SPEKTROFOTOMETRI-VIS

LAPORAN PRAKTIKUM
disusun untuk memenuhi salah satu tugas praktikum
mata kuliah Analitik Instrument

Dosen Pembimbing : Dra. Dewi

Disusun oleh
Kelompok 5
Kelas 1 B
Rifaldi Hadiansyah

131411046

Risma Regiyanti

131411047

Rizki Abi Karomi

131411048

Tanggal Praktikum

: 20 Maret 2014

Tanggal penyerahan

: 27 Maret 2014

D3 TEKNIK KIMIA
POLITEKNIK NEGERI BANDUNG
2014

SPEKTROFOTOMETRI

TUJUAN
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Membuat larutan induk

Membuat larutan standar dari larutan induk
Menentukan maksimum
Membuat kurva kalibrasi dari larutan standar dengan maksimum
Menentukan absorbansi larutan cuplikan dengan menggunakan maksimum
Menentukan konsentrasi larutan dengan menginterpolasikan absorbansi ke dalam kurva
kalibrasi, sehingga dihasilkan konsentrasi yang tidak diketahui.

DASAR TEORI
Spektrofotometri adalah metode pengukuran konsentrasi suatu zat berdasarkan
besarnya penyerapan energi cahaya oleh suatu sistem kimia sebagai fungsi dari panjang
gelombang radiasi zat tersebut. Benda bercahaya seperti matahari atau suatu bohlam listrik
memancarkan spektrum yang lebar yang terdiri dari panjang gelombang. Panjang gelombang
yang dikaitkan dengan cahaya tampak itu mampu mempengaruhi selaput pelangi mata
manusia dan karenanya menimbulkan kesan subjektif yang diterjemahkan oleh otak sebagai
sebuah warna tampak. Namun banyak radiasi yang dipancarkan oleh benda panas terletak
diluar daerah kepekaan mata yaitu daerah ultraviolet dan inframerah, dari spektrum yang
terleak di kiri dan di kanan daerah tampak spektrum elektromagnetik. Dalam daerah tampak
spektrum itu dapat mengkorelasikan panjang gelombang cahaya yang mengenai mata dengan
indera subjektif mengenai warna seperti diuraikan.
Secara umum spektrofotometri dibedakan menjadi empat macam, yaitu :
spektrofotometer ultraviolet, spektrofotometer sinar tampak, spektrofotometer infra merah,
dan spektrofotometer srapan atom. Penyerapan sinar UV-Vis dibatasi pada sejumlah gugus
fungsional atau gugus kromofor yang mengandung elektron valensi dengan tingkat eksutasi
rendah. Tiga jenis elektron yang terlibat adalah sigma, phi, dan elektron bebas. Kromoforkromofor organik seperto karbonil, alkena, azo, nitrat, dan karboksil mampu menyerap sinar
ultraviolet dan sinar tampak. Panjang gelombang maksimumnya dapat berubah sesuai dengan
pelarut yang digunakan. Auksokrom adalah gugus fungsional yang mempunyai elektron
bebas nseperti hidroksil, metoksi, dan amina. Terkaitnya gugus kromofor akan
mengakibatkan pergeseran pita absorpsi menuju ke panjang gelombang yang lebih besar dan
disertai dengan peningkatan intensitas (Hart 2003).
Ketika cahaya melewati suatu larutan biomolekul, terjadi dua kemungkinan.
Kemungkinan pertama adalah cahaya ditangkap dan kemungkinan kedua adalah cahaya
discattering. Bila energi dari cahaya (foton) harus sesuai dengan perbedaan energi dasar dan
energi eksitasi dari molekul tersebut. Proses inilah yang menjadi dasar pengukuran
absorbansi dalam spektrofotometer (Khopkar 2007).
Cara kerja spektrofotometer dimulai dengan dihasilkannya cahaya monokromatik dari
sumber sinar. Cahaya tersebut kemudian menuju ke kuvet (tempat sampel/sel). Banyaknya
cahaya yang diteruskan maupun yang diserap oleh larutan akan dibaca oleh detektor yang
kemudian menyampaikan ke layar pembaca (Khopkar 2007)

Larutan yang akan diamati melalui spektrofotometer harus memiliki warna tertentu.
Hal ini dilakukan supaya zat di dalam larutan lebih mudah menyerap energi cahaya yang
diberikan. Secara kuantitatif, besarnya energi yang diserap oleh zat akan identik dengan
jumlah zat di dalam larutan tersebut. Secara kualitatif, panjang gelombang dimana energi
dapat diserap akan menunjukkan jenis zatnya (Keenan 1992).
Bila cahaya putih yang berisi seluruh spektrum panjang gelombang, melewati suatu
larutan kimia yang berwarna dan tembus cahaya bagi panjang-panjang gelombang tertentu
tetapi menyerap panjang-panjang gelombang lain, larutan itu akan tampak berwarna bagi
pengamat, karena hanya gelombang yang diteruskan yang sampai ke mata. Panjang-panjang
gelombang itulah yang menentukan warna larutan.
Cahaya yang dapat dilihat oleh manusia disebut cahaya terlihat atau sinar tampak.
Biasanya cahaya yang terlihat merupakan campuran dari senyawa yang mempunyai berbagai
panjang gelombang, mulai dari 400 nm hingga 760 nm, seperti pelangi di langit.
Bila seberkas sinar radiasi dengan intensitas I 0 dilewatkan melalui medium yang
panjangnya b dan mengandung atom-atom pada tingkat energi dasar dengan konsentrasi c,
maka radiasinya akan diserap sebagian dan intensitas radiasinya akan berkurang menjadi I
sehingga berlaku persamaan:
I = I0 ek.b.c

.(1)

Atau
log Io /I = a.b.c atau A = a.b.c
Keterangan:

.(2)

= log Io/It = absorbansi

k

2,303

koefisien serapan (serapan molar)

= tetapan perbandingan

It / Io

= transmitansi (T)

Persamaan (2) dikenal sebagai hukum Lambert-Beer, yang digunakan sebagai dasar
analisis kuantitatif dalam spektrofotometri sinar tampak. Dari persamaan (1) di atas
ditunjukkan bahwa absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi larutan. Besarnya
konsentrasi larutan ini sebanding dengan konsentrasi larutan di dalam suatu cuplikan,
sehingga dengan meletakkan absorbansi sebagai titik ordinat dengan konsentrasi larutan
standar sebagai absis, akan diperoleh kurva garis lurus. Kurva ini disebut sebagai kurva
kalibrasi (kurva standar). Dengan menginterpolasikan absorbansi larutan cuplikan pada kurva
kalibrasi tersebut, maka akan didapat konsentrasi larutan cuplikan.
Metode kurva kalibrasi, yaitu dengan membuat kurva antara konsentrasi larutan
standar terhadap absorbansi berbentuk garis lurus. Menginterpolasikan absorbansi dari

larutan cuplikan ke dalam kurva kalibrasi tersebut akan diperoleh konsentrasi larutan
cuplikan.

ALAT DAN BAHAN

ALAT

Spektrofotometer Spectronic 20
Pipet tetes
Pipet ukur 5 ml, 10 ml, 25 ml
Labu takar 50 ml 6 buah
Botol semprot
Gelas kimia 100 ml, 250 ml
Bola hisap

BAHAN
Larutan induk Fe2+ 1000 ppm
Larutan HNO3 4 N
Larutan KSCN 10%
Aquades

LANGKAH KERJA
a. Persiapan Larutan
i.
Pengenceran Larutan Fe2+ 1000 ppm menjadi 100 ppm
5 mL larutan Fe2+ 1000 ppm

Labu takar 50 mL

Larutan Fe2+ 100 ppm

Aquades

ii.

Pembuatan Larutan Blanko

4 mL HNO3 4 N

iii.

Labu takar
50 mL

Larutan blanko

4 mL KCNS 10%
Pengenceran Larutan Fe2+ menjadi beberapa konsentrasi

5 mL
0,5larutan
mL
2+
2+
Fe
larutan
100 Fe
ppm
100 ppm

10 mL
larutan Fe2+
100 ppm

5 mL HNO3 4 N

15 mL
larutan Fe2+
100 ppm

Labu takar
50 mL

Tandabataskan
dengan aquades

20 mL
larutan Fe2+
100 ppm

25 mL
larutan Fe2+
100 ppm

5 mL KCNS 10%

Kocok
b. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Hidupkan alat dan
panaskan selama 30
menit

Atur skala pada skala 0

(memutar tombol bagian
depan bawah kiri)

Atur panjang
gelombang
(400nm-540nm)

Ganti larutan blanko

dengan larutan standar
6ppm

Atur skala %T pada posisi

100% (memutar tombol
bagian depan bawah kanan)

Masukkan kuvet
yang berisi larutan
blanko

Ubah panjang
gelombang mulai dari
400nm-540nm

Catat nilai %T
pada alat

Buat kurva antara

panjang gelombang
dengan absorbansi

c. Penentuan Kurva Kalibrasi dan Konsentrasi Sampel

Masukan kuvet yang

berisi larutan blanko

Ganti larutan dengan

larutan sampel

Catat nilai %T nya

Atur skala % T pada

posisi 100%

Buat kurva kalibrasi

antar konsentrasi
dengan adsorbansi

Ganti larutan blanko

dengan larutan
standar

Atur panjang gelombang

yang didapat dari langkah
sebelumnya

Tentukan konsentrasi sampel

(interpolasikan nilai
adsorbansi sampel ke dalam
kurva kalibrasi)

DATA PENGAMATAN DAN PENGOLAHAN DATA

NO

%T

Absorbansi

(nm)
1
400
0.9
0.045757491
2
410
0.87
0.060480747
3
420
0.85
0.070581074
4
430
0.84
0.075720714
5
440
0.82
0.086186148
6
450
0.81
0.091514981
7
460
0.805
0.09420412
8
470
0.8
0.096910013
9
480
0.8
0.096910013
10
490
0.8
0.096910013
11
500
0.8
0.096910013
12
510
0.82
0.086186148
13
520
0.83
0.080921908
14
530
0.85
0.070581074
15
540
0.86
0.065501549
Tabel 1. Penentuan Panjang gelombang Maksimum
0.1
0.1
0.09
0.09
0.08
0.08
Absorbansi

0.07
0.07
0.06
0.06
0.05
0.05
400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550
Panjang Gelombang (nm)

Gambar 1. Kurva Penentuan Panjang Gelombang Maksimum

No
.
1
2
3
4
5
6
7
8

Konsentrasi (ppm)
0
10
20
30
40
50
Sampel #1
Sampel #2

%T

Absorbansi (-log T)

0
100
1,0
0.086186148
82
0.82
0.075720714
84
0.84
0.102372909
79
0.79
0.119186408
76
0.76
0.148741651
71
0.71
0.086186148
82
0.82
0.107905397
78
0.78
Tabel 2. Data Penentuan Kurva Kalibrasi

Absorbansi

10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
konsentrasi (ppm)

Gambar 2. Kurva Kalibrasi

LAMPIRAN
Perhitungan pembuatan larutan induk Fe2+ 100 ppm
Rumus : V1 x N1 = V2 x N2
N1 = 1000 ppm

N2 = 100 ppm

V2 = 100 m1

V1 ?

V1 =

10 0 x 100
1000

V1 = 10 mL

Perhitungan pembuatan larutan standar Fe2+

Larutan Fe2+ dari Fe2+ 100 ppm
Larutan #1 (5 mL Fe2+)
V1.N1 = V2.N2
5 mL. 100 ppm = 50 mL. N2
N2 = 10 ppm
Larutan #2 (10 mL Fe2+)
V1.N1 = V2.N2
10 mL. 100 ppm = 50 mL. N2
N2 = 20 ppm
Larutan #3 (15 mL Fe2+)
V1.N1 = V2.N2
15 mL. 100 ppm = 50 mL. N2
N2 = 30 ppm
Larutan #4 (20 mL Fe2+)
V1.N1 = V2.N2
20 mL. 100 ppm = 50 mL. N2
N2 = 40 ppm

Larutan #5 (25 mL Fe2+)

V1.N1 = V2.N2
25 mL. 100 ppm = 50 mL. N2
N2 = 50 ppm

PEMBAHASAN
Oleh: Risma Regiyanti (131411048)
Pada percobaan kali ini, digunakan larutan induk Fe2+ dengan konsentrasi 1000 ppm.
Setelah itu larutan tersebut diencerkan menjadi larutan Fe2+ 100 ppm. Kemudian dibuat
komposisi masing-masing 0 mL;5 mL;10 mL;15 mL;20 mL; dan 25 mL larutan Fe2+
ditambah 5 mL KSCN dan 5 mL HNO3. Fungsi dari KSCN yaitu untuk menjadikan suatu
senyawa kompleks pada ion Fe2+ yang nantinya akan mengalami panjang gelombang tertentu
sedangkan HNO3 berfungsi untuk mempercepat oksidasi (oksidator). Pada saat pengenceran,
larutan Fe2+ ditambahkan larutan HNO3 terlebih dahulu agar larutan Fe2+ teroksidasi menjadi
Fe3+, selanjutnya ditambahkan KSCN agar terbentuk larutan kompleks yang berwarna.
Spectronic-20 merupakan alat yang tipenya single beam configuration (berkas tunggal),
dimana tempat sel untuk memasukkan kuvetnya harus bergantian antara larutan blanko
dengan larutan standar yang akan diukur %T nya. Sehingga dalam pengukuran dan
pengaturan panjang gelombang larutan blanko harus dirubah %T nya. Perbedaan antara
larutan sampel dengan larutan blanko yaitu pada komponen yang dimilikinya. Larutan blanko
adalah larutan yang digunakan untuk mengkalibrasi.. Tujuan pembuatan larutan blanko ini
adalah untuk mengetahui besarnya daya serap dari larutan dimana dalam larutan itu tidak
terdapat komponen yang dimiliki oleh larutan sampel. Panjang gelombang maksimum yang
didapat adalah 470nm. Hal ini dapat dilihat dari nilai %T yang menunjukkan angka terendah.
Seperti telah diketahui dari persamaan Lambert-Beer, semakin besar intensitas yang diserap
maka semakin besar juga panjang gelombang yang dihasilkan. Setelah didapat panjang
gelombang maksimum, yaitu 470 nm, nilai ini digunakan untuk mengukur absorbansi dari
larutan yang sudah diketahui konsentrasinya. Setelah dibuat grafik linier antara absorbansi
dengan konsentrasi, maka konsentrasi sampel dapat diketahui, yaitu dengan
menginterpolasikan nilai absorbansi dari sampel, dan didapat konsentrasi sampel #1 adalah
10 ppm dan sampel #2 adalah 33 ppm.

Oleh: Rizki Abi Karomi (131411048)

Pada percobaan ini digunakan larutan induk Fe2+ 1000 ppm yang diencerkan menjadi
100 ppm. Lalu larutan Fe2+ dimasukan ke labu takar 50 ml dengan komposisi Fe2+ masing

masing 0;5; 10 ; 15 ; 20 ; 25 ml lalu pada masing masing ditambahkan HNO 3 agar larutan
Fe2+ teroksidasi menjadi Fe3+ sehingga menjadi ion kompleks sehingga stabil saat direaksikan
dengan KSCN. Dari hasil pengolahan data dapat diketahui bahwa panjang gelombang
maksimum dari larutan Fe berada pada angka 470 nm karena pada panjang gelombang ini
nilai absorban tinggi dan % T kecil dan pada grafik yang dibuat menunjukan nilai tertinggi
pada panjang gelombang sebesar 470 nm.

Pada percobaan ini dibuat larutan sampel#1 dan sampel#2 dengan variasi konsentrasi
yang berbeda. Dengan menggunakan grafik dengan berdasarkan data yang didapat pada
percobaan sampel#1 memiliki konsentrasi 10 ppm dan sampel#2 memiliki konsentrasi
sebesar 33 ppm.

