UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUI - UFPI

CENTRO DE CIENCIAS DA SADE CCS

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E FARMACOLOGIA
DISCIPLINA: FARMACOLOGIA BSICA PARA FARMCIA
MINISTRANTE: PAULO MARQUES DA SILVA CAVALCANTI
CURSO: BACHARELADO EM FARMCIA

DETERMINAO DA DOSE LETAL em Mus musculus

ANNA LAYSE BARROS DA SILVA OLIVEIRA

TERESINA PI,
AGOSTO DE 2010

INTRODUO

Paracelsus (1493 1541) afirmou: Todas as substancias so venenosas; no

h qualquer uma que no seja veneno. A dose certa diferencia um veneno de um
remdio. Qualquer frmaco, no importa quo triviais sejam suas aes
teraputicas, pode causar efeitos deletrios. As reaes adversas so o preo a ser
pago pelo tratamento medico moderno (BRUNTON, 2007)
O estudo da relao dose-resposta ou dose-efeito extremamente
importante. Existe uma relao de dose-resposta gradativa em determinado
individuo e uma relao de dose resposta quntica para a populao. As doses
gradativas de um frmaco administrado a determinado indivduo geralmente levam
ao aumento da magnitude da resposta medida que a dose aumenta. Numa relao
de dose-resposta quntica, a percentagem da populao afetada cresce medida
que a dose aumenta, sendo uma relao quntica porque o efeito especificado
como presente ou ausente em determinado indivduo. Esse fenmeno de doseresposta quntica de extrema importncia em Toxicologia e usado para determinar
a dose letal mdia (DL50) dos frmacos e outros compostos qumicos. (BRUNTON,
2007), O objetivo deste experimento foi o estudo da toxicidade do anestsico
Tionembutal sdico, e o estabelecimento da correlao dose-efeito de uma droga
em grupo de animais da espcie Mus musculus.

MATERIAIS E MTODOS
Utilizou-se 75 cobaias (camundongos da espcie Mus musculus), dispersas
em 5 bancadas, cada uma com 15 animais, esses por sua vez, divididos em 3 lotes
de 5 cobaias. O frmaco utilizado foi o anestsico Tionembutal sdico. Cada lote
continha uma concentrao diferente do anestsico, sendo: lote A 5mg/mL, lote B
100mg/mL, lote C 200mg/mL. Cada animal recebeu uma dose distinta de anestsico
de acordo com seu peso obedecendo a dose de: para lote A 50mg/kg, lote B 100
mg/kg, lote C 200 mg/kg. A via de administrao foi atravs de injeo peritoneal e
20 minutos aps a aplicao da anestesia, observou-se o comportamento dos
animais, no sentido de anestesia ou morte.
Por ltimo, anotaram-se os dados obtidos sobre a porcentagem de animais
anestesiados e mortos para cada dose administrada e traou-se um grfico
mostrando nas abcissas os valores das doses e nas ordenadas a porcentagem dos
efeitos (anestesiado-morto). Calculou-se a DL 50, DE50 e IT (ndice teraputico).

RESULTADOS

GRFICO 01: CURVA DOSE-RESPOSTA INDIVIDUAL RELACIONANDO A

PERCENTAGEM DOS INDIVDUOS QUE RESPONDERAM AO EFEITO E DOSE
DA DROGA UTILIZADA EM Mus musculus. TERESINA, 2010

Fonte: Laboratrio de Farmacologia- UFPI, alunos de Farmcia, 2010.2.

QUADRO 1.0: QUADRO DOSE-RESPOSTA COLETIVA RELACIONANDO A

PERCENTAGEM DOS INDIVDUOS QUE RESPONDERAM AO EFEITO E DOSE
DA DROGA UTILIZADA, SOBRE O Mus musculus. TERESINA, 2010.

DOSAGEM

N DE
ANIMAIS

ANESTESIADOS

MORTOS

% ANESTESIADOS

%MORTOS

1 DOSE

25

25

100

2 DOSE

25

23

92

3 DOSE

25

21

16

84

CLCULO 01: NDICE TERAPUTICO. TERESINA, 2010

DL (DOSE LETAL) = 162 ml
DE (DOSE EFETIVA) = 26 ml
IT (NDICE TERAPUTICO) = DL50/DE50
IT = 162/26 = 6,2
FONTE: LABORATRIO DE FARMACOLOGIA, UFPI. ALUNOS DE FARMCIA,
2010.2

