En estas condiciones se destruyen todas las clulas vegetativas y endosporas en un tiempo que
por lo general es de 15 minutos. Se piensa que el calor hmedo degrada los cidos nucleicos,
desnaturaliza protenas y adems alterar las membranas celulares.
Si no se cumplen las condiciones adecuadas, no hay esterilizacin. Para controlar el buen
funcionamiento del equipo, se pueden incluir con la esterilizacin un control biolgico o un
indicador qumico.
b. Pasteurizacin:
Se utiliza para sustancias o medios que no pueden ser calentadas a ms de su temperatura de
ebullicin.
Un calentamiento breve a 55 o 60C destruir los microorganismos patgenos y disminuye los
causantes de la descomposicin de la sustancia. NO esteriliza.
c. Tindalizacin o esterilizacin fraccionada al vapor:
Se utiliza para qumicos o material biolgico que no puede llevarse a ms de 100C. Se calienta
a una temperatura de 90C a 100C durante 30 minutos por tres das consecutivos y se incuba a
37C entra cada calentamiento.
El primer calentamiento destruye clulas vegetativas pero no esporas, por lo que germinan a
37C y luego son eliminadas con el siguiente calentamiento.
d. Calor seco:
Se utilizan hornos o estufas a una temperatura de 160-170C por 2 o 3 horas. Es menos efectivo
que el calor hmedo, pero no corroe utensilios metlicos. Es lenta y no se puede utilizar para
material termo sensible.
e. Incineracin:
Destruye por completo los microorganismos. (calentar las asas en los mecheros).
f. Temperaturas bajas:
Refrigeracin y congelacin, son nicamente bacteriostticos. En general, el metabolismo de las
bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de 0 C. Sin embargo estas temperaturas no
matan a los microorganismos sino que pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo.
Esta circunstancia es aprovechada tambin por los microbilogos para conservar los
microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan congelados a
-70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a -196 C.
g. Desecacin:
Es de efecto bacteriosttico y las esporas permanecen viables.
FILTRACIN: Es utilizada para materiales termo sensibles.
a. Filtros de profundidad:
Se utilizan materiales fibrosos o granulados que forman una capa gruesa con canales de
dimetro muy pequeo. La solucin es aspirada al vaco y los microorganismos quedan retenidos
o son adsorbidos por el material. Se utilizan diatomeas, porcelana no vidriada, asbestos.
b. Filtros de membrana:
Son circulares con un grosor de 0.1 mm y con poros muy pequeos, de unos 2 m por lo que los
microorganismos no pueden atravesarlo. Se fabrican de acetato de celulosa, policarbonato,
fluoruro de polivinilo u otros materiales sintticos.
RADIACIN:
a. Ultravioleta:
Es letal para todas las clases de microorganismos por su longitud de onda corta y su alta
energa. Es letal a 260 nm ya que es la longitud de onda que es ms efectivamente absorbida
por el ADN.
El mecanismo primario del dao al ADN es la formacin de dmeros de timina lo que inhibe su
funcin y replicacin. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
b. Ionizante:
Niveles bajos pueden producir mutaciones e indirectamente resultar en la muerte, niveles altos
son letales. Especficamente causan una serie de cambios en las clulas: ruptura de puentes de
hidrgeno, oxidacin de dobles enlaces, destruccin de anillos, polimerizacin de algunas
molculas, generacin de radicales libres.
La mayor causa de muerte es la destruccin del ADN. Es excelente esterilizante y con
penetracin profunda en distintos materiales, por lo que se utilizan para esterilizar materiales
termolbiles (termosensibles) como jeringas desechables, sondas, etc.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los
componentes.
MTODOS QUMICOS:
Condiciones ideales para un agente antimicrobiano qumico:
-
Modo de accin:
- Bacteriostticos:
Inhibidores de sntesis proteica por unin al ribosoma, que es reversible, pues se disocia de este
cuando disminuye en concentracin.
- Bactericidas:
Causa la muerte celular pero no la lisis. No se eliminan por dilucin.
- Bacteriolticos:
Inducen la lisis celular al inhibir la sntesis de la pared celular o daan la membrana
citoplasmtica.
Agentes antimicrobianos qumicos:
a. Fenoles:
El primer desinfectante y antisptico utilizado, en 1867 Joseph Lister los emple para reducir el
riesgo de infeccin en las cirugas. Hasta ahora los fenoles y sus derivados (cresol, xilenol) son
utilizados como desinfectantes en laboratorios y hospitales. Elimina micobacterias, eficaz an en
presencia de materia orgnica y permanece activo en la superficie despus de mucho tiempo de
su aplicacin. Desnaturaliza protenas y altera la membrana. Tiene olor desagradable y puede
producir irritaciones cutneas.
b. Alcoholes:
No elimina esporas pero son bactericidas y fungicidas y algunas veces viricida (virus que
contienen lpidos), son comnmente utilizados principalmente el etanol y el isopropanol en
concentraciones de 70-80%. Tienen el mismo modo de accin de los fenoles.
c. Metales pesados:
Mercurio, arsnico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostticos ya que el metal se combina con los
grupos sulfihidrilos de las protenas inactivndolas o precipitndolas. Son txicos. Ejemplos:
sulfato de cobre (alguicida) y nitrato de plata (gonorrea oftlmica en nios)
d. Halgenos:
- Yodo: antisptico cutneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con las
protenas. En altas concentraciones puede destruir algunas esporas. Puede lesionar la piel,
dejar manchas y desarrollar alergias.
- Cloro: oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposicin de unos 30
minutos. El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio, que
es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio
rango de temperaturas.
e. Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes):
Molculas orgnicas emulsificantes porque contienen extremos polares y no polares, solubilizan
residuos insolubles y son agentes limpiadores eficaces.
Solo los catinicos son desinfectantes, alteran membrana y pueden desnaturalizar protenas. No
destruyen micobacterias ni esporas. Se inactivan con el agua dura y el jabn.
f. Aldehdos:
Eliminan esporas (tras 12 horas de exposicin) y pueden usarse como agentes esterilizantes.
g. Gases esterilizantes: Esterilizacin de objetos termo sensibles.
- xido de etileno: microbicida y esporicida, se combina con las protenas celulares. Alto poder
penetrante. En concentraciones de 10-20% mezclado con CO2 o diclorodifluorometano. Se debe
de airear ampliamente los materiales esterilizados para eliminar el gas residual porque es muy
txico.
AGENTES ANTIMICROBIANOS:
La medicina moderna depende de los agentes quimioterapeuticos para el tratamiento de
enfermedades. Estos agentes destruyen a los microorganismos patgenos o inhiben su
crecimiento para evitar un dao significativo al hospedador.
La mayora de estos agentes son antibiticos derivados de productos microbianos o sus
derivados. Existen tambin antibiticos sintticos. Caractersticas de los agentes
antimicrobianos:
- Toxicidad selectiva:
Debe de eliminar o inhibir exclusivamente el microorganismo patgeno que est daando al
hospedador.
- No causar efectos adversos:
No deben de causar efectos indeseables para el hospedador. (respuestas alrgicas, dao renal,
dao gastrointestinal, nauseas, deplecin de la mdula sea)
- Espectro de accin:
Algunos agentes tienen un espectro de accin estrecho por lo que su efecto es contra una
limitada variedad de microorganismos. Otros tienen un espectro de accin amplio, y pueden
atacar diferentes clases de patgenos.
Para tener una idea de la efectividad de un agente antimicrobiano puede obtenerse:
- Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), que es la mnima concentracin del agente
antimicrobiano que puede inhibir el crecimiento de un patgeno en particular.
- Concentracin Letal Mnima (CLM), es la mnima concentracin de un agente antimicrobiano
que mata a un patgeno.
Mecanismos de accin de los agentes antimicrobianos:
Las drogas antimicrobianas pueden causar un dao al organismo patgeno de varias
maneras:
- Los antibiticos ms selectivos son aquellos que interfieren con la sntesis de la pared
bacteriana. (penicilinas, vancomicina, bacitracina, cefalosporinas).
- Pueden inhibir la sntesis proteica al unirse al ribosoma procaritico. (estreptomicina,
gentamicina, cloranfenicol, eritromicina)
- Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos, inhibiendo la ADN girasa, interfiriendo con la
replicacin, transcripcin o traduccin, bloqueando la sntesis de ARN, etc. (ciprofloxacina,
quinolonas, rifampicina)
- Dao en la membrana plasmtica unindose a ella para daar su estructura y alterar su
permeabilidad. (polimixina B)
- Algunas drogas antimicrobianas pueden actuar como antimetabolitos: bloquean las vas
metablicas por competicin inhibitoria. Compiten por los metabolitos.
Bioseguridad
Se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el control de
factores de riesgo laborales procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la
prevencin de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos
procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores de la salud, pacientes,
visitantes y el medio ambiente.
NORMAS UNIVERSALES DE SEGURIDAD BIOLGICA EN EL LABORATORIOEL DECALOGO
DEL LABORATORIO:
1. La sangre y los lquidos corporales de todos los pacientes deben ser manipulados como
materiales infecciosos. Todos los pacientes deben presumirse como infectados con VIH y por
otros patgenos de transmisin sangunea.
2. Todas las muestras de sangre y los lquidos corporales deben colocarse en un recipiente
adecuado, con una tapa segura para evitar el derrame durante el transporte.
3. Todas las personas que procesan muestras de sangre y lquidos corporales deben utilizar
guantes y proteccin facial, si se espera que la sangre o lquidos corporales salpiquen.
4. Los trabajadores deben cambiarse los guantes y lavarse las manos cuando concluyan con el
procedimiento de las muestras.
5. Los trabajadores nunca deben pipetear con la boca; deben utilizar dispositivos mecnicos.
6. La utilizacin de agujas y jeringas deben limitarse a las situaciones en las cuales no existe
otra alternativa.
7. Las superficies de trabajo del laboratorio deben descontaminarse con las sustancias qumicas
germicidas apropiados luego de un derrame de sangre u otros lquidos corporales y cuando se ha
concluido con las tareas.
8. Los materiales de trabajo que se utilizan en las pruebas de laboratorio deben
descontaminarse antes de ser reutilizados o colocarse en bolsas para ser desechados de acuerdo
con las polticas institucionales.
9. Todas las personas deben lavarse las manos al finalizar las actividades del laboratorio y
quitarse la vestimenta de proteccin antes de abandonar el lugar.
10. Limpieza de los derrames de material infeccioso.
USO DE BARRERAS O EQUIPO DE PROTECCIN:
Las barreras fsicas paras las infecciones en el laboratorio pueden clasificarse en personales o
institucionales. Las barreras personales son: la higiene personal y el equipo de proteccin con
guantes, proteccin ocular y mascarilla, proteccin corporal con mandil, mandiln, gorras y
zapatos.
ELIMINACIN DE DESECHOS: