FAR178 IMUNOLOGIA DAS DOENAS INFECCIOSAS

HTLV BLOT 2.4 MP Diagnostics

Teste imunoenzimtico qualitativo por Western Blotting para deteco in vitro de
anticorpos para HTLV-I e HTLV-II
PREPARO DOS REAGENTES PARA O ENSAIO
Soluo Tampo de Lavagem (LAVAGEM)
A Soluo est concentrada 20x. Diluir 1 parte de
tampo concentrado para 19 partes de gua.
Ex: 500 L concentrado para 9500 L de gua para
preparar 10 mL
Soluo Tampo Blotting (BLOTTING)
Utilizar 20 mL da soluo estoque reconstituda em
um bquer, e acrescentar 1 g (um sach) do p de
blotting. Certifique-se de que o p se dissolva
completamente.

Soluo conjugado de trabalho (CONJUGADO)

Preparar soluo diluindo na proporo 1:1000.
Utilize a soluo anterior (BLOTTING) para
diluio.
Ex: 10L conjugado concentrado para 10 mL da
soluo BLOTTING

Soluo Substrato (SUBSTRTO)

A soluo est pronta para o uso. Use uma ponteira
limpa para dispens-la. Deixe em temperatura
ambiente, assim como os demais reagentes.

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Teste imunoenzimtico qualitativo por Western Blotting para deteco in vitro de
anticorpos para HTLV-I e HTLV-II
Etapa Pr-Teste
Separe as tiras necessrias para controle Reativo
Forte e No Reativo, e para as amostras.
Prepare Soluo Tampo de Lavagem.
Prepare Soluo Tampo Blotting.

- Lave as fitas na bandeja, com 2mL Soluo Tampo LAVAGEM e

incube por 5 minutos em placa de oscilao;
- Aspire, descartando a soluo anterior; Acrescente 2 mL de Soluo
Tampo de BLOTTING.

20 L de CONTROLES e amostras
Incline a bandeja e acrescente as amostras e
controles nos poos corretos, acrescendo NA
SOLUO TAMPO, e no diretamente na tira;
Cobrir a bandeja e incubar a temperatura
ambiente por 60 minutos, em placa de oscilao;

- Lave cada fita trs vezes usando 2 mL de Tampo LAVAGEM, com

tempos de 4 minutos, usando a placa de oscilao. Entre as lavagens,
aspira-se e descarta-se as ponteiras usadas - no reutiliz-las.

2mL de CONJUGADO em cada poo da bandeja

Sobre a bandeja inclinada, acrescente o

conjugado. Aps isso, cobrir a bandeja
novamente e incubar a temperatura ambiente por 60
minutos, em placa de oscilao;

- Lave cada fita trs vezes usando 2 mL de Tampo LAVAGEM, com

tempos de 4 minutos, usando a placa de oscilao. Entre as lavagens,
aspira-se e descarta-se as ponteiras usadas, no reutiliz-las.
2mL de SUBSTRATO, e incubar por 15 minutos

Aps o fim dessa incubao, aspirar / descartar a

soluo SUBSTRATO, e enxaguar as tiras com
gua (trs vezes cada, com cuidado ao manusear
as tiras use a pina); usar guas separadas,
uma para cada tira;)

FINALIZANDO O TESTE: secar as tiras em papel toalha. Realizar leitura visual e

interpretar resultados.

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Teste imunoenzimtico qualitativo por Western Blotting para deteco in vitro de
anticorpos para HTLV-I e HTLV-II
Controle de Qualidade
CONTROLE NO REATIVO nenhuma banda especfica do HTVL I/II dever
ser exibida. A banda de controle de soro deve ser evidente.
CONTROLE REATIVO FORTE a banda de controle de soro e todas as bandas
especficas do HTVL I/II devem ser evidentes. Devem estar obrigatoriamente
presentes: p19, p24, gp46, rgp46-I e GD21 (HTLV-I). A banda gp46 difusa.
CONTROLE REATIVO FRACO (se usar) as bandas de controle de soro e
todas as bandas especficas devem estar presentes. Devem obrigatoriamente
estar presentes: p24, GD21 e rgp46-II (HTLV-II).
Interpretao dos Resultados
PADRO
nenhuma reatividade com
protenas especficas do
HTLV
Reatividade para p24 (com
ou sem p19) + reatividade
para GD21 e rgp46-I
Reatividade para p24 (com
ou sem p19) + reatividade
para GD21 e rgp46-II
Reatividade para p24 (com
ou sem p19) + reatividade
para GD21 e:
Se p19 > p24 HTLV I
Se p19< p24 HTLV II
Presena de bandas do
HTLV, mas que no
preenchem os critrios
descritos anteriormente.

INTERPRETAO
SORONEGATIVO
PARA HTLV
SOROPOSITIVO
PARA HTLV-I
SOROPOSITIVO
PARA HTLV-II
SOROPOSITIVO
PARA HTLV*
*na ausncia de rgp46-I
ou II
INDETERMINADO

Exemplos: