UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

Facultad de Ingeniera Ambiental

MICROBIOLOGA SANITARIA I

INFORME DE LABORATORIO N7
Ttulo:
Numeracin de coliformes totales y fecales por el mtodo del
Nmero ms probable (NMP) en muestras ambientales.
Numeracin de enterobacterias.
Docente:
MSc. Martn Martnez Vila
Integrantes:
Vsquez Pea Julian Gustavo 20132141E
Flores Crdenas Karen Kimberly 20123502I

2015

INFORME DE LABORATORIO N7
I.

OBJETIVOS

II.

2015

Evidenciar presencia de coliformes en muestras ambientales.

Evidenciar el origen de fecales.
Evidenciar cuantitativamente rganos coliformes.
Manejar el mtodo NMP y su correcta interpretacin.

MARCO TEORICO

La determinacin de microorganismos coliformes totales por el mtodo del Nmero

ms Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de
fermentar la lactosa con produccin de
48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinacin
consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio
el cual permite la recuperacin de los microorganismos daados que se encuentren
presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de
carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo
lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de
aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde
brillante.
La determinacin del nmero ms probable de microorganismos coliformes fecales se
realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son
incubados a una temperatura de 44.5 0.1C por un periodo de 24 a 48 h.
Finalmente, la bsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de
caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales
(Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las
pruebas bioqumicas bsicas (IMViC) a las colonias tpicas.
COLIFORNES FECALES:
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo de coliformes. Estas
son definidas como bacilos gram- negativos, no esporulados que fermentan la lactosa
con produccin de cido y gas a 44.5C 0.2C dentro de las 24 2 horas.
La mayor especie en el grupo de coliformes es ESCHERICHIA COLI.
1

INFORME DE LABORATORIO N7

2015

CALDO BILIS BRILLANTE: se utiliza para detectar presencia de coliformes Totales.

CALDO EC: Caldo ESCHERICHIA COLI, se utiliza para detectar presencia de coliformes
fecales.

III.

MATERIALES Y EQUIPOS

IV.

Incubadora a 35 37oC.
Bao Mara 44.5 0.2oC.
Asa de siembra
Pipetar bacteriolgicas.
Medios de cultivo.
o Caldo Lauril sulfatado triptosa (LST) volumen de 10ml en tubos de 16 x
150mm conteniendo tubos fermentacin (Durhem) invertidos 75 x
10mm.
o Clado EC.
o Agar Endo.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Prueba presuntiva de microorganismos coliformes totales

1. A partir de la muestra de agua inocular 1mL en cada uno de los tubos con LST con
campana de Durham.
2. Incubar los medios a 35-37 C durante 24-48hrs.
3. Observar si hay formacin de gas (desplazamiento del medio en la campana de
Durham), si no se observara tal produccin, incubar 24 horas ms.

INFORME DE LABORATORIO N7

2015

PRUEBA CONFIRMATIVA
a) Sembrar en agar Endo por el mtodo de estriado escoger 9 tubos del proceso
anterior.

b) Sembrar en caldo BRILA, inocular con asa de siembra 2 asadas

INFORME DE LABORATORIO N7

2015

Contar nmero de tubos positivos, por cada dilucin y comparar con tabla
NMP
c) Coliformes fecales

Contar nmero de tubos positivos (gas + acidez turbidez) para cada dilucin y
comprobar con la tabla de NMP
d) Del caldo EC sembrar con asa siembra en placas de agar ENDO.

Luego sembrar colonias verdes con brillo metlico en placas con agar nutritivo.
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INFORME DE LABORATORIO N7

V.

2015

RESULTADOS
PESCADO

DILUCION

OBSERVACION
HAY MUCHAS COLONIAS
HAY CONTAMINANTE; 40 COLONIAS 40. UFC/g
5 COLONIAS
1 COLONIA

CARNE MOLIDA
DILUCION

OBSERVACION

42 COLONIAS LAPTOSA (+) ROJITA

4 COLONIA ; 1 SUPERFICIAL COLIFORME LAPTOSA (+)

Las superficiales no se cuentan porque la muestra est bajo la capa de agar.

A
POCO BRILLO
METALICO MS
COLOR ROJO ; ALTO
RELIEVE
BRILLO METALICO
VERDE CIRCULAR
PEQUEO
BRILLO METALICO
VERDE

B
POCO BRILLO
METALICO (VERDE)
MS COLOR ROJO
ALTO RELIEVE
BRILLO METALICO
VERDE CIRCULAR
PEQUEO
BRILLO METALICO
VERDE

C
BRILLO METALICO
VERDE CON POCO
ROJO
BRILLO METALICO
VERDECIRCULAR
PEQUEO
BRILLO METALICO
VERDE

PRUEBA CONFIRMATIVA: PRUEBA POSITIVA (+). COLONIA ROJA, RODEADO DE COLOR

ROJO O CON BRILLO METALICO.

INFORME DE LABORATORIO N7
VI.

2015

CONCLUSIONES

Ms contaminacin hay en la carne molida que en el pescado.

Se observ presencia de coliformes totales en el agar ENDO

VII.

RECOMENDACIONES

El nmero de colonias debe de estar en el rango de (20;200)

Esterilizar las pipetas para evitar contaminacin.
Licuar bien los slidos para no tener complicaciones al usar la pipeta.