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Biologa y Geologa

Tema 20

Los genes y la ingeniera gentica.


1.- La ingeniera gentica.
La biotecnologa es el conjunto de tcnicas mediante las que se obtienen productos tiles para las
personas a partir de seres vivos, sus partes o sus productos (vgr.- fabricar cerveza).
La ingeniera gentica es una tcnica que consiste en la manipulacin del ADN de los organismos,
bsicamente mediante la transferencia de ADN de unos a otros. El objetivo a veces es la clonacin, es
decir, obtener copias idnticas de organismos. Sera como una reproduccin asexual.
A.- Tcnicas de ingeniera gentica.
La ingeniera gentica se conoce tambin como tcnica del ADN recombinante. Un ADN recombinante
es un ADN obtenido en el laboratorio que incluye fragmentos de distintas procedencias.
Esta tcnica comienza con la obtencin de un fragmento de ADN que interesa (por medio de enzimas de
restriccin) A continuacin se inserta en otro fragmento de ADN (un vector) que posteriormente se r
introducido en el organismo receptor (que se transformar en un transgnico).
Enzimas de restriccin.
Estas enzimas o endonucleasas de restriccin son un grupos de enzimas bacterianas cuya funcin es
destruir los ADN vricos que puedan entrar en la bacteria. Esta destruccin es por medio de cortes en el
ADN extrao.
Lo interesante de estas enzimas es cada una corta al ADN siempre de la misma manera al identificar una
breve secuencia de ADN (de 4 a 12 nucletidos) que siempre es palindrmicas (se leen igual en una
cadena que en la otra).
Adems la enzima no corta las hebras en el mismo punto, sino en puntos ligeramente separados lo que
deja un corto fragmento de ADN monocatenario en cada lado del corte.
Vectores de clonacin para procariotas.
Los vectores de clonacin son medios biolgicos que se emplean para introducir material gentico en una
clula. Para introducir material gentico en clulas bacterianas se usan:
Plsmidos. Un plsmido es un fragmento circular de ADN bicatenario extra que existe en algunas
bacterias como material genetico con capacidad replicativa autnoma (debido a auq poseen un origen
de replicacin). Los plsmidos naturales que se conocen no tienen caractersticas ideales (suelen ser
grandes), y por ello, se elaboran mediante ingeniera gentica plsmidos artificiales con genes de
resistencia a antibiticos.
Virus bacterifagos y fagos. Los fagos son un tipo de virus que infectan a bacterias. Estos fagos se
manipulan eliminando determinadas secuencias de su ADN e insertando otras. Cuando el fago infecta
a la bacteria introduce en esta el ADN insertado y, cuando se multiplica, multiplican tambin la
secuencia insertada. La principal ventaja de usar vectores fgicos es que el ADN extrao se
empaqueta junto con el ADN del fago, formando ambos el ADN recombinante, dentro de su cubierta
proteica y penetra en las bacterias por el sistema de inyeccin propio del virus. Esto aumenta
enormemente la eficacia de la transformacin bacteriana. (Fago )
Csmicos. Son un tipo de plsmidos que incluyen la secuencia de ADN reconocida por el sistema de
empaquetamiento del fago (extremos COS). As, cuando se inserta un largo fragmento, el ADN
recombinante se puede empaquetar dentro de la cubierta del fago y, en consecuencia, ser inyectado
en la clula; una vez dentro de la bacteria se recircularas y se comporta como un plsmido enorme.
As pues, los csmidos permiten la clonacin de fragmentos muy largos de ADN forneo.
Tecnologa del ADN complementario.
Uno de los objetivos de la ingeniera gentica es la produccin de protenas de clulas eucariotas en
clulas procariotas (vgr.- insulina). Esto plantea un problema y es que laos ADN de procariotas presentan
intrones, y las bacterias carecen de las enzimas para eliminarlos.
Para evitar esto lo que se hace es sintetizar una molcula de ADN a partir de un ARN maduro (sin
intrones) por medio de una transcriptasa inversa o retrotranscriptasa. DE ah sale un ADN monocatenario
que posteriormente se har bicatenario por medios de una ADN polimerasa I.
A veces cuando se tiene la secuencia de aminocidos de la protena lo que se hace es sintetizar
artificialmente el ADN.
Vectores de clonacin para eucariotas.
Para introducir ADN en clulas eucariotas se usan sistemas diferentes a los usados en procariotas.
La bacteria Agrobacterium tumefaciens contiene el plsmido Ti, que puede introducirse en clulas
vegetales e insertarse en un cromosoma..
En levaduras se han descubierto algunos plsmidos similares a los bacterianos que pueden usarse en
clulas eucariotes.
Para introducir genes en clulas eucariotas se pueden usar retrovirus modificados o la inyeccin de ADN
en el ncleo de los ovocitos.