NANA RUSDIANA (101411082)

Pada praktikum ini menentukan konsentrasi larutan dengan menggunakan metode

spektrofotometri. Yaitu metode penetapan konsentrasi yang didasarkan pada pada
penyerapan intensitas cahaya. Prinsip dari metode ini adalah semakin tinggi
konsentrasi larutan tersebut semakin tinggi penyerapan/intensitas cahaya.
Perbedaan yang sangat signifikan kolorimetri dengan spektrofotometri yaitu pada
larutan blanko.Larutan yang digunakan untuk mengkalibrasi. Tujuan pembuatan
larutan blanko adalah untuk mengetahui besarnya serapan zat yang bukan analat.
Larutan analat dibuat dari campuran larutan Fe2+, HNO3, dan KCNS. Tujuan
penambahan HNO3 adalah sebagai penstabil saat pengkompleksian dengan KCNS.
Merubah Fe2+ menjadi Fe3+. Sedangkan tujuan penambahan KCNS yaitu untuk
pengkompleksian larutan. Sehingga akan menghasilkan senyawa kompleks yang
berwarna (warna komplementer).
Berdasarkan data pengamatan dan pengolahan data panjang gelombang maksimum
dari larutan Fe3+ ada di kisaran 475 nm. Hal ini teramati dari %T yang menunjukan
angka terendah pada kisaran panjang gelombang 475 nm. Seperti telah diketahui dari
persamaan Lambert-Bee, makin besar intensitas yang diserap, makin besar panjang
gelombang yang dihasilkan.
Dengan mengatur alat pada panjang gelombang 475 nm. Kemudian mengukur larutan
dengan variasi konsentrasi yang berbeda-beda (1 ppm, 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm).
Dan larutan sampel.
Kemudian dibuat grafik antara absorban dengan konsentrasi. Didapatkan persamaan,
y=0.145x + 0.137. R2=0.954.
Konsentrasi sampel dapat dihitung dari persaman. Dihasilkan sampel#1 sebesar 2.25
ppm dan sampel#2 sebesar 3.8 ppm.

Terjadi beberapa penyimpangan saat penghitungan absorban pada konsentrasi 6 ppm

dan 8 ppm. Kemungkinan hal ini disebabkan karena adanya pengotor pada tabung
reaksi. Sehingga absorban yang dihasilkan cukup tinggi. Melebihi 1.

1. NENDRY NURRAMDANI SOLIHAH (101411083)

Pada proses pengenceran larutan Fe2+ 100 ppm, penambahan larutan pengkompleks
harus berurutan, karena proses pembentukan senyawa kompleks tidak terjadi secara
langsung.
Larutan yang dimasukan setelah Fe2+ adalah larutan HNO3, karena HNO3 berfungsi
untuk mempercepat proses pengoksidasian menjadi ion Fe3+. Kemudian setelah itu,
ditambahkan larutan KCNS untuk proses pengkompleksan untuk menjadi larutan
kompleks yang berwarna.
Alat spectrometer yang digunakan adalah spekktronic-20 yang bertipe single beam
configuration yang hanya memiliki tempat kuvet satu sehingga proses pengkalibrasian
harus dilakukan satu-satu (bergantian). Panjang gelombang maksimal yang didapat
adalah 475 nm, yang kemudian digunakan untuk menentukan transmitan larutan
standard dan sampel. Panjang gelombang maksimal itu menunjukan bahwa Fe
memiliki warna serap biru dan warna komplementer jingga.
larutan blanko digunakan untuk proses pengkalibrasian dan untuk mengetahui daya
absorbansi dari larutan tersebut. Perbedaan larutan blamko dengan larutan standar
lainnya adalah pada larutan blanko tidak ditambahnkan larutan yang akan di uji.
Setelah dibuat grafik linier antara absorbansi dengan konsentrasi, maka konsentrasi
sampel dapat diketahui, yaitu dengan menginterpolasikan nilai absorbansi dari
sampel, dan didapat konsentrasi sampel #1 sebesar 2.25 ppm dan sampel #2 sebesar
3.8 ppm.

KESIMPULAN

Panjang gelombang maksimum yang diperoleh sebesar 470 nm.

Konsentrasi dari sampel Fe2+ dengan absorbansi 0.086186148 sebesar 10 ppm.
Konsentrasi dari sampel Fe2+ dengan absorbansi 0.107905397 sebesar 33 ppm.
Absorbansi dari larutan Fe2+ dengan berbagai konsentrasi :
Konsentrasi (ppm)

Absorbansi

10
20
30
40
50

0.086186148
0.075720714
0.102372909
0.119186408
0.148741651

DAFTAR PUSTAKA
Tim Penyusun Analitik Instrumen. 2010. Jobsheet Analitik Instrumen. Bandung: Politeknik
Negeri Bandung