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RESUMO
O presente trabalho apresenta resultados obtidos acerca da atividade de cultura bacteriana
mista capaz de degradar a celulose sob a condio de anaerobiose estrita. A cultura
bacteriana foi obtida a partir do enriquecimento de amostra de chorume, originada da
degradao de resduos slidos urbanos, de depsito de lixo cu aberto do municpio de
So Carlos, Estado de So Paulo.
A cultura bacteriana anaerbia celuloltica foi enriquecida e subcultivada em meios de cultivo
lquido e slido contendo celulose em p CC 41 Whatmann, e mantida temperatura de 372
C. A habilidade da cultura bacteriana em degradar a celulose foi avaliada atravs de ensaios
de acompanhamento do crescimento celular e produo de metablitos. As contagens iniciais
de bactrias anaerbias celulolticas e metanognicas no chorume estudado revelaram a ordem
de grandeza de 104 bactrias/mL para ambos os grupos.
Variando-se a concentrao da celulose em cultivo lquido, as velocidades de crescimento
da cultura anaerbia celuloltica foram encontradas na faixa de 0,06 a 0,20 mg S.A.B. / L
h (Soro Albumina Bovina / Litro Hora), atravs de medidas de protenas totais. Foi
verificada a produo de acares redutores totais e cidos orgnicos volteis, aps
perodos de incubao de aproximadamente 100 horas.
Os experimentos realizados forneceram dados originais sobre a microbiologia e atividade
celuloltica do chorume, revelando aspectos do metabolismo pouco conhecidos, que
podem auxiliar na avaliao do potencial real do lquido gerado pela degradao de
resduos slidos, na inoculao de biodigestores anaerbios, ou na acelerao de aterros
sanitrios.
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INTRODUO
Aterro sanitrio um mtodos existentes atualmente empregados na disposio dos
resduos slidos urbanos. No Brasil considerado uma soluo atraente para os resduos
slidos, pois trata-se do mtodo mais vivel economicamente, alm de ser uma alternativa
energtica (VAZOLLER et al., 1992).
Para STEGMANN apud TEIXEIRA (1993), os aterros sanitrios devem ser operados de
modo a otimizar os processos de degradao bioqumica no interior dos mesmos. Para que
os processos de interveno nos aterros tornem-se eficientes, imprescindvel o
conhecimento mnimo das caractersticas fsico-qumicas e biolgicas dos lquidos
gerados durante a degradao dos resduos slidos, ou seja, do chorume. Vrios estudos
neste sentido j foram realizados, podendo-se exemplificar com os trabalhos de
MANTELL (1975); POHLAND apud PAVONI (1975), ROBINSON & MARIS (1985);
BALDOCHI (1990), SENIOR et al. apud SCHALCH (1992) e SCHALCH (1992).
Observa-se grandes variaes nos resultados das anlises dos chorumes provenientes de
diferentes aterros sanitrios ou lixes. As razes esto relacionadas s caractersticas da
populao geradora dos resduos (nvel e caractersticas de vida scio-econmicoculturais), topografia e geologia do local do tratamento e/ou destino final do lixo, formas
de coleta dos resduos, e ainda, s caractersticas hidrolgicas e climticas da regio.
importante, ainda, o conhecimento das caractersticas microbiolgicas do chorume, uma
vez que os processos de degradao dos resduos que ocorrem nos aterros sanitrios so
em grande parte devido s atividades de bactrias existentes neste lquido. As interaes
microbianas que ocorrem em ecossistemas anaerbios tm sido elucidadas com os estudos
sobre a microbiologia da digesto anaerbia, inicialmente realizados no trato intestinal de
animais herbvoros (rmen), em biodigestores e nos lodos provenientes de regies
bentnicas lacustres e marinhas (KIRSCH, TOERIEN & SIEBERT, TOERIEN,
HUNGATE, ZEIKUS & WINFREY apud VILLAS BAS, 1990).
Em uma das poucas revises realizadas sobre a dinmica microbiana em aterros
sanitrios, BARLAZ et al. (1990) mostraram a importncia de uma clara definio dos
principais nveis trficos existentes nestes sistemas e, particularmente, do papel das
bactrias acetognicas consumidoras de hidrognio, em funo da possvel existncia de
competio com as metanobactrias hidrogenotrficas pelo mesmo substrato gasoso.
Outro importante aspecto levantado pelos autores foi a ausncia de conhecimento em
relao ao principal precursor do gs metano em aterros sanitrios. A digesto anaerbia
de lodos de esgotos resulta na produo de 70% de metano a partir do acetato. No entanto,
no se pode afirmar valores semelhantes para os sistemas de aterramento de resduos
slidos.
O presente trabalho mais uma colaborao ao conhecimento dos aspectos fundamentais
da degradao anaerbia de resduos slidos. Foram realizados experimentos para a
avaliao da cintica de degradao da celulose por culturas bacterianas anaerbias
oriundas do chorume, uma vez que o chorume um dos principais produtos da
degradao de resduos slidos, e possui um elevado potencial hidroltico devido a
presena de bactrias e metablitos, e a celulose constitui a maior frao de carbono
orgnico nos resduos slidos.
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METODOLOGIA
A manipulao de microrganismos anaerbios requer tcnicas apropriadas para a
manuteno da atmosfera livre de agentes oxidantes, em especial o oxignio. As tcnicas
portanto, utilizam gases como nitrognio, dixido de carbono ou hidrognio. Os
procedimentos para o cultivo dos microrganismos anaerbios celulolticos, estudados
neste trabalho, foram baseados naqueles descritos por HUNGATE (1969), BRYANT
(1972) e MILLER & WOLIN (1974). Trabalhos realizados por VAZOLLER (1989),
VILLAS BAS (1990) e GIAJ-LEVRA (1991) foram tambm considerados.
Os meios de cultura e solues empregados (meio de cultura BCYT; meio de cultura
mineral suplementado Zinder; soluo trao de metais; soluo trao mineral; soluo
macro mineral; soluo de vitaminas; soluo redutora e soluo de diluio anerbia),
bem como a metodologia para o rompimento celular, determinaes de protenas,
aucares e cidos volteis esto descritos em GOMES (1995). A celulose em p utilizada
nos experimentos foi do tipo CC 41 WHATMAN, catlogo nmero 4061-050.
O chorume estudado foi coletado no antigo Lixo da cidade de So Carlos - SP,
localizado no Stio Santa Madalena. O local era utilizado para a disposio de resduos
urbanos e parte dos resduos industriais gerados na cidade, e foi caracterizado como
Lixo, tendo em vista a falta das condies sanitrias mnimas exigidas pela NBR 8419
(ABNT, 1984).
Foram realizadas as seguintes determinaes fsico-qumicas com a amostra de chorume:
medida do pH (potencial hidrogeninico); anlises de DQO (demanda qumica de
oxignio), DBO (demanda bioqumica de oxignio), nitrognio total, amoniacal e
orgnico, fsforo total, alcalinidade total, slidos totais, suspensos e dissolvidos. As
tcnicas analticas empregadas bem como as anlises de metais (ferro, mangans, cromo,
nquel, cdmio, chumbo, zinco, cobalto e cobre) , por absoro atmica, basearam-se nos
procedimentos descritos pela APHA/AWWA/WPCF (1992).
As caractersticas microbiolgicas iniciais do chorume foram obtidas pela determinao
do nmero de microrganismos anaerbios celulolticos totais, por anlises microscpicas
e anlises dos gases formados por cromatografia gasosa.
O mtodo empregado na contagem dos microrganismos anaerbios celulolticos foi o
Nmero Mais Provvel (NMP), segundo metodologia descrita por BARLAZ et al. (1989)
e GIAJ-LEVRA (1991).
Para o acompanhamento do crescimento celular, foram realizadas observaes
microscpicas sob luz comum, fluorescncia e contraste de fase. Utilizou-se durante as
observaes microscpicas, na maioria das vezes, os aumentos de 100 x para a objetiva, e
10 x para as oculares.
Realizou-se tambm ensaios para determinao das velocidades especficas e tempos de
gerao mdios do crescimento microbiano, o consumo mdio de substrato e a obteno
mdia de produtos da degradao anaerbia da celulose e glicose. Estudou-se as culturas
em meio suplementado, segundo ZINDER & KOCH (1984), contendo celulose em p nas
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concentraes de 1 g/L, 5 g/L e 10 g/L, bem como em meio contendo glicose nas
concentraes de 1 g/L e 3g/L.
O inculo empregado sempre foi uma amostra das culturas enriquecidas e mantidas em
meio de cultura basal suplementado com celulose em p na concentrao de 5 g/L,
incubado em mdia por 15 dias, em estufa temperatura de 37 2 C. Este procedimento
foi sempre o mesmo, incluindo os ensaios com as culturas microbianas frente a glicose.
No acompanhamento do crescimento microbiano empregou-se um mtodo de
determinao indireta, medida da quantidade de protenas totais, expressa em mg de Soro
Albumina Bovina / Litro (mg S.A.B./L). Os procedimentos para a medida de protenas
foram os descritos por LOWRY et al. (1951) e PETERSON (1977).
O rompimento das clulas bacterianas, previamente medida de protenas totais, foi
efetuado segundo o Mtodo da Acetona, segundo BHADURI & DEMCHICK (1983).
O consumo do substrato glicose e a obteno de produtos, pela degradao da celulose foi
acompanhado a partir da determinao de carboidratos, segundo o mtodo de Somogyi
(SOMOGYI apud PEREGO JR., 1979).
A avaliao dos produtos da degradao dos compostos orgnicos foi tambm realizada
pelo Mtodo da Titulao para cidos Volteis Totais, segundo Di LALLO e
ALBERTSON (1961).
Os valores obtidos permitiram calcular as velocidades mdias do crescimento das culturas
bacterianas (Vmdio). Considerando-se que os ensaios foram realizados com culturas
mistas, optou-se pela realizao de clculos do crescimento celular linear.
Foram tambm calculadas as velocidades mdias de produo de cidos volteis (VP), e
avaliadas a produo e o consumo dos acares redutores totais.
RESULTADOS
A caracterizao fsico-qumica do chorume resultou nos dados apresentados na Tabela 1.
O valor obtido para o nmero de bactrias anaerbias celulolticas foi de 2,3 x 104
bactrias/mL de chorume ou log NMP = 4,36 bactrias/mL. Analisando-se os valores de
metano (%), foi possvel indicar a ordem de grandeza das clulas metanognicas, em
funo da leitura das diluies: 105 bactrias/mL.
As anlises microscpicas tiveram duas finalidades: 1) observar a morfologia das espcies
e 2) auxiliar na leitura dos resultados do ensaio de NMP. Desde o incio do trabalho
observou-se o predomnio de bacilos pequenos esporulados ou no. Filamentos longos e
cocos tambm estavam presentes em grande nmero nas amostras observadas. Algumas
espcies em formato de sarcinas fluorescentes e filamentos longos com extremidades
retas, no fluorescentes foram verificados.
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RESULTADOS
7,2
1094
1640
1050
350
203
147
3,8
3878
1290
2588
166
103
63
3712
2485
1227
62
1,2
0,27
0,001
0,001
0,001
0,84
0,001
0,17
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Regresso Linear :
Celulose 1 g/L
Celulose 5 g/L
90
Celulose 10 g/L
80
Glicose 1 g/L
Celul. 1 g/L
PROT = 0,007 t + 20,14
r = 0,986
Glicose 3 g/L
70
Celul. 5 g/L
PROT = 0,11 t + 19,92
r = 0,988
60
50
Celul. 10 g/L
PROT = 0,14 t + 19,66
r = 0,951
40
30
20
Glic. 1 g/L
PROT = 0,75 t - 13,61
r = 0,994
10
0
0
72
144
216
288
360
432
Glic. 3 g/L
PROT = 0,37 t + 8,04
r = 0,995
Tempo (h)
Celulose 1 g/L
90
Celulose 5 g/L
Celulose 10 g/L
80
Glicose 1 g/L
Glicose 3 g/L
70
Velocidades mdias :
Celul. 1 g/L
0,07 mg S.A.B./ L h
Celul. 5 g/L
0,11 mg S.A.B./ L h
60
50
Celul. 10 g/L
0,14 mg S.A.B./ L h
40
30
Glic. 1 g/L
0,75 mg S.A.B./ L h
20
10
0
0
72
144
216
288
360
Glic. 3 g/L
432 0,37 mg S.A.B./ L h
Tempo (h)
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1400
Velocidades mdias :
1200
Celul. 1 g/L
1,38 mg / L h
1000
800
Celul.1 g/L
600
Celul.5 g/L
400
Celul.10
g/L
Glic.1 g/L
200
Celul. 5 g/L
0,61 mg / L h
Celul. 10 g/L
1,03 mg / L h
Glic. 1 g/L
4,27 mg / L h
Glic.3 g/L
0
0
72
144
216
288
Glic. 3 g/L
432 5,58 mg / L h
360
Tempo (h)
3000
50
2500
40
2000
30
1500
20
1000
10
500
0
0
72
144
216
288
Tempo (h)
0
360
Glicose 1 g/L
Glicose 3 g/L
Celulose 1 g/L
Celulose 5 g/L
Celulose 10 g/L
DISCUSSO E CONCLUSES
Parmetros de crescimento de microrganismos so obtidos a partir da modelagem
matemtica do crescimento celular, que pode ser definida como a tentativa de representar
este crescimento por funes matemticas.
Quando tem-se um microrganismo crescendo em meio de cultura, em processo
descontnuo clssico, tambm conhecido por batelada, como o caso do processo
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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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