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Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR.- Polymerase Chain reaction).
Esta es una tcnica usada para obtener una gran cantidad de copias de un segmento de ADN a partir de
cantidades minsculas.
En primer lugar se ha de calibrar bien la cantidad de ADN que se quiere amplifica (es decir, del que se
quiere hacer muchas copias). Si se deja mucha cantidad de ADN interfiere y da problemas.
Adems hay que secuenciar dos oligonucleotidos (15-20 unidades) sintticos de ADN
complementario de cada una de las cadenas de la doble hlice de ADN. Esto hay que hacerlo de zonas
que estn situadas un poco antes y un poco
despus de regin que queremos amplificar. Estos
son los cebadores (primer). Oligonucletidos
necesarios para que la ADN-poliomerasa acte.
Se desnaturaliza el ADN a copiar (90 C durante
1 minuto)
Se aade el cebador (oligonucleotidos
sintetizados anteriormente)
Se enfra a una temperatura de entre 40 y 60 C y
se mantiene as durante 45 segundos. Esta es la
temperatura de anillamiento. Hace que los
cebadores
se
unan
a
las
regiones
complementarias.
Se aade la ADN-polimerasa y los dNTP y se
sube la temperatura hasta los 70 C. Esta es la
temperatura de elongacin. En este paso las
ADN-polimerasa amplia la cadena entre 1.000 y
2.000 bases.
Lo normal es que queramos duplicar unas 300 bases, esto nos genera ADN de ms pero da igual. De
esta forma tenemos 2 cadenas dobles de ADN. Hemos completado un ciclo.
Ahora tengo que repetir el ciclo. Pero al subir la temperatura a 90 C la ADN polimerasa se me
desnaturaliza (al ser un protena el calor le afecta y hace que pierda sus propiedades clara de huevo
fresca y cocida) y tengo constantemente que estar aadiendo ADN-polimerasa en cada ciclo. Para
evitar esto se usa polimerasa especial obtenida de una bacteria que vive en aguas termales, (Thermus
aquaticus) y que es termoestable (no se estropea a temperaturas altas). Se conoce como Taq
polimerasa.
A partir de aqu comienza un nuevo ciclo. Pero en estos nuevos ciclos slo se sintetiza la cantidad de
ADN que quiero, porque la Taq-polimerasa solo reconoce una parte del ADN sintetizado.
Se suelen repetir unas 30 o 35 veces el ciclo. Lo que nos da una cantidad de 68 billones de copias.
Actualmente se hace de forma automtica en un termociclador.
B.- Aplicaciones de la ingeniera gentica.
La ingeniera gentica comenz en la dcada de 1970 y al principio se us slo como investigacin
bsica. Pero rpidamente comenzaron a desarrollarse numerosas aplicaciones con mltiples fines como
mdico, farmacutico, agroalimentario, etc.
Las principales aplicaciones son:
Produccin de protenas teraputicas.
Algunas enfermedades tienen su origen en la carencia de alguna protena. Mediante tcnicas de ingeniera
gentica se pueden sintetizar grandes cantidades de esa protena para luego inyectarse en las personas con
esa enfermedad y de ese modo paliarla. Las ms comunes son:
La insulina es la molcula encargada de regular el nivel de glucosa en la sangre. Tiene dos cadenas
de aminocidos: el pptido A (21 aminocidos) y el pptido B (30 aminocidos). Una vez aisladas las
dos secuencias de nucletidos, se introdujeron por separado, mediante plsmidos, en dos estirpes
diferentes de bacterias, detrs del opern lac. stas proporcionaron en muy poco tiempo muchas
bacterias portadoras de esos genes. Al aadir lactosa al medio, estas bacterias empiezan a sintetizar
pptidos A o B, respectivamente. Luego se retiran, se purifican y se activan los grupos - SH para que
se unan los dos pptidos y se forme la insulina humana madura. Como el metabolismo bacteriano es
muy elevado, esta va de obtencin resulta muy rentable. Adems, se trata de insulina humana en
lugar de insulina porcina, que es la que haba antes en el mercado para los enfermos de diabetes.
La hormona del crecimiento es un nico polipptido de 191 aminocidos. Tambin se ha
introducido su gen en bacterias gracias a un plsmido en el lugar regulado por el promotor del opern
lac. Esta hormona se emplea para tratar algunos casos de enanismo.
El interfern (IFN) es una protena de peso molecular entre 16.000 y 20.000, que contiene una
cadena glucosdica. Se aisl a partir de clulas animales que la producan como respuesta a

