buteno.

Realizado por: Greciel Egurrola.

Optimizacin de mtodos en Cromatografa

Gaseosa
Una separacin cromatogrfica se optimiza variando las condiciones experimentales hasta
que los componentes de una mezcla se separen completamente en el menor tiempo posible.
Los experimentos de optimizacin tienen como objetivo bien: (1) reducir el
ensanchamiento de banda, o bien (2) modificar las velocidades relativas de migracin de
los componentes. Las variables cinticas que incrementan la altura de plato de una columna
producen un ensanchamiento de banda. Por otra parte, las velocidades de migracin son
modificadas por aquellas variables que afectan los factores de retencin y selectividad de la
disolucin.
-Resolucin de la Columna: para una fase estacionaria dada, la resolucin puede
mejorarse alargando la columna, aumentando as el nmero de platos tericos. Una
consecuencia negativa del aumento del nmero de platos es el incremento del tiempo
requerido para la separacin y es evidente que en cromatografa es deseable tener la mayor
resolucin en el menor tiempo posible. Cuando se desea optimizar la selectividad del
mtodo cromatogrfico se dispone de varias opciones; en orden decreciente de
conveniencia, determinada sta por sus expectativas y comodidad, las opciones incluyen:
(1) cambiar la composicin de la fase mvil; incluyendo los cambios en el pH, (2) cambiar
la temperatura de la columna; (3) cambiar la naturaleza de la fase estacionaria; (4) utilizar
efectos qumicos especiales. En cromatografa de lquidos, la resolucin y selectividad se
mejoran por variaciones en la composicin de la fase mvil durante la elucin (elucin con
gradiente o programacin del disolvente). En cromatografa de gases, el incremento de la
temperatura (programacin de la temperatura) permite conseguir las condiciones ptimas
para las separaciones, por ello la columna normalmente se introduce dentro de un horno de
temperatura controlada. La temperatura afecta las posiciones de los equilibrios de
distribucin de los analitos entre el gas de arrastre mvil y la fase estacionaria y as como la
rapidez con que se establecen los equilibrios. Cuando se aumenta la temperatura de la
columna se acelera la elucin y se alcanza ms rpido el equilibrio entre la fase mvil y la
estacionaria. La temperatura ptima de la columna depende del punto de ebullicin de la
muestra y del grado de separacin requerido. En la prctica, con una temperatura igual o
ligeramente superior al punto de ebullicin promedio de la muestra, se obtienen tiempos de

elucin razonables (2 a 30min). Para muestras cuyos componentes presentan un amplio

intervalo de temperaturas de ebullicin, a menudo es conveniente emplear una
programacin de temperatura, con lo que se aumenta la temperatura de la columna bien de
forma continua o por etapas, al mismo tiempo que tiene lugar la separacin.
En general, la resolucin ptima se asocia con una temperatura mnima; en contrapartida la
reduccin de temperatura produce un aumento en el tiempo de elucin y por lo tanto del
tiempo que se necesita para completar el anlisis.

Factores extra-columna sobre el

ensanchamiento de las bandas cromatogrficas
Adems de los factores ya considerados que contribuyen al ensanchamiento de los picos y
que se producen en la propia columna cromatogrfica, es necesario mencionar algunos que
ocurren en otras zonas del sistema distintas de la fase estacionaria. Entre ellos, pueden
considerarse los siguientes:
-Sistema de inyeccin de muestra: tericamente suele considerarse que la muestra se
introduce en el sistema cromatogrfico de forma que ocupa una capa de espesor
infinitamente pequeo. Sin embargo, en la realidad, la muestra ocupa un volumen finito y a
veces relativamente grande, tal como sucede en CG, donde un micro-litro de una sustancia
lquida inyectada puede ocupar un volumen del orden de 0.5 mL cuando se vaporiza a 250
y ello representa varios centmetros de longitud de columna. Adems, la lenta velocidad de
vaporizacin contribuye tambin al ensanchamiento de la banda. En este sentido, la eficacia
de la separacin cromatogrfica requiere que la muestra sea de un tamao adecuado y que
sea introducida como un tapn de vapor; la inyeccin lenta de muestras demasiado grandes
provoca un ensanchamiento de las bandas y una pobre resolucin.
Para mantener la cantidad de muestra dentro del nivel correcto, se emplea un tipo especial
de inyector que reduce la cantidad de muestra que llega a la cabeza de la columna capilar:
el inyector divisor o sin divisin (Split/splitless). Las muestras con concentracin de analito
adecuadamente baja se inyectan en modo no divisor (splitless), y son transportadas a la
columna por el gas de arrastre como en un inyector normal. Cuando se emplea el modo de
divisin (Split), el gas de arrastre fluye continuamente por la entrada a razn de 50 a 1000
veces la velocidad con que fluye por la columna. El exceso de flujo se deja escapar y solo
penetra una fraccin de la muestra a la columna. En el trabajo cuantitativo, tanto en el caso
de lquidos como en el de gases la optimizacin de los sistemas de inyeccin se logra a
travs de la introduccin de tamaos de muestras ms reproducibles mediante el uso de una
vlvula rotatoria con la que se reducen los errores relativos hasta un 2%.
-Volmenes muertos en el sistema de inyeccin, detector y tubos de conexin: por
volumen muerto se considera el existente entre el punto de inyeccin de la muestra y el

punto de deteccin, excepto el volumen ocupado por la fase estacionaria, de forma que
cualquier zona del sistema en la que estn presentes el soluto y la fase mvil, pero no
expuesta a la fase estacionaria contribuye a la difusin del soluto y, en consecuencia, al
ensanchamiento de las bandas cromatogrficas. Es evidente, que debern usarse tubos
estrechos para las conexiones entre el sistema de inyeccin y la columna, y entre sta y el
detector.
-La temperatura del detector: aunque en algunos tipos de detectores puede influir sobre
la respuesta, no es normalmente un parmetro que requiera una optimizacin excesiva. La
temperatura del detector debe ser siempre ms elevada que la mxima temperatura de
trabajo a la que se someta la columna, con el fin de evitar que se puedan condensar en el
detector compuestos eluidos de baja volatilidad; aparte de este criterio, las nicas
limitaciones sern las que pueden venir determinadas por el tipo concreto de instrumento
que se trate. En estos detectores, su propio volumen podr actuar como una verdadera
cmara de mezcla. Debern disearse de forma que su volumen sea pequeo y de que se
mantenga un flujo laminar en su interior.
Finalmente de acuerdo a todos los factores anteriormente expuestos se puede inferir que un
mtodo cromatogrfico se encuentra optimizado cuando todos los efectos cinticos y
termodinmicos que conducen al ensanchamiento de la banda estn controlados, es decir; la
elucin de los solutos se da de forma selectiva, con tiempos de retencin bien definidos y
con picos debidamente resueltos. (Ver Figura 1)

Figura 1. Separacin cromatogrfica optimizada.

Referencias
- Hernndez L; Gonzlez C (2002). Introduccin al anlisis instrumental. Editorial Ariel
Ciencias. Barcelona- Espaa.
- Hinshaw J. (2001). Strategies for GC Optimization, Part I - Setting Realistic
Expectations. Chrom Source, Franklin. Tennessee- USA.
- Guide to GC Column Selection and Optimizing Separations. (2013). Restek corporation.
USA.
- Anila I. (2013). Optimizing GC Parameters for Faster Separations with Conventional
Instrumentation. Thermo Fisher Scientific. Runcorn- Cheshire, UK.
- Lee M. (2011). Optimizing Column Selection for Gas Chromatography Applications
and Speed of Analysis. Sr. Field Application Scientist El Perkin Elmer.
- D.A. Skoog, F.J. Holler, T.A. Niemann. (2001). Principios de Anlisis Instrumental.
Ed. McGraw-Hill. 6ta edicin.