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El Metodo de Kjeldahl.

El mtodo Kjeldahl para la determinacin de protenas totales se basa en la


determinacin del nitrgeno proteico. Se trata de un mtodo que, aunque resulte
muy exacto se emplea poco hoy en da debido a que es un mtodo lento para la
determinacin de protenas totales en clnica. Sin embargo su uso esta bastante
extendido en la determinacin de protenas en alimentos, sobre todo con el uso
de aparatos automatizados.
El mtodo de Kjeldahl sirve para determinar la cantidad total de nitrgeno de un
compuesto, aunque puede utilizarse para determinar la cantidad total de
protena que hay en una muestra, si se conoce la prporcin de nitrognitrgeno
protena que, por termino medio se situa en 16 %. Las determinaciones de
protenas por este mtodo presentan interferencias debido a la presencia de
nitrgeno no proteico, dichas interferencia pueden evitarse precipitando las
protenas y determinando la presencia de nitrgeno en el precipitando de
protenas. Roca, P y Oliver J. (2003)
Etapas del Mtodo de Kjeldahl
Existen tres etapas del mtodo de Kjeldahl descritos de la siguiente manera por
Garcia, E y Fernadez E (2000)
(a) Etapa de digestin: un tratamiento con cido sulfrico concentrado, en
presencia de un catalizador y ebullicin convierte el nitrgeno orgnico en
in amonio, segn la ecuacin 1.

(Ec. 1)

Procedimiento: Se introducen de 1 a 5 g de muestra un tubo de mineralizacin y


se ponen 3 g de catalizador que suele estar constituido por una mezcla de sales
de cobre, xido de titanio o/y xido de selenio. De forma habitual se utiliza como
catalizador una mezcla de K2SO4 : CuSO4 : Se (10:1:0,1 en peso). Despus se
adicionan 10 mL de H2SO4 concentrado y 5 mL de H2O2. Posteriormente se
digiere a 420 C durante un tiempo que depende de la cantidad y tipo de
muestra. Se sabe que la digestin ha terminado porque la disolucin adquiere un
color verde esmeralda caracterstico. En esta etapa, el nitrgeno proteico es
transformado en sulfato de amonio por accin del cido sulfrico en caliente. En
la actualidad, para llevar a cabo este proceso se utilizan digestores automticos
que son capaces de digerir un nmero determinado de muestras al mismo
tiempo.

Figura 1: Unidad de digestin


Etapa de destilacin: se alcaliniza la muestra digerida y el nitrgeno se
desprende en forma de amoniaco (ecuacin 2). El amoniaco destilado se recoge
sobre un exceso desconocido de cido brico (ecuacin 3). (NH2)SO4 + 2 NaOH
2NH3 + Na2SO4+ 2H2O (ec. 2) NH3 + H3BO3 NH4 + H2BO3 - (ec. 3)

Procedimiento: Despus de enfriar se adicionan al tubo de digestin 50 mL de


agua destilada, se pone en el soporte del destilador y se adiciona una cantidad
suficiente de hidrxido sdico 10 N, en cantidad suficiente (50 mL aprox.) para
alcalinizar fuertemente el medio y as desplazar el amoniaco de las sales
amnicas. El amoniaco liberado es arrastrado por el vapor de agua inyectado en
el contenido del tubo durante la destilacin, y se recoge sobre una disolucin de
cido brico (al 4 % p/v).

Figura 2: Unidad de digestin


Etapa de valoracin: La cuantificacin del nitrgeno amoniacal se realiza por
medio de una volumetra cido-base del in borato formato, empleando cido
clorhdrico o sulfrico y como indicador una disolucin alcohlica de una mezcla

de rojo de metilo y azul de metileno (ecuacin 4). Los equivalentes de cido


consumidos corresponden a los equivalentes de amoniaco destilados.

Ventajas y Desventajas del Mtodo de Kjeldalh.


Segn Vedimi R. (2014) existes ventajas y desventajas en este mtodo que son
los siguientes:
VENTAJAS DEL MTODO
Apropiado para varios tipos de productos.
Alta confiabilidad.
Usado como mtodo de referencia referencia.
DESVENTAJAS DEL MTODO
Interfieren compuestos nitrogenados no proteicos
. Uso de catalizadores catalizadores txicos txicos o caros.
Eleccin del factor de conversin.

BIBLIOGRAFA.

Roca, P y Oliver, J . 2003. Bioquimica tcnicas y mtodos. Editorial Elice.


155 -156.
Garcia, E y Fernadez E (2000) Determinacin de protenas de un alimento
por el mtodo Kjeldahl. Valoracin con un cido fuerte. ETSIAMN.
Universitat Politcnica de Valncia.
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16338/Determinaci%C3%B3n
%20de%20proteinas.pdf?sequence=1
Vedimi R. (2014) NALISIS DEL CONTENIDO DE PROTE DE PROTENAS EN
LOS ALIMENTOS. QUMICA DE LOS ALIMENTOS.
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/112238/mod_resource/c
ontent/1/QA%202014-proteinas-metodos.pdf