CLCULO 02: NDICE TERAPUTICO. TERESINA, 2010

DL (DOSE LETAL) = 162 ml

DE (DOSE EFETIVA) = 26 ml

IT (NDICE TERAPUTICO) = DL50/DE50

IT = 162/26 = 6,2
FONTE: LABORATRIO DE FARMACOLOGIA, UFPI. ALUNOS DE FARMCIA,
2010.2

DISCUSSO

A avaliao da toxicidade realizada com o objetivo de determinar o

potencial de novas substncias e produtos causar danos sade humana. Testes
que avaliam a toxicidade sistmica aguda so utilizados para classificar e
apropriadamente rotular substancias de acordo com o seu potencial de letalidade ou
toxicidade como estabelecido pela legislao. Alm da letalidade, outros parmetros
so investigados em estudos de toxicidade aguda sistmica para identificar o
potencial txico em rgos especficos, identificar a toxicocintica e a relao-dose
resposta. Outras informaes podem ainda ser obtidas numa avaliao de
toxicidade aguda como: indicativos sobre o mecanismo de ao txica; diagnstico e
tratamento das reaes txicas; estabelecimento das doses para estudos adicionais
de toxicidade; informaes para a comparao de toxicidade entre substncias de
mesma classe; informaes sobre quais seriam as conseqncias de exposies
acidentais no trabalho ou no ambiente domstico; alm de ser um padro para a
avaliao de testes alternativos ao uso de animais experimentais (VALADARES,
2006).
A dose do frmaco necessria para produzir um efeito especificado em 50%
da populao e conhecida como dose de efetiva mediana, abreviada como ED 50.
Nos estudos pr-clnicos dos frmacos, a dose letal mediana determinada em
experimentos com animais abreviada como LD 50. A relao entre LD50 e ED50 uma
expresso do ndice teraputico, que uma descrio do grau de seletividade do
frmaco para produzir seus efeitos desejveis versus efeitos adversos. (BRUNTON,
2007)
Segundo OGA, 1996, a curva dose-resposta representa a relao entre a
dose e a proporo da populao que responde com um efeito quntico. Em geral
estas curvas so sigmides. Uma forma de explicar a configurao das curvas doseresposta dizer que cada indivduo de uma populao tem uma tolerncia prpria
e requer certa dose antes de responder com um efeito. A princpio, existem tanto
uma dose baixa a qual ningum responder como uma dose alta a qual todos
respondero. A razo deve-se variabilidade biolgica, isto , diferente
sensibilidade dos indivduos (ou animais) ao de determinada substncia
qumica. A concentrao teraputica situa-se entre as concentraes geradoras de
efeito mnimo eficaz (limite mnimo) e efeito txico (concentrao mxima tolerada,
limite mximo). A curva sigmide ou em forma de S uma expresso curvilnea
comumente observada na maior parte das curvas dose-resposta. O fundamento
biolgico desta relao se pode compreender parcialmente quando se pensa na
natureza da distribuio de frequncia das suscetibilidades ou resistncias
individuais em uma populao. No entanto, a equao matemtica correspondente
curva sigmide difcil de manusear e, por isso levada a se transformar em uma
linha reta para apresentao e avaliao dos dados.

Quando se trabalha com animais com animais de laboratrio, um dos efeitos

txicos mais convenientes para se monitorar a letalidade. A morte universal;
todas as drogas so capazes de caus-la; por conseguinte, representa um ponto
final definido que pode ser reconhecido rapidamente e de modo inequvoco. A dose
que causa a morte em 50% dos animais testados em determinado perodo de tempo
designada dose letal mediana (DL 50). A relao entre esta dose e a dose efetiva
mediana (DL50/DE50) define o ndice teraputico (IT), medida grosseira, porm til da
segurana de uma droga. ndice teraputico uma medida utilizada em
Farmacologia, que relaciona a dose da droga necessria para produzir um efeito
desejado com a que produz um efeito indesejado. Medicamentos de ndice
teraputico estreito apresentam o valor da dose txica mediana (TD 50) bastante
prxima do valor da dose eficaz mediana (ED 50) (BRUNTON, 2007).
Quando o ndice teraputico (IT) apresenta valor superior a 10, isso indica
razovel segurana ao frmaco, devido a elevada seletividade e especificidade
(respostas decorrentes de um nico mecanismo de ao, conferindo menor
oportunidade para a ocorrncia de efeitos adversos. (FERREIRA, 2006).
Como pde-se ser observado no grfico 1.0, para a curva dose-resposta
individual, a DE50 apresentou o valor de 26 mg/Kg, e a DL 50 apresentou o valor de
162 mg/Kg o que gerou um IT de 6,2, que um ndice teraputico baixo,
demonstrando a baixa janela teraputica do anestsico Tionembutal sdico, o que
infere a proximidade da dose que causa o efeito teraputico e a dose txica do
frmaco em questo, inviabilizando, segundo o dado experimento, o uso clinico do
anestsico, devido aos riscos que pode acarretar.
Todos os testes toxicolgicos descritivos realizados em animais tm como
base dois princpios bsicos. Primeiramente, os efeitos das substancias qumicas
produzidos nos animais de laboratrio, quando so adequadamente qualificados,
aplicam-se a toxicidade humana. Quando calculados com base na dose por unidade
de superfcie corporal, os efeitos txicos observados nos humanos geralmente so
encontrados na mesma faixa de concentraes dos animais de laboratrio. Tendo
como base o peso corporal, os seres humanos geralmente so mais suscetveis que
os animais de laboratrio. Essas informaes so utilizadas para selecionar as
doses para experincias clinicas com os agentes teraputicos potenciais e para
tentar estabelecer os limites de exposio permissvel aos txicos ambientais.
(BRUNTON, 2007)
Se todos os outros aspectos forem iguais, uma droga com grande ndice
teraputico ser considerada mais segura do que um agente com ndice menor. Na
verdade, quando numerosos congneres esto sendo testados concomitantemente,
os com ndices teraputicos mais favorveis passam a ter preferncia em
investigaes posteriores, sendo considerados os candidatos mais promissores para
aplicao clnica. Infelizmente a relao DL50/DE50 no prev totalmente a
segurana relativa. As drogas produzem muitos efeitos txicos alm da morte,
impedindo o seu uso em seres humanos. Um frmaco com grande ndice teraputico
em relao a determinada reao adversa pode no ser adequado devido a outro

tipo de toxicidade. Uma segunda limitao do ndice teraputico que a

variabilidade biolgica no considerada. O objetivo da farmacoterapia obter um
efeito desejado em praticamente todos os pacientes, sem produzir qualquer
toxicidade (WANNMACHER, 2007).
Existem diferenas marcantes nos valores da DL 50 para varias substancias
qumicas. Algumas provocam mortes em doses de uma frao de um micrograma (a
DL50 da toxina botulnica de 10 pg/kg), enquanto outras podem ser relativamente
inofensivas em doses de vrios gramas ou mais. O que deve ser avaliado para cada
substancia o risco associado ao uso dela, na avaliao do risco, devem-se levar
em considerao a concentrao ou a dose e os efeitos deletrios da substancia
qumica, que podem ser atribudos direta ou indiretamente aos efeitos adversos no
ambiente, quando utilizada na quantidade e na forma sugerida. Conforme a
utilizao e disposio de uma substancia qumica, um composto muito txico
poderia ser finalmente menos deletrio do que uma substancia relativamente
atxica. (BRUNTON, 2007)
Observando agora o grfico 2.0, com relao a curva de dose-resposta
coletiva, clara a variao das DL 50 das 5 bancadas, mas a DE50 foi mais constante
entre os 5 grupos, apresentando o valor de aproximadamente 26 mg/Kg. Com
relao as DL50 das 5 bancadas pode-se observar uma faixa de variao entre 149 e
162 mg/Kg. Para o calculo do IT, foi deita uma mdia aritmtica dos valores
extremos das DL das 5 bancadas, que apresentou o valor de aproximadamente 6,0,
ndice teraputico tambm baixo, confirmando a baixa janela teraputica do
anestsico Tionembutal sdico.
Medicamentos com amplo IT apresentam uma ampla faixa de concentrao
que leva ao efeito requerido, pois, as concentraes potencialmente txicas
excedem nitidamente as teraputicas. Infelizmente, muitos frmacos apresentam
uma estreita janela teraputica (IT<10), por apresentarem uma pequena diferena
entre as concentraes teraputicas e txicas. Nestes casos, h a necessidade de
cuidadosa monitorao da dose, dos efeitos clnicos e mesmo das concentraes
sangneas destes frmacos, visando assegurar eficcia sem toxicidade.
Como previsto pela literatura devido a sua caracterstica de baixo IT, o
Tionembutal sdico, conforme o experimento demonstrou, no seria o frmaco de
escolha para uso clinico, devido aos altos nveis de toxicidade que esse poderia
acarretar. Esse estudo do IT de suma importncia na hora da escolha de um
frmaco para a formulao de um medicamento, bem como para a escolha de um
tratamento com disposio de varias drogas, porque atravs dele pode-se analisar
os riscos-benefcios que esse pode trazer para o paciente.

CONCLUSO

Atravs do experimento, ficou clara a ao txica dos frmacos quando

administrados em doses acima da dose efetiva. Alem disso, tambm foi possvel
compreender a importncia que os estudos experimentais de doses efetivas e letais,
e consequentemente do ndice teraputico tem, para a formulao de um novo
medicamento e a sua determinao da margem de segurana, bem como para a
escolha de um determinado frmaco para o tratamento clinico, correlacionando seus
riscos e benefcios.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BRUNTON, L. L., ET AL. Goodman & Gilman: As Bases Farmacolgicas da

Teraputica. 11a ed. Rio de Janeiro: Mcgraw-Hill Interamericana, 2007.
VALADARES, M. C. Avaliao de toxicidade aguda: estratgias aps a era do teste
DL50 Revista Eletrnica de Farmcia Vol 3(2),93-98,2006, Faculdade de Farmcia,
Universidade Federal de Gois-GO
WANNMACHER, L.FERREIRA, M.B.C. Farmacologia clnica para dentistas. 3. ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.

OGA, S. (Ed.) - Fundamentos de Toxicologia. Atheneu:So Paulo, 1996