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infecciones vricas. Se ha observado que esta sustancia limita o incluso anula los efectos de la
infeccin. La aplicacin del interfern ha sido positiva en enfermedades vricas, como resfriados,
hepatitis, herpes, rabia, etc. En aplicaciones prolongadas disminuye los efectos del cncer. Se han
observado claras regresiones de las metstasis durante el tiempo que dura su aplicacin En la
actualidad, se ha conseguido aislar el ADN responsable del interfern en leucocitos y fibroblastos
(tejido conjuntivo) infectados. Este ADN se ha introducido en bacterias y, aunque la tasa de
obtencin es muy baja debido a la inestabilidad de esta molcula, se espera que en el futuro se
mejorar el rendimiento y servir para el tratamiento de las enfermedades vricas y de algunos tipos
de cncer.
El factor VIII de la coagulacin. La hemofilia es una enfermedad que consiste en la no coagulacin
de la sangre, debido a la ausencia de alguna de las protenas que intervienen en el proceso. El 80 %
de las veces se debe a la ausencia del factor VIII. A partir de la introduccin en bacterias del gen
humano que lo codifica, se ha obtenido dicho factor de forma ms rentable que a partir de la sangre
de donantes, y sin el peligro de introducir virus (de la hepatitis B, del SIDA, etctera), como
desgraciadamente ha sucedido en varios pases.
Produccin de enzimas.
Muchos procesos industriales requieren el uso de enzimas que se extraen de los microorganismos.
Actualmente se usan tcnicas de ingeniera gentica para obtener de los microorganismos esas enzimas
modificadas y mejoradas y en mayor cantidad.
Produccin de vacunas.
Se insertan los genes del agente patgeno contra el que se quiere obtener la acuna en cualquier clula y se
recogen las protenas sintetizadas. Dichas protenas inyectadas en el paciente actuarn cono antgenos y
desencadenan la respuesta inmunitaria. De esta manera se logra la inmunizacin. Con esto se consigue
que las vacunas sean ms seguras pues no hay que inyectar agentes patgenos debilitados o muertos que
pueden provocar algunos tipos de problemas.
Terapia gnica.
La terapia gnica consiste en la introduccin de genes en seres humanos con el fin de corregir alguna
enfermedad de origen gentico. En este caso, se pretende restaurar la funcin de un gen defectuoso y
lograr una curacin definitiva.
A nivel terico se pueden distinguir dos tipos de terapias gnicas:
Terapia de clulas germinales. Se introduce el gen en clulas de la lnea germinal (en gametos, sus
precursores o en un cigoto). De este modo, resultan modificadas todas las clulas del organismo al que
den origen estas clulas. Este tipo de terapia tiene unas fuertes implicaciones ticas y sociales y,
actualmente, no est autorizada en ningn pas.
Terapia de clulas somticas. Se introduce el gen en un grupo ms o menos amplio de clulas
somticas. De este modo, la correccin no pasa a la descendencia.
Para introducir los genes en las clulas somticas se suelen emplear retrovirus modificados, que integran
el ADN en los cromosomas de las clulas. El problema que plantean los retrovirus es que los genes se
insertan al azar en cualquier punto del genoma, lo que puede provocar diversas alteraciones genticas, si
se inserta, por ejemplo, en el interior de un gen o en alguna secuencia de las que regulan la expresin
gnica.
Una de las primeras enfermedades tratadas con estas tcnicas fue la deficiencia de la enzima
adenosinadesaminasa (ADA). Esta enfermedad implica una alteracin de los linfocitos, que los hace no
funcionales. El paciente carece totalmente de defensas, de modo que puede fallecer ante cualquier
infeccin, aunque sea de carcter leve. Esta enfermedad tambin se conoce como enfermedad de los
nios burbuja, porque los pacientes deben vivir completamente aislados del exterior, a fin de evitar
cualquier contacto con microorganismos patgenos.
Otras enfermedades que se estn tratan mediante ingeniera gentica son la talasemia, la fibrosis qustica
y algunos tipos de cncer.
An no ha habido xitos realmente concluyentes con la terapia gnica, pues aunque algunos pacientes han
experimentado una gran mejora, en otros no se han encontrado mejoras destacables. En algunos casos,
incluso, se ha relacionado la terapia gnica con la aparicin de tumores. No obstante, es importante seguir
investigando en esta va por las ventajas que puede llegar a aportar. De hecho, actualmente se estn
realizando diversos ensayos clnicos de terapia gentica.
Aplicaciones de la ingeniera gentica en la agricultura.
Los organismos eucariotas desarrollados a partir de una clula en la que se han introducido genes
extraos se denominan organismos transgnicos. En el campo de la agricultura, con estos organismos se
intenta aumentar la productividad de los cultivos, conseguir que las prcticas agrcolas sean ms
ecolgicas y obtener productos con caractersticas mejoradas. Aunque no estn exentos de polmica, los
cultivos de plantas transgnicas cada vez se encuentran ms extendidos.

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Para introducir genes en las clulas vegetales y obtener plantas transgnicas se emplea el plsmido Ti de
Agrobacterium tumefaciens u otras tcnicas, como la microinyeccin y las microbalas de metal
recubiertas de ADN.
Mediante la ingeniera gentica se persiguen varios objetivos de mejora:
Obtener plantas resistentes a los herbicidas.
Conseguir plantas resistentes a los insectos.
Mejorar la resistencia a cambios ambientales. (resistir las heladas, la sequa, etc.).
Modificar caractersticas de las plantas. (Retrasar la maduracin de las frutas, etc.).
Mejorar las caractersticas nutritivas del producto. (Introducir vitaminas y aminocidos).
Algunos cultivos transgnicos que se emplean hoy da son:
Maz Bt. Esta variedad de maz incorpora un gen que le hace producir un insecticida.
Soja resistente a herbicidas
Tomate de maduracin tarda.
Arroz dorado. Este arroz produce vitamina A.
Cultivos con genes nif. Estos genes hacen que algunos microorganismos puedan utilizar el
nitrgeno atmosfrico como fuente de este elemento.
Aplicaciones de la ingeniera gentica en la ganadera.
Las principales aplicaciones de las tcnicas de ingeniera gentica a la mejora de la produccin animal se
han realizado en peces. Ello se debe a que en la mayora de los peces la fecundacin es externa, lo cual
permite la introduccin de genes en el cigoto antes de que se unan el ncleo del espermatozoide y el del
vulo. Esto se realiza mediante microinyeccin o mediante un campo elctrico que hace permeable su
membrana plasmtica. El gen se fija al proncleo masculino. Se obtiene entre un 10 y un 70 % de
embriones transgnicos, en vez de un 1 % que es lo que suele obtenerse en mamferos. A partir de estas
tcnicas se han conseguido los siguientes logros:
Carpas transgnicas que crecen entre un 20 y un 46 % ms rpidamente gracias al gen de la
hormona del crecimiento de la trucha arco iris. ste se ha unido a un promotor (regin de ADN que
regula la expresin del gen vecino) sensible a los metales pesados. Debido a ello, la expresin del
gen se estimula cuando se aade cinc a la dieta.
Salmones transgnicos que resisten mejor las bajas temperaturas gracias a haber incorporado un
gen de una especie de platija que vive en el rtico. Este gen produce una protena que se une a los
cristales de hielo que se forman en la sangre e impide su crecimiento, por lo que se evita la
congelacin del medio interno.
En mamferos tambin se han realizado diversos experimentos encaminados a obtener organismos con
una mayor tasa de crecimiento. As, en ratones que carecan de la hormona del crecimiento, debido a una
mutacin en el gen correspondiente, tras la introduccin del gen de la hormona del crecimiento de rata,
mediante microinyeccin en cigotos homocigticos, se han obtenido ratones transgnicos con 800 veces
ms hormona que los ratones normales, lo que provoca individuos con ms del triple de peso y tamao.
Esto puede tener un gran inters en la produccin animal. En realidad, el nuevo gen no se ha situado en el
lugar propio sino en otro; as pues, no se ha corregido el defecto sino que simplemente se ha
enmascarado.

2.- La clonacin de los seres vivos.


La clonacin de seres vivos es la obtencin de organismos genticamente idnticos, originados por
reproduccin asexual a partir de una nica clula u organismo o por escisin artificial de estados
embrionarios tempranos.
A.- Clonacin de plantas.
En las plantas, la clonacin ocurre continuamente en la naturaleza, cada vez que una planta se reproduce
asexualmente. Los agricultores tambin realizan clonacin cuando propagan una planta mediante un
esqueje.
Esta capacidad de las plantas se basa en la existencia, en diversos tejidos, de clulas totipotentes, es
decir, clulas con la capacidad de generar todos los tipos celulares del adulto. Ya en la dcada de 1950, a
partir de una sola clula del floema de raz de la zanahoria, se consigui una nueva planta completa
cultivndola en un medio con nutrientes y hormonas.
La regeneracin de una planta a partir de una sola clula, callo vegetal, resulta til para la obtencin de
plantas modificadas por ingeniera gentica.
B.- Clonacin de animales.
La clonacin de animales es ms compleja que la clonacin de plantas, pues no se han encontrado clulas
adultas totipotentes a partir de las cuales se regenere un individuo adulto completo. Sin embargo, a partir
de clulas embrionarias en las primeras fases del desarrollo s se pueden formar individuos completos. Se
pueden extraer varias clulas de un embrin joven y hacer que se desarrollen para formar varios animales
idnticos, es decir, varios clones.

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En 1997 un equipo dirigido por lan Wilmut consigui un gran xito: produjo una oveja clnica a partir de
una oveja adulta. Para ello, obtuvieron el ncleo de una clula de la mama de una oveja adulta y lo
introdujeron en un vulo al que previamente se le haba extrado su ncleo haploide. El ncleo estaba en
fase G0 o de detencin de la expresin de sus genes. Posteriormente, haciendo pasar una corriente
elctrica, se consigui reactivar los genes de este ncleo y el ovocito, ya diploide, comenz su desarrollo
embrionario. Ms adelante, este embrin se transfiri al tero de otra oveja receptora, en la que se
desarroll.
El xito obtenido requiri de un gran esfuerzo, puesto que de los 400 ovocitos utilizados solo naci una
oveja, la famosa oveja Dolly. Sin embargo, esta tcnica, que recibi el nombre de transferencia nuclear
somtica, abri la va para clonar no solo individuos completos, sino los tejidos u rganos que cada
paciente precisara. Como estos seran genticamente idnticos a los del paciente, se evitara el problema
del rechazo.
C.- Clonacin teraputica.
En algunas enfermedades es necesario realizar trasplantes, ya sea de rganos, de tejidos o de clulas. En
estos casos, la dificultad estriba en encontrar donantes compatibles, a fin de que el receptor no rechace el
trasplante recibido.
Una solucin para el problema de encontrar un donante compatible sera tomar clulas del enfermo y
clonarlas en el laboratorio, de modo que dieran origen a los rganos, tejidos o clulas que se necesitaran.
La dificultad de esta tcnica es que las clulas adultas estn diferenciadas, es decir, pertenecen a un tipo
celular concreto y es difcil que se transformen en otro tipo distinto. Las clulas que se pueden dividir y
dar origen a diversos tipos celulares se denominan clulas madre pluripotentes.
Clulas madres embrionarias.
Las clulas madre embrionarias son las que se obtienen a partir de un embrin en los primeras fases del
desarrollo. Estas clulas son pluripotentes y se pueden diferenciar para producir otros tipos celulares. Es
decir, se podra tomar una clula de un embrin en la edad adecuada y cultivarla en el laboratorio para
formar las clulas, los tejidos o, quiz, los rganos precisos. Sin embargo, an existira el problema de la
compatibilidad entre el donante y el receptor.
Una solucin es aplicar la tcnica de la transferencia nuclear somtica que se us para clonar a la oveja
Dolly. Para ello, se introduce el ncleo de una clula somtica de la persona a tratar en un ovocito al que
previamente se ha extrado el ncleo (ovocito enucleado). El ovocito se desarrolla para formar un
embrin. Cuando este llega al quinto da, se pueden obtener las clulas madre pluripotentes, que ya son
compatibles con el paciente. Este proceso se denomina clonacin teraputica.
La diferencia con el caso de la oveja Dolly es que estos embriones no se desarrollan para formar un
individuo completo, sino los tejidos que se precisan.
La clonacin de clulas embrionarias plantea un problema tico, pues en el proceso se destruyen
embriones humanos. Una parte de la sociedad considera que el embrin ya es un ser humano que merece
la misma proteccin legal que el adulto. Adems, las clulas madre embrionarias pueden favorecer la
aparicin de tumores en los receptores, debido a su alta capacidad de proliferacin.
Clulas madres adultas.
Aunque las clulas madre embrionarias parecen ser una herramienta muy prometedora para el tratamiento
de algunas enfermedades, plantean numerosos problemas tanto prcticos como ticos.
En 2001, Catherine Verfaillie descubri la existencia de clulas madre adultas multipotentes en la
mdula sea, es decir, clulas adultas que podan diferenciarse en clulas de otros tejidos, dependiendo de
las condiciones en las que se cultivaban en el laboratorio.
Las clulas madre adultas presentan las siguientes caractersticas:
- Son fciles de conseguir a partir de una simple puncin.
- No presentan problemas de histoincompatibilidad si se extraen del propio enfermo al que se va a tratar.
- No originan tumores, ya que su tasa de proliferacin es menor que la de las clulas madre embrionarias.
En los seres humanos, se ha encontrado este tipo de clulas, adems de en la mdula sea, en otros
muchos rganos, como la grasa del tejido adiposo, el cordn umbilical, la placenta, el cerebro, el msculo
cardaco, etc.
Clulas madres y terapia celular.
Se pueden distinguir tres tipos de clulas madre en funcin de su capacidad para diferenciarse en un
nmero mayor o menor de tejidos:
Totipotentes. Pueden generar por completo un nuevo individuo organizado y estructurado. Esta
capacidad es exclusiva de clulas madre embrionarias.
Pluripotentes. Son capaces de diferenciarse en cualquier tejido, pero no pueden formar un
individuo completo. Existen clulas madre pluripotentes tanto embrionarias como adultas.
Multipotentes. Son aquellas capaces de generar exclusivamente nuevas clulas del tejido del que
proceden.

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La utilizacin de clulas madre para curar enfermedades debidas a anomalas celulares recibe el nombre
de terapia celular. Algunas enfermedades humanas que se espera curar con esta tcnica son la diabetes
(por regeneracin de clulas de los islotes del pncreas), la leucemia infantil (por regeneracin de la
mdula sea) y el infarto de miocardio (mediante la regeneracin de los tejidos necrosados del corazn).

3.- Los anticuerpos monoclonales.


Cuando un antgeno entra en el cuerpo de un animal, el sistema inmunitario lo detecta como extrao y los
linfocitos B que lo reconocen y se transforman en clulas plasmticas, que producen anticuerpos
especficos contra ese antgeno. Del mismo modo, si se inyecta cualquier molcula extraa en un animal,
su sistema inmunitario producir anticuerpos contra dicha sustancia. Los anticuerpos as formados son
anticuerpos policlonales, porque proceden de diferentes clones de linfocitos. Se producirn diferentes
anticuerpos que se unirn a lugares diferentes del antgeno, aunque sean especficos contra ese antgeno.
Si se pudiera cultivar un linfocito en el laboratorio, de modo que se multiplicara y produjera anticuerpos,
estos anticuerpos seran monoclonales, pues procederan de un clon de linfocitos y seran idnticos.
Ahora bien, los linfocitos no se pueden cultivar de este modo. Para poder hacerlo, se produce la fusin de
un linfocito B y una clula cancerosa que tiene la facultad de dividirse indefinidamente. La clula hbrida
resultante de la fusin recibe el nombre de hibridoma y tiene la capacidad de producir anticuerpos de un
solo tipo y de reproducirse constantemente. Todas las clulas hijas descendientes tendrn la misma
constitucin gentica y producirn idnticos anticuerpos.
A.- Aplicacin de los anticuerpos monoclonales.
Los anticuerpos monoclonales son muy tiles en investigacin. Se les pueden unir molculas
fluorescentes y usarlos para teir preparaciones microscpicas. As, observando la fluorescencia,
podemos ver dnde se encuentran las molculas a las que se unen los anticuerpos.
Tambin son muy tiles para el diagnstico de enfermedades. Numerosas pruebas diagnsticas, como la
prueba del sida, se basan en el empleo de anticuerpos monoclonales.
Cada vez es ms frecuente el empleo de anticuerpos monoclonales para el tratamiento de diversas
enfermedades. Actualmente, se emplean ms de una docena de anticuerpos para tratar diversas
enfermedades y se estn realizando ensayos clnicos con muchos ms.
Buena parte de los anticuerpos monoclonales que se usan con fines teraputicos se emplean para combatir
el cncer. Este uso se basa en que las clulas, cuando se transforman en cancerosas, exhiben en su
membrana ciertas molculas o conjuntos de molculas que no se hallan en las clulas normales. La
estrategia que se emplea consiste en producir anticuerpos monoclonales contra esos marcadores y unirles
sustancias radiactivas o citotxicas, que, de este modo, actan solo sobre las clulas cancerosas.
La mayor parte de los anticuerpos monoclonales empleados procedan de ratn. Cuando se usaban en
tratamientos prolongados, el organismo los reconoca como extraos y terminaba por rechazarlos.
Actualmente se emplean anticuerpos humanizados, fabricados por medio de ingeniera gentica. En
ellos, la parte que reconoce al antgeno procede de ratn, pero el resto procede del ser humano. Estos
anticuerpos experimentan un menor rechazo.

4.- El proyecto genoma humano.


El Proyecto Genoma Humano se plante con la finalidad de identificar todos los genes y la secuenciacin
completa del genoma del ser humano, es decir, el desciframiento de la secuencia exacta de nucletidos (3
x 109 pares de bases) que se encuentran en los 23 cromosomas del genoma humano haploide.
A.- Historia del Proyecto Genoma Humano.
En la dcada de 1980, comenz a gestarse en los Estados Unidos el Proyecto Genoma Humano. Aunque
se trataba de un proyecto muy ambicioso, que requera de una gran inversin humana y econmica, se
pensaba que aportara gran cantidad de informacin til y que facilitara en gran medida futuras
investigaciones, ahorrando tiempo y dinero. Este proyecto desat un gran inters internacional y varios
pases quisieron unir sus esfuerzos con los de Estados Unidos, a fin de compartir tambin los beneficios
resultantes. Por ello, en 1988 se hizo necesario fundar la Organizacin del Genoma Humano (HUGO),
encargada de coordinar los esfuerzos internacionales. Su primer director fue el norteamericano Vctor
McKusick.
Los trabajos de secuenciacin comenzaron en 1990 y se estimaba que se tardara quince aos en
finalizarlos. Sin embargo, a medida que avanzaba el proyecto, las tcnicas de secuenciacin avanzaron
considerablemente. Se han desarrollado mquinas secuenciadoras automticas y programas informticos
para analizar los resultados. De este modo, la secuenciacin se ha hecho mucho ms rpida y barata. Esto
ha hecho que el proyecto haya tardado en completarse menos de lo previsto.
El proyecto HUGO fue un proyecto pblico, financiado por fondos pblicos. Pero tambin hubo otro
proyecto privado que se desarroll en paralelo, liderado por la empresa Celera Genomics, dirigido por
Craig Venters. Esto desat una competencia que hizo tambin adelantar el proceso.
En 2001 ya se public el 90 % del genoma humano, y en el ao 2003 se consider completada la
secuenciacin de todo el genoma. El anuncio lo realizaron simultneamente, aunque por separado, el

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consorcio pblico del proyecto HUGO, dirigido entonces por Francis Collins, y el grupo privado de
Celera Genomics.
B.- Genoma humano.
A raz del Proyecto Genoma Humano ha surgido una ciencia conocida como genmica, que se ocupa del
estudio de los genomas de los seres vivos.
La primera sorpresa que proporcion el Proyecto Genoma Humano sobre nuestro propio genoma fue
mostrar que tenemos muchos menos genes de lo que se pensaba, y muchos de ellos los compartimos con
las bacterias y otros organismos sencillos. Posteriormente, se confirm que el ADN humano contena
entre 20000 y 25 000 genes, muy pocos si se considera que, por ejemplo, el ADN de la mosca Drosophila
mdanogaster contiene 13 700 genes.
Se estima que en el ser humano solo un 1,5 % del genoma corresponde a los exones de los genes, que
darn origen a un ARN mensajero y a una protena. Otra parte del genoma, en torno a un 40%,
corresponde a los intrones de los genes, a los promotores y a regiones de ADN ms o menos largas que
flanquean a los genes y son importantes para la regulacin de su transcripcin. El resto del ADN, en torno
a un 59 %, corresponde a secuencias de ADN ms o menos repetidas cuya funcin es totalmente
desconocida, hasta el punto de que a veces se denomina ADN basura. Parte de estas secuencias repetidas
guardan relacin con los centrmeros de los cromosomas.
En el transcurso del Proyecto Genoma Humano se ha descifrado tambin el genoma de muchos otros
organismos, como diversos virus, bacterias, la levadura de la cerveza, el gusano Caenorhabditis degans,
la mosca Drosophila mdanogaster, el ratn, diversas plantas... As, se puede comparar el genoma de estas
especies y estudiar su evolucin. De todo esto se ocupa la genmica comparada.
C.- Protemica.
La protemica estudia el conjunto de protenas de un organismo. En la especie humana se ha descubierto
que el nmero de protenas es mucho mayor que el nmero de genes. Esto se debe a que un mismo ARN
mensajero puede madurar de varias formas diferentes, dependiendo de los intrones que se eliminen. De
esta manera, se pueden formar diferentes protenas a partir de un mismo gen. A esto se le denomina
maduracin alternativa o splicing alternativo del ARN mensajero.
D.- Beneficio del P.G.H.
El conocimiento de la secuencia de nucletidos de cada gen, as como de su forma de expresarse,
permitir tener un patrn normal de referencia para la terapia gnica. Al comparar el ADN de un
individuo con este patrn se podr conocer si el individuo es o no portador de una enfermedad gentica,
que no se manifieste en los primeros aos de vida, y se podr cuantificar la posibilidad de que llegue a
manifestarse. De esta manera, se podrn tomar las precauciones necesarias para prevenirla.
El uso de los anlisis de ADN plantea numerosos problemas ticos, especialmente los relacionados con la
privacidad y voluntariedad de este anlisis gentico tan exhaustivo.

5. -Riesgos e implicaciones ticas de la biotecnologa.


La tcnica del ADN recombinante se inici en los aos 70, slo 15 aos despus que se descubriera la
estructura del ADN, y desde entonces algunos cientficos expresaron sus preocupaciones sobre sus
posibles peligros. Por ejemplo, el virus de los simios 40 (SV40) se sabe que produce cncer en los monos.
Si se introduce en la bacteria Escherichia coli, que es capaz de vivir en el intestino humano, tal vez
originara una bacteria que, si escapa del laboratorio, podra producir cncer en los humanos.
En 1974, once bilogos pidieron el establecimiento de normas para regular los posibles peligros de los
trabajos con ADN recombinante y pidieron una moratoria respecto a experimentos con genes productores
de cncer o sustancias txicas. En 1976 se establecieron las normas para este tipo de experimentos,
normas de esterilizacin, salas a baja presin para evitar la salida de aire contaminado en caso de
accidente, trabajar con cepas de E. coli genticamente dbiles que no pueden vivir fuera del laboratorio,
etc.
En una primera etapa, las cuestiones sobre ingeniera gentica se centraron en la calidad, seguridad y
eficacia de los productos. En una segunda etapa, la discusin ha girado en torno a cuestiones ticas y su
relacin con los procesos legislativos. Para dar respuesta a estas cuestiones se han creado varias
organizaciones, entre ellas el Comit Internacional de Biotica de la Unesco, constituido por unos 50
cientficos de unos 35 pases, fundado por el espaol E. Mayor Zaragoza en 1993. El objetivo de estos
comits de biotica es evitar aspectos del progreso que atenten contra la dignidad humana, que la ciencia
no sea identificada como parcialmente sospechosa, y que sus posibilidades no generen peligrosidad por
falta de definiciones ticas.
A.- Criterios del Comit Internacional de Biotica de la UNESCO.
Los criterios bsicos establecidos son:
Lmites por motivos ecolgicos y de sanidad. Se considera que han de existir controles muy
estrictos en la produccin de organismos transgnicos cuando stos puedan causar desastres
ecolgicos, como extincin de especies naturales debido a su mayor competitividad, causar

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Biologa y Geologa
Tema 20
enfermedades en los humanos (por ejemplo, infecciones debidas a los nuevos virus o nuevas
bacterias) o causar contaminaciones, sobre todo de las aguas, debido a nuevos procesos
metablicos indeseables.
Lmites por motivos ticos y morales. Se considera que muchas aplicaciones que son totalmente
lcitas en especies animales y vegetales no lo son en la especie humana debido a la dignidad de la
persona. El uso de la ingeniera gentica con la intencin de curar una enfermedad humana
(terapia gnica) es moralmente deseable, siempre que se respete la integridad del individuo y no
lo exponga a riesgos desproporcionados. En el caso de los embriones, es preciso el
consentimiento de los padres. Dado que la intencin curativa del individuo no es aplicable a las
clulas reproductoras (no son individuos), no se considera ticamente correcta la aplicacin de
estas tcnicas a los gametos humanos. Tambin se prohbe trabajar con embriones humanos con
finalidades de simple experimentacin.
Lmites por motivos sociales. Se considera que han de existir lmites legales, basados en el
derecho a la intimidad, que impidan la exigencia de un sondeo gnico para acceder a un puesto de
trabajo, a una plaza en un centro educativo, a una asistencia sanitaria, a la firma de una pliza de
seguros, etc.
Lmites por motivos polticos. Se considera que las aplicaciones de la ingeniera gentica en la
produccin vegetal y animal han de favorecer a todos los humanos y no solamente a los grupos
que dominan estas tcnicas. Podra haber perjuicios econmicos graves si, mediante el
establecimiento de patentes de organismos transgnicos, se aumentaran las diferencias entre
pases pobres y pases ricos.
Hay controversia entre los cientficos sobre la licitud de patentar las secuencias del genoma humano que
se vayan descubriendo. Unos consideran que no deberan patentarse nunca, sino ponerlas al servicio de
todos los pases. Otros aducen que es lgico que los laboratorios quieran recuperar las inversiones
realizadas, tal y como sucede en la industria farmacutica, ya que si esta investigacin fuera costeada por
los gobiernos, comportara un aumento de los impuestos que no parecen dispuestos a asumir; y que si no
se permite obtener beneficios, es posible que no se comuniquen los avances por miedo a que se prohba
patentarlos. La organizacin HUGO defiende que slo se puedan patentar las secuencias de las que se
sepa su funcin, tal como marcadores, lugares de actuacin de medicamentos o genes de funcin
conocida.
B.- Sitiuacin en Espaa.
En Espaa se aprob en el 2007 la Ley de investigacin biomdica para ofrecer un marco legislativo que
regule los posibles conflictos que generen todas estas nuevas tecnologas. Entre uno de los puntos que
plantea esta ley es la creacin de un Comit de biotica para establecer los parmetros ticos que regulen
todas las investigaciones en el campo de la biomedicina.
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6.- El cncer, una enfermedad gentica.


A.- Concepto de cncer y su relacin con el ADN.
La palabra cncer (cangrejo) alude a un mal que ataca desde dentro. El cncer es una enfermedad que
consiste en una multiplicacin acelerada de ciertas clulas alteradas, que forman tumores, y que pueden
migrar a otros puntos, a travs del sistema circulatorio y linftico, lo que se denomina metstasis.
Si el tumor est muy localizado y no crece indefinidamente, recibe el nombre de tumor benigno.
Generalmente, se puede extirpar con facilidad. En cambio, si crece invadiendo y destruyendo los dems
tejidos del organismo, con el consiguiente adelgazamiento del individuo, recibe el nombre de cncer
maligno.
Las clulas cancerosas se diferencian de las normales en que se dividen a gran velocidad, poseen
protenas de membrana diferentes (pueden ser detectadas mediante reacciones antgeno-anticuerpo),
presentan alteraciones de forma y tienen tendencia a invadir los tejidos prximos. Se considera que la
alteracin de las protenas de membrana receptoras de hormonas mitgenas (inductoras de mitosis) puede
estar relacionada con su incesante divisin.
El paso de clula normal a clula cancerosa, denominado transformacin cancerosa o neoplsica, est
relacionado con diferentes factores ambientales que mayoritariamente actan alterando el ADN. Se
considera la existencia de ciertos genes, denominados protooncogenes, que, con una pequea alteracin
producida por los llamados agentes cancergenos, pasan a oncogenes y stos provocan la transformacin
cancerosa. Adems hay otros genes, denominados antioncogenes o genes supresores, que inhiben la
divisin celular, establecindose un equilibrio entre unos y otros.

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Tema 20
En los humanos se han identificado ms de 100 oncogenes y unos 12 antioncogenes. En animales de
laboratorio se ha comprobado que el ADN de clulas cancerosas es capaz de provocar la transformacin
de clulas sanas en cancerosas, confirmando que la alteracin radica en el ADN. En los humanos se
conocen dos tipos de cncer con un claro componente hereditario (el retinoblastoma y el xeroderma
pigmentosum), lo cual confirma su relacin con el ADN.
B:- El cncer producido por virus.
Se conocen varios virus que producen cncer al infectar las clulas (transduccin) de determinados
animales de laboratorio; son los denominados virus oncognicos. Todava no se han encontrado en
humanos. Estos virus poseen uno o ms genes capaces de producir la transformacin cancerosa; son los
denominados oncogenes: por ejemplo, el oncogen src del virus oncognico del sarcoma de Rous, un virus
de ARN, que afecta al pollo. Es el virus en el que se descubri la enzima retrotranscriptasa o transcriptasa inversa.
C.- El cncer producido por sustancias qumicas o radiaciones.
En los seres humanos, la mayora de los cnceres, excepto algunos tipos de cncer de hgado y de
leucemias, no estn relacionados con virus, sino con otros agentes cancergenos, como son las
radiaciones UV y X, las radiaciones nucleares, el alquitrn, los ahumados, el pan tostado chamuscado, el
amianto, el cloruro de vinilo, las anilinas, algunos conservantes y edulcorantes artificiales, las bebidas
alcohlicas, sobre todo las de alta graduacin, y el tabaco; este ltimo directamente relacionado con el
cncer de pulmn.
Los agentes cancergenos generalmente son mutgenos. Sus efectos no son inmediatos, como sucede con
muchos mutgenos, sino que precisan repeticin y otros factores complementarios para que se
desencadene la transformacin de clula normal en clula cancerosa. Se considera que adems del
agente mutgeno es necesario un proceso promotor, por ejemplo, una recombinacin que site el
oncogn bajo un potente promotor que implique su transcripcin y por ello la aparicin de mucha
protena alterada.
Dado que el sistema inmunitario debera destruir las clulas cancerosas, se considera que debe producirse
tambin una alteracin de este sistema, tal vez en los linfocitos T citotxicos, y de la sntesis de
interfern.
D.- El cncer y la respuesta inmunolgica.
Las clulas cancerosas tienen molculas especiales en su membrana que pueden actuar como antgenos;
sin embargo, cuando la respuesta inmune no es la apropiada, el crecimiento tumoral prosigue.
La investigacin se ha centrado en ciertos antgenos de las clulas cancerosas que, al ser inoculados en
ratones de laboratorio, desencadenan la respuesta inmune de los linfocitos. El objetivo es esperar que
estos anticuerpos, al ser introducidos en el enfermo, destruyan las clulas tumorales. Para aumentar su
produccin se han fusionado los linfocitos que los producen con clulas tumorales. Los anticuerpos as
obtenidos se denominan anticuerpos monoclonales.
En la actualidad tambin se sigue investigando en conseguir la inmunidad activa, es decir, la respuesta
inmunolgica suficiente de las clulas humanas, mediante el uso de clulas cancerosas atenuadas por
irradiacin o por modificacin gentica (ingeniera gentica), o sea, la vacuna frente a uno o varios tipos
de cncer.
Se ha comprobado que hay sustancias anticancergenas que actan en los sistemas de reparacin del
ADN o evitando los procesos promotores. Estas sustancias se encuentran en las frutas, en las verduras, en
el aceite de oliva y en el pescado azul. Constituyen la mejor prevencin contra el cncer